MT01对Pg感染的成骨细胞MG63特异性成骨相关因子表达的影响

目的:通过检测MT01对牙周致病菌Pg感染的成骨细胞MG63细胞内特异性成骨相关因子基因表达水平,探讨MT01对感染状态下成骨细胞成骨分化作用的影响。方法:选取生长状态稳定的人成骨样细胞MG63接种于6孔板,分别加入质量浓度1 mg/L的特定序列寡核苷酸MT01和等体积PBS,共孵育3 h后,加入感染复数MOI=100∶1的Pg菌悬液(对照组加等体积PBS)。即实验分为:MT01+Pg、MT01、Pg和空白对照4组,Real-time PCR检测2、4、6、8、12、24 h特异性成骨相关因子Runx2,SP7 mRNA的表达。结果:在有无Pg感染的状态下,MT01均可上调成骨细胞MG63细胞内成骨相关因子Runx2,SP7 mRNA的表达,但在不同时间点,MT01调控Runx2,SP7 mRNA表达上调的能力存在差异。结论:MT01可以促进牙周致病菌感染下的成骨细胞的成骨向分化。     

MT01对感染状态人成骨样细胞内ALP活性及mRNA表达的影响

目的:通过检测MT01对牙龈卟啉单胞菌感染的人成骨样细胞内特异性成骨相关因子ALP活性及mRNA表达水平的改变,探讨MT01对感染状态下人成骨样细胞成骨向分化的影响。方法:选取状态良好的MG63细胞接种于6孔板内,2个MT01组加入质量浓度为1mg/L的MT01,共孵育3h后,相应组加入感染复数为100∶1的Pg菌悬液。实验分为:空白对照、MT01、Pg和MT01+Pg4组,碱性磷酸酶测试盒测定24h后上清液及细胞内ALP活性。Real-timePCR检测2、4、6、8、12、24h特异性成骨相关因子ALPmRNA的表达。结果:在感染与非感染情况下,MT01均可促进ALP活性,且上调MG63细胞内成骨相关因子ALPmRNA表达,其表达上调呈时间依赖性。结论:MT01可促进感染及非感染状态下MG63内ALP基因表达水平,提高ALP活力。     

代谢综合征患者与健康者唾液中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β水平比较

目的 比较代谢综合征(metabolic syndrome,MS)患者和非MS的健康对照者唾液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β水平,了解牙周炎与MS患者体内低度炎症的关系.方法 采用病例对照的研究方法,共纳入MS患者57例(MS组),非MS的全身健康者26人(健康组).留取受检者静息全唾液,用放射免疫的方法检测TNF-α的质量浓度,酶联免疫吸附试验检测IL-1β的质量浓度.比较MS组和健康组唾液中细胞因子水平的差异,并分析细胞因子与牙周临床指标和MS组分数的相关关系.结果 MS组唾液中TNF-α水平[(69.30±21.01)ng/L]显著高于健康组[(57.85±15.69)ng/L],P<0.05;唾液中IL-1β的水平[(616.42±360.05)ng/L]高于健康组[(506.06±245.76)ng/L],差异无统计学意义(P>0.05).唾液中的TNF-α水平与探诊后出血呈正相关(r=0.220,P<0.05).唾液中TNF-α和IL-1β水平在MS组中随发生MS的组分数增加而增高、随牙周炎程度加重而增高,但差异均无统计学意义.结论 牙周感染可能是MS患者体内低度炎症的来源之一,唾液TNF-α、IL-1β水平可能不同程度地受全身状况和口腔感染的影响.     

