白细胞介素-1β上调人鼻黏膜上皮细胞黏蛋白MUC2和MUC5B mRNA的表达

目的:探讨白细胞介素-1β(1L-1β)对鼻黏膜上皮细胞黏蛋白MUC2和MUC5B mRNA表达的影响.方法:在培养的第二代人鼻黏膜上皮细胞加入IL-1β(10μg/L)刺激24 h后,采用荧光定量RT-PCR检测人鼻黏膜上皮细胞中MUC2和MUC5B mRNA的定量表达.结果:在培养的鼻黏膜上皮细胞上均检测到MUC2和MUC5B mRNA的表达,IL-1β刺激组MUC2 mRNA定量表达[(39.26±6.10)×104拷贝/μg]高于对照组[(5.70±4.16)×104拷贝/μg],差异有统计学意义(P<0.01);IL-1β刺激组MUC5BmRNA定量表达[(5.72±2.06)×105拷贝/μg]高于对照组[(1.11±0.72)×10.拷贝/μg],差异有统计学意义(P<0.05).结论:在培养的鼻黏膜上皮细胞中IL-1β组的MUC2和MUCSB mRNA表达均高于对照组,提示IL-1β可能具有上调鼻黏膜上皮细胞黏蛋白mRNA的表达作用.     

变应性鼻炎鼻黏膜组织中NF-κB p50表达及其与DNA结合活性的研究

目的:探讨核转录因子-κB亚单位p50(NF-κB p50)在季节性变应性鼻黏膜中的表达及活性状态.方法:采用免疫组织化学方法检测16例季节性变应性鼻炎(SAR组)下鼻甲黏膜组织中NF-κB p50的表达,其中6例为非发作期患者,10例为发作期患者;并与10例鼻中隔偏曲患者下鼻甲黏膜进行对照.采用电泳迁移率滞后分析(EMSA)检测鼻黏膜组织中核蛋白提取物与特异性NF-κB探针的结合活性.结果:NF-κB p50在SAR组及对照组中均有表达,p50阳性表达主要分布在2组鼻黏膜的上皮细胞、炎性细胞、腺上皮细胞及血管内皮细胞的胞质和部分胞核中;SAR组p50胞核阳性染色的阳性细胞百分率发作期是(41.83 ±4.43)%,非发作期是(37.19±3.93)%,两者比较差异无统计学意义(P>0.05).对照组p50胞核阳性染色的阳性细胞百分率仅(8.89±1.32)%.SAR组(包括发作期和非发作期)与对照组p50胞核阳性染色的阳性细胞百分率间比较差异有统计学意义(P<0.01);SAR组NF-κB的DNA结合的32P标记电泳带密度扫描值为32.14±8.73,与对照组(11.12±3.42)比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论:在对照组鼻黏膜中保持低水平的表达,在SAR鼻黏膜中表达显著增高,且其与DNA-蛋白结合活性增高,提示NF-κB p50可能参与维持鼻黏膜的生理功能,并在SAR鼻黏膜持续慢性炎症反应中起重要作用.     

中耳胆脂瘤组织中核因子κB的活化及白细胞介素6的异常表达

目的 研究中耳胆脂瘤组织中核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)活化与细胞因子白细胞介素6(IL-6)表达的关系,以进一步阐明胆脂瘤的发病机制.方法 于中耳手术中收集中耳胆脂瘤组织标本10例,正常外耳道皮肤组织6例,分别采用凝胶电泳迁移阻滞法及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测NF-κB与IL-6在胆脂瘤中的表达,并进行相关性分析.结果 胆脂瘤及正常外耳道皮肤组织中NF-κB DNA结合活性分别为(15.9±8.2)%和(1.4±0.9)%,两组比较差异具有统计学意义(t=3.502,P=0.014);IL-6 mRNA相对表达量分别为0.836±0.281和0.470±0.115,两组比较差异具有统计学意义(t=2.166,P=0.048);NF-κB DNA结合活性与IL-6 mRNA表达水平呈正相关(r=0.752,P<0.05).结论 胆脂瘤组织中存在NF-κB的活化及IL-6基因的异常表达,NF-κB的活化可能是导致胆脂瘤中IL-6过量表达的重要因素.     

