双类似物鼻黏膜耐受治疗实验性自身免疫性重症肌无力的免疫机制

目的　用双类似物鼻黏膜耐受治疗实验性自身免疫性重症肌无力 ( EAMG)大鼠 ,探讨其对机体免疫机制的影响。方法　建立 Lewis大鼠的 EAMG模型 ,在致敏同时 ( A组 )及缓解期第 1天 ( B组 )给予双类似物 3 0 0μg/只。动态评估大鼠临床症状 ,检测外周血 ( PB) ACh R-Ab( Ig G)含量 ,检测急、慢性期 PB单个核细胞 ( MNC)及致敏第 5 0天淋巴结、脾 MNC中的 CD4+ CD2 5 + 细胞数改变。结果　治疗组大鼠临床症状减轻 ;治疗组及对照组大鼠 PB中特异性 ACh R-Ab( Ig G)含量随病程延续而增加 ,但在致敏后第 5及第 7周 ,A、B组特异性 Ig G抗体含量比各自对照组显著减低 ( P <0 .0 5 ) ;双类似物鼻黏膜耐受治疗后 ,EAMG大鼠 PB MNC中的 CD4+ 细胞数减少 ( P<0 .0 5 ) ,CD4+ CD2 5 +细胞数相对增加 ( P<0 .0 5 ) ;A、B组淋巴结和脾 MNC中 CD4+细胞数减少( P<0 .0 5 ) ,CD4+ CD2 5 +细胞数只在 B组相对增加 ( P <0 .0 5 )。结论　双类似物鼻黏膜耐受治疗病情进展中的 EAMG有效 ;伴随临床症状缓解 ,治疗组大鼠 ACh R-Ab( Ig G)含量减少且免疫调节性 CD4+ CD2 5 +细胞数相对增多 ;双类似物治疗 EAMG的可行性为抗原特异性治疗重症肌无力 ( MG)和其他自身免疫性疾病 ( AID)提供了依据。     

双类似物鼻黏膜耐受在EAMG发病中的预防作用机制

目的　采用双类似物 (Lys2 62 -Ala2 0 7)对实验性自身免疫性重症肌无力 (EAMG)模型进行鼻黏膜耐受不同时间点预防性给药 ,观察临床及免疫指标变化 ,以探讨其对 EAMG免疫发病中的预防作用机制。方法　应用乙酰胆碱受体 (ACh R)加福 (氏 )佐剂致敏 Lewis大鼠建立 EAMG模型 ,在致敏前 1 0 d(预防耐受 A组 )及致敏当日 (预防耐受 B组 )经鼻腔给药 ,评价给药后 A、B组及对照组大鼠体重、临床症状 ,观察肌电图变化、检测致敏第 42天血清抗 ACh R抗体 Ig G及其亚型含量和第 5 0天处死后淋巴结单个核细胞 (MNC)中 IFN-γ、IL-4及 IL-1 0分泌细胞含量变化。结果　 (1 )急性期和慢性期 A、B组体重增加而临床症状明显轻于对照组 ,慢性期 A组临床症状轻于 B组 ;(2 ) A、B组低频重复电刺激出现明显衰减的阳性率低于对照组 ;(3 )慢性期 A、B组 Ig G含量明显低于对照组 ,且 A组低于 B组 ,各组间抗体亚型 Ig G1含量无明显差异 ,而 A、B组的 Ig G2 a和 Ig G2 b含量明显少于各自对照组 ,B组 Ig G2 b含量高于 A组 ;(4 ) A、B组淋巴结中的 IFN-γ、IL-4及 IL-1 0阳性细胞含量均明显低于各自对照组。结论　Lys2 62 -Ala2 0 7鼻黏膜预防耐受不仅可有效地抑制临床症状 ,并使致病性最强的ACh R特异性 Ig G2抗体分泌量减少 ,Ig G     