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌对牙龈成纤维细胞表达白细胞介素-8的影响

目的:研究不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis, Pg)对人牙龈成纤维细胞表达IL- 8的影响,探讨fimA基因型与Pg致病力差异之间的关系.方法: Pg ATCC 33277(Ⅰ型),WCSP115(Ⅱ型),WCSP1.5(Ⅲ型),W83(Ⅳ型)分别与牙龈成纤维细胞在标准条件下共同孵育,于孵育后1、3、6、12 h收集细胞和上清,应用实时荧光定量RT- PCR和ELISA法分别检测牙龈成纤维细胞IL- 8 mRNA和蛋白的动态表达.结果:与对照组比较,各fimA型Pg对牙龈成纤维细胞IL- 8 mRNA和蛋白的表达均有明显的促进作用(P<0.01);其中ⅡfimA型组IL- 8 mRNA和蛋白的表达量明显高于其它fimA型组,不同时间点IL- 8 mRNA相对表达量分别为20.42±2.21～103.01±12.50,蛋白分泌水平为(137.46±4.97～323.24±13.74) pg/ml;而Ⅲ fimA型Pg组的表达水平弱于其它fimA型组,IL- 8 mRNA相对表达量为3.61±0.39～12.88±1.56,蛋白分泌水平为(44.83±3.68～189.19±87.34) pg/ml, 差异有统计学意义(P<0.05).结论:Pg可促进牙龈成纤维细胞IL- 8 mRNA和蛋白的表达,且各fimA型Pg的促进作用有所差异.提示: fimA基因型的不同可能是Pg的致病力差异的基因基础.     

牙龈卟啉单胞菌对人脐静脉内皮细胞分泌IL-1β和IL-6的影响研究

目的:研究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)上清液对人脐静脉内皮细胞(hu-man umbilical vein endothelial cells,HUVECs)分泌IL-1β、IL-6的影响。方法:酶消化法原代培养HUVECs,并对细胞进行来源鉴定,用5×106CFU/mL的Pg上清液刺激HUVECs 6、12、18、24 h后,RT-PCR检测IL-1β、IL-6 mRNA的表达;同时ELISA方法测定IL-1β及IL-6蛋白的水平。结果:Pg上清液刺激HUVECs后,IL-1βmRNA水平在12、18 h时蛋白明显高于对照组(P<0.05);IL-6 mRNA水平在12 h的表达明显高于对照组(P<0.05)。IL-1β蛋白在18、24 h的表达明显高于对照组(P<0.05);IL-6蛋白在12、18、24 h 3个时点均明显高于对照组(P<0.05)。结论:5×106CFU/mL Pg上清液可促进人脐静脉内皮细胞IL-1β和IL-6的基因及蛋白表达,提示Pg感染可能在As的发生发展中起一定作用。     

17β雌二醇对人牙周韧带细胞表达碱性磷酸酶和骨保护素因子的影响

目的 探讨17β雌二醇(17β-estradiol,17β-E2)对人牙周韧带细胞(human periodontal ligament cells,hPDLC)表达碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)的影响.方法 采用组织块法培养hPDLC,培养基中加入不同浓度17β-E2,对硝基酚磷酸酯法检测ALP活性;ELISA法和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法确定OPG含量.结果 各浓度组17β-E2作用于hPDLC 14 d和21 d后均可促进ALP的表达(P＜0.05);生理浓度(1 nmol/L)促进OPG蛋白分泌和mRNA表达(P＜0.05),72 hOPG蛋白分泌量达(4714.89±71.48)ng/L;高浓度(100 nmol/L)对OPG分泌无影响(P＞0.05),72 h OPG蛋白分泌量为(1932.04±51.59)ng/L,但降低了OPG mRNA表达(P＜0.05).结论 17β-E2可能通过促进ALP和OPG的表达介导局部牙周组织的骨保护作用.     

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌刺激牙龈成纤维细胞后单核细胞趋化蛋白1的表达

目的 比较不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)刺激下人牙龈成纤维细胞单核细胞趋化蛋白1 mRNA和蛋白的表达水平,比较不同fimA基因型Pg毒力和致病性的差异.方法 Pg ATCC 33277(Ⅰ型,T1组),WCSP115(Ⅱ型,T2组),WCSP1.5(Ⅲ型,T3组),W83(Ⅳ型,T4组)分别与牙龈成纤维细胞在标准条件下共同孵育,对照组加入2 ml达尔伯克氏改良伊格尔培养基,每组3孔.分别于孵育后1、3、6和12 h收集细胞和上清液,应用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和ELISA法分别检测牙龈成纤维细胞单核细胞趋化蛋白1 mRNA和蛋白的动态表达.结果 与对照组比较,各fimA型Pg刺激下牙龈成纤维细胞单核细胞趋化蛋白1 mRNA和蛋白水平的表达量均明显上调(P<0.05);其中T2组Pg的刺激作用强于其他各型,不同时间点单核细胞趋化蛋白1 mRNA相对表达量分别为(25.75±3.12)～(326.69±35.35),蛋白分泌水平为(178.20±46.20)～(443.46±82.19)ng/L;而T3组Pg弱于其他各型,单核细胞趋化蛋白1 mRNA相对表达量为(4.16±0.82)±(94.17±18.56),蛋白分泌水平为(86.95±23.90)～(264.01±28.59)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Pg可诱导牙龈成纤维细胞mRNA和蛋白水平过表达单核细胞趋化蛋白1,提示fimA基因型的不同可能与Pg的毒力和致病性存在相关性.     

