冬凌草甲素对NB4细胞的诱导凋亡机制

目的：研究冬凌草甲素对急性白血病NB4细胞的诱导凋亡作用，并对其作用机制进行探讨。方法：以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的NB4细胞，检测细胞生长抑制率，观察细胞凋亡时的形态学变化，对细胞凋亡前后的Caspase3活性进行检测。结果：冬凌草甲素可显著的升高NB4细胞Caspase3活性，抑制细胞的生长，诱导细胞发生凋亡。并呈现出明显的量-效与时-效关系。结论：冬凌草甲素能诱导NB4细胞凋亡，升高Caspase3活性是其重要作用机制之一。     

冬凌草甲素对白血病NB4细胞的诱导凋亡作用及其机制

目的探讨冬凌草甲素对白血病NB 4细胞的诱导凋亡作用及其机制。方法以不同质量浓度(8、16、24和32μm o l/L)的冬凌草甲素作用于体外培养的NB 4细胞。应用四氮唑蓝(M TT)比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;采用Hoechst 33258荧光染色法和琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡;采用蛋白印迹(W estern b lot)和比色法测定细胞凋亡前后caspase-3表达水平及其活性的变化。结果冬凌草甲素(16μm o l/L以上浓度)对白血病NB 4细胞具有显著的增殖抑制及诱导凋亡作用,并且呈现出一定的时间-效应和剂量-效应关系。Hoechst 33258荧光染色观察到典型的核浓缩、核碎裂等细胞凋亡的形态学变化,琼脂糖凝胶电泳观察到细胞凋亡时的DNA“梯形”条带;W estern b lot检测结果表明32 kD a的caspase-3酶原被激活,出现20 kD a的亚单位活化片段,同时在细胞凋亡过程中,caspase-3活性显著增高。结论冬凌草甲素能够通过激活caspase-3的表达而诱导NB 4细胞发生凋亡,可为冬凌草甲素进一步应用于临床治疗急性白血病提供实验依据。     

六神丸诱导NB4细胞凋亡的实验研究

目的 :观察六神丸诱导 NB4白血病细胞凋亡的作用。方法 :应用 TUNEL法和 Annexin V/ PI双染法检测不同浓度和不同时间段六神丸诱导 NB4细胞的凋亡率。结果 :TU NEL法表明凋亡率与剂量呈正相关性 ,10 0μg/ ml六神丸凋亡率最高。 Annexin V / PI双染法表明 5 0μg/ ml六神丸作用 32 h凋亡率最高。结论 :六神丸可诱导白血病细胞凋亡。     

赤雹根总皂苷镇痛作用研究

目的:观察赤雹根总皂苷的镇痛作用,探讨赤雹根镇痛作用的有效部位。方法:采用小鼠48℃热板法、小鼠48℃热水浸尾法、灌胃酒石酸锑钾致小鼠扭体法,评价赤雹根总皂苷的镇痛作用。结果:48℃热板试验中,赤雹根总皂苷各剂量组(240mg/kg、120mg/kg、60mg/kg)小鼠痛反应潜伏期(35.73±3.84)s、(28.20±3.74)s、(27.00±3.38)s均显著高于NS对照组(24.88±5.02)s,且差异有统计学意义(P<0.05～0.01)。小鼠48℃甩尾实验中,赤雹根总皂苷各剂量组药后40min、60min缩尾潜伏期(11.89±1.36)s、(10.83±1.09)s、(10.30±2.20)s、(8.98±1.65)s、(9.08±1.22)s、(8.01±2.04)s均显著高于NS组(7.27±1.32)s,且差异有统计学意义(P<0.05)。酒石酸锑钾致小鼠扭体反应实验中,赤雹根总皂苷各剂量组15min内小鼠扭体反应次数(24.10±2.77)次、(28.40±3.75)次、(35.60±4.99)次均显著低于NS组(40.40±5.04)次,且差异有统计学意义(P<0.05～0.01)。结论:赤雹根总皂苷具有显著的镇痛作用。     

赤雹根水提取物对人白血病细胞K562的抑制作用

目的 观察赤雹根水提取物对人白血病细胞K562的抑制作用.方法 采用MTT法和细胞形态学观察的方法, 观察不同浓度赤雹根水提取物对人白血病细胞K562的抑制作用.结果 赤雹根水提物对人白血病细胞K562的增殖有剂量依赖性的抑制作用,其中浓度1,0.5 ,0.25,0.125,0.062 5 mg/ml的赤雹根水提物对人白血病细胞K562的抑制率分别为85.61%,69.78%,37.98% ,32.09%,15.68%.结论 赤雹根水提物在体外对人白血病细胞K562的增殖有显著的抑制作用.     

