兔肝纤维化模型建立与自体骨髓干细胞移植的疗效

背景：国内外已基于不同研究需要建立了多种肝纤维化动物模型方法，多采用大鼠为实验对象，但大鼠血容量少，不利于生化指标的检测。 目的：探讨容易重复而且可靠的肝纤维化模型制作方法，并通过骨髓干细胞自体肝门静脉移植给予治疗，判定其疗效和安全性。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2004-09/2006-03在解放军昆明总医院干细胞与组织工程研究中心完成。 材料：肝功能检查正常的健康日本大耳白兔38只，体质量2.0~2.5㎏，随机分为2组：健康对照组8只，模 型 组30只。 方法：连续12周皮下注射硫代乙酰胺诱导兔肝纤维化，将造模成功的17只大鼠分为移植组与空白对照组。采集移植组兔骨髓，分离获得骨髓单个核细胞，加入肝细胞生长因子和粒单细胞集落刺激因子对骨髓干细胞进行诱导分化72 h，经肝门静脉自体移植。 主要观察指标：移植后4周通过病理与生化指标分析诱导后骨髓干细胞对肝纤维化的治疗作用。 结果：注射硫代乙酰胺12周时，病理切片显示肝小叶结构破坏，肝索排列紊乱，肝细胞脂肪变性，有少许坏死，间质纤维组织增生，有部分伸入小叶，有炎性细胞浸润，为肝纤维化症状。经兔肝门静脉移植骨髓干细胞4周后，总蛋白、清蛋白和白球蛋白比值均有所提高，总胆红素、直接胆红素、谷丙转氨酶和谷草转氨酶均有所降低，空白对照组也有改善，移植组肝纤维化病变较空白对照组改善程度明显。 结论：皮下注射硫代乙酰胺能成功诱导兔肝纤维化，且致死率低，容易重复；骨髓干细胞移植有治疗肝纤维化的作用，有助于肝组织结构恢复和改善肝功能。     

骨髓干细胞治疗心肌梗死临床应用现状与前景*★

学术背景：尽管目前可以应用血运重建和药物治疗来阻止心功能的恶化和心律失常的发生，但效果有限，仍无法使已梗死的心肌细胞再生。如何使坏死心肌或无功能心肌再生，再现其舒缩功能，一直是亟待解决的难题。 目的：深入认识骨髓干细胞在心肌梗死治疗中的研究进展。 检索策略：由该论文的研究人员应用计算机检索Pubmed数据库 2000-05/2006-07的相关文献，检索词“the marrow stem cell，cell transplant，myocardial infarction”，并限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库1997-10/2006-12的相关文献，检索词“骨髓干细胞，细胞移植，心肌梗死”，并限定文章语言种类为中文。共检索到67篇文献，对资料进行初审，纳入标准：①文章所述内容应与骨髓干细胞治疗心肌梗死密切相关。②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。排除标准：①重复性研究。②Meta分析。 文献评价：文献的来源主要是通过对骨髓干细胞在心肌梗死治疗中的研究进展作以汇总分析。所选用的30篇文献中，10篇为综述，其余均为临床或基础实验研究。 资料综合：①骨髓干细胞组成复杂，包括骨髓单个核细胞、造血干细胞、骨髓间充质干细胞、内皮祖细胞、多潜能成体祖细胞以及其他功能不明的干细胞。②骨髓干细胞植入动物心脏后可以分化为心肌细胞，能与受体心肌细胞进行有效的电-机械耦合，此外可促进缺血区血管新生，易于自体采集，避免伦理学纠纷和免疫排斥反应。骨髓干细胞属于成体干细胞，其是否具有横向分化能力尚需进一步研究。大量临床研究表明，自体骨髓干细胞移植治疗后急性心肌梗死、心力衰竭均能取得成功。③骨髓干细胞释放的基质金属蛋白酶、干细胞因子及基质细胞趋化因子，在促进干细胞动员、归巢与心肌修复过程中发挥重要作用。组织损伤和高水平的多能干细胞是骨髓干细胞在心肌微环境中分化成熟的两个决定因素。④目前骨髓干细胞移植所面临的问题包括移植时选用的细胞类型、横向分化的调控机制不明、移植时机及移植方式、移植的安全性等。 结论：通过建立完整的动物模型技术平台，探索各项技术在临床应用的可能性，骨髓干细胞治疗心肌梗死有可能成为不同于内科传统的药物治疗、心血管介入治疗和外科手术治疗的又一个全新方法。     