双类似物鼻粘膜耐受对实验性自身免疫性重症肌无力的影响

目的　在实验性自身免疫性重症肌无力 (EAMG)动物模型采用双类似物进行鼻粘膜免疫耐受 ,观察其临床及免疫功能变化 ,评价疗效并探讨其作用机制。方法　建立Lewis大鼠EAMG动物模型 ,选取经预实验证实有效的最低剂量为治疗量 ,检测致敏同时 (A组 )和缓解期第 1天 (B组 )给予双类似物鼻粘膜免疫耐受治疗后 ,大鼠体重、临床症状、致敏第 35天血清抗AChR抗体IgG含量及其淋巴细胞在不同刺激原作用下的增殖情况。结果　 (1 )治疗后EAMG大鼠体重增加 ,临床症状缓解。 (2 )治疗后血清抗AChR抗体IgG含量 (吸光度 ,A值 ) :A组 (0 98± 0 2 4 )和B组 (0 95± 0 2 6)均少于各自对照组 (分别为 1 1 8± 0 1 0和 1 1 9± 0 1 2 ) ,但A、B组间差异无显著意义。 (3)针对AChR等特异性抗原的淋巴细胞增殖指数 :A组 (1 71± 0 78)和B组 (1 97± 0 56)与对照组 (3 2 4± 1 31和 3 1 9±1 50 )相比均减低 ,增殖反应明显受抑制。结论　双类似物鼻粘膜耐受能明显缓解EAMG的肌无力症状 ,并伴有特异性T、B细胞免疫功能抑制     

设计耐受原并用鼻黏膜耐受治疗EAMG的方法学研究

目的　设计特异性耐受原 ,通过其鼻黏膜耐受治疗对实验性自身免疫性重症肌无力 (EAMG)发病过程的影响 ,以探讨该疗法在模型应用中的可行性。方法　用 Lewis大鼠建立 EAMG模型 ,选取双类似物作为耐受原在致敏同时给予鼻黏膜耐受治疗 ,动态观察大鼠体重及临床评分改变。结果　虽然治疗组大鼠发病率不降低 ,但是在 EAMG急性期和慢性期 ,其临床症状均较对照组减轻 (P <0 .0 5 )。结论　用双类似物鼻黏膜耐受可以达到治疗 EAMG的目的 ,其结果为抗原特异性治疗重症肌无力 (MG)和其他自身免疫性疾病 (AID)提供了依据。     

预防性双类似物鼻粘膜耐受对EAMG的影响

目的选择双类似物(Lys262-Ala207)通过不同时间点对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型进行鼻粘膜耐受预防性给药,观察其临床及免疫指标变化,并评价疗效,探讨预防性鼻粘膜耐受在EAMG中的预防作用机制。方法应用乙酰胆碱受体(AChR)加CFA致敏Lewis大鼠建立EAMG模型,并在致敏前10 d(预防耐受A组)及致敏当日(预防耐受B组)给予耐受肽Lvs262-Ala207及相应对照组CA、CB采用相同剂量对照肽MBP-p83-99鼻腔给药。检测给药后A、B组及相应对照组大鼠的体重、临床评分、肌电图、肌肉中AChR含量丢失变化及致敏第42 d血清抗AChR抗体IgG含量。结果急性期和慢性期A、B组体重明显超过相应对照组,临床症状明显轻于相应对照组,慢性期A组体重明显超过B组、病情明显轻于B组;A、B组低频重复电刺激出现衰减反应D5阳性率低于相应对照组;A、B组肌肉AChR含量丢失分别明显低于相应对照组,而A组低于B组;慢性期42 d A、B组IgG含量明显低于相应对照组,同时A组明显低于B组。结论本实验表明,预防耐受的疗效与自身免疫启动时间有关,启动前优于启动时耐受;双类似物鼻粘膜耐受预防不仅可有效地抑制临床症状,且可特异性减低致病性循环抗体含量和减少神经肌接头AChR含量丢失,为采用双类似物鼻粘膜耐受防治人类重症肌无力(MG)提供了依据。     

获得性自身免疫性重症肌无力

凡神经肌肉接头(NMJ)处突触后膜(PS)上乙酰胆碱受体(AChR)数量减少或功能减退,均可致活动后加重、休息后减轻等随意肌无力的临床表现,该病称为重症肌无力(MG)。MG病因众多,包括先天遗传、代谢障碍、中毒、药物(D-青霉胺等)、免疫障碍等。     

实验性自身免疫性重症肌无力动物模型的研究概况

通过主动或被动免疫方法可复制出实验性自身免疫性重症肌无力(ＥＡＭＧ)动物模型,该模型在临床表现、药理学、电生理、免疫学及组织学表现等方面与ＭＧ病人很相似,因此,它是研究ＭＧ的极佳工具。本文从ＥＡＭＧ的动物选择、制备方法及检测指标等方面作一综述。     

实验性自身免疫性重症肌无力动物模型(综述)

