Avastin对小鼠角膜碱烧伤后新生淋巴管形成的影响

目的观察小鼠角膜碱烧伤后新生淋巴管形成情况,探讨Avastin对小鼠角膜碱烧伤后新生淋巴管形成的影响及其机制。方法制作小鼠角膜碱烧伤模型,随机分为治疗组和烧伤组,烧伤组连续两周内每日左氧氟沙星滴眼液滴眼3次,治疗组连续两周内应用25mg/ml Avastin结膜下隔日注射5μl+每日左氧氟沙星滴眼液滴眼3次,分别于碱烧伤后3d、5d、7d、12d和18d取材。采用免疫组化法,观察VEGF-C在碱烧伤后不同时间段角膜组织内的表达;应用淋巴管内皮透明质酸受体(LYVE-1)标记淋巴管内皮,观察小鼠角膜内新生淋巴管的形成情况。结果在正常小鼠角膜组织内,VEGF-C表达于角膜上皮层和内皮层。在烧伤组碱烧伤角膜内,VEGF-C主要表达于角膜上皮细胞和角膜基质内入侵的炎性细胞,于碱烧伤后3d,VEGF-C的表达达到高峰(0.05),碱烧伤后12d,VEGF-C的表达恢复至正常水平。在治疗组碱烧伤角膜内,VEGF-C的表达在碱烧伤后3d低于烧伤组。Avastin治疗组角膜内,碱烧伤后12d见LYVE-1阳性表达开放状态的新生淋巴管,淋巴管出现的时间较烧伤组明显延迟。结论 Avastin能减少小鼠碱烧伤后角膜新生淋巴管的形成,其机制可能与抑制角膜组织内淋巴管生成因子VEGF-C的表达相关。     

LYVE-1蛋白在小鼠碱烧伤角膜的表达及意义

目的观察淋巴管内皮透明质酸受体(LYVE-1)在小鼠碱烧伤角膜内的表达情况,探讨角膜新生淋巴管形成的时间过程及角膜疾病后新生淋巴管形成的作用。方法应用NaOH溶液制作小鼠角膜碱烧伤模型,分别于角膜碱烧伤后第1d、3d、5d、7d和12d取材。采用免疫组化法,观察正常角膜和碱烧伤后不同时间段角膜内LYVE-1的表达情况。结果在正常角膜组织中,LYVE-1表达于角膜上皮细胞和内皮细胞内。在角膜碱烧伤后1d、3d和5d,LYVE-1主要表达于角膜上皮内及入侵角膜基质的炎性细胞内;碱烧伤后7d,可见大量LYVE-1呈条索样表达于角膜基质中,并可见少量LYVE-1阳性表达于开放状态的淋巴管;碱烧伤后12d,角膜基质内新生淋巴管数量增多。结论正常角膜组织储备LYVE-1生物因子,在炎性角膜中,LYVE-1可能在角膜新生淋巴管运输透明质酸(HA)的过程中发挥重要作用。     

血管内皮生长因子D在小鼠碱烧伤后角膜的表达及其作用

目的观察血管内皮生长因子D(VEGF-D)在小鼠角膜碱烧伤后不同时间角膜组织内的表达,探讨VEGF-D在小鼠角膜碱烧伤后新生淋巴管形成过程中的作用。方法制作小鼠角膜碱烧伤模型,分别于碱烧伤后1d、3d、5d、7d、12d和18d取材。应用免疫组化SP法观察VEGF-D在正常角膜和碱烧伤后不同时间角膜内的表达,应用淋巴管内皮透明质酸受体1(LYVE-1)标记淋巴管,观察小鼠碱烧伤角膜内新生淋巴管的形成情况。结果碱烧伤后1d、3d、5d,角膜内VEGF-D表达水平明显高于正常角膜(P<0.01),于碱烧伤后3d,表达达到高峰。碱烧伤后7d,VEGF-D的表达下降至正常水平。在碱烧伤角膜内,可见阳性表达LYVE-1的新生淋巴管。结论 VEGF-D过表达可能参与小鼠角膜碱烧伤后新生淋巴管形成过程。     