自体骨髓间充质干细胞体外扩增后移植治疗糖尿病足

背景：国外动物实验表明体外扩增自体骨髓间充质干细胞移植治疗糖尿病足效果较好。 目的：观察自体骨髓间充质干细胞体外扩增后患肢移植的效果和安全性。 设计：随机对照临床观察。 对象：解放军第三军医大学西南医院2006-10/2008-10住院确诊的糖尿病足患者40例,男22例,女18例,年龄(64.3±12.7)岁,按wagner分级2级8例,3级18例,4级14例。按查表法随机分为细胞移植组22例,常规治疗组18例,实验经医院伦理委员会讨论批准。 方法：常规治疗组给予常规降糖、降压、调脂、抗感染、抗凝、营养神经、扩张血管等药物治疗,局部常规换药,有坏疽者行截趾治疗;细胞移植组在常规治疗的基础上,按密度梯度离心和贴壁法分离制备骨髓间充质干细胞悬液,经流式细胞仪鉴定、染色体检测、细胞悬液皮试后,予肌肉注射法行扩增后自体骨髓间充质干细胞移植。 主要观察指标：细胞移植后1个月两组患者治疗效果的比较,鉴定可能不良事件和副反应。 结果：移植后1个月,细胞移植组患者肢体疼痛、冷感、间歇性跛行均有所改善,踝肱指数明显升高,双下肢血管显像血流灌注有所增加,与常规治疗组比较差异均有显著性意义(P < 0.01)。移植后3个月随访患者均无异常症状体征出现,血、尿、便常规检测正常,心电图和肝肾功能无特殊改变,出凝血时间正常。 结论：体外扩增自体骨髓间充质干细胞移植患肢治疗糖尿病足简便、有效、安全。     

骨髓间充质干细胞移植对兔急性心肌梗死后胶原重构的影响

背景：研究发现干细胞移植可明显改善心肌梗死后心功能,以往认为主要与干细胞分化为心肌细胞和促血管新生作用有关,近来研究显示旁分泌、抑制心室重构尤其是细胞外胶原重构对心功能的改善起重要作用。 目的：探讨骨髓间充质干细胞移植对兔急性心肌梗死后胶原重构的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007-06/08在辽宁中医药大学针灸电生理实验室完成。 材料：健康日本大耳白兔57只,购自辽宁中医药大学实验动物中心。 方法：取2只兔用于制备骨髓间充质干细胞,移植前行BrdU标记。余55只兔取10只作为正常组,45只结扎冠状动脉左室支建立心肌梗死模型,共30只成功造模,随机分为模型组、盐水组、细胞移植组,10只/组。兔心肌梗死后7 d,细胞移植组经耳缘静脉注射骨髓间充质干细胞悬液1 mL(2×106个细胞),盐水组注射1 mL生理盐水,造模后饲养5周。 主要观察指标：采用Masson三色染色法观察心肌间质纤维结构及测量胶原容积分数,免疫组化法测量Ⅰ/Ⅲ型胶原比值。 结果：细胞移植组心肌梗死区可见Brdu染色阳性细胞。细胞移植组梗死中心区和交界区内胶原纤维融合较少,排列有序;模型组和盐水组梗死中心区和交界区内胶原纤维斑块状融合明显,排列紊乱。心肌梗死5周后与正常组比较,模型组梗死区及梗死周围区胶原容积分数显著增加(P < 0.05),Ⅰ/Ⅲ型胶原比值显著下降(P < 0.05);与模型组比较,细胞移植组胶原容积分数、Ⅰ/Ⅲ型胶原比值均显著下降(P < 0.05)。 结论：静脉移植骨髓间充质干细胞可以在心肌梗死区定植,通过减少胶原形成、改善胶原结构来抑制心肌梗死后胶原重构。     