实验性自身免疫性重症肌无力动物模型在临床表现、药理学、电生理、免疫学及组织学表现等方面已经证明与重症肌无力患者极为相似，是进一步研究人类重症肌无力的极佳工具。此文主要介绍实验性自身免疫性重症肌无力动物模型的各种制备方法、检测指标以及影响制备动物模型的因素。     

细胞因子在实验性自身免疫性重症肌无力发生机制中的作用(综述)

重症肌无力（MG）及其动物模型实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）是自身免疫性疾病，研究表明细胞因子在EAMG的发生及发展过程中有重要作用。并可为MG的研究提供有益的启示，本文就近年来研究较多并在EAMG发生机制中有重要作用的部分细胞因子（干扰素-α、干扰素-γ，白细胞介素-12和白细胞介素-4）做一综述。     

一氧化氮合酶抑制剂对实验性自身免疫性重症肌无力的作用

实验证明，一氧化氮合酶/一氧化氮(NOS／NO)参与了自身免疫反应的多个环节，但关于它们在自身免疫性疾病发病中的作用，目前仍存在争议。Brenner等发现，NOS抑制剂治疗实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)大鼠可以取得肯定的疗效，而Gold等的研究却认为，NOS抑制剂可使主动免疫的EAE大鼠发病明显加重。     

鼠源性乙酰胆碱受体α亚基97-116肽段(V108A)鼻黏膜耐受对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的影响

目的 研究鼠源性乙酰胆碱受体α亚基97-116肽段丙氨酸替代108缬氨酸[Rα97-116(V108A)]鼻黏膜耐受对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠肌无力表现及免疫功能的影响.方法 将采用Rα97-116强化免疫接种方法 成模的22只EAMG大鼠随机分成耐受组和对照组,分别经鼻黏膜给予Rα97-116(V108A)和PBS缓冲液免疫耐受处理10 d后,观察不同时间点两组大鼠体质量、Lennon肌无力评分、血清AChR-ab(ELISA法)及CD28、CTLA4、B7共刺激分子(流式细胞仪)变化.结果 耐受组EAMG大鼠体质量[(228.1±5.8)g]较对照组[(215.0±16.2)g]增加(t=2.395,P＜0.05);肌无力临床评分[耐受组(1.55±0.44)分,对照组(2.10士0.66)分]下降(t=-2.20,P＜0.05);血清AChR-ab(耐受组0.97±0.20,对照组1.27±0.26,t=-2.857,P＜0.05)和外周血CD28、B7-1、B7-2、CTLA4分子的表达(%)耐受组(分别为27.35±7.05、4.73±0.58、2.71±0.35、1.72±0.44)较对照组(分别为40.02±8.81、9.52±1.25、5.88±1.09、2.64±0.47)明显下调(t=3.479、10.861、8.755、4.403,均P＜0.01).结论 Rα97-116(V108A)鼻黏膜耐受能明显减轻EAMG的肌无力症状,并能引起特异性T细胞活化和B细胞免疫功能抑制.     

与霍乱毒素B亚单位结合的重组人AChR片断经鼻腔治疗实验性自身免疫性重症肌无力

目的 探讨与霍乱毒素B亚单位结合的重组人AChRα亚单位片断(CTB-Hα1-205)治疗实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的有效性和基本作用机制.方法 将用AChR诱导的Lewis EAMG鼠随机分为3组:CTB-Hα1-205治疗组、Hα1-205组和CTB-HGG对照组,在诱导EAMG后第14天分别按上述3组从鼻腔滴入CTB-Hα1-205、Hα1-205和CTB-HGG.对各组进行临床分数评估、测定鼠血清中抗AChR特异抗体和淋巴细胞增殖反应.结果 CTB-Hα1-205组和Hα1-205组平均临床分数均较对照组有明显减少,差异有统计学意义(均为P＜0.01),同时CTB-Hα1-205组较Hα1-205组也有明显减少(P＜0.05);与对照组比较,CTB-Hα1-205组和Ha1-205组血清中鼠抗AChR特异抗体IgG、IgG2a、IgG2b和IgG2c的产生均明显被抑制(P＜0.01),CTB-Hα1-205治疗组的IgG、IgG2b和IgG2c较Hα1-205组低,且差异有统计学意义(P＜0.05);另一方面,CTB-Hα1-205组和Hα1-205组的IgG1较对照组却有明显升高(P＜0.05),同时,CTB-Hα1-205组和Hα1-205组对AChR特异性抗原的淋巴细胞增殖反应也被明显抑制(P＜0.05).结论 CTB-Hα1-205比Hα1-205能更加有效治疗EAMG,其作用机制是抑制了自身抗体的产生、IgG亚型的转换和特异的淋巴细胞增殖反应.     