赤雹根总皂苷镇痛作用机制研究

目的探讨赤雹根总皂苷(TSTD)镇痛作用与阿片受体、NO及PGE2的关系,为其临床应用提供实验依据。方法采用小鼠热板法实验,观察纳洛酮、L-精氨酸(L-Arg)和左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)对赤雹根总皂苷镇痛作用的影响,探讨其镇痛作用与阿片受体及NO含量的关系;通过观察TSTD对疼痛模型小鼠组织中PGE2含量的影响,探索其镇痛作用与PGE2的关系。结果 TSTD组痛阈显著高于模型组(P<0.01);TSTD组与纳洛酮+TSTD组痛阈差异无显著统计学意义(P>0.05);L-Arg+TSTD组痛阈显著低于TSTD组(P<0.01)。TSTD+L-NAME组痛阈高于TSTD组。TSTD组小鼠血清和脑组织中NO的含量显著低于NS对照组(P<0.05),TSTD+L-Arg组NO含量高于TSTD组(P<0.05),TSTD+L-NAME组NO含量低于TSTD组(P<0.05)。TSTD组动物腹腔液和血清中PGE2的含量低于NS对照组(P<0.01)。结论 TSTD镇痛作用与阿片受体无关,与抑制NO和PGE2的合成或释放有关。     

赤雹根总皂苷抗炎作用研究

目的:观察赤雹根总皂苷的抗炎活性,为其研究开发提供实验依据.方法:采用二甲苯致小鼠耳肿胀法,角叉菜胶致小鼠足肿胀法,小鼠棉球肉芽肿法,评价赤雹根总皂苷的抗炎作用.二甲苯耳肿胀法和角叉菜胶致足肿胀法,各组小鼠每日灌胃给药1次,连续3d,末次给药后30 min,复制模型.小鼠棉球肉芽肿实验,棉球植入术后小鼠连续灌胃给药7d.实验动物均分为赤雹根总皂苷高、中、低( 240,120,60 mg·kg-1)剂量组、阿司匹林(100 mg·kg-1)组、模型组(生理盐水).结果:赤雹根总皂苷高、中、低剂量组小鼠的耳肿胀度[(1.46±0.19),(1.68±0.15),(1.99±0.17) mmg]较模型组(2.31±0.24)mg明显降低(P＜0.01);赤雹根总皂苷各剂量组小鼠足肿胀度[(28.7±5.03),(33.8±4.65),(43.33±4.98) mg]较模型组(55.18±2.96) mg明显降低(P＜0.01);赤雹根总皂苷各组小鼠肉芽肿质量(5.08±0.37,6.76±0.44,8.66±0.55) mg较模型组(12.05 ±1.22) mg明显降低(P＜0.01),且各实验中赤雹根总皂苷高和(或)中剂量效果优于阿司匹林(P＜0.05～0.01).角叉菜胶致小鼠足肿胀实验中,赤雹根总皂苷各组小鼠血清前列腺素E2(PGE2)吸光度值(0.193±0.022,0.219±0.035,0.250±0.037)和一氧化氮(N0)含量(5.85±3.50,9.62±3.61,16.79±3.14)μmol·L-1较模型组PGE2吸光度值(0.545±0.06),NO含量(23.02±3.18)μmol· L-1明显降低(P＜0.01).结论:赤雹根总皂苷有显著的抗炎作用,其抗炎作用与抑制炎症介质PGE,和NO的合成释放有关.     

满药赤雹根总皂苷抗炎作用实验研究

目的:评价赤雹根总皂苷(TSRT)的抗炎活性.方法:二甲苯致小鼠耳肿胀实验,昆明种小鼠,随机分为TSRT240,120,60 mg·kg-1剂量组,Asp 200 mg·kg-1组及模型对照组,连续ig给药3 d.角叉菜胶致大鼠足跖肿胀实验,Wistar大鼠,随机分为TSRT 200,100,50 mg·kg-1剂量组,Asp 160 mg·kg-1组及模型对照组,连续ig给药3d.大鼠皮内色素渗出实验,分组及给药剂量同“大鼠足跖肿胀实验”,ig给药1次.小鼠棉球肉芽肿实验,分组及给药剂量同“小鼠耳肿胀实验”,连续ig给药7d.以耳肿胀度、足跖肿胀度、色素渗出量及肉芽肿质量为指标评价TSRT对急、慢性炎症的影响.结果:在小鼠耳肿胀实验中,TSRT 240,120,60 mg·kg-1剂量组小鼠耳肿胀度均明显低于模型对照组(P＜0.01);在大鼠足跖肿胀实验中,致炎后1-4h,TSRT 200,100 mg·kg-1剂量组大鼠足趾肿度均明显低于模型对照组(P＜0.01),致炎后2～4h,TSRT 50 mg·kg-1剂量组大鼠足趾肿度均明显低于模型对照组(P＜0.05);大鼠皮内色素渗出实验中,各剂量组皮内蓝斑的面积及色素渗出量均低于模型对照组(P＜0.05～P＜0.01);大鼠棉球肉芽肿质量显著低于模型对照组(P＜0.05～P＜0.01).结论:赤雹根总皂苷对急慢性炎症有明显的抗炎作用.     