Avastin对小鼠角膜新生血管形成和TGF-β1表达的影响

目的探讨Avastin对小鼠角膜新生血管形成和转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)表达的影响。方法制作小鼠角膜碱烧伤模型,随机分为碱烧伤组和Avastin治疗组,碱烧伤组连续两周内每日左氧氟沙星滴眼液滴眼3次,Avastin治疗组连续两周内应用25mg/ml Avastin结膜下隔日注射5μl+每日左氧氟沙星滴眼液滴眼3次,分别于碱烧伤后3d、7d和12d取材。体视显微镜观察角膜新生血管形成情况,应用HE染色法观察角膜组织的损伤情况,采用免疫组化法观察TGF-β1在碱烧伤后不同时间段角膜组织内的表达情况。结果在不同时间段,Avastin治疗组角膜新生血管的形成均少于碱烧伤组。在正常小鼠角膜组织内,TGF-β1表达于角膜上皮层和内皮层。在碱烧伤对照组角膜内,TGF-β1主要表达于角膜上皮细胞和角膜基质内入侵的炎性细胞,在碱烧伤后3d,TGF-β1的表达达到高峰(P0.05),在碱烧伤后12d,TGF-β1的表达恢复至正常水平。在Avastin治疗组角膜内,各时间段TGF-β1的表达均低于对照组。结论 Avastin能够抑制小鼠碱烧伤后角膜新生血管的形成,其机制可能与下调碱烧伤角膜组织TGF-β1的表达相关。     

血管内皮生长因子C及其受体3在人恶性黑色素瘤组织内的表达及意义

目的 观察人恶性黑色素瘤组织内血管内皮生长因子C(VEGF-C)及其受体3(VEGFR-3)的表达,探讨VEGF-C和VEGFR-3在恶性黑色素瘤淋巴管生成及淋巴道转移中的作用.方法 取人恶性黑色素瘤组织48例(石蜡标本30例,术后新鲜组织18例),应用免疫组织化学和RT-PCR技术,观察VEGF-C和VEGFR-3蛋白及mRNA在恶性黑色素瘤组织内的表达情况.以淋巴管内皮透明质酸受体(LYVE-1)标记淋巴管,计数恶性黑色素瘤组织淋巴管数密度.结果 VEGF-C和VEGFR-3蛋白主要表达于恶性黑色素瘤细胞胞浆内,在肿瘤周围的血管和淋巴管内皮上也可见VEGFR-3蛋白表达,VEGF-C和VEGFR-3蛋白在淋巴结转移组恶性黑色素瘤组织内的表达水平明显高于无淋巴结转移组(P<0.05).在18例新鲜恶性黑色素瘤中,淋巴结转移组VEGF-C和VEGFR-3mRNA的表达明显高于无淋巴结转移组(P<0.01).LYVE-1表达于肿瘤间质内的淋巴管内皮细胞,淋巴结转移组恶性黑色素瘤组织中的淋巴管数密度(LMVD)为9.845±2.454,无淋巴结转移组恶性黑色素瘤组织中的淋巴管数密度为6.534±2.193,淋巴结转移组恶性黑色素瘤组织内的淋巴管数密度明显高于无淋巴结转移组(P<0.01).结论恶性黑色素瘤组织内VEGF-C表达明显增高,并通过上调其受体VEGFR-3的表达促进恶性黑色素瘤组织内淋巴管的生成,从而促进恶性黑色素瘤的淋巴道转移.     

肝再生过程中血管内皮生长因子C诱导LYVE-1~+内皮细胞重建肝血窦

目的探讨肝部分切除后,肝血窦重建的候选分子及机制。方法肝脏部分切除后,用免疫组织化学染色法观察肝血窦重建过程。检测血管内皮生长因子A(VEGF-A)、VEGF-C、CD34、淋巴管内皮透明质酸受体1(LYVE-1)的表达。结果肝脏部分切除后,残留肝组织中VEGF-C均有表达。术后12 h、第2天、第5天表达水平达到高峰;LYVE-1的表达与VEGF-C具有相似性,高峰期要比VEGF-C延迟1~2 d;VEGF-A只在肝再生早期及晚期表达;CD34阳性细胞集中分布于大的门静脉及其新生分支的周围。结论在肝血窦重建中,VEGF-C诱导CD34阳性细胞表达LYVE-1,最终分化为成熟的肝血窦内皮细胞。     