转染AKT1基因的自体骨髓间充质干细胞移植治疗猪缺血性心肌病☆

背景：干细胞移植早期出现的大量细胞缺失可明显影响移植效果,目前已证实AKT1基因的过表达能明显抑制细胞凋亡。 目的：探讨过表达AKT1基因的猪自体骨髓间充质干细胞移植能否在体内缺氧状态下抑制干细胞凋亡,及其修复受损心肌的效果。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2005-08/2007-02在苏州大学完成。 材料：健康雄性梅山猪24只,由苏州大学动物实验中心提供。 方法：扩增AKT1 cDNA基因,并构建表达载体。扩增后,使用慢病毒转染系统进行基因重组,以其为载体转染建立稳定过表达AKT1基因的猪自体骨髓间充质干细胞,并行BrdU标记。24只猪均应用明胶海绵栓塞冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型,造模后4周,随机均分为4组：模型对照组不做任何治疗性处理;DMEM组行冠脉内注射DMEM液5 mL;单纯细胞移植组行冠脉内注射骨髓间充质干细胞悬液5 mL(1×107个细胞);AKT转染细胞移植组同法注射等量转染AKT1基因的 骨髓间充质干细胞悬液。 主要观察指标：载体酶切鉴定和测序验证结果,心脏磁共振检查评估心功能,免疫组化染色观察心肌组织学变化,ELISA法测定血清中血管内皮生长因子及转化生长因子β1的水平。 结果：①双酶切鉴定和测序结果均表明所获取的cDNA为AKT1的CDS功能区基因;转染入293T细胞和骨髓间充质干细胞24,48 h后,均可检测到强荧光出现;其蛋白表达产物的分子量与已知分子量相符,实时荧光定量检测结果表明转染2周后的骨髓间充质干细胞能稳定转录AKT1,其AKT1-mRNA的转录水平是原代细胞的120倍。②细胞移植前,梗死心脏的左室舒张末径增加,每搏量明显下降。与移植前比较,移植后单纯细胞移植组、AKT转染细胞移植组心功能明显改善,梗死区的收缩功能和血流灌注均有所改善,左室腔缩小,梗死区的毛细血管密度明显增加,且AKT转染细胞移植组上述各指标改善更为显著(P < 0.05)。③苏木精-伊红染色结果显示,模型对照组、DMEM组梗死区纤维化明显;单纯细胞移植组、AKT转染细胞移植组梗死区均可见岛样心肌组织,且后者含有较丰富的小血管样结构。免疫组化染色结果显示,移植4周后单纯细胞移植组、AKT转染细胞移植组心肌切片中均发现有VWF及Cx-43阳性表达,且后组Brdu和Cx-43双阳性细胞占所有Brdu阳性细胞的比例明显高于前组(P < 0.05)。④细胞移植后,血管内皮生长因子水平呈逐渐升高的趋势,1周后达峰值,后逐渐下降,至4周后接近正常水平;而转化生长因子β1水平呈逐渐下降的趋势,至4周后明显低于同期模型对照组、DMEM组(P < 0.05),且明显低于移植前水平(P < 0.05)。 结论：使用携带目的基因AKT1的慢病毒系统转染猪骨髓间充质干细胞可使其长期稳定过表达AKT1,移植体内后可能通过防止梗死区变薄、抑制收缩功能异常而改善左室功能,同时AKT1的过表达可显著改善梗死后心脏功能。     

自体骨髓干细胞移植治疗严重慢性下肢缺血性疾病15例★

严重慢性下肢缺血患者其下肢远端没有良好的流出道，故无法接受手术搭桥。植入自体骨髓干细胞移植后缺血下肢可形成新生血管，建立侧支循环，改善肢体血供，以达到细胞性血管搭桥目的。选择2006-06/2007-02沈阳市第七人民医院内分泌科住院确诊的严重慢性下肢缺血性疾病患者15例，患肢均有不同程度的静息痛、缺血性溃疡或趾端坏疽，踝臂指数0~0.5，CTA及彩超证明为周围动脉闭塞性病变，病变远端流出道差，患者对本实验知情同意且自愿接受自体骨髓干细胞移植术，排除并发严重的心、肺、脑等脏器功能不全不能耐受手术者，实验经医院医学伦理委员会批准。于双髂后上棘穿刺采集自体骨髓血，每例采集骨髓血100~300 mL，羟乙基淀粉及Ficoll液分离，配置成干细胞混悬液50 mL，单个核细胞计数为（2.05~9.36）×108。椎管内麻醉，沿下肢动脉走行给予缺血下肢肌肉及足部局部注射移植自体骨髓干细胞混悬液，术后给予常规药物治疗。移植后12周患者肢体疼痛、患肢冷感明显减轻，皮肤温度升高，间歇跛行距离延长（t=-5.328~6.373，P < 0.01）；踝臂指数略微升高（P > 0.05）；肾功能不全者血肌酐略微降低（P > 0.05）。9例缺血性足溃疡患者的足部创面于术后3~12周基本愈合；2例趾端坏疽患者在干细胞移植术中进行坏疽部位截趾，术后4周完全愈合。术后均未出现异常症状或体征，随访6个月无不良反应发生。提示自体骨髓干细胞移植术能够增加严重慢性缺血患肢的血流灌注，明显改善肢体疼痛、冷感、间歇跛行等指标，且不会加重并发肾功能不全患者的肾功能损伤，安全有效。     