地塞米松对人鼻黏膜上皮细胞前炎性因子表达的抑制作用

目的观察地塞米松对脂多糖(lipopolysac-charide,LPS)诱导的人鼻黏膜上皮细胞缺氧诱导因子-1(hypoxic inducible factor-1,HIF-1)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达抑制情况及意义。方法无血清原代培养人鼻息肉和下鼻甲黏膜上皮细胞,以LPS100ng/ml,白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)20ng/ml,LPS100ng/ml加地塞米松13ng/ml,IL-1β20ng/ml加地塞米松13ng/ml作用于对数生长期的上皮细胞3、6、9小时后,采用免疫细胞化学和原位杂交方法检测HIF-1α和VEGF蛋白及mRNA的表达情况。结果①LPS和IL-1β作用于上皮细胞时,HIF-1α及VEGF表达增加具有时间依赖性,以LPS100ng/ml6小时组最明显(P<0.05),且鼻息肉中的表达明显高于下鼻甲(P<0.05);②LPS100ng/ml加地塞米松13ng/ml组和IL-1β20ng/ml加地塞米松13ng/ml组表达强度分别较LPS100ng/ml组和IL-1β20ng/ml组弱(P<0.05)。两抑制组间表达无显著性差异。结论炎性因子及感染性因子可以诱导人鼻黏膜上皮细胞大量表达HIF-1α及VEGF,而地塞米松对其表达有很强的抑制作用。     

细菌脂多糖对人鼻黏膜上皮细胞环氧合酶-2表达和前列腺素E2释放的影响

目的:检测不同浓度和时间梯度的细菌脂多糖(LPS)诱导人鼻黏膜上皮细胞(HNE)环氧合酶-2(COX-2)表达和前列腺素E2(PGE2)释放状况,探讨其在鼻黏膜炎症发病机制中的作用.方法:应用Western印迹和荧光实时定量PCR技术检测LPS诱导下和COX-2特异性抑制剂阻断后,HNE中COX-2表达变化.以酶标免疫测定检测在此过程中PGE2的释放水平.结果:COX-2和PGE2在正常HNE中呈微弱的表达.LPS呈时间和浓度依赖性诱导HNE COX-2表达及PGE2释放;PGE2释放较COX-2晚;NS-398呈浓度依赖性减弱LPS对COX-2表达及PGE2释放的诱导.结论;LPS可有效诱导HNE COX-2表达和PGE2释放,PGE2由COX-2催化合成,COX-2和PGE2表达增加参与了LPS诱导HNE的体外炎症过程.     

核因子-κB及ICAM-1 mRNA在变应性鼻炎鼻黏膜中的表达

目的:检测变应性鼻炎(AR)患者鼻黏膜细胞中NF-κB的活化及其对ICAM-1 mRNA表达量的影响.方法:选取AR患者32例(AR组),同时以单纯鼻中隔偏曲患者20例为对照组,采用免疫组织化学法检测2组患者的中鼻甲黏膜NF-κB亚单位p50、p65的表达情况,用RT-PCR法检测2组患者的中鼻甲黏膜ICAM-1mRNA的表达量.结果:NF-κB在AR组表达为阳性或强阳性,其中NF-κB p50主要表达于细胞质和细胞核;NF-κB p65主要表达于细胞质,细胞核表达较少.对照组鼻黏膜组织中NF-κB有微弱的表达.2组NF-κB p50、NF-κB p65表达的差异有统计学意义(均P＜0.01).RT-PCR显示:对照组中ICAM-1 mRNA表达微弱,AR组ICAM-1 mRNA表达较强,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).NF-κB p50、NF-κB p65的表达强度与ICAM-1 mRNA的表达强度均存在相关性(r=0.899 5,P＜0.01;r=0.7601,P＜0.01).结论:NF-κB在AR形成、发展中发挥重要作用.过度活化的NF-κB启动ICAM-1 mRNA的转录,上调黏附分子的表达.ICAM-1作为一种重要的炎性因子,与AR形成、发展有关.     