白薇根部提取物上调部分肝切除后血管再生相关蛋白的表达促进肝脏新生血管形成

目的观察白薇提取物对部分肝切除后血管再生过程的影响,探讨其调节作用的相关分子及机制。方法昆明种小鼠20只,随机分为对照组、白薇组。两组分别采用一次性切除部分肝左外叶。实验组则在术后开始灌胃给药白薇提取液(50 g/kg),2次/d。术后1~8 d,每天处死2组小鼠各1只,取肝左外叶。免疫组织化学技术检测血管内皮生长因子C(VEGF-C)、VEGF-A、淋巴管内皮透明质酸受体1(LYVE-1)、CD34的表达。结果与对照组相比,白薇组中CD34表达明显升高,分布范围扩大,VEGF-C、VEGF-A、LYVE-1的表达早期下降,后期则显著增加。结论白薇上调VEGF-A、VEGF-C、LYVE-1的表达,促进血管新生。     

VEGF-C在卵巢癌局部淋巴结内淋巴管生成中的作用

目的观察血管内皮生长因子-C(VEGF-C)在卵巢癌组织内的表达,分析其与卵巢癌局部淋巴结内淋巴管生成之间的关系。方法取卵巢癌64例,其中,有淋巴结转移40例,无淋巴结转移24例。应用免疫组化法和Western blot技术观察VEGF-C在卵巢癌组织内的表达。以D2-40作为淋巴管内皮特异性标记物,检测卵巢癌局部淋巴结内淋巴管生成情况。结果 VEGF-C主要表达于卵巢癌细胞浆和胞膜以及癌组织周围浸润的炎性细胞,在有淋巴结转移组的表达率明显高于其在无淋巴结转移组的表达率。Western blot检测结果表明,VEGF-C蛋白在有淋巴结转移的卵巢癌组织中的表达量高于其在无淋巴结转移的卵巢癌组织内的表达量。D2-40表达于卵巢癌局部淋巴结内的淋巴管内皮细胞,在有转移的淋巴结内可见大量新生的淋巴管,淋巴管腔内存在入侵的肿瘤细胞,在无转移的淋巴结内观察到新生的淋巴管。在无淋巴结转移组病例中,卵巢癌组织VEGF-C阳性者局部淋巴结内淋巴管密度明显高于VEGF-C阴性者淋巴结内的淋巴管密度。结论 VEGF-C的表达与卵巢癌淋巴结转移密切相关,卵巢癌在发生局部淋巴结转移之前存在淋巴结内淋巴管生成的现象,卵巢癌组织内VEGF-C的表达在卵巢癌局部淋巴结内的淋巴管生成中可能发挥重要作用。     

小鼠恶性黑色素移植瘤模型的建立及其淋巴管内皮细胞透明质酸受体1的表达

目的:建立小鼠皮肤恶性黑色素移植瘤模型,探讨小鼠皮肤恶性黑色素移植瘤组织内淋巴管的生成情况。方法:体外培养B16瘤细胞,接种B16瘤细胞于C57BL/6小鼠右侧背部皮内,构建C57BL/6小鼠皮肤恶性黑色素移植瘤模型;应用H-E染色、淋巴管内皮细胞透明质酸受体1(1ymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor-1, LYVE-1)免疫组化染色确认模型和观察肿瘤组织内淋巴管的生成情况。结果:建立了恶性黑色素移植瘤模型;LY- VE-1主要着色于正常组织和移植瘤组织中淋巴管内皮细胞的细胞膜上;恶性黑色素瘤组织中淋巴管密度明显高于正常皮肤组织。结论:构建C57BL/6小鼠皮肤恶性黑色素移植瘤模型是获得恶性黑色素瘤组织和进一步研究的有效手段;LYVE-1是特异性较高的淋巴管内皮标记物;小鼠皮肤恶性黑色素移植瘤组织中可能存在淋巴管的新生。     