自体骨髓干细胞移植对心力衰竭患者近期心功能的影响**☆

目的：心肌细胞在人类出生后已几乎失去增殖能力,增加具有完整收缩功能的心肌细胞数目是治疗心力衰竭所致心肌损伤的关键。实验拟进一步观察和验证自体骨髓干细胞移植对心力衰竭患者近期心功能的影响。 方法：①对象：选取2003-10/2005-06苏州大学附属第四医院胸心外科收治的23例急性心肌梗死患者,随机数字表法分为心肌梗死细胞移植组7例,心肌梗死对照组16例。另选取2003-10/2005-06收治的11例严重风湿性心脏病、二尖瓣狭窄合并全心衰竭女性患者为二尖瓣病变细胞移植组,以2001-10/2003-10收治的同类疾病女性患者10例为二尖瓣病变瓣膜置换组。以上4组患者术前均依靠大剂量正性肌力药物和利尿剂维持心功能,患者及其家属对治疗均签署知情同意书,实验经医院医学伦理委员会批准。②实验方法：无菌条件下在髂前上棘抽取骨髓25 mL,用DMEM完全培养基分离培养骨髓干细胞,贴壁筛选法进行纯化的。细胞达80%融合时用胰酶消化传代,取第3代细胞用于移植,浓度调整为1.5×1010 L-1。心肌梗死细胞移植组将自体骨髓干细胞悬液自左、右冠状动脉注入5 mL。心肌梗死对照组患者仅行常规治疗。二尖瓣病变细胞移植组患者在二尖瓣置换术中将自体骨髓干细胞悬液自左、右冠状动脉注入,同时行心肌内注射,每点注射0.1~0.2 mL,间距2 cm,注入量共5 mL。二尖瓣病变瓣膜置换组单纯行二尖瓣置换术。③实验评估：细胞移植前后通过心脏超声以及核素显像方法全面评价心功能。 结果：4组患者均完成3个月随访。①自体骨髓干细胞移植对急性心肌梗死心功能的影响：与心肌梗死对照组比较,术前 10 d及术后2周心肌梗死细胞移植组射血分数、心输出量、心肌梗死面积均基本相似（P > 0.05）;术后4,6,8周射血分数、心输出量均显著提高（P < 0.01）,心肌梗死面积均显著缩小（P < 0.01）。②自体骨髓干细胞移植对风湿性二尖瓣病变心功能的影响：与二尖瓣病变瓣膜置换组比较,二尖瓣病变细胞移植组术后4周射血分数和心输出量均明显提高(t =3.97,P < 0.01;t = 3.61,P < 0.01) ,至术后8周差异最为明显,提高效果均显著优于术后4周（t =2.91,P < 0.05;t=2.64,P < 0.05）。 结论：自体骨髓干细胞移植可明显改善冠状动脉粥样硬化性心脏病心肌梗死患者的心功能,辅助用于风湿性二尖瓣并发心力衰竭患者的外科治疗亦能对心功能有所提高。     

骨髓源性神经干细胞自体移植海藻酸致痫大鼠海马后脑电图的改变

目的探讨骨髓源性神经干细胞移植至海藻酸（KA）致痫大鼠海马后对宿主海马脑电图的影响，从而为神经干细胞移植治疗颞叶癫痫提供理论依据。方法无菌条件下分离大鼠骨髓基质细胞，在特定的条件下培养使其诱导分化为神经干细胞。建立大鼠颞叶癫痫模型，将诱导分化的神经干细胞自体移植至KA大鼠的右侧海马内，观察移植后1周、2周、4周、8周和16周大鼠海马的MRI和脑电图改变情况。结果MRI检查发现在神经干细胞移植后1周和2周时低信号改变区比较局限，但移植4周、8周和16周后低信号改变明显增大，且随着时间的推移低信号改变区逐渐增大。与未移植组相比，移植组大鼠海马脑电图的波幅明显降低，且随着时间的推移降低幅度也明显增加，最高至移植8周后脑电图波幅降低达40％以上。结论骨髓源性神经干细胞自体移植至KA大鼠后对宿主海马的癫痫样放电有一定的抑制作用。     

自体骨髓间质干细胞移植治疗多系统萎缩34例分析

目的：观察自体骨髓间质干细胞移植治疗多系统萎缩患者的临床疗效和安全性。方法选择2010-01-2012-07江西省人民医院神经内科收治的多系统萎缩患者34例,其中橄榄脑桥小脑萎缩26例,纹状体黑质变性8例。患者在粒细胞集落刺激因子进行骨髓干细胞动员后,采集骨髓液并分离骨髓间质干细胞,通过蛛网膜下腔移植治疗,骨髓间质干细胞数量（5.0～10.0）×107,1次/周,共治疗2次。采用世界神经病联合会国际合作共济失调评分量表（IC A RS ）、统一多系统萎缩评估量表（UMSARS）及改良的Barthel指数（MBI）为指标评估疗效,并观察患者的不良反应。结果34例患者均进入结果分析,中途无脱落。患者移植1、3个月后ICARS、UMSARS与入院时比较评分降低,MBI升高（均 P＜0.05）。患者移植12个月后ICARS、UMSARS、MBI与入院时比较差异无统计学意义（均 P＞0.05）。其中术后7例低热和4例低颅压性头痛,对症处理后症状完全消失。结论自体骨髓干细胞移植不良反应轻,可一定程度改善多系统萎缩患者的临床症状,提高患者生活质量,但疗效不持久。     