机械压应力条件下人牙周膜成纤维细胞炎症因子表达变化初探

目的 探讨在一定机械压应力条件下人牙周膜成纤维细胞常见炎症相关细胞因子的表达谱变化,初步明确机械压应力对牙周膜成纤维细胞炎症相关细胞因子表达的影响.方法 取健康恒前磨牙牙根中1/3牙周膜组织,采用组织块法培养人牙周膜成纤维细胞,分为加压组(200 Pa持续加压)与未加压组培养24 h后,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及实时定量PCR法检测白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、肿瘤坏死因子(TNF)-α、TNF-β、干扰素(interferon,IFN)-γ的mRNA表达量并与管家基因磷酸甘油醛脱氢酶进行对比.加压组与未加压组培养48 h后通过微球流式多因子方法检测上述细胞因子蛋白水平的表达量.结果 加压组人牙周膜成纤维细胞培养24 h后细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、TNF-β及IFN-γ mRNA相对表达量(分别为0.3633±0.0874、0.4200±0.0285、0.1697±0.0284、0.0983±0.0131、0.2840±0.0676及3.1067±0.2857)显著高于未加压组(分别为0.1173±0.0176、0.1691±0.0174、0.0117±0.0021、0.0243±0.0050、0.0000±0.0000及0.1433±0.0125),P＜0.05;加压组人牙周膜成纤维细胞培养48 h后细胞培养上清液中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、TNF-β及IFN-γ的蛋白表达量[分别为(18.21±1.01)、(1634.11±472.41)、(1461.47±50.53)、(20.71±2.52)、(884.11±118.86)以及(1461.47±333.37)ng/L也显著高于未加压组[分别为(5.32±4.97)、(373.56±155.92)、(679.11±141.42)、(4.32±0.73)、(3.56±0.92)及(204.11±35.36)ng/L],P＜0.05;IL-2、IL-4、IL-5、IL-10及IL-12的mRNA相对表达量及蛋白表达在两组中差异无统计学意义(P＞0.05).结论 人牙周膜成纤维细胞在持续机械压应力作用下可显著上调IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、TNF-β、IFN-γ等炎症相关细胞因子mRNA及蛋白水平的表达,从而进一步影响局部牙周组织微环境.