缺氧和IL-1β对人鼻黏膜上皮细胞环氧化酶-2表达和前列腺素E2释放的影响

目的：检测不同时间梯度的缺氧和（或）IL-1β诱导人鼻黏膜上皮细胞（HNE）环氧化酶-2（COX-2）表达和前列腺素E2（PGE2）释放状况,探讨其在鼻黏膜炎症发病机制中的作用。方法：应用Western Blot和荧光实时定量PCR技术检测缺氧和（或）IL-1β诱导后HNE中COX-2表达的变化。以酶标免疫测定检测PGE2的释放水平。均数间比较采用秩和检验,缺氧和IL-10诱导间的交互作用分析采用广义线性模型。结果：COX-2和PGE2在正常HNE中呈微弱表达。缺氧和（或）IL-1β均呈时间依赖性诱导HNE中COX-2表达及PGE2释放,各时间点COX-2表达均较对照组明显增加（P〈0．05）。其中,缺氧＋IL-1β组诱导作用最强,缺氧组和IL-1β组依次减弱。缺氧＋IL-1β组诱导的COX-2表达量及PGE2释放量高于同时间点缺氧组和IL-1β组分别诱导量之和。结论：缺氧和IL-1β均可有效诱导HNE中COX-2表达和PGE2释放,且缺氧和IL-1β具有协同诱导作用,提示COX2参与了缺氧和IL-1β诱导的HNE体外炎症过程。     

克拉霉素对离体鼻息肉组织中环氧合酶-2及核因子κB表达的影响

目的：检测用不同浓度梯度的克拉霉素干预后,离体鼻息肉组织中环氧合酶-2（COX-2）及核因子κB（NF-κB）的表达状况,探讨其在鼻黏膜炎症机制中的作用。方法：将鼻息肉组织块分别与克拉霉素（0、10^-6、10^-5及10^-4mol／L）于体外共同培养1d,应用Western blot和荧光实时定量PCR技术检测COX-2和NF-κB亚基的表达水平,观察克拉霉素干预后COX-2和NF-κB表达的变化规律。结果：对照组（0mol／L克拉霉素组）鼻息肉组织中COX-2、NF-κBp50和NF-κcBp65的蛋白质和核酸表达水平最高;随着克拉霉素干预剂量的增加,COX-2、NF-κBp50和NF—κBp65的表达水平呈剂量依赖性下降。相关分析表明,同一组鼻息肉组织中,COX-2核酸表达量分别与NF-κBp50、NF-κBp65呈直线正相关。结论：COX-2异常表达参与了鼻-鼻窦黏膜慢性炎症反应,克拉霉素可能通过阻断NF-κB通路来下调COX-2的合成,发挥其抗炎作用。     

人鼻黏膜上皮细胞中白细胞介素12和细胞间黏附分子1及单核细胞趋化因子3的表达研究

目的:利用RT-PCR检测原代培养的人鼻黏膜上皮细胞中IL-12、细胞间黏附分子1(ICAM-1)以及单核细胞趋化因子3(MCP-3)mRNA的表达。方法:获取人鼻黏膜组织,原代培养人鼻黏膜上皮细胞。设计IL-12 p35亚基、IL-12 p40亚基I、CAM-1以及MCP-3的引物,参照物采用3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH),目标扩增片段938 bp。半定量RT-PCR检测其mRNA在鼻黏膜上皮细胞的表达。结果:×400光镜下观察结果显示原代培养的鼻黏膜上皮细胞形状呈圆形或不规则形,饱满贴壁。RT-PCR结果通过1%琼脂糖凝胶电泳显示,鼻黏膜上皮细胞有IL-12 p35I、CAM-1以及MCP-3 mRNA的表达,但无IL-12 p40亚基的表达。结论:人鼻黏膜上皮细胞中有IL-12 p35、ICAM-1以及MCP-3的mRNA表达,但无IL-12p40亚基的表达。人鼻黏膜上皮细胞不能合成完整有活性的IL-12。     