树突状细胞负载Tα146-162预防实验性自身免疫性重症肌无力的实验研究

目的探讨负载电鳗乙酰胆碱受体(TAChR)免疫优势肽段α146-162(Tα146-162)的不成熟髓源树突状细胞(iMDC),即Tα146-162-iMDC对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的预防作用及其机制。方法(1)24只C57BL/6小鼠随机分为Tα146-162-iMDC组、iMDC组、对照组、正常组,每组6只。Tα146-162-iMDC组、iMDC组和对照组小鼠皮下注射TAChR抗原乳剂(作为第0天)。第7天,Tα146-162-iMDC组皮下注射Tα146-162-iMDC,iMDC组和对照组分别注射对照iMDC和磷酸盐缓冲液(PBS)。正常组小鼠不做干预。第14天检测淋巴细胞增殖反应。(2)另外24只C57BL/6小鼠随机分为预防组和EAMG组。每只小鼠在第0、30、60天皮下注射抗原乳剂诱导EAMG。预防组每次免疫后3d皮下注射Tα146-162-iMDC,对照组皮下注射PBS。观察发病情况并进行肌力评分。第90天结束观察。(3)3H-TdR掺入法检测淋巴细胞增殖反应,酶联免疫吸附实验检测淋巴细胞培养液上清中干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-6的含量。结果(1)Tα146-162-iMDC组、iMDC组、对照组和正常组TAChR特异性淋巴细胞增殖反应值(放射性荧光闪烁计数)分别为3314·1±571·3、7717·5±1283·4、8608·6±1458·9、922·9±109·3,与iMDC组和对照组相比,Tα146-162-iMDC组抗原特异性淋巴细胞增殖反应显著降低(P<0·01)。(2)预防组和EAMG组临床评分分别为(0·33±0·65)、(1·46±1·08)分,差异有统计学意义(P<0·01);预防组和EAMG组发病率分别为3/12(25%)和9/12(75%)只,差异有统计学意义(P<0·05)。(3)预防组和EAMG组TAChR特异性淋巴细胞增殖反应值分别为3347·6±556·9、9416·2±1546·5,预防组显著低于EAMG组(P<0·01)。(4)预防组和EAMG组淋巴细胞在TAChR刺激下分泌IFN-γ分别为(117·6±18·5)、(363·1±63·2)pg/ml,分泌IL-6为(49·7±9·9)、(90·6±13·6)pg/ml;与EAMG组相比,预防组淋巴细胞抗原特异性IFN-γ、IL-6分泌显著减少(P<0·01)。结论Tα146-162-iMDC能抑制TAChR预致敏T细胞免疫反应,预防EAMG的发生。Tα146-162-iMDC诱导免疫耐受与抗原特异性淋巴细胞增殖和IFN-γ、IL-6的分泌降低有关。     

Suppression of experimental autoimmune myasthenia gravis by nasal administration of acetylcholine receptor

Experimental autoimmune myasthenia gravis (EAMG) is a well established animal model, which can be induced in various animal species and strains with acetylcholine receptor (AChR) and represents an experimental counterpart of human myasthenia gravis (MG). Current immunotherapies of both EAMG and MG are non-specific and limited by their toxicity. Tolerance to EAMG has been achieved by oral administration of milligram quantities of Torpedo AChR. In the present report we demonstrate that nasal administration of microgram doses of Torpedo AChR to female Lewis rats prior to immunization with Torpedo AChR and complete Freund's adjuvant resulted in the prevention of subsequently induced EAMG, the suppression of serum anti-AChR antibody levels, the decrease of delayed-type hypersensitivity responses to AChR, as well as the suppression of AChR-specific immunoglobulin G-secreting cells, AChR-reactive interferon-γ-secreting cells and T cell proliferation in peripheral lymphoid organs, particularly in popliteal and inguinal lymph nodes regional to immunization. We conclude that clinical signs of EAMG can be efficiently prevented by nasal administration of AChR in parallel with the downregulation of both B and T cell responses specific to AChR.     