Abstract：

Objective To investigate the changes of inflammation-related cytokine expression profiles in human periodontal ligament fibroblasts (hPDLF) under mechanical stress. Methods The periodontal ligament attached to the mid-third part of the fresh root of young premolars extracted for orthodontic treatment was scalped and removed hPDLFs were cultured by the method of digesting by Ⅰ -type collagenase combined with tissue adhering, and then isolated and purified by cells passages. hPDLFs were then divided into two groups, group with mechanical force and group without mechanical force and then cultured for 24 h. Employing cytokine-microarray analysis to assess, in a comprehensive manner compared to the hPDLFs culture system without a static force. The quantity of different cytokine-related genes in hPDLFs was analyzed by means of quantitative with the special primers of up-and down-regulated genes. The mRNA of inflammation-related cytokines was examined by real-time PCR, and the expression of the cytokines in hPDLFs detected by cytokine flowcytomix assay. Results The relative expression of interleukin (IL)-1β,IL-6, IL-8, tumor necrosis factor(TNF)-α, TNF-β and interferon(IFN)-γ mRNA in the hPDLFs with 24 h persistent-pressure (0. 3633 ± 0. 0874, 0. 4200 ± 0. 0285, 0. 1697 ± 0. 0284, 0. 0983 ± 0. 0131, 0. 2840 ±0. 0676 and 3. 1067 ±0. 2857) was significantly higher than the group without mechanical force(0. 1173 ±0.0176, 0. 1691 ± 0.0174, 0.0117 :± 0.0021, 0.0243 ± 0.0050, 0.0000 ± 0.0000 and 0.1433 ±0. 0125) ,P ＜0. 05. The cell culture supernatant cytokines expression of IL-1 β, IL-6, IL-8, TNF-α, TNF-βand IFN-γ after 48 h cultured [(18.21 ± 1.01), (1634. 11 ± 472. 41), (1461.47 ± 50. 53), (20. 71 ±2. 52), (884. 11 ± 118. 86) and (1461.47 ± 333.37) ng/L]was significantly higher than the group without mechanical force [(5. 32 ± 4. 97), (373.56 ± 155.92), (679. 11 ± 141.42), (4. 32 ± 0. 73), (3.56 ±0.92)and(204. 11 ±35.36) ng/L],P ＜0.05. The relative mRNA and protein expression of IL-2, IL-4,IL-5, IL-10 and IL-12 showed no significant difference between the both groups. Conclusions Persistent static mechanical force could regulate the expression of some inflammation-related cytokines. These upregulated cytokines may be invloved in remodeling of hPDLFs, bone resorption and periodontal microenvironment.     

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌对牙龈成纤维细胞基质金属蛋白酶表达的影响

目的 观察不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)对人牙龈成纤维细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)表达水平的影响,探讨fimA基因型与Pg致病力之间的关系.方法 Pg ATCC 33277(Ⅰ型)、WCSP115(Ⅱ型)、WCSP1.5(Ⅲ型)、W83(Ⅳ型)分别与牙龈成纤维细胞在标准条件下共同孵育(对照组为达尔伯克氏改良伊格尔培养基),于孵育后1、3、6和12 h收集细胞和培养上清液,应用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和ELISA法分别检测牙龈成纤维细胞MMP-1、MMP-2的mRNA及蛋白的动态表达.结果 与对照组相比,Pg刺激下牙龈成纤维细胞MMP-1、MMP-2的mRNA和蛋白水平表达量均明显上调(P<0.01);其中Ⅱ型fimA型Pg的刺激作用强于其他各型,不同时间点MMP-1 mRNA相对表达量及蛋白分泌水平分别为(28.88±3.12)～(231.01±24.99)、(1.35±0.17)～(3.08±1.20);MMP-2 mRNA相对表达量及蛋白分泌水平分别为(20.42±2.21)～(188.34±37.37)、(2.57±0.76)～(18.08±1.15),与其他各型相比差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ型Pg的刺激作用较弱,不同时间点MMP-1 mRNA相对表达量及蛋白分泌水平分别为[(5.11±0.55)～(72.84±8.84)]μg/L、[(0.68±0.13)～(1.46±0.94)]μg/L;MMP-2 mRNA相对表达量及蛋白分泌水平分别为[(4.55±0.55)～(25.75±3.12)]μg/L、[(2.28±0.93)～(11.22±2.46)]μg/L,与其他各型相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 Pg可以诱导牙龈成纤维细胞过表达MMP,fimA基因型与Pg的毒力作用相关,fimA型可能为Pg致病力差异的基因基础.     