自体骨膜复合骨髓间充质干细胞移植修复兔关节软骨缺损

背景：自体骨髓间充质干细胞及骨膜移植等方法可促进关节软骨缺损的修复,但其各自的成软骨能力有限,治疗效果欠佳。 目的：观察自体骨膜复合向软骨细胞诱导的骨髓间充质干细胞移植修复软骨缺损的疗效。 设计、时间及地点：随机分组对照动物实验,于2005-08/2007-03在山西医科大学第二医院骨科实验室完成。 材料：6~8月龄新西兰白兔18只,按随机数字表法分为3组,即骨膜复合骨髓间充质干细胞组、单纯骨膜组及空白对照组,每组6只12个膝关节标本。 方法：骨膜复合骨髓间充质干细胞组采用胰酶消化法采集骨髓间充质干细胞进行贴壁培养,加入转化生长因子β1向软骨细胞进行诱导分化,同时进行PKH-26细胞膜免疫荧光标记。在全部兔双侧股骨内侧髁造成直径3 mm,深度3 mm的全层软骨缺损,骨膜复合骨髓间充质干细胞组、单纯骨膜组取同侧胫骨上段内侧骨膜,骨膜生发层朝向骨髓腔覆盖软骨缺损,骨膜复合骨髓间充质干细胞组先期缝合3针,向缺损区注入1×109 L-1骨髓间充质干细胞细胞悬液20 μL,植入细胞后缝合最后1针。单纯骨膜组只进行单纯骨膜覆盖缺损处理;空白对照组只钻孔不作任何处理。 主要观察指标：术后6,12周时,对缺损部位进行大体观察、组织学观察、Wakitani评分以及Ⅱ型胶原免疫组化及原位杂交检测。 结果：所有缝合骨膜未发现脱落,骨膜复合骨髓间充质干细胞组6周时,软骨缺损已由透明软骨样修复组织填充,12周时修复组织进一步改建,且修复组织中细胞主要为带有PKH-26荧光标记的植入细胞。单纯骨膜组缺损区修复组织为乳白色,表面光滑稍微凹陷,与周围正常软骨组织之间界限清晰;空白对照组缺损区多数比较凹陷,或缺损部位形状不规则,周围软骨组织断裂。术后6,12周时,骨膜复合骨髓间充质干细胞组Wakitani组织学评分均优于单纯骨膜组和空白对照组(P < 0.05),单纯骨膜组的评分优于空白对照组(P < 0.05)。 同时,骨膜复合骨髓间充质干细胞组修复组织内细胞周围基质Ⅱ型胶原免疫组化及原位杂交染色阳性,证实修复组织内的细胞为植入细胞。 结论：自体骨膜复合向软骨细胞诱导的骨髓间充质干细胞移植可形成透明软骨样修复组织修复关节软骨缺损。     

自体骨髓干细胞移植治疗心肌梗死患者心理状态调查分析

目的：当前自体骨髓干细胞移植治疗心肌梗死技术进展很快，但对于患者的心理问题关注不足，无法准确评估患者围手术期的应激程度。文章调查采用自体骨髓干细胞移植治疗心肌梗死患者的心理状况。 方法：抽取急性心肌梗死患者41例，均行经皮冠状动脉介入治疗+标准药物治疗+经冠脉注入自体骨髓单个核细胞治疗。对41例患者进行心理问题调查，用症状自评量表SCL-90和社会支持评定量表对患者进行问卷调查，并与国内常模进行比较。SCL-90量表每个症状的评分计1~5级，1级没有症状，5级极严重；社会支持评定量表评分越高，社会支持越高。分析影响患者的心理健康因素、心理健康水平与社会支持的相关性。 结果：自体骨髓干细胞移植患者SCL-90量表的9项因子中，躯体化、强迫、焦虑、敌对性、恐怖、精神病性6项指标评分均高于国内常模(P < 0.01)；人际关系敏感、抑郁评分低于国内常模(P < 0.01)；惟有偏执评分与常模差异无显著性意义 (P > 0.05)。41例自体骨髓干细胞移植心肌梗死患者的社会支持评分为25.32~45.52分，平均（36.92±8.91）分。将社会支持评分高于36.92分的23例患者设定为高社会支持得分组，低于36.92分的18例设定为低社会支持得分组，低社会支持得分组患者的躯体化、强迫、人际关系、抑郁、焦虑、恐怖、偏执等症状因子评分明显高于高社会支持得分组(P均< 0.05)。 结论：采用干细胞移植的心肌梗死患者常常存在明显的心理问题，表现为不同程度的抑郁、焦虑等身心症状。在进行躯体疾病治疗的同时，应配合以疏导为主的心理治疗，消除不良心理因素的影响。     