赤雹根总皂苷镇痛作用部位研究

目的:探讨赤雹根总皂苷(TSRT)的镇痛作用部位.方法:昆明种小鼠120只,随机分为福尔马林致痛实验组和改进小鼠酵母致炎性组织疼痛模型实验组,每组60只.各组再分为TSRT 240,120,60 mg· kg-1组,阿司匹林200 mg· kg-1组,吗啡5 mg·kg-1组和空白对照组,每组10只,吗啡组腹腔注射给药,其余各组均灌胃给药.采用小鼠福尔马林致痛实验和改进小鼠炎性组织疼痛模型观察TSRT对痛反应的影响,分析其镇痛作用部位.结果:在福尔马林实验中,TSRT 120,60 mg· kg-1剂量组小鼠第Ⅱ时相痛反应积分显著低于NS组(P＜0.01),但对第Ⅰ时相疼痛积分无明显影响;TSRT 240 mg· kg-1剂量组小鼠第Ⅰ时相和第Ⅱ时相痛反应积分均低于NS组(P ＜0.05,P＜0.01).在小鼠炎性组织疼痛模型实验中,TSRT各剂量组炎性足痛阈显著高于NS组(P＜0.01),正常足痛阈与NS组比较差异无显著意义.结论:TSRT镇痛作用部位主要在外周.     

太白楤木总皂苷诱导人白血病K562细胞凋亡的研究

目的 探讨太白楤木总皂苷对人白血病K562细胞增殖的抑制作用及其作用机制.方法 MTT法检测不同浓度的太白楤木总皂苷处理后K562细胞的增殖抑制率,倒置显微镜下观察细胞形态学变化,荧光显微镜下观察细胞核的变化,免疫组化法检测NF-κB、Casp3蛋白的表达.结果 太白楤木总皂苷对K562细胞的增殖有抑制作用,呈时间和剂量效应;倒置显微镜及荧光显微镜观察显示K562细胞随太白楤木总皂苷作用浓度增加发生形态学改变,出现凋亡小体;免疫组化法检测显示太白楤木总皂苷可以抑制NF-κB的表达,升高Caspase-3.结论 太白楤木总皂苷对K562细胞增殖有显著的抑制作用,并促进K562细胞凋亡,可能与下调NF-κB的表达和上调Caspase-3表达相关.     

赤雹根总皂苷对类风湿性关节炎大鼠血清细胞因子的影响

目的研究赤雹根总皂苷对类风湿性关节炎大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α的影响。方法以弗氏完全佐剂诱导大鼠佐剂性关节炎,将造模成功50只大鼠随机分为模型组,赤雹根总皂苷160,80,40 mg/(kg·d)组和雷公藤12 mg/(kg·d)组,另取10只正常大鼠作正常对照。连续灌胃给药21 d。观测各组大鼠继发关节肿胀度和关节炎指数;给药后第22天,处死大鼠,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量。结果赤雹根总皂苷能明显降低佐剂性关节炎大鼠继发侧的关节肿胀度和关节炎指数(P<0.01);与正常对照组相比,模型组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量明显升高(P<0.01);赤雹根总皂苷灌胃治疗后,各组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量较模型组明显降低(P<0.01)。结论赤雹根总皂苷对大鼠类风湿性关节炎有治疗作用,且该作用与抑制IL-1β、IL-6、TNF-α的合成有关。     

赤雹根镇痛作用及有效部位研究

目的 观察赤雹根的镇痛作用并筛选其有效部位.方法 采用小鼠48℃热板法和扭体法,观察赤雹根水提物、醇提物及醇提物的石油醚萃取物、氯仿萃取物、正丁醇萃取物及水溶性部分的镇痛作用.结果 除石油醚萃取物以外,其余赤雹根各提取物均能明显延长热板试验小鼠痛反应潜伏期,减少ip酒石酸锑钾所致小鼠扭体次数,上述作用的主要有效部位之一为正丁醇萃取物中所含的总皂苷.结论 赤雹根具有明显的镇痛作用,其所含总皂苷为其镇痛作用的主要有效部位之一.     