CD-14和Tool样受体在牙髓卟啉单胞菌脂多糖诱导成骨细胞白细胞介素6表达中的作用

目的 探讨CD-14和Tool样受体（Toll like receptors,TLR）在牙髓卟啉单胞菌（Porphyromonas endodontalis,Pe）脂多糖诱导小鼠成骨细胞白细胞介素6(IL-6)表达中的作用。方法用10 mg/L的Pe-脂多糖分别作用于小鼠成骨细胞MC3T3-E1不同时间,未加Pe-脂多糖的MC3T3-E1为空白对照组。反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验检测细胞IL-6基因和蛋白的表达,RT-PCR和流式细胞术检测细胞表面CD-14、TLR-2及TLR-4基因和蛋白的表达变化。抗小鼠CD-14、TLR-2及TLR-4抗体预处理细胞后,采用RT-PCR法检测Pe-脂多糖诱导细胞IL-6mRNA表达的变化。应用SPSS 11.0统计软件对结果进行单因素方差分析Dunnett-t检验。结果Pe-脂多糖作用于细胞后,与空白对照组比较细胞IL-6 mRNA和蛋白的表达明显增加,6h时IL-6表达[(36.534±0.574) ng/L]显著高于空白对照组[(11.696±0.672)ng/L)],P＜O.01;空白对照组中CD-14和TLR-4 mRNA呈弱表达,CD-14和TLR-4的阳性细胞率分别为(39.038±3.131)％和( 11.438±0.385)％,加入Pe-脂多糖后CD-14和TLR-4 mRNA表达明显增加,CD-14和TLR-4的阳性细胞率分别增加至(62.407±1.800)％和(21.367±2.271)％,但TLR-2的表达未见明显变化;中和抗体实验证明CD-14或TLR-4抗体均可部分抑制细胞IL-6 mRNA的表达,TLR-2抗体则无此作用。结论Pe-脂多糖作用于成骨细胞MC3T3-E1诱导其炎症因子IL-6的产生依赖于CD-14和TLR-4受体,与TLR-2无关。     

周期性张应变对人牙周膜细胞迁移的影响

目的 探讨周期性张应变对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLC)迁移的影响及其相关机制,为进一步了解机械力对hPDLC功能的影响提供资料.方法 应用FX-4000T细胞应变加载系统,对体外培养的hPDLC施加周期性张应变,牵张幅度分别为10%和20%,加载时间为6 h和24 h,频率均为0.1 Hz,以未加载的静态细胞作为对照组,应用划痕法观察hPDLC的迁移,蛋白质印迹法检测hPDLC的基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)的表达变化;用细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)的特异性抑制剂PD98059预处理hPDLC后,在0.1 Hz、10%幅度条件下,加载6 h,检测细胞p-ERK1/2和MMP-9表达的变化.用细胞迁移划痕法观察加载10%和20%幅度张应变,观察24 h后PD98059和MMP家族的抑制剂强力霉素(doxycycline,DOX)对hPDLC迁移的影响.结果 细胞迁移划痕实验结果显示,牵张幅度和加载时间均可显著促进细胞迁移.与静态组相比,施加牵张幅度分别为10%和20%的张应变6 h后,hPDLC迁移变化不明显,但加载24 h后,10%和20%幅度的张应变均显著促进了hPDLC迁移(P<0.05),细胞迁移率分别为(45 ±8)%和(66±14)%,且20%比10%幅度牵张对细胞迁移的促进作用更显著(P<0.05).蛋白印迹法结果显示,周期性张应变促进了hPDLC的MMP-9表达.牵张幅度对细胞MMP-9的表达有显著影响(P<0.05),但加载时间对细胞MMP-9的表达无显著影响.ERK1/2的抑制剂PD98059不仅可以明显抑制张应变诱导的p-ERK1/2活化,而且可通过ERK信号通路明显抑制张应变诱导的细胞MMP-9表达.细胞迁移划痕实验还证实,加载幅度分别10%和20%的张应变24 h后,抑制剂PD98059和DOX均能有效抑制周期性张应变诱导的hPDLC迁移.结论 周期性张应变可通过激活hPDLC的ERK信号通路,促进细胞的MMP-9表达,从而诱导体外培养的hPDLC迁移.     

