烟曲霉暴露对支气管哮喘大鼠气道黏蛋白MUC2表达的影响

目的 研究烟曲霉暴露对支气管哮喘(简称哮喘)大鼠气道黏蛋白MUC2表达的影响.方法 70只雄性Wistar大鼠随机数字表法分为7组(每组10只):慢性哮喘(A)组、慢性哮喘+烟曲霉孢子吸入1周(B)组、3周(C)组和5周(D)组、慢性哮喘+生理盐水吸入(E)组、卵清白蛋白(OVA)致敏生理盐水激发(F)组和OVA致敏生理盐水激发+烟曲霉孢子吸入(G)组.测定各组大鼠的基础气道阻力和气道阻力变化率,ELISA法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-13水平,RT-PCR法检测肺组织MUC2 mRNA水平,免疫组织化学染色测定气道上皮细胞MUC2表达强度.结果 D组大鼠基础气道阻力为(1.06±0.28) cm H2O·ml-1·s-1、气道阻力变化率为(85.69±5.68)％、BALF中IL-13为(197±34) mg/L、肺组织MUC2 mRNA/β-actin mRNA为(3.0±0.6)、气道上皮细胞MUC2表达强度(A值)为(871±70)均高于A组[(0.52±0.13) cm H2O· ml-1·s-1、(31.62±3.62)％、(54±9)mg/L、(1.8±0.4)、(202±36)]、B组[(0.54±0.14) cmH2O·ml-1·s-1、(35.90±2.62)％、(96±16) mg/L、(1.9±0.3)、(258±48)]、C组[(0.89±0.22) cm H2O· ml-1·s-1、(60.91±4.26)％、(136±22) mg/L、(2.3±0.5)、(546±54)]和E组[(60.91±4.26) cm H2O· ml-1· s-1、(31.64±3.47)％、(37±8)mg/L、(1.7±0.4)、(188±39)](P＜0.01或P＜0.05);A组高于F组[(0.33±0.08) cm H2O· ml-1·s-1、(16.85±3.62)％、(23±6)mg/L、(0.5±0.2)、(87±18)]和G组[(0.34±0.12) cm H2O· ml-l· s-1、(16.52±3.34)％、(25±6)mg/L、(0.5±0.1)、(88±15)](P＜0.01或P＜0.05);大鼠肺组织MUC2 mRNA/β-actin mRNA和气道上皮细胞MUC2表达强度(A值)均与BALF中IL-13水平正相关(r=0.648,P＜0.05;r=0.676,P＜0.05),与气道阻力变化率正相关(r=0.644,P＜0.05;r=0.584,P＜0.05).结论 慢性烟曲霉暴露可上调哮喘大鼠气道黏蛋白MUC2基因表达,气道黏液分泌增多,黏稠度和黏滞度增加,导致气道反应性增高.     

烟曲霉暴露对支气管哮喘大鼠气道黏蛋白MUC2表达的影响

目的研究烟曲霉暴露对支气管哮喘（简称哮喘）大鼠气道黏蛋白MUC2表达的影响。方法70只雄性Wistar大鼠随机数字表法分为7组（每组10只）：慢性哮喘（A）组、慢性哮喘＋烟曲霉孢子吸入1周（B）组、3周（C）组和5周（D）组、慢性哮喘＋生理盐水吸入（E）组、卵清白蛋白（0VA）致敏生理盐水激发（F）组和OVA致敏生理盐水激发＋烟曲霉孢子吸入（G）组。测定各组大鼠的基础气道阻力和气道阻力变化率,ELISA法测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-13水平,RT—PCR法检测肺组织MUC2mRNA水平,免疫组织化学染色测定气道上皮细胞MUC2表达强度。结果D组大鼠基础气道阻力为（1．06±0．28）cmH20·ml^-1·S^-1、气道阻力变化率为（85．69±5．68）％、BALF中IL-13为（197±34）mg／L、肺组织MUC2mRNA／β-actinmRNA为（3．0±0．6）、气道上皮细胞MUC2表达强度（A值）为（871±70）均高于A组[（o．52±0．13）cmH20·ml^-1·S^-1、（31．62±3．62）oA、（54±9）mg／L、（1．8±0．4）、（202±36）]、B组[（O．54土0．14）cmH20·ml^-1·S^-1、（35．90±2．62）％、（96土16）mg／L、（1．9±0．3）、（258±48）]、C组[（o．89±0．22）cmH20·ml^-1·S^-1、（60．91±4．26）％、（136±22）mg／L、（2．3±0．5）、（546土54）]和E组[（60．91±4．26）C1TIH20·ml^-1·S^-1、（31．64±3．47）％、（37±8）mg／L、（1．7±0．4）、（188±39）]（P〈O．01或P〈O．05）;A组高于F组[（0．33±0．08）cmH20·ml^-1·S^-1、（16．85±3．62）％、（23±6）mg／L、（O．5±0．2）、（87±18）]和G组[（O．34±0．12）cmH20·ml^-1·S^-1、（16．52±3．34）％、（25±6）mg／L、（O．5±0．1）、（88±15）]（P〈0．01或P〈0．05）;大鼠肺组织MUC2mRNA／β-actinmRNA和气道上皮细胞MUC2表达强度（A值）均与BAI,F中IL-13水平正相关（r=0．648,P〈0．05;r=0．676,P〈i0．05）,与气道阻力变化率正相关（r=0．644,P〈0．05;r=0．584,P〈0．05）。结论慢性烟曲霉暴露可上调哮喘大鼠气道黏蛋白MUC2基因表达,气道黏液分泌增多,黏稠度和黏滞度增加,导致气道反应性增高。     