超声辐射微泡增效骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死

背景：超声辐射微泡已被大量应用于临床心肌微循环诊断,其安全性已得到证实。研究显示超声靶向破坏微泡可以使骨骼肌毛细血管破坏和局部红细胞渗出,可以促进细胞穿过内皮生理屏障。 目的：探讨超声辐射微泡是否可以增加骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的效果。 设计、时间及地点：随机对照动物观察,于2006-10/2008-05在东南大学医学院完成。 材料：2月龄中国家猪20只,随机分为超声微泡组12只,细胞对照组8只。超声微泡对比剂SonoVue,国药准字J20030117,为上海博莱信谊药业有限责任公司产品。 方法：无菌条件下抽取猪骨髓液,密度梯度离心法分离纯化骨髓间充质干细胞。两组动物均建立急性心肌梗死模型,造模后14 d,超声微泡组通过OTW球囊导管先把2.4 mL超声微泡对比剂SonoVue经冠状动脉注入左前降支中段,同时在体表给予1 MHz,2 W/cm2超声辐射心肌梗死区,连续辐射90 s后,再注入超顺磁性氧化铁标记的骨髓间充质干细胞5×106个;细胞对照组同法仅单纯输注骨髓间充质干细胞。 主要观察指标：采用64层螺旋CT检查心功能变化,光镜观察心肌组织学检测结果,电镜观察血管内皮细胞超微结构。 结果：与移植前1 d比较,移植后6周两组左心室射血分数均明显增加,且超声微泡组增加幅度高于细胞对照组(P < 0.01)。与细胞对照组比较,超声微泡组普鲁士蓝阳性细胞数明显增多(P < 0.01),且多数分布于心肌梗死周边区,有2例标本可见普鲁士蓝阳性细胞分化为新生血管内皮细胞;梗死周边区毛细血管密度明显升高(P < 0.05)。两组心肌血管内皮细胞超微结构无差异,但移植后0 h超声微泡组可见血管内皮间隙增宽。 结论：超声辐射微泡可促进梗死心肌内猪自体骨髓间充质干细胞的移植,促进心肌血管新生,从而改善因心肌梗死而受损的心功能。     

骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后正常心肌细胞凋亡的影响

背景：目前的研究显示，骨髓间充质干细胞移植在治疗缺血性心血管疾病中起到了重要的作用，但干细胞移植后改善缺血心肌功能的详细机制尚不明确。 目的：观察骨髓间充质干细胞移植对急性心肌梗死后大鼠正常心肌细胞凋亡的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2008-02/08在福建省高血压研究所完成。 材料：密度梯度离心法和贴壁筛选法获得SD大鼠骨髓间充质干细胞。2周龄雄性清洁级SD大鼠16只，体质量200~250 g，用于制备心肌梗死模型。 方法：16只SD大鼠随机区组法分为2组，对照组：结扎冠状动脉前降支，未进行干细胞移植，只在梗死心肌周围注入等量(200 μL)的生理盐水；实验组：在心肌梗死1 h后，向梗死心肌的周围分4点(200 μL)注入同种异体骨髓间充质干细胞1×1011 L-1；每组8只。于移植4周后处死动物，取梗死边缘正常心肌组织，TUNEL法检测心肌细胞凋亡形态，并计算心肌细胞凋亡率。 主要观察指标：①凋亡心肌细胞的形态变化。②实验组和对照组心肌细胞的凋亡率。 结果：①造模后4周，TUNEL检测显示凋亡的心肌细胞核呈深浅不一的深褐色，细胞轮廓清楚，而正常增殖的心肌细胞不被染色。②经显微镜结合计算机显微图像分析系统检测对照组、实验组心肌细胞凋亡率分别是(1.12±0.06)% ，(0.81±0.02)%，两者相比差异有显著性意义(P < 0.05)。 结论：骨髓间充质干细胞移植在一定程度上可以抑制急性心肌梗死后正常心肌细胞凋亡的发生。     

经冠状动脉自体骨髓单个核细胞移植治疗急性心肌梗死40例

选择南昌大学第二附属医院心内科2004-01/2006-12收治的急性前壁心肌梗死患者40例，经皮腔内冠状动脉成形术后立即将提取的骨髓单个核细胞群分3次缓慢注入左冠状动脉前降支，进行骨髓单个核细胞移植。应用超声心动图检测移植前、移植后5 d患者左心室舒张末径、左心室收缩末径和左心室射血分数。移植5 d后左心室舒张末径较移植前缩小(1.20±3.77) mm (P > 0.05)，左心室收缩末径较移植前缩小(4.50±4.52) mm (P < 0.01)，左心室射血分数较移植前提高(10.65±9.83)% (P < 0.01)。冠状动脉自体骨髓单个核细胞移植治疗急性心肌梗死能明显改善左心室收缩功能，短期疗效良好。     

5000/骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死及随后心肺复苏的实验研究 (英文发表,作者希望加急到9月)