母体唾液及龈沟液细胞因子水平与早产低体重新生儿关系的病例对照研究

目的 验证牙周炎是否为早产低体重新生儿(preterm low birth weight,PLBW)母亲体内低度炎症的来源之一,初步探讨PLBW与炎症因子之间的关系.方法 以83例PLBW的母亲(PLBW组)及44名健康新生儿(normal birth weight,NBW)的母亲(NBW组)为研究对象,留取受试对象的静息全唾液、龈沟液,应用酶联免疫吸附试验检测唾液和龈沟液中白细胞介素(IL)-1β和IL-6水平,比较两组间唾液和龈沟液中细胞因子水平的差异,并分析细胞因子与分娩孕周、新生儿体重之间的相关性.结果 唾液IL-1β水平在PLBW组[(78.32±11.81)ng/L]显著高于NBW组[(39.66±11.89)ng/L],差异有统计学意义(P<0.05);分娩孕周与唾液IL-6之间呈显著的负相关关系(r=-0.274,P<0.01);新生儿体重与龈沟液IL-1β(r=-0.231,P<0.01)、唾液IL-6(r=-0.424,P<0.01)之间呈显著的负相关关系.结论 唾液和龈沟液中炎性因子水平越高,分娩孕周越短、新生儿体重越轻,母体牙周炎程度与PLBW之间可能存在一定程度的相关关系.     

牙周非手术治疗对2型糖尿病伴牙周炎患者糖代谢及血清白细胞介素6的影响

目的 观察牙周非手术治疗对2型糖尿病伴慢性牙周炎(chronic periodontitis,CP)患者牙周状况、糖代谢及血清白细胞介素6(IL-6)的影响,探讨其可能的影响机制.方法 选取2型糖尿病伴慢性牙周炎(type 2 diabetes mellitus with chronic periodontitis,DMCP组)和不伴有全身系统性疾病的CP患者(CP组)各55例进行牙周非手术治疗,其中DMCP组中糖化血红蛋白(glycated hemoglobin,HbA1c)＜7.00%的患者为血糖控制较好组(A1组),HbAlc≥7.00%的为血糖控制较差组(A2组).在治疗前及治疗后6周、3个月时分别记录全口探诊深度(probing depth,PD)、附着丧失(attachment loss,AL)、出血指数(beeding index,BI)和菌斑指数(plaque index,PLI),并检测空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、HbA1c及血清IL-6水平.结果 DMCP组和CP组PD、AL、BI、PLI和血清IL-6水平在治疗后6周及3个月时均显著降低(P＜0.05),其中DMCP组血清IL-6从(3.47±0.33)ng/L(治疗前)显著降至(3.21±0.66)ng/L(治疗后6周),再降至(3.03±0.54)ng/L(治疗后3个月).DMCP组治疗后3个月HbA1c水平[(6.80±1.21)%]与治疗前[(7.35±1.73)%]相比显著降低(P＜0.05),其中A2组HbA1c水平从治疗前的(8.72±1.51)%显著降至治疗后3个月的(7.59±1.28)%(P＜0.05),而A1组HbA1c水平则无明显变化(P＞0.05).结论 牙周非手术治疗能够降低DMCP患者血清IL-6水平,并在一定程度上改善患者糖代谢状况;该治疗能显著改善血糖控制较差者的糖代谢,而对血糖控制较好者的糖代谢则无明显影响.

Abstract：

Objective To evaluate the effect of non-surgical periodontal therapy on periodontal status, glycemic control and the level of serum interleukin(IL)-6 in type 2 diabetic patients with chronic periodontitis (DMCP). Methods Fifty-five DMCP and 55 systemically healthy patients with chronic periodontitis(CP) were recruited in this study. The diabetes were classified into two groups, the wellcontrolled group [glycated hemoglobin (HbA1c) ＜ 7.00%]and the poorly controlled group (HbA1c ≥7.00%). All subjects received non-surgical periodontal therapy. Periodontal clinical parameters including periodontal probing depth (PD), attachment loss (AL), bleeding index (BI) and plaque index (PLI) were recorded at baseline, 6 weeks and 3 months after the treatment. Fasting plasma glucose(FPG), HbA1c and the concentration of serum IL-6 were measured. Results At 6 weeks and 3 months after treatment, PD,AL, BI, PLI and the concentration of serum IL-6 of both groups significantly reduced(P ＜ 0. 05). The level of IL-6 in diabetic patients reduced significantly from (3.47 ±0.33) ng/L to (3.21 ±0.66) ng/L and to (3.03 ± 0. 54) ng/L. The HbA1c of diabetic patients reduced significantly 3 months after treatment [(6.80±1.21%]compared with the baseline[(7.35 ± 1.73)%, P ＜0.05]. HbA1c of the poorly controlled group reduced significantly(P ＜0. 05), while HbA1c of the well-controlled diabetes did not show any apparent reduction (P ＞ 0. 05). Conclusions Non-surgical periodontal therapy can effectively reduce the concentration of serum IL-6, thereby improving glycemic control in type 2 diabetes patients with chronic periodontitis. However, there was no any significant reduction of HbA1c in the well-controlled diabetes.     

