糖心康对糖尿病大鼠心肌组织基因膜联蛋白A4 mRNA表达的影响

目的:比较糖尿病性心肌病大鼠和中药复方糖心康治疗组大鼠心肌组织中基因表达的差异,并用Evegreen实时荧光RT-PCR技术定量检测膜联蛋白A4(annexin A4)在各组大鼠心肌组织的表达水平。方法:(1)差异表达基因的筛选;(2)荧光定量RT-PCR的检测。结果:本文仅对筛选出差异表达基因谱中的annexin A4 mRNA进行报告。糖尿病性心肌病模型组心肌组织基因annexin A4 mRNA表达下调,中药复方糖心康治疗组心肌组织基因annexin A4 mRNA表达上调。结论:annexin A4 mRNA在糖尿病状态下心肌组织也有表达且表达下调,而中药复方糖心康可使其上调,这也是中药复方糖心康对糖尿病性心肌组织损伤具有保护作用的机制之一。     

糖心康对糖尿病大鼠心肌组织基因fgl2mRNA表达的影响

目的：比较糖尿病性心肌病大鼠和中药复方糖心康治疗组大鼠心肌组织中基因表达的差异,并用Eve green实时荧光RT-PCR技术定量检测凝血酶原酶（fgl2mRNA）在各组大鼠心肌组织的表达水平。方法：（1）差异表达基因的筛选;（2）荧光定量RT-PCR的检测。结果：本文仅对筛选出差异表达基因谱中的fgl2mRNA进行报告。糖尿病性心肌病模型组心肌组织基因fgl2mRNA表达上调,中药复方糖心康治疗组心肌组织基因fgl2mRNA表达下调。结论：fgl2mRNA在糖尿病状态下心肌组织也有表达,并且表达上调,而中药复方糖心康可使其下调,这也是中药复方糖心康对糖尿病性心肌组织损伤具有保护作用的机制之一。     

糖心康对糖尿病大鼠心肌组织基因Igfbp-3mRNA表达的影响

目的:比较糖尿病性心肌病大鼠和中药复方糖心康治疗组大鼠心肌组织中基因表达的差异,并用Evegreen实时荧光RT-PCR技术定量检测胰岛素样生长因子结合蛋白-3(Igfbp-3mRNA)在各组大鼠心肌组织的表达水平。方法:(1)差异表达基因的筛选;(2)荧光定量RT-PCR的检测。结果:仅对筛选出差异表达基因谱中的Igfbp3mRNA进行报道。糖尿病性心肌病模型组心肌组织基因Igfbp3mRNA表达下调,中药复方肾消康治疗组心肌组织基因Ig-fbp3mRNA表达上调。结论:Igfbp-3mRNA在糖尿病状态下心肌组织也有表达,并且表达上调,而中药复方糖心康可使其下调,这也是中药复方糖心康对糖尿病性心肌组织损伤具有保护作用的机制之一。     

糖心康对糖尿病大鼠心肌组织基因骨苷氨酸表达的影响

目的:比较糖尿病性心肌病大鼠和中药复方糖心康治疗组大鼠心肌组织中基因表达的差异,并用Eve green实时荧光RT-PCR技术定量检测骨甘氨酸(Ogn mRNA)在各组大鼠心肌组织的表达水平。方法:①差异表达基因的筛选;②荧光定量RT-PCR的检测。结果:仅对筛选出差异表达基因谱中的Ogn mRNA进行报告。糖尿病性心肌病模型组大鼠心肌组织中Ogn mRNA在心肌组织表达量增多,与空白组比较差异显著(P<0.01),而经糖心康治疗后大鼠心肌组织中Ogn mRNA表达量减少,与模型组比较有显著差异(P<0.01)。结论:Ogn mRNA在糖尿病状态下心肌组织也有表达,并且表达上调,而中药复方糖心康可使其下调,这也是中药复方糖心康对糖尿病性心肌组织损伤具有保护作用的机制之一。     