背景：至目前为止发表的心肺复苏论文所使用的基本为健康动物,而临床实际情况是在心肺复苏发生之前患者大多有严重的心脏疾病,并导致了心室颤动的发生。 目的：实验力图接近临床实际,观察骨髓间充质干细胞移植后心肌梗死大鼠心功能的变化,及对其心肺复苏结果的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007-04/08在美国南加州大学和中山大学附属第二医院联合完成。 材料：成年SD雄性大鼠18只,随机分为模型对照组、细胞移植组,9只/组。另取1月龄SD大鼠1只用于制备骨髓间充质干细胞。 方法：两组大鼠均结扎左前降支冠状动脉建立心肌缺血模型,4周后再次开胸,细胞移植组梗死心肌局部注射PKH26荧光标记的骨髓间充质干细胞悬液0.1 mL(5×106个细胞),模型对照组同法注射等量PBS。4周时诱导心室颤动及进行心肺复苏。 主要观察指标：移植后2,4周用超声心动图测量心功能;测量心肺复苏前及心肺复苏后4 h内的血液动力学参数的变化;在心肺复苏 72 h 后取心肌组织进行病理切片检查。 结果：与模型对照组比较,移植后2,4周细胞移植组射血分数均明显升高(P < 0.01)。在心肺复苏前及心肺复苏后4 h内,与模型对照组比较,细胞移植组心脏指数、左心室收缩压力上升到40 mm Hg(1 mm Hg= 0.133 kPa)时的上升速率、左心室舒张速率、左心室舒张末压均有明显改善(P < 0.01, P < 0.05)。与模型对照组比较,细胞移植组大鼠心肺复苏后可生存至72 h,生存时间明显延长(P < 0.05)。病理切片结果显示心肌内存在大量PKH26标记的骨髓间充质干细胞。 结论：大鼠心肌梗死后,骨髓间充质干细胞移植治疗能明显改善其心功能、心肺复苏前后的血流动力学参数以及生存时间。     

骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后炎性细胞因子表达的调节*☆

目的：近来研究表明，骨髓间充质干细胞具有独特的免疫调节特性，实验拟观察骨髓间充质干细胞移植对梗死心脏炎性细胞因子表达的影响，以进一步认识干细胞治疗心肌梗死的可能机制。 方法：实验于2006-11/2007-08在中南大学湘雅二医院心内科实验室和实验动物中心完成。①实验材料：清洁级SD大鼠由中南大学湘雅二医院实验动物中心提供，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：提取体质量120~150 g SD大鼠骨髓间充质干细胞，以溴脱氧尿嘧啶核苷标记。取体质量180~200 g 雄性SD大鼠，结扎冠状动脉前降支建立心肌梗死模型，将模型随机分为3组：假手术组：仅穿线不接扎血管；PBS溶液注射组：模型制作成功即刻心外膜注射PBS液；干细胞移植组：模型制作成功即刻心外膜注射溴脱氧尿嘧啶核苷标记的骨髓间充质干细胞，每组8只。③实验评估：于术后1 ，28 d行心脏超声检测，测量大鼠射血分数、左室短轴缩短率和左室舒张末期直径以评价心脏功能，并进行免疫组织化学和western blot检测，分析移植细胞存活和炎性细胞因子的表达情况。 结果：24只建模成功大鼠均进入结果分析。①术后28 d，心脏超声检测显示与注射PBS溶液相比，移植骨髓间充质干细胞可以延缓心室重构，改善心功能[射血分数：（30.76±3.39）%，（24.06±4.71）%，P < 0.05；左室短轴缩短率：（29.33±4.87）%，（23.05±3.94）%，P < 0.05；左室舒张末期直径：（6.45±0.47）mm，（7.81±0.31）mm，P < 0.05] 。②免疫组织化学检测显示，心肌梗死后即刻心外膜移植的骨髓间充质干细胞可以在宿主体内存活。③ 与注射PBS溶液相比，骨髓间充质干细胞移植可以明显降低肿瘤坏死因子α、白细胞介素6表达（P < 0.05） ，同时增加白细胞介素10表达（P < 0.05) 。western blot检测与免疫组织化学结果一致。 结论：骨髓间充质干细胞移植可以延缓心肌梗死大鼠心室重构，同时下调大鼠梗死心脏促炎细胞因子肿瘤坏死因子α和白细胞介素6表达，上调抗炎细胞因子白细胞介素10表达。     