慢性鼻-鼻窦炎黏膜组织中核因子-κB的表达及其与DNA结合活性的研究

目的 探讨核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)在慢性鼻-鼻窦炎黏膜中的表达及活性状态。方法 采用免疫组化方法检测18份慢性鼻-鼻窦炎钩突黏膜NF-κB亚单位P50、p65的表达,并与10份中鼻道侧中鼻甲黏膜对照;同时采用凝胶电泳迁移率法检测慢性鼻-鼻窦炎黏膜组织中核蛋白提取物与特异性NF-κB探针的结合活性。结果 p50主要位于上皮细胞和腺上皮细胞的胞核和胞质,p65则主要位于上皮细胞的胞质,偶见于胞核。慢性鼻-鼻窦炎组p50胞核阳性染色的阳性细胞百分率是7.8％-52.1％,平均为23％;对照组p50胞核阳性染色的阳性细胞百分率仅0.7％。2组p50胞核阳性染色的阳性细胞百分率间比较差异有显著意义(x2=22.917,P<0.01)。慢性鼻-鼻窦炎组NF-κB的DNA结合的32P标记电泳带密度扫描值为28.14±16.71,与对照组(9.28±2.84)比较,差异有显著意义(t=4.56,P<0.05)。结论 NF-κB在慢性鼻-鼻窦炎黏膜中表达显著增强,且其与DNA-蛋白结合活性显著增高,提示慢性鼻-鼻窦炎黏膜炎症反应中NF-κB被激活。     

核因子κB/p65与环氧合酶2在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的：探讨核因子κB／p65(NF-κB／p65)和环氧合酶2(COX-2)在喉鳞状细胞癌(LSCC)中的表达和临床意义及两者间可能存在的相互关系。方法：采用免疫组织化学SP法检测41例LSCC和10例声带息肉组织中NF-κB／p65和COX-2蛋白的表达水平。结果：NF-κB／p65和COX-2蛋白在喉癌组与对照的声带息肉组比较有显著性差异。进一步定性分析发现COX-2与喉癌的组织病理学分化程度有关。Spearman相关分析显示NF-κB／p65与COX-2高度相关。结论：①喉癌中NF-κB／p65与COX-2的表达均升高。②NF-κB／p65可能促使COX-2的表达。③NF-κB／p65可能成为喉癌治疗的新靶点。     

核因子-kappa B活化对鼻息肉组织中PKC、IL-8表达活性的影响

目的探讨核因子-kappa B p65(NF-κB p65)活化对鼻息肉组织中蛋白激酶C-α(PKC-α)和白细胞介素- 8(IL-8)表达的影响及其在鼻息肉发病机制中的可能作用。方法息肉组织标本35例,正常下鼻甲黏膜16例,免疫组织化学技术检测NF-κB p65、PKC-α、IL-8的表达活性。结果鼻息肉中的NF-κB p65、PKC-α和IL-8表达活性明显高于下鼻甲黏膜,差异有统计学意义(P<0.01);NF-κB p65表达活性与PKC-α和IL-8呈正相关(r分别为0.902,0.946,P<0.01);PKC-α表达活性与IL-8呈正相关(r=0.970,P<0.01)。结论NF-κB-PKC信号传导通道可以调节IL-8的表达活性,是鼻息肉发病的重要机制之一。     

p38丝裂原活化蛋白激酶和核因子κB在鼻黏膜炎症上皮细胞的表达意义

目的　探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（mitogenactivated protein kinase,MAPK）和核因子κB（nuclear factorkappa B,NF-κB）在脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）致炎鼻黏膜上皮细胞中的表达意义。方法　采用蛋白印迹法检测LPS加入培养的鼻黏膜上皮细胞后活化的p38MAPK（磷酸化p38MAPK）表达的变化,及加入p38MAPK特异性阻断剂SB203580对其活性的抑制作用;应用凝胶电泳迁移率分析法检测SB203580对NF-κB DNA结合活性的抑制作用。结果　随着LPS浓度的增加（0.01 mg/L,0.1mg/L）,鼻黏膜上皮细胞中磷酸化p38MAPK的表达升高（0.2±0.059,0.243±0.059）,但无统计学差异（t =0.908,P =0.424;t =0.116,P =0.99）;当LPS的刺激浓度为l mg/L时表达最高（0.851±0.108）（t =9.484,P <0.01）;浓度为10 mg/L时不再继续升高（0.83±0.122）（t =7.916,P <0.01）。在加入LPS之前30 min加入SB203580可抑制p38MAPK活性（0.248±0.055）（t =8.741,P <0.01）。LPS刺激鼻黏膜上皮细胞后NF-κB的DNA结合活性升高（2.116±0.037）,可被SB203580部分抑制（1.323±0.038）（t =10.662,P <0.01）。结论　p38MAPK在LPS致炎的鼻黏膜上皮细胞中被激活,且可能部分调控NF-κB转录因子的活性。     