糖心康对糖尿病大鼠心肌基因Alox 12mRNA表达的影响

观察中药复方糖心康对糖尿病心肌损伤大鼠的作用机理。方法：采用链脲佐菌素（S1Z）加高热量饮食建立糖尿病大鼠心肌损伤模型。采用美国Affymetrix Rat2302．0基因表达谱芯片及聚类分析，筛选差异表达基因，采用荧光定量RT—PCR法验证。结果：花生四烯酸12-脂加氧酶mRNA（Alox12mRNA）是筛选出的差异表达基因。在糖尿病状态下，Alox12mRNA基因表达上调，经糖心康治疗后表达下调。结论：Alox12mRNA和糖尿病心肌损伤有重要相关性，糖心康对其有良性调节作用。     

肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因CcL5mRNA表达的影响

目的：比较糖尿病肾病（DN）大鼠和中药复方肾消康治疗组大鼠肾脏组织中基因表达的差异，并用Evegreen实时荧光RT—PCR技术定量检测CcL5mRNA在各组大鼠肾脏组织的表达水平。方法：（1）差异表达基因的筛选：实验大鼠分为空白组、模型组、治疗组。从肾脏组织中抽提mRNA，由纯化的总RNA合成双链cDNA，并将其纯化，以生物素标记cRNA合成，纯化和质控体外转录（IVT）产物，片断化cRNA，然后进行杂交、洗脱、染色、芯片扫描并用软件进行统计分析，筛选出差异表达数据。不同肾脏组织样本用灰度扫描图和杂交信号强度散点图表示。（2）荧光定量RT—PCR的检测：RNA样品反转录，荧光定量PCR反应。结果：仅对筛选出差异表达基因谱中的CcL5mRNA进行报告。糖尿病肾病模型组肾脏组织基因CcL5mRNA表达上调，中药复方肾消康治疗组肾脏组织基因CcL5mRNA表达下调。结论：CcL5mRNA在糖尿病状态下肾脏也有表达，并且表达上调，而中药复方肾消康可使其下调，这也是中药复方对糖尿病性肾组织损伤具有保护作用的机制之一。     

糖心康对糖尿病大鼠心肌基因Alox12mRNA表达的影响

观察中药复方糖心康对糖尿病心肌损伤大鼠的作用机理。方法:采用链脲佐菌素(STZ)加高热量饮食建立糖尿病大鼠心肌损伤模型。采用美国Affymetrix Rat2302.0基因表达谱芯片及聚类分析,筛选差异表达基因,采用荧光定量RT-PCR法验证。结果:花生四烯酸12-脂加氧酶mRNA(Alox12 mRNA)是筛选出的差异表达基因。在糖尿病状态下,Alox12 mRNA基因表达上调,经糖心康治疗后表达下调。结论:Alox12 mRNA和糖尿病心肌损伤有重要相关性,糖心康对其有良性调节作用。     

肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因CcL5mRNA表达的影响

目的:比较糖尿病肾病（DN）大鼠和中药复方肾消康治疗组大鼠肾脏组织中基因表达的差异,并用Eve green实时荧光RT-PCR技术定量检测CcL5mRNA在各组大鼠肾脏组织的表达水平。方法:（1）差异表达基因的筛选:实验大鼠分为空白组、模型组、治疗组。从肾脏组织中抽提mRNA,由纯化的总RNA合成双链cDNA,并将其纯化,以生物素标记cRNA合成,纯化和质控体外转录（IVT）产物,片断化cRNA,然后进行杂交、洗脱、染色、芯片扫描并用软件进行统计分析,筛选出差异表达数据。不同肾脏组织样本用灰度扫描图和杂交信号强度散点图表示。（2）荧光定量RT-PCR的检测: RNA样品反转录,荧光定量PCR反应。结果:仅对筛选出差异表达基因谱中的CcL5mRNA进行报告。糖尿病肾病模型组肾脏组织基因CcL5mRNA表达上调,中药复方肾消康治疗组肾脏组织基因CcL5mRNA表达下调。结论:CcL5mRNA在糖尿病状态下肾脏也有表达,并且表达上调,而中药复方肾消康可使其下调,这也是中药复方对糖尿病性肾组织损伤具有保护作用的机制之一。     

肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因Gna12表达的影响

[目的]观察中药复方肾消康对糖尿病。肾病大鼠的防治作用及对肾脏基因表达的影响,探讨糖尿病肾病（DN）的发病机制,揭示中药复方肾消康防治DN的作用机制,筛选药效作用靶点,为临床推广应用提供科学依据。[方法]本实验采用链脲佐菌素（STZ）加高热量饮食建立糖尿病大鼠肾脏损伤模型。运用放免、生化、光镜、电镜及美国Affymetrix公司的基因表达谱芯片、逆转录聚合酶链反应法（RT—PCR）等先进检测手段和方法,观察了多项指标,尤其是通过聚类分析寻找和DN有重要相关性的基因,并进一步采用实时荧光定量RT—PCR法做验证实验研究。[结果]鸟嘌呤核苷酸结合蛋白cd2（Gna12）,在糖尿病大鼠肾脏表达下调,肾消康中剂量组表达上调。[结论]应用Aflymetrix Rat2302．0基因表达谱芯片检测糖尿病大鼠肾脏基因的表达,Gna12是筛选出的肾脏差异表达基因和药效靶点之一,并对该基因做荧光定量RT—PCR测序分析。基因功能分析表明,在糖尿病状态下,Gna12表达下调,与糖尿病肾脏损伤有重要相关性,而经肾消康治疗后大鼠肾脏组织中Gna12表达上调,可见肾消康对Gna12基因表达具有良性调节作用,其作用机制还有待于进一步研究。     

肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因Aloxl2表达的影响

目的:观察中药复方肾消康对糖尿病肾病大鼠肾脏Aloxl2基因表达的影响,探讨糖尿病肾痛(DN)的发生与Alox 12基因变化的相关性,筛选中药复方肾消康防治DN的药效作用靶点.方法:采用链脲佐菌素加高脂饮食的方法建立糖尿病大鼠肾脏损伤的模型.运用美国Affymetrix公司的基因表达谱芯片,尤其是通过聚类分析寻找和糖尿病肾病有重要相关性的基因——Alox 12基因是其中之一,并进一步采用实时荧光定量RT - PCR法,观察Aloxl2基因表达的变化.结果:花生四烯酸12-脂加氧酶( Aloxl2),在糖尿病大鼠肾脏表达上调,肾消康治疗组表达下调.结论:在糖尿痛肾损伤状态下,Aloxl2表达上调,与糖尿痛肾脏损伤有重要相关性,而经肾消康治疗后大鼠肾脏组织中Aloxl2表达下调,可见肾消康对Aloxl2基因表达具有良性调节作用,其作用机制还有待于进一步研究.     

肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因ubiquitin mRNA表达的影响

目的观察中药复方肾消康对糖尿病肾病大鼠的防治作用及对肾脏基因表达的影响,探讨DN的发病机制,揭示中药复方肾消康防治DN的作用机理,筛选药效作用靶点,为临床推广应用提供科学依据。方法采用链脲佐菌素(STZ)加高热量饮食建立糖尿病大鼠肾脏损伤模型。运用放免、生化、光镜、电镜及美国Affymetrix公司的基因表达谱芯片、RT-PCR等先进检测手段和方法,观察多项指标,通过聚类分析寻找和DN有重要相关性的基因,并进一步采用实时荧光定量RT-PCR法做验证实验研究。结果泛素mRNA(ubiquitin mRNA)在糖尿病大鼠肾脏表达上调,肾消康治疗组表达下调。结论应用Affymetrix Rat2302.0基因表达谱芯片检测糖尿病大鼠肾脏基因的表达,ubiquitin mRNA基因是筛选出的肾脏差异表达基因和药效靶点之一。糖尿病状态下,ubiquitin mRNA基因表达上调,与糖尿病肾脏损伤有重要相关性,而经肾消康治疗后大鼠肾脏组织中ubiquitinm RNA表达下调。肾消康对ubiquitin mRNA基因表达具有良性调节作用。     