膀胱癌VEGF-C的表达与局部淋巴结内淋巴管生成之间的关系

目的观察血管内皮生长因子(VEGF)-C在膀胱癌组织内的表达情况,分析VEGF-C的表达与膀胱癌局部淋巴结内淋巴管生成及淋巴结转移之间的关系。方法取膀胱癌病例60例,其中,有淋巴结转移组26例及转移淋巴结30例,无淋巴结转移组34例及淋巴结48例。应用免疫组化法和Western blot技术检测VEGF-C在膀胱癌组织及转移淋巴结内的表达。以D2-40作为淋巴管内皮特异性标记物,检测膀胱癌局部淋巴结内淋巴管生成情况。结果 VEGF-C主要表达于膀胱癌细胞胞浆内及癌组织周围浸润的炎性细胞,在有淋巴结转移的膀胱癌组织中的表达量高于其在无淋巴结转移的膀胱癌组织内的表达量。30例有转移的淋巴结内VEGF-C的表达均呈阳性,并见大量新生的淋巴管,淋巴管腔内可见入侵的肿瘤细胞。在无淋巴结转移组病例中,膀胱癌组织VEGF-C阳性者局部淋巴结内淋巴管密度明显高于VEGF-C阴性者淋巴结内淋巴管密度。结论 VEGF-C的表达与膀胱癌淋巴结转移及淋巴管生成密切相关。     

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯抑制乳腺癌裸鼠移植瘤淋巴管生成

目的 探讨表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)对人乳腺癌裸鼠皮下移植瘤淋巴管生成的影响及其作用机制.方法 建立裸鼠皮下移植瘤模型30例,随机分成5组,即生理盐水组、5-氟脲嘧啶(5-FU)组、20mg/kg EGCG组、10mg/kg EGCG组、5mg/kg EGCG组,观察瘤组织血管内皮生长因子C(VEGF-C)的表达情况,淋巴管内皮细胞透明质酸受体1(LYVE-1)标记淋巴管,检测淋巴管密度及面积;Western blotting检测移植瘤组织VEGF-C蛋白的表达情况.结果 免疫组织化学染色VEGF-C在20mg/kg EGCG处理组中的表达量明显低于生理盐水组和5-FU组,且VEGF-C的表达与EGCG成剂量依赖性;移植瘤周边淋巴管密度、面积在20mg/kg EGCG处理组中显著低于5-FU组和生理盐水组,差异有统计学意义;Western blotting结果显示,EGCG高剂量处理组VEGF-C蛋白明显低于生理盐水组.结论 EGCG可以抑制乳腺癌裸鼠移植瘤中VEGF-C的表达及淋巴管的生成.     

人喉癌组织中VEGF-C、VEGF-D及其受体3的表达及意义

目的 探讨喉癌组织中VEGF—C、D和受体VEGFR-3的表达及其在喉癌进展中的作用。方法 取人喉癌标本12例,正常及良性病变喉组织10例,免疫组化法观察VEGF—C、VEGF—D、VEGFR-3以及LYVE-1的表达。结果 VEGF—C和VEGF—D主要表达于喉癌细胞胞浆内,喉癌组织中VEGF—C和VEGF—D表达的阳性率明显高于正常及良性病变喉组织（P〈0．05）;VEGFR-3主要表达于基底层的癌细胞,在喉癌组织中VEGFR-3表达的阳性率明显高于正常和良性病变组织中（P〈0．01）,并且VEGFR-3的表达与VEGF—C、VEGF—D的表达显著正相关（P〈0．01）。LYVE—1仅见表达于淋巴管内皮细胞。结论 喉癌组织中VEGF—C、VEGP-D的表达明显增高,推测可能通过与VEGFR-3的结合促进喉癌组织中淋巴管的生成;LYVE-1是淋巴管内皮细胞较特异的标记物。     

Transgenic induction of vascular endothelial growth factor-C is strongly angiogenic in mouse embryos but leads to persistent lymphatic hyperplasia in adult tissues

Vascular endothelial growth factor-C (VEGF-C) is the quintessential lymphangiogenic growth factor that is required for the development of the lymphatic system and is capable of stimulating lymphangiogenesis in adults by activating its receptor, VEGFR-3. Although VEGF-C is a major candidate molecule for the development of prolymphangiogenic therapy for defective lymphatic vessels in lymphedema, the stability of lymph vessels generated by exogenous VEGF-C administration is not currently known. We studied VEGF-C-stimulated lymphangiogenesis in inducible transgenic mouse models in which growth factor expression can be spatially and temporally controlled without side effects, such as inflammation. VEGF-C induction in adult mouse skin for 1 to 2 weeks caused robust lymphatic hyperplasia that persisted for at least 6 months. VEGF-C induced lymphangiogenesis in numerous tissues and organs when expressed in the vascular endothelium in either neonates or adult mice. Very few or no effects were observed in either blood vessels or collecting lymph vessels. Additionally, VEGF-C stimulated lymphangiogenesis in embryos after the onset of lymphatic vessel development. Strikingly, a strong angiogenic effect was observed after VEGF-C induction in vascular endothelium at any point before embryonic day 16.5. Our results indicate that blood vessels can undergo VEGF-C-induced angiogenesis even after down-regulation of VEGFR-3 in embryos; however, transient VEGF-C expression in adults can induce long-lasting lymphatic hyperplasia with no obvious side effects on the blood vasculature.     