烟曲霉暴露对哮喘大鼠气道微环境的影响及药物干预的作用

目的 探讨烟曲霉孢子吸入对哮喘气道微环境的影响及地塞米松/头孢曲松钠的作用。方法 40只大鼠随机分为：空白对照组、单纯哮喘组、哮喘+孢子组、地塞米松组、头孢曲松组。采用OVA激发构建哮喘模型,烟曲霉孢子滴鼻模拟烟曲霉吸入。药物组于OVA激发前腹腔注射。检测肺泡灌洗液(BALF)及血中pH值、电解质、LDH、总蛋白水平,PDA培养法观察曲霉菌生长。结果 与单纯哮喘组比较,哮喘+孢子组血和BALF的K⁺浓度差减少以及总蛋白量增加(P<0.05)。与哮喘+孢子组比较,头孢曲松组血清和BALF总蛋白量减少(P<0.05),地塞米松组指标无显著变化。各组肺组织/BALF培养阳性率为0/0、0/0、50%/50%、100%/57%、50%/50%。结论 烟曲霉孢子吸入影响哮喘气道微环境,地塞米松和头孢曲松钠增加烟曲霉定植风险。     

吸入烟曲霉孢子对支气管哮喘大鼠气道黏蛋白MUC2表达的影响

气道黏液过度分泌是支气管哮喘(简称哮喘)加重和死亡的危险因素[1-2].MUC2是由杯状细胞分泌的不溶性黏蛋白,哮喘患者MUC2表达上调,呼吸道黏液黏稠度和黏滞性增加,更易导致气道阻塞[3].流行病学资料显示烟曲霉(Aspergillus fumigatus)暴露与哮喘病情加重密切相关[4].我们用卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)致敏和激发的方法建立大鼠慢性哮喘模型,然后给予长期的烟曲霉孢子吸入,观察对黏蛋白MUC2表达的影响,探讨烟曲霉暴露加重哮喘的机制.     

内生多肽Elafin对气道黏蛋白5AC表达的影响

目的 探讨内生多肽Elafin调节气道黏液高分泌的分子机制.方法 构建人 Elafin 重组质粒,原代培养正常人支气管上皮细胞 HBE16,分为对照组、香烟抽提物(CSE)刺激组、CSE 刺激+转染重组质粒、CSE 刺激+空质粒组、单纯转染重组质粒以及空质粒组6组.四甲基偶氮唑盐法检测各组细胞活力,Western blot法检测p-JNK、p-ERK、p-P38和IκBα蛋白含量,荧光素酶报告基因系统测定激活蛋白-1(AP-1)及核转录因子-κB(NF-κB)活性,RT-PCR检测各组黏蛋白(MUC)5AC mRNA 表达水平,ELISA 法分析各组细胞 MUC5AC 蛋白的相对含量.结果 CSE刺激组的p-JNK、p-ERK、p-c-Jun、IκBα、AP-1、NF-κB、MUC5AC和MUC5AC mRNA 含量分别为(0.55±0.03)μg/mg、(0.64±0.06)μg/mg、(0.60±0.07)μg/mg、(0.27±0.03)μg/mg、7.49±0.31、4.42±0.22、(0.71±0.04)mg/L和0.81±0.04,与对照组的(0.26±0.02)μg/mg、(0.30±0.05)μg/mg、(0.19±0.04)μg/mg(0.61±0.04)μg/mg、2.54±0.22、2.37±0.16、(0.23±0.02)mg/L和0.32±0.03比较差异有统计学意义(均P＜0.05).转染重组Elafin后再给予CSE刺激,p-JNK、p-ERK、p-c-Jun、IκBα、AP-1、NF-κB、MUC5AC和MUC5AC mRNA含量分别为(0.38±0.04)μg/mg、(0.31±0.04)μg/mg、(0.14±0.03)μg/mg、(0.54±0.03)μg/mg、2.60±0.19、2.55±0.21、(0.28±0.03)mg/L、0.35±0.05,与CSE组相比差异有统计学意义(均P＜0.05);p-P38蛋白含量在CSE刺激及转染Elafin前后无明显变化.结论 内生多肽Elafin可降低JNK和ERK磷酸化水平并抑制IκBα蛋白降解,从而降低转录激活蛋白-1和核因子-κB的活性,下调黏蛋白5AC的高表达,而p38MAPK在其中的作用并不明显.     