糖心康对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡促进与抑制因子基因表达的调控作用

目的探讨糖心康对糖尿病心肌损伤的保护作用及机理。方法采用STZ加高脂饮食造模。治疗组以中药糖心康灌胃,空白组及模型组以生理盐水灌胃,以基因芯片技术TUNEL法检测心肌细胞凋亡。结果模型组细胞凋亡较正常组发生率明显增加,两组比较差异非常显著(P<0.01),而糖心康组心肌凋亡率则下降,模型组大鼠Fas基因蛋白表达增强,与正常组比较差异非常显著(P<0.01),而糖心康组Fas基因表达减弱,与模型组比较差异显著(P<0.01),模型组Bcl-2表达减弱,而糖心康组Bcl-2表达较模型组增强,二者比较差异显著(P<0.01)。利用基因芯片技术在心肌基因表达谱中筛选出与细胞凋亡有关的促进与抑制因子基因主要有2个,即AFO41376,M75720。结论糖心康有抑制心肌细胞凋亡作用,可使Fas基因、AFD41376基因表达下调,使Bcl-2,M75720表达上调。这也是中药复方糖心康具有心肌损伤保护作用的机制之一。     

肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因Alox12表达的影响

目的:观察中药复方肾消康对糖尿病肾病大鼠肾脏Alox12基因表达的影响,探讨糖尿病肾病(DN)的发生与Alox12基因变化的相关性,筛选中药复方肾消康防治DN的药效作用靶点。方法:采用链脲佐菌素加高脂饮食的方法建立糖尿病大鼠肾脏损伤的模型。运用美国Affymetrix公司的基因表达谱芯片,尤其是通过聚类分析寻找和糖尿病肾病有重要相关性的基因——Alox12基因是其中之一,并进一步采用实时荧光定量RT-PCR法,观察Alox12基因表达的变化。结果:花生四烯酸12-脂加氧酶(Alox12),在糖尿病大鼠肾脏表达上调,肾消康治疗组表达下调。结论:在糖尿病肾损伤状态下,Alox12表达上调,与糖尿病肾脏损伤有重要相关性,而经肾消康治疗后大鼠肾脏组织中Alox12表达下调,可见肾消康对Alox12基因表达具有良性调节作用,其作用机制还有待于进一步研究。     

肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因eIF3s8表达的影响

目的观察中药复方肾消康对糖尿病肾病大鼠的防治作用及对肾脏基因表达的影响,探讨糖尿病肾病(DN)的发病机制,揭示中药复方肾消康防治DN的作用机理,筛选药效作用靶点,为临床推广应用提供科学依据。方法采用链脲佐菌素(STZ)加高热量饮食建立糖尿病大鼠肾脏损伤模型。运用放免、生化、光镜、电镜及美国Affymetrix公司的基因表达谱芯片、RT-PCR等先进检测手段和方法,观察了多项指标,尤其是通过聚类分析寻找和DN有重要相关性的基因,并进一步采用实时荧光定量RT-PCR法做验证实验研究。结果真核生物翻译起始因子3,8亚基(eIF3s8),在糖尿病大鼠肾脏表达下调,肾消康治疗组表达上调。结论应用Affymetrix Rat2302.0基因表达谱芯片检测糖尿病大鼠肾脏基因的表达,eIF3s8是筛选出的肾脏差异表达基因和药效靶点之一,并对该基因做荧光定量RT-PCR测序分析。这在国内外尚属首次。基因功能分析表明,在糖尿病状态下,eIF3s8表达下调,与糖尿病肾脏损伤有重要相关性,而经肾消康治疗后大鼠肾脏组织中eIF3s8表达上调,可见肾消康对eIF3s8基因表达具有良性调节作用,其作用机制还有待于进一步研究。     