骨化三醇对牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导的人牙周膜细胞IL-8、IL-6表达的影响研究

目的    观察活性形式的维生素D——骨化三醇（1,25D）对牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Pg-LPS）诱导的人牙周膜细胞（hPDLCs）白细胞介素（IL）-8、IL-6表达的影响。方法    取3例患者因正畸需要拔除的前磨牙牙周膜,组织块法原代培养hPDLCs,分别用0.1%无水乙醇（对照组）、10 μg/mL Pg-LPS（单纯Pg-LPS组）、10-10 mol/L 1,25D（低浓度1,25D组）、10-8 mol/L 1,25D（高浓度1,25D组）、10-10mol/L 1,25D+ 10 μg/mL Pg-LPS（低浓度1,25D联合Pg-LPS组）、10-8mol/L 1,25D+ 10 μg/mL Pg-LPS（高浓度1,25D联合Pg-LPS组）处理第5代细胞。24和48 h后收集培养基上清液,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测hPDLCs IL-8和IL-6的表达水平。结果    （1）10 μg/mL Pg-LPS处理hPDLCs 48 h时,其IL-8表达水平最高,为对照组的38.86倍（P＜0.001）;处理hPDLCs 24 h时,其IL-6表达水平最高,为对照组的 6.19倍（P＜0.001）。（2）1,25D 以剂量和时间依赖方式抑制hPDLCs IL-8的内源性表达。10-8 mol/L 1,25D 处理hPDLCs 48 h时,其IL-8表达水平为对照组的49.94%（P＜0.001）。（3）1,25D 显著抑制Pg-LPS诱导的hPDLCs IL-8和IL-6的表达。处理48 h时,高浓度1,25D联合Pg-LPS组hPDLCs IL-8的表达水平为单纯Pg-LPS组的71.98%（P＜0.001）;处理24 h时,高浓度1,25D联合Pg-LPS组hPDLCs IL-6的表达水平为单纯Pg-LPS组的84.51%（P = 0.003）。结论    1,25D可以抑制hPDLCs IL-8的内源性表达,并抑制Pg-LPS诱导的hPDLCs IL-8和IL-6的表达,从而可能抑制牙周炎症反应。     

TRAF6沉默对LPS刺激牙周膜成纤维细胞增殖能力的影响

目的:使用小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)沉默人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament cell, hPDLC) 肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor associated factor 6,TRAF6)的基因,观察细胞的增殖情况及脂多糖刺激时增殖能力的变化。方法:酶消化联合组织块法体外培养原代hPDLC,并进行免疫组化鉴定,将细胞分为TRAF6 siRNA组、control siRNA组、NONE组,脂质体法将TRAF6 siRNA、control siRNA分别转染入对应组中,NONE组只加入等量的转染试剂,再使用10 mg/L LPS刺激细胞,RT-PCR检测TRAF6mRNA的表达情况,CCK-8检测沉默前后及LPS刺激时细胞增殖能力的改变。结果:免疫组化鉴定hPDLC培养成功;TRAF6 siRNA组的TRAF6 mRNA的表达水平与NONE、control siRNA组相比显著下降(P<0.001);TRAF6 siRNA组在转染后36、48、72 h的A值均显著低于相同时间点的2个对照组(P<0.001);使用10 mg/L LPS刺激各组细胞24、48 h时,TRAF6 siRNA组细胞的A值显著低于相同时间点的2个对照组(P<0.001)。结论:沉默TRAF6基因能抑制LPS刺激时hPDLC的增殖,推测TRAF6可能影响牙周炎的发生发展进程,是牙周炎潜在的治疗靶点。     