叉头框C2在人胚淋巴管发生过程中的表达

目的 探讨人淋巴管胚胎期的发生和发育及叉头框c2(FOXC2)的表达. 方法 用淋巴管内皮透明质酸受体1(LYVE-1)作为淋巴管的标记物,应用免疫组织化学SP染色及免疫荧光双标染色的方法 ,检测FOXC2和LYVE-1在妊娠5～11周的85例人胚胎标本淋巴管的表达及淋巴管的发生发育情况. 结果 妊娠7周后的胎儿颈部及胸部的淋巴管出现LYVE.1表达.在妊娠大约10周时,胎儿肠系膜间淋巴管内皮细胞开始出现LYVE-1表达.FOXC2的表达早于LYVE-1,于妊娠第6周开始在中胚层间充质明显表达.FOXC2不仅表达于淋巴管,并广泛分布于椎体、心血管等部位.妊娠11周后的胎儿淋巴管内皮细胞中仍能见到FOXC2和LYVE-1的表达. 结论 在妊娠7～8周间(人胚胎发育35～42d),淋巴管开始形成,FOXC2和LYVE-1与淋巴管的发生和发育相关.     

Expression of the hyaluronan receptor LYVE-1 is not restricted to the lymphatic vasculature; LYVE-1 is also expressed on embryonic blood vessels

Expression of the hyaluronan receptor LYVE-1 is one of few available criteria used to discriminate lymphatic vessels from blood vessels. Until now, endothelial LYVE-1 expression was reported to be restricted to lymphatic vessels and to lymph node, liver, and spleen sinuses. Here, we provide the first evidence that LYVE-1 is expressed on blood vessels of the yolk sac during mouse embryogenesis. LYVE-1 is ubiquitously expressed in the yolk sac capillary plexus at E9.5, then becomes progressively down-regulated on arterial endothelium during vascular remodelling. LYVE-1 is also expressed on intra-embryonic arterial and venous endothelium at early embryonic stages and on endothelial cells of the lung and endocardium throughout embryogenesis. These findings have important implications for the use of LYVE-1 as a specific marker of the lymphatic vasculature during embryogenesis and neo-lymphangiogenesis. Our data are also the first demonstration, to our knowledge, that the mouse yolk sac is devoid of lymphatic vessels.     

Inhibition of inflammatory lymphangiogenesis by integrin alpha5 blockade

The interaction between endothelial cells and extracellular matrix proteins plays an important role in (hem)angiogenesis. Integrins are able to mediate the outgrowth of newly formed blood vessels. In contrast, the role of integrins in lymphangiogenesis, ie, the outgrowth of new from pre-existing lymphatic vessels, has so far been unclear. Here, expression and functional relevance of integrins on lymphatic endothelium in vivo was investigated using the mouse model of combined inflammatory corneal hemangiogenesis and lymphangiogenesis. Immunohistochemistry revealed novel expression of both integrin alpha5 and alphav on both resting and activated lymphatic vessels in vivo. Integrin alpha5-inhibiting small molecules significantly blocked the outgrowth of new lymphatic vessels into the cornea in a dose-dependent manner. The outgrowth of blood vessels was less significantly affected by this treatment, thus allowing for selective inhibition of lymphangiogenesis at lower dosages. Combined inhibition of integrin alpha5 and alphav using inhibiting molecules did not significantly increase the anti-lymphangiogenic effect in vivo, thus suggesting an important functional role of integrin alpha5 in lymphangiogenesis. In summary, our findings demonstrate novel expression of specific integrins on growing lymphatic endothelial cells in vivo and reveal their functional role during lymphangiogenesis. This opens new treatment options for selective inhibition of lymphangiogenesis, eg, in oncology and transplant immunology.