养胃解毒合剂对脓毒症模型大鼠肠屏障功能的影响与机制研究

目的:从肠屏障功能角度探讨养胃解毒合剂治疗脓毒症的作用机制。方法:140只SPF级健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药正常剂量组、中药高剂量组、西药组、西药+中药正常剂量组、西药+中药高剂量组。采用HE染色技术观测各组大鼠肠道结构,分别采用实时荧光定量PCR技术与Western Blot技术检测肠屏障功能相关基因mRNA与蛋白表达。结果:(1)形态学结果显示:脓毒症模型大鼠肠组织细胞水肿严重,大量炎症细胞浸润,中药高剂量组与西药+中药高剂量组水肿明显改善,炎症细胞明显减少。(2)Western Blot与PCR结果显示:与正常组比较,模型组Occludin、Claudin-1和ZO-1基因mRNA与蛋白表达显著下调;与模型组比较,3种基因mRNA与蛋白在西药组、中药高剂量组、西药+中药正常剂量组、西药+中药高剂量组表达均显著上调;与西药组比较,西药+中药高剂量组Claudin-1和ZO-1基因mRNA与蛋白表达显著上调,Occludin蛋白表达显著上调。结论:高剂量养胃解毒合剂能够改善脓毒症大鼠的肠道屏障功能,与西药合用提高西药疗效,可能是通过上调肠组织Occludin、Claudin-1和ZO-1基因mRNA与蛋白表达水平实现的。     

活血潜阳方对“血瘀-阳亢-痰浊”高血压模型大鼠胰岛素信号通路基因表达及心肌重构的影响

目的:探讨活血潜阳方对"血瘀-阳亢-痰浊"高血压模型大鼠胰岛素信号通路基因表达及心肌重构的影响。方法:以36只5周龄雄性自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensive rat,SHR)为对象,按照随机数字表法按2∶1随机分为两组:SHR空白对照组(SHR-C组)、SHR模型组;SHR模型组通过附子汤灌胃+高脂饮食4周后随机分为SHR模型对照组(SHR-M组)及SHR模型治疗组(SHR-H组),9只同龄京都大鼠(WistarKyoto,WKY)为正常对照组(WKY-C组),9周龄时处死并取其心脏进行组织切片,提取心肌组织RNA用胰岛素功能基因芯片筛选效应基因,从中选择部分主要的关键基因,用荧光定量PCR法检测葡萄糖激酶(GCK)mRNA、6-磷酸葡萄糖酶催化亚基(G6PC)mRNA及丙酮酸脱氢酶激酶4(Pdk4)mRNA水平,Western Blot检测GCK、G6PC及Pdk4蛋白表达,在光镜及电镜下大鼠心肌结构。结果:SHR-H组大鼠心肌GCK、G6PC表达明显上调(P0.01),Pdk4表达明显下调(P0.05),光镜及电镜下观察发现SHR-H组大鼠心肌结构较SHR-M组明显改善。结论:活血潜阳方具有改善SHR模型大鼠心肌重构的作用,其机制可能与上调心肌组织GCK、G6PC蛋白表达、下调心肌组织Pdk4蛋白表达有关。     

新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠心肌纤维化的影响及机制研究

目的 探讨益气健脾通络中药复方新风胶囊对佐剂性关节炎（AA）大鼠心肌纤维化的影响及其作用机制。方法 60只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组（12只）和模型组（48只）,除正常对照（NC）组外,每只大鼠右足跖皮内注射弗氏完全佐剂（CFA）0.1 mL致炎,制备AA大鼠模型。致炎后第19天将AA模型大鼠组随机分为4组：新风胶囊（XFC）组、甲氨喋呤（MTX）组、雷公藤多甙片（TPT）组和模型对照（MC）组,并分组给药30天后处死,采用透射电镜观察各组大鼠心肌组织超微结构;反转录酶 聚合酶链锁反应（RT PCR）法及Western blot法测定各组大鼠心肌组织基质金属蛋白酶（MMP9）、基质金属蛋白酶组织抑制因子1（TIMP1） mRNA及蛋白表达水平。结果 （1）电镜观察结果显示,AA大鼠心肌细胞间胶原纤维增生明显,呈现心肌纤维化趋势。MTX、TPT、XFC组均能有效改善心肌超微结构变化,而3组间比较,XFC组大鼠心肌细胞形态完整,细胞核清晰, 细胞间仅有少量胶原纤维,明显好于其他两组。（2）与NC组比较,MC组大鼠心肌组织MMP9 mRNA及蛋白表达水平均明显上调,而TIMP1 mRNA和蛋白表达水平明显下调（P<0.01）;与MC组比较,XFC组MMP9 mRNA及蛋白表达水平均下降,TIMP1 mRNA及蛋白表达水平明显上升,差异有统计学意义（P<0.05, P<0.01）。结论 益气健脾通络中药复方新风胶囊可以有效抑制AA大鼠心肌纤维化,其机制可能与降低心肌组织MMP9 mRNA及蛋白表达,提高心肌组织TIMP1 mRNA及蛋白表达水平,调节MMP9/TIMP1平衡,改善心肌细胞外基质代谢有关。     