兔自体脂肪干细胞成骨诱导后经皮注射修复骨缺损★

目的：探索兔自体脂肪干细胞、成骨诱导后的脂肪干细胞联合骨形态发生蛋白-2/纤维蛋白胶（bone morphogenetic protein-2/ Fibrin glue，BMP-2/ FG）经皮移植到骨缺损后体内成骨能力的差异。 方法：实验于2006-08/2007-11在北京军区总医院全军骨科研究所完成。①实验材料：清洁级日本大耳白兔，2.0~2.5 kg,雌雄不限，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：制作新西兰大白兔桡骨中段15 mm骨缺损模型35侧，随机分为5组，每组7侧：未诱导细胞组、诱导细胞组、未诱导细胞+BMP-2/FG组、诱导细胞+ BMP-2/FG组、空白对照组。未诱导细胞组、诱导细胞组直接用生理盐水重悬未诱导脂肪干细胞和经成骨诱导的脂肪干细胞，未诱导细胞+BMP-2/FG、诱导细胞+ BMP-2/FG组分别用含20 g/L 骨形态发生蛋白-2、5 g/L纤维蛋白原的生理盐水重悬未诱导和经成骨诱导的脂肪干细胞。③实验评估: X射线片观察各组骨缺损修复情况，并进行生物力学检测。 结果：①12周时，未诱导细胞+BMP-2/FG组、诱导细胞+ BMP-2/FG组在骨缺损区新生骨的数量明显优于未诱导细胞组、诱导细胞组(P均 < 0.05)。②术后4周X射线显示，未诱导细胞+BMP-2/FG组、诱导细胞+ BMP-2/FG组阻射密度值高于其他组(P均 < 0.05)，未诱导细胞组与诱导细胞组无差别。术后8，12周时，诱导细胞组高于未诱导细胞组，未诱导细胞+BMP-2/FG、诱导细胞+ BMP-2/FG组均高于其他组，诱导细胞+ BMP-2/FG组高于未诱导细胞+BMP-2/FG组(P均 < 0.05)。③生物力学检测显示，未诱导细胞+BMP-2/FG组、诱导细胞+ BMP-2/FG组桡骨标本的四点弯曲断裂载荷均明显高于其他组，并且诱导细胞+ BMP-2/FG组高于未诱导细 胞+BMP-2/FG组(P均 < 0.05)。未诱导细胞组与诱导细胞组无差别。 结论: 成骨诱导脂肪干细胞及联合BMP-2/FG移植后8周和12周时具有更强的成骨能力，可作为种子细胞应用于骨组织工程。     

骨髓干细胞移植梗死心肌区域交感神经重构的研究与进展

心肌梗死后存在着交感神经重构现象，表现为交感神经再生和过度再生。交感神经的过度再生与心肌梗死慢性期室性心律失常和猝死的发生关系密切。骨髓干细胞心肌移植可增加有功能的心肌细胞数目，体外研究表明骨髓干细胞可促进神经元的生长，植入动物心肌梗死心脏后，可使神经生长因子生成增多，其交感神经密度增加。干细胞植入心肌后刺激心肌神经萌生的机制仍不明确，干细胞植入后是否有神经细胞形成再迁移至心肌梗死远隔区，另外有可能是干细胞分化成过表达神经营养因子和其他生长因子的细胞，转而刺激神经萌生还需探讨。目前骨髓干细胞移植所面临的问题包括移植时选用的细胞类型、横向分化的调控机制不明、移植时机及移植方式、移植的安全性等。     

骨髓间充质干细胞移植对急性心肌梗死患者血管内皮功能的影响

背景：移植干细胞可以分化形成心肌细胞、血管内皮细胞改善心脏功能。但有些学者认为干细胞移植会加重梗死心肌的炎症反应及内皮功能不全，从而增加支架内再狭窄的发生率。 目的：观察骨髓间充质干细胞移植后急性心肌梗死患者血清可溶性细胞间黏附分子1、可溶性血管内皮细胞黏附分子1、可溶性E-选择素含量的变化，评价干细胞移植的安全性。 设计、时间及地点：随机对照临床试验，于2006-06/2007-06在唐山市工人医院完成。 对象：急性前壁心肌梗死患者40例，随机分为2组：干细胞移植组20例，男12例，女8例，平均年龄（63.7±10.2）岁；单纯经皮冠状动脉介入组20例，男11例，女9例，平均年龄（65.3±11.5）岁。选取20名健康体检者作为正常对照组，男10名，女10名,平均年龄（62.4±10.7）岁。 方法：干细胞移植组患者急诊行经皮冠状动脉介入治疗开通罪犯血管后7~10 d行干细胞移植术，单纯经皮冠状动脉介入组患者急诊经皮冠状动脉介入治疗开通罪犯血管，未行干细胞移植。 主要观察指标：采用ELISA法测定急诊经皮冠状动脉介入前、干细胞移植术后及术后1，3，6月患者血清中可溶性细胞间黏附分子1、可溶性血管内皮细胞黏附分子1、可溶性E-选择素的变化。 结果：随访6个月中，干细胞移植组与单纯经皮冠状动脉介入组炎性因子表达量均呈下降趋势。术后1，3，6月干细胞移植组可溶性细胞间黏附分子1均低于单纯经皮冠状动脉介入组（P < 0.05）；术后1，3月干细胞移植组可溶性血管内皮细胞黏附分子1均低于单纯经皮冠状动脉介入组（P < 0.05），术后6个月两组间比较差异不显著(P > 0.05)；术后1，3月干细胞移植组可溶性E-选择素与单纯经皮冠状动脉介入组比较差异无显著性意义(P > 0.05)，术后6个月干细胞移植组低于单纯经皮冠状动脉介入组（P < 0.05），说明干细胞移植组下降更为显著。 结论：骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死较安全，不会加重炎性反应及血管内皮功能损伤，相反可能会带来有益影响。