口腔种植修复在牙列缺失患者中的应用效果及对龈沟液中TNF-α、IL-6、IL-8的影响

目的:探讨口腔种植修复在牙列缺失患者中的应用效果及对龈沟液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6、8(IL-6、IL-8)的影响.方法:选择2014年10月-2016年10月于我院就诊的94例牙列缺失患者,按治疗方式分组,各47例,对照组采用常规修复,实验组采用口腔种植修复,比较2组的临床疗效,TNF-α、IL-6、IL-8,牙龈状态、牙功能,以及并发症发生情况.采用SPSS8.0软件包对数据进行统计学处理.结果:实验组总有效率显著高于对照组(95.74％:80.85％,P＜0.05).实验组TNF-α、IL-6、IL-8[(3.55±0.42)μg/L、(25.90±3.24)μg/L、(69.34±8.65) μg/L]显著低于对照组[(4.69±0.58)μg/L、(41.37±5.19)μg/L、(108.72±13.56)μg/L] (P＜0.05).实验组牙龈状态、牙功能均优于对照组,且并发症率显著少于对照组(P＜0.05).结论:口腔种植修复在牙列缺失患者中的应用效果肯定,可抑制龈沟液中TNF-α、IL-6、IL-8的表达,减轻局部炎症反应,改善牙的功能.     

牙龈卟啉单胞菌对兔血管平滑肌细胞分泌IL-1β、IL-6的影响

目的:观察牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)上清液对体外培养的兔血管平滑肌细胞分泌IL-1β、IL-6的影响。方法:组织块法培养兔腹主动脉血管平滑肌细胞,并对其细胞来源进行鉴定。用4.3×106 CFU/mL的Pg上清液刺激细胞12、24、48 h后,通过ELISA检测IL-1β、IL-6的水平;同时用RT-PCR检测其mRNA表达的情况。结果:Pg上清液刺激24 h和48 h时能促进血管平滑肌细胞分泌IL-6,分别与同一时间点的对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),而且24 h时,IL-6表达最强,而IL-1β的表达最低,明显低于相同时间的对照组和其他时间点的实验组(P<0.05)。RT-PCR检测显示,4.3×106 CFU/mL的Pg上清刺激血管平滑细胞12、24、48 h后细胞内均有IL-1β、IL-6的基因表达,在24 h时,血管平滑肌细胞的IL-1β基因表达减少,而IL-6基因表达增加。结论:Pg上清液可促进细胞合成和分泌IL-6,在动脉粥样硬化的发生发展过程中可能发挥一定作用。     

牙龈卟啉单胞菌对人脐静脉内皮细胞一氧化氮生成的影响

目的 观察牙龈卟啉单胞茵(Porphyromonas gingivalis,Pg)对人脐静脉内皮细胞皮细胞功能损伤的途径,以期为牙周病在动脉粥样硬化发病机制中的作用提供依据.方法 应用厌氧罐培养Pg ATCC33277,用感染复数(multiplicity of infection,MOI)1:10、1:100、1:1000的Pg干预HUVEC,未受Pg干预的HUVEC作为阴性对照组,分别于4、8、12、24 h时收集细胞上清液,利用硝酸还原酶法测定细胞上清液中NO的浓度.结果 在24 h内,Pg MOI 1:10、1:100均能促进HUVEC NO的生成,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);Pg MOI 1:1000干预HUVEC后,12 h内可促进HUVEC NO的生成,但与阴性对照组相比差异无统计学意义,24 h时HUVEC NO的生成降低[(57.83±9.09)mmol/L],与其他各组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Pg对内皮细胞NO的生成有影响.Pg MOI 1:10、1:100能够促进内皮细胞NO的生成,Pg MOI 1:1000则抑制内皮细胞NO的生成.     

牙龈卟啉单胞菌对兔血管平滑肌细胞分泌IL-1β、IL-6的影响

组织块法培养兔腹主动脉血管平滑肌细胞,并对其细胞来源进行鉴定。用4.3×106CFU/mL的Pg上清液刺激细胞12、24、48h后,通过ELISA检测IL-1β、IL-6的水平;同时用RT-PCR检测其mRNA表达的情况。结果:Pg上清液刺激24h和48h时能促进血管平滑肌细胞分泌IL-6,分别与同一时间点的对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),而且24h时,IL-6表达最强,而IL-1β的表达最低,明显低于相同时间的对照组和其他时间点的实验组(P<0.05)。RT-