补脾益气方对脾虚哮喘大鼠肺组织黏蛋白5AC表达的影响

目的 观察补脾益气方治疗前、后的脾虚哮喘大鼠黏蛋白(mucin,MUC)5AC表达的变化.旨在探讨补脾益气方对脾虚哮喘气道黏液高分泌的影响.方法 50只Wistar雄性大鼠,按照随机数字法分为5组:对照组、脾虚哮喘组、哮喘组、脾虚哮喘治疗组和哮喘治疗组.每组10只.采用ELISA测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中MUC5AC含量,采用RT-PCR测定肺组织MUC5AC的mRNA表达水平.结果 脾虚哮喘组和哮喘组大鼠BALF中MUC5AC含量和肺组织MUC5AC表达均显著升高,和对照组比较差异显著(P<0.01).并且和哮喘组相比较,脾虚哮喘组BALF中MUC5AC含量和肺组织MUC5AC表达显著升高(P<0.01).和脾虚哮喘组比较,脾虚哮喘治疗组BALF中MUC5AC含量和肺组织MUC5AC表达显著降低(P<0.01).和哮喘组比较,哮喘治疗组BALF中MUC5AC含量显著降低(P<0.01).结论 脾虚哮喘大鼠肺组织MUC5AC表达进一步升高,BALF中的MUC5AC含量进一步增加,补脾益气方能够使其不同程度逆转.     

气道黏液中黏蛋白MUC5AC的研究进展

目前已有21种黏蛋白在人类基因组中被识别，MUC5AC作为气道黏液中最为重要的黏蛋白，受到了广泛关注。许多黏液高分泌疾病，如支气管哮喘、慢性阻塞性肺病（COPD）、支气管扩张等疾病的病理生理改变都与MUC5AC密切相关。对其信号通路和调节机制的研究将有助于通过阻断其信号通路或是调节基因表达进行药物靶向治疗，从而改善症状乃至有效地治疗疾病。另外，MUC5AC在肺癌中的异常表达将会有助于对肺癌进行更为精确的分型，并为肺癌的基因治疗提供依据。     

白细胞介素13对小鼠支气管哮喘模型肺组织钙激活的氯通道gob-5和黏蛋白基因MUC5AC表达的作用

目的　研究白细胞介素 13(IL 13)对小鼠支气管哮喘 (简称哮喘 )模型肺组织“钙激活的氯通道”成员gob 5和黏蛋白基因MUC5AC表达的影响 ,了解其在哮喘发病中的作用。方法　 4 5只雄性BALB/c小鼠按随机数字表法分为对照组、哮喘组和IL 13组 ,每组 15只。用逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)测定方法和免疫组化法分别检测gob 5mRNA、MUC5ACmRNA和MUC5AC蛋白在肺组织的表达。结果　对照组小鼠肺组织中gob 5mRNA表达为 0 0 0 0± 0 0 0 0 ,哮喘组为 1 136± 0 0 0 7,两组比较差异有统计学意义 (P <0 0 1) ;IL 13组小鼠肺组织中gob 5mRNA为 1 2 4 6± 0 0 0 8,哮喘组为 1 136± 0 0 0 7,两组比较差异有统计学意义 (P <0 0 1) ;对照组小鼠MUC5ACmRNA(0 0 70± 0 0 0 4 )和蛋白 (2只小鼠阳性 )表达与哮喘组 (分别为 0 16 1± 0 0 11和 7只小鼠阳性 )比较 ,差异均有统计学意义 (P分别 <0 0 1、0 0 5 ) ;经IL 13处理后的哮喘小鼠肺组织中MUC5ACmRNA (0 2 5 0± 0 0 14 )和蛋白 (13只小鼠阳性 )的表达与对照组 (分别为 0 0 70±0 0 0 4、2只小鼠阳性 )、哮喘组 (分别为 0 16 1± 0 0 11、7只小鼠阳性 )比较 ,差异均有统计学意义 (P均 <0 0 5 ) ;哮喘组和IL 13组小鼠肺组织中gob 5mRNA表达与MUC5ACm     