赤雹根总皂苷对实验性佐剂型关节炎镇痛作用的研究

目的:观察赤雹根总皂苷对实验性佐剂型关节炎的镇痛作用。方法:采用弗氏完全佐剂(FCA)制备大鼠实验性佐剂型关节炎疼痛模型,分别给予赤雹根总皂苷(160、80、40mg.kg-1),以及雷公藤12mg.kg-1阳性对照药治疗,以关节炎指数、痛阈和疼痛级别为指标,评价其对实验性佐剂型关节炎的镇痛作用。结果:赤雹根总皂苷各剂量均能明显降低大鼠实验性佐剂型关节炎的关节炎指数,提高其痛阈,降低其疼痛级别。结论:赤雹根总皂苷对实验性佐剂型关节炎具有显著的镇痛作用。     

赤雹果水提物抗炎作用及机制研究

目的 研究赤雹果水提物的抗炎作用,并探讨其作用机制.方法 采用二甲苯致小鼠耳肿胀模型、角叉菜胶致小鼠足趾肿胀模型,观察赤雹果水提物对急性炎症的作用;采用小鼠棉球肉芽肿实验模型,观察其对慢性炎症的作用;通过测定角叉菜胶致足跖肿胀小鼠血清及足爪中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)及前列腺素E2(PGE2)的含量,足爪中总蛋白含量,评价其抗炎作用的可能机制.结果 赤雹果水提物3.2,1.6,0.8g·kg-1剂量组可显著抑制小鼠耳肿胀、小鼠足趾肿胀及小鼠棉球肉芽的增生(与NS组比较P<0.01～0.05),降低角叉菜胶致足趾肿胀小鼠血清和足爪中NO、MDA及PGE2含量,减少炎症组织总蛋白的渗出(与NS组比较P<0.01～0.05).结论 赤雹果水提物具有显著的抗炎作用,其作用机制可能与抑制NO、PGE2合成及脂质过氧化有关.     

冬凌草甲素对白血病NB4细胞的生长抑制作用

目的探讨冬凌草甲素对急性白血病 NB4细胞的生长抑制作用及其作用机制.方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的 NB4细胞, MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪及 Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡, TRAP- PCR- ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性.结果冬凌草甲素可显著降低 NB4细胞端粒酶活性,抑制细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,有明显的量-效与时-效关系.结论 冬凌草甲素能抑制 NB4细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一.     

冬凌草甲素对HL-60细胞的诱导凋亡作用及其作用机制

目的:探讨冬凌草甲素对白血病HL-60细胞的诱导凋亡作用及其作用机制.方法:以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的HL-60细胞,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡,TRAP-PCR-ELISA及FCM法检测细胞凋亡前后端粒酶活性及P53蛋白表达水平的变化.结果:8 umol/L以上的冬凌草甲素对HL-60细胞具有显著的诱导凋亡及增殖抑制作用,并呈现出明显的量-效与时-效关系.药物作用48小时后细胞的凋亡率达高峰,在Hoechst染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的凋亡改变.在细胞凋亡过程中,端粒酶活性下降,同时P53蛋白的表达水平显著升高.结论:冬凌草甲素对HL-60细胞具有显著的诱导凋亡及增殖抑制作用,升高P53蛋白的表达水平及降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一;这为冬凌草甲素进一步应用于临床治疗急性白血病提供了有力的试验依据.     

眼镜蛇毒细胞毒素CTX-d诱导NB4细胞凋亡及其机制研究

目的探讨眼镜蛇毒细胞毒素CTX-d诱导NB细胞凋亡的机制。方法MTT法测定CTX-d体外细胞毒作用,电镜、流式细胞仪观察CTX-d对NB4细胞的诱导凋亡作用,流式细胞仪检测NB4细胞线粒体膜电位的变化,Western-blotting测定胞浆细胞色素C及caspase-9、caspase-3的变化。结果CTX-d作用NB4细胞6、12h的IC50分别为1.8、1.35μg/mL;CTX-d引起NB4细胞线粒体肿胀、核固缩等形态学改变;诱导NB4细胞出现亚G1期的凋亡峰,且有时效及量效关系;CTX-d(1.0μg/mL)作用0.5h,NB4细胞线粒体膜电位已开始下降,同时在胞浆中检测到细胞色素C,显示细胞色素C已由线粒体释放入胞浆;caspase-9酶原的量在CTX-d(1.0μg/mL)作用1h时开始下降,而活化的caspase-3片断在0.5h即检测到,表明除了通过caspase-9,CTX-d还可能通过其他途径激活caspase-3。结论CTX-d可通过降低线粒体膜电位、细胞色素C释放,激活caspase-9和caspase-3,从而诱导NB4细胞凋亡,还可能通过其他途径激活caspase-3,参与凋亡作用。