真武汤对转基因扩张型心肌病小鼠心肌Acta1、Col3a1基因及蛋白表达的影响

目的:本研究旨在观察转基因扩张型心肌病小鼠心肌组织Acta1、Col3a1基因及蛋白表达变化,探究真武汤防治扩张型心肌病的分子生物学机制。方法:将cT nT R141W基因转入C57BL/6J小鼠,建立了心肌组织特异表达cT nT R141W基因的转基因小鼠模型,以C57BL/6J小鼠15只作为空白对照组,模型组小鼠60只,随机分为模型对照组、西药组、中药高剂量组及中药中剂量组,中药组以真武汤高中剂量对模型小鼠治疗4周,卡托普利为阳性对照药物。4周后采用qRT-PCR法检测各组心肌组织Acta1、Col3a1相对表达量; Western Blot法检测各组心肌组织Acta1、Col3a1蛋白表达。结果:与空白对照组比较模型对照组Acta1、Col3a1基因及蛋白表达显著升高(P 0. 01),与模型对照组比较西药组及中药高中剂量组Acta1、Col3a1基因及蛋白表达均显著下降(P 0. 01)。结论:DCM的发病机制与心肌组织中Acta1与Col3a1mRNA及蛋白表达升高有关,真武汤通过下调心肌组织中Acta1与Col3a1 mRNA及蛋白表达,抑制心肌细胞肥大及纤维化过程,起到防治DCM的作用。     

抗痫灵对戊四氮诱导癫痫大鼠海马区Bcl-2mRNA及其蛋白表达的影响

目的:观察中药复方抗痫灵对戊四氮致痫大鼠海马Bcl-2mRNA及其蛋白表达的影响。方法:观察大鼠痫性发作行为;采用免疫组化方法检测大鼠脑组织中海马Bcl-2蛋白的表达;采用实时荧光定量(Real timePCR)方法检测大鼠海马组织Bcl-2mRNA的相对表达。结果:经过中药复方抗痫灵治疗6周后,大鼠痫性发作行为明显减少;海马区抑制凋亡基因Bcl-2mRNA及其蛋白表达均升高。结论:抗痫灵能减少癫痫发作次数,上调海马区抑凋亡基因Bcl-2mRNA及其蛋白表达。     

MMPs和TIMPs与糖尿病心肌病心室重构的关系及糖心宁的干预作用

目的:探讨MMP-2、MMP-9、TIMP-2、TIMP-1在糖尿病心肌病心室重构过程中的作用,以及糖心宁的心肌保护作用及机制。方法:36只SD大鼠,其中9只作为空白对照组,27只腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病心肌病大鼠模型,随机分为模型组、糖心宁高剂量组、糖心宁等效剂量组3组,糖心宁组灌服中药,模型组及空白对照组灌服等量清洁饮用水,给药8周后处死大鼠,计算左心室肥厚指数,检测血清T-SOD活性和MDA含量;Masson染色观察心肌组织中胶原,免疫组化法检测心肌组织MMP-2、MMP-9、TIMP-2、TIMP-1的蛋白表达。结果:糖尿病心肌病大鼠用药8周后,糖心宁高剂量组、糖心宁等效剂量组均能降低左心室肥厚指数,减少MDA含量,升高T-SOD水平,且同时升高MMP-9/TIMP-1和MMP-2/TIMP-2比值,降低心肌胶原含量。结论:糖心宁具有通过改善氧化应激,重新调整MMP-9/TIMP-1平衡、减弱TIMP-1对MMP-9抑制从而减轻DCM心室重构的作用。