气道黏蛋白分泌异常与支气管哮喘

支气管哮喘 (简称哮喘 )是嗜酸粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞等多种炎性细胞参与的气道慢性炎症。气道黏液过度分泌是哮喘的重要病理生理改变及导致危重哮喘死亡的主要原因 ,但哮喘中调控黏液过度分泌的机制还不很清楚。黏蛋白 (MUC)是气道内黏液的主要成分 ,对其粘、弹性起着重要作用 ,近年逐渐成为研究的热点。我们就哮喘中黏蛋白分泌异常及其机制的研究进展作一综述。一、黏蛋白黏蛋白是一类富含寡糖链的大分子糖蛋白 ,由多肽骨架和数目众多的寡糖链构成 ,分别是黏蛋白基因和糖基转移酶基因的产物 ,其核心多肽骨架含有大量数目可变的串…     

水通道蛋白敲除对支气管哮喘小鼠气道黏蛋白谱表达的影响

目的水通道蛋白5（aquaporin5,AQP5）敲除对支气管哮喘（简称哮喘）小鼠气道黏蛋白（MUC）谱表达的影响。方法用卵白蛋白致敏和激发制备AQP5敲除鼠的哮喘高分泌模型。用苏木精-伊红染色观察气道及血管周围炎性细胞浸润。阿辛兰-过碘酸雪夫检测显示气道上皮细胞总黏液分泌,免疫组织化学检测气道上皮MUC5AC,MUC5B,MUC2的表达情况。结果哮喘小鼠气道和血管周围可见大量中性粒细胞,淋巴细胞和嗜酸粒细胞浸润,气道上皮有大量的紫红色中性黏液分布,其中以AQP5敲除鼠总黏液分布更多。免疫组织化学显示小鼠哮喘高分泌模型中MUC谱主要为MUC5AC和MUC5B,未见MUC2分布。与野生型哮喘小鼠比较,MUC5AC、MUC5B在AQP5敲除鼠中表达更丰富。结论AQP5基因缺失可能使小鼠气道对过敏原的应激性提高,从而促进黏液高分泌。     

烟曲霉提取物诱导小鼠哮喘模型的建立

目的:探讨小鼠哮喘模型建立的方法,为开展哮喘发生机制或药物治疗研究奠定基础。方法:40只,SPF级C57BL/6小鼠,雌雄各20只,随机分成对照组和模型组两组。模型组小鼠采用气管滴注烟曲霉提取物,隔天给药,对照组小鼠采用无菌0.9%氯化钠溶液气管滴注。给药21天后,最后一次给药24小时后收取肺泡灌洗液,离心后灌洗液上清检测炎症因子水平,灌洗细胞做Giemsa染色分类计数;取左肺做AB-PAS染色,右肺提取mRNA;腹主动脉取血ELISA检测Ig E水平。结果:与对照组相比,模型组小鼠可见典型的哮喘症状,肺泡灌洗液中炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞较对照组显著增多,肺泡灌洗液IL-3、IL-4、IL-5、IL-6及IL-17表达上调,与对照组相比分别为P<0.05和P<0.01。血清Ig E较对照组明显增加[(23.84±3.65)vs.(6.22±1.06)mg/L,P<0.01];AB-PAS染色黏液分泌较对照组明显加重。结论:烟曲霉提取物气管滴注可成功诱导小鼠哮喘模型。     

Chronic intranasal administration of Aspergillus fumigatus spores leads to aggravation of airway inflammation and remodelling in asthmatic rats