Effects of sex hormones on experimental autoimmune myasthenia gravis.

To examine whether exacerbation of myasthenia gravis (MG) can be induced by changes in sex hormone levels we immunized 20 female Lewis rats with torpedo antigen to induce experimental autoimmune MG (EAMG). Ten of the animals underwent surgical ovariectomy prior to the induction of EAMG and 10 served as controls. Anti-acetylcholine receptor antibody (AChR-ab) titres and the degree of decrement on repetitive stimulation electromyography (REMG) at 3 Hz were obtained at base line and compared between rats with and without ovariectomy and a second control group of naïve rats. Three rats in each group were then injected with excess oestrogen and progesterone for one week, and three of the remaining rats in each group were given sham injections, and the degree of decrement on REMG and AchR-ab titres were re-evaluated. Immune reactivity of peripheral lymphocytes and splenic lymphocytes from all groups and controls was also determined. A comparable number of animals with and without ovariectomy developed clinical and electromyographic EAMG. The extent of decrement on REMG and AChR-ab titres did not change following hormonal replacement. Lymphocyte reactivity was similar for rats with and without ovariectomy. In conclusion, sex hormones do not appear to have an influence on the susceptibility to and the severity of MG.     

糖皮质激素受体阻断对大鼠实验性自身免疫性重症肌无力的影响

研究重症肌无力（ＭＧ）患者外周血白细胞糖皮质激素受体（ＧＲ）减少，而血浆皮质醇则在正常范围，探讨其与ＭＧ发病的关系。方法ＳＤ大鼠３２只，随机分成４组。实验组先以ＧＲ的竞争性拮抗剂米非司酮（ＲＵ３８４８６，ＲＵ４８６）阻断其ＧＲ，再以从人肌肉中粗提的乙酰胆碱受体（ｎＡＣｈＲ）进行免疫；实验对照组单用ｎＡＣｈＲ，试剂对照组只用ＲＵ４８６，而正常对照组仅用福氏佐剂。以临床症状、血清抗ｎＡＣｈＲ抗体（ｎＡＣｈＲ－ａｂ），重复刺激坐骨神经递减幅度为观察指标。结果实验组的临床症状和ｎＡＣｈＲ－ａｂ滴度升高及肌电图递减幅度均较明显，经ｔ检验分析，均与实验对照组有显著性差异（Ｐ＜０．０５），而试剂对照组和正常对照组均无ＭＧ的表现。结论ＧＲ被阻断后，对大鼠的实验性自身免疫性ＭＧ（ＥＡＭＧ）发病有易化作用。     

Age-related susceptibility to experimental autoimmune myasthenia gravis: Immunological and electrophysiological aspects

Susceptibility to experimental autoimmune myasthenia gravis (EAMG) was found to decrease with aging in both Lewis and Brown Norway (BN) rats. In this study, the difference in susceptibility between young and aged Lewis and BN rats was used to analyze factors determining the clinical severity of EAMG. The incidence and severity of muscular weakness did not correlate with acetylcholine receptor (AChR) loss nor with the ability of antibodies to interfere with AChR function. Aged rats showed significantly lower anti-rat AChR antibody titers than young rats and developed less severe or no clinical signs of disease. In individual young or aged rats, however, no significant correlation was found between the clinical signs of disease and anti-rat AChR titer. Neuromuscular transmission was found to change with aging as measured by single-fiber electromyography (SFEMG). In aged BN rats, increased jitter and blockings were found even before EAMG induction. Despite this disturbed neuromuscular transmission, these aged BN rats were clinically resistant against induction of EAMG. The results of this study indicate that the age-related susceptibility to EAMG is influenced by factors determined by the immune attack as well as mechanisms at the level of the neuromuscular junction. © 1997 John Wiley & Sons, Inc. Muscle Nerve 20: 1091–1101, 1997     

Macrophage apoptosis in muscle tissue in experimental autoimmune myasthenia gravis

Combining in situ tailing and immunocytochemical staining, we demonstrated that the infiltrating macrophages in muscle tissue sections during early phase of experimental autoimmune myasthenia gravis (EAMG) in Lewis rats were eliminated by apoptosis at high frequency. These apoptotic macrophages were colocalized in the end-plate regions. Apopto-sis is a major cause for elimination of infiltrating macrophages during the early phase of EAMG. © 1998 John Wiley & Sons, Inc. Muscle Nerve 21:1071–1074, 1998.