Background and objective:   Epidemiological evidence indicates a close link between exposure to fungi and deterioration of asthma. However, the role of fungi as an exogenous precipitant for initiation and progression of asthma has been incompletely explored. In this study, the effects of Aspergillus fumigatus exposure on airway inflammation and remodelling in a rat model of chronic asthma were investigated.
Methods:   The rat model of chronic asthma was established by systemic sensitization and repeated challenge with ovalbumin (OVA). The asthmatic rats were exposed to chronic intranasal inhalation of A. fumigatus spores. Changes in airway inflammation, remodelling and BHR were measured after exposure to the fungus.
Results:   Chronic inhalation of A. fumigatus spores elevated the production of T helper 2 (Th2) cytokines, increased the concentration of total serum IgE, and resulted in the recruitment of eosinophils and lymphocyte infiltration into the airways of asthmatic rats. Goblet cell hyperplasia, mucus hyperproduction and subepithelial collagen deposition were also induced by inhalation of the fungus. The remodelling changes induced by inhalation of the fungus paralleled the changes in BHR in this rat model of asthma.
Conclusions:   Chronic exposure to A. fumigatus aggravated Th2 airway inflammation, promoted airway remodelling and increased BHR in OVA-sensitized and -challenged rats.     

烟曲霉致病相关因子的研究进展

毒力因子是在病原体适应生存环境的过程中产生.烟曲霉毒力是多因素相关的,包括微小的孢子结构使之能够吸入到达宿主的肺泡,耐热特征,疏水性,快速的繁殖速度以及抵抗氧化应激反应的能力.此外,烟曲霉适应环境及代谢相关的蛋白、通路信号分子、脂类代谢产物、毒素等均可看作毒力因子.     

Aspergillus fumigatus endophthalmitis in a patient with acute myeloid leukaemia

A 55-year-old patient developed progressive loss of vision in one eye following induction chemotherapy for acute myeloid leukaemia (AML). Aspergillus fumigatus was cultured from vitreal aspirates. The patient was treated with intravenous and intravitreal amphotericin B but suffered complete loss of vision in her right eye. We believe this is the first report of culture-proven Aspergillus fumigatus endophthalmitis in a patient treated for a haematological malignancy.     

TIM-1对卵蛋白致敏小鼠肺组织黏蛋白SAC及T—bet表达的影响

目的研究T细胞免疫球蛋白-黏蛋白1（TcellIgandmucin-1,TIM-1）对支气管哮喘（简称哮喘）小鼠肺组织黏蛋白（mucin5AC,MUC5AC）及T—bet表达的影响,探讨TIM-1参与气道黏液高分泌的机制。方法卵蛋白（ovalbumin,0VA）腹腔注射致敏小鼠,随机分为正常对照组、哮喘组和哮喘＋TIM-1抗体处理组（TIM—1组）,每组10只。检测小鼠外周血单个核细胞（PBMCs）TIM-1＋细胞比例,实时RT—PCR检测小鼠肺组织MUC5ACmRNA及T-betmRNA表达变化。结果①哮喘组及TIM-1组小鼠外周血PBMCs中TIM-1＋细胞比例分别为（13．15％和7．42％）,均高于正常对照组（1．12％）（P〈O．01）,且TIM-1组低于哮喘组（P〈0．01）;②与对照组小鼠肺组织表达MUC5ACrnRNA（0．223±0．017）相比,哮喘组（1．121士0．082）及TIM-1组（O．771±0．040）表达明显增多（Pd0．01）,且TIM-1组小鼠肺组织表达MUC5ACmRNA较哮喘组降低（Pd0．01）;③哮喘组及TIM-1组小鼠肺组织表达rr-betrnRNA分别为（O．187±0．011）及（O．689±0．057）,较对照组降低（1．001±0．085）（P〈0．01）,而与哮喘组相比,TIM-1组表达有所增多（Pd0．01）;④TIM—1＋细胞比例与MUC5ACmRNA表达比例呈正相关（r1=0．918,P〈0．01）,而与T—bet1TIRNA表达呈负相关（r2=-0．958,P〈0．01）。结论抑制TIM-1表达可通过增强T-betmRNA表达,减少气道MUC5ACmRNA表达,调控气道黏液分泌。     

灯盏花素在气道黏液高分泌大鼠模型中的治疗作用

目的研究灯盏花素在气道黏液高分泌疾病中的治疗作用。方法采用中性粒细胞弹力酶雾化吸人法制作大鼠气道黏液高分泌病理模型,以灯盏花素注射液为干预因素,生理盐水为对照,分别以RT-PCR、ELISA法检测各组气道上皮黏蛋白的表达情况,wester nblot检测蛋白激酶C（PKC）的蛋白水平,放射活性法测定PKC的活性。结果灯盏花素治疗组中的黏蛋白基因转录及蛋白表达水平明显低于对照组,同时伴有组织中蛋白激酶C（PKC）蛋白水平及活性的降低。结论灯盏花素能在一定程度上抑制大鼠气道黏液高分泌,其作用是通过抑制PKC活性而实现。