核因子κB在分泌性中耳炎动物模型鼓室黏膜中的表达

目的检测核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)在分泌性中耳炎(secretory otitis media,SOM)动物模型鼓室黏膜中的表达,探讨NF-κB活化在SOM发病机制中的作用。方法应用灭活肺炎链球菌注入豚鼠中耳腔,制作SOM动物模型,采用免疫组织化学的方法检测致病鼠鼓室黏膜上皮在注入细菌后6h、1d、3d、7d及14d后NF-κBp65、TNF-α和IL-1β的表达及其关系。结果SOM动物模型的鼓室黏膜上皮中NF-κBp65在术后6h就有表达,24小时表达最强,随后表达明显下降,TNF-α和IL-1β的表达也出现相应波动。结论灭活肺炎链球菌致SOM的早期,NF-κB即被激活,在鼓室黏膜中出现过度表达,并与SOM发病中的重要致炎因子TNF-α和IL-1β的产生相关,提示NF-κB与SOM发病机制密切相关。     

环氧合酶-2对细菌脂多糖诱导的鼻黏膜组织中MUC2基因表达的影响

目的探讨细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的离体鼻黏膜组织中环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)及前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)对黏液素2(mucin2,MUC 2)表达的影响,以阐明慢性鼻-鼻窦炎中黏液过度分泌的病理学机制。方法应用荧光实时定量PCR技术检测不同浓度的LPS、PGE2和COX-2特异性抑制剂NS-398干预前后,体外培养的鼻黏膜组织中COX-2和MUC2的基因表达变化,并以酶标免疫测定检测干预前后的PGE2释放水平。结果 COX-2,MUC2和PGE2在体外培养的健康鼻黏膜组织中呈微弱的表达。LPS呈浓度依赖性诱导鼻黏膜组织中COX-2和MUC2基因表达及PGE2释放增加;以不同浓度的NS-398阻断COX-2后,观察到NS-3 9 8呈浓度依赖性减弱LPS对MUC 2的基因表达及PGE 2释放的诱导。外源性的PGE2呈浓度依赖性增加MUC2的基因表达,对COX-2表达无明显影响。结论 LPS通过诱导COX-2进而增加PGE2合成来调节MUC2的表达增高,可能是慢性鼻-鼻窦炎中黏液过度分泌的部分机制。     

变应性鼻炎对小鼠鼻黏膜核因子-κB p65和糖皮质激素受体表达的影响

目的探讨变应性鼻炎（allergic rhinitis,AR）小鼠鼻黏膜核因子-κB（nuclear factor kappat B,NF-κB）p65和糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor,GR）的表达,进一步了解NF—κB p65和GR在AR发病机制中的作用。方法清洁级C57BL6／J小鼠20只,随机分为AR组和对照组,每组10只。AR组用10％卵清蛋白（ovalbumin,OVA）200μl腹腔注射,6％OVA鼻腔局部激发建立AR模型。取鼻面骨,石蜡包埋,连续切片,行HE染色。分别运用免疫组化SABC法和SP法染色,观察鼻黏膜中NF-κB p65和GR的表达情况。结果AR组中10只动物均建模成功,鼻部AR典型症状明显;对照组无明显变化。①形态学改变：对照组鼻黏膜无明显炎症改变;AR组黏膜则显示不同程度水肿,黏膜下嗜酸粒细胞（eosinophils,Eos）、淋巴细胞和单核细胞浸润。②黏膜NF—κB p65表达：NF-κB p65主要表达于上皮细胞和腺上皮细胞的胞浆,偶见胞核。AR组中上皮细胞染色平均光密度值（0．40±0．12）强于对照组（0．23±0．05;P〈0．05）。③GR表达：2组中均有GR表达,主要表达于鼻黏膜上皮、腺上皮及血管内皮细胞的胞核或胞质。AR组中GR的平均光密度值（0．20±0．04）低于对照组（0．36±0．11;P〈0．05）。结论 NF-±κB p65在AR黏膜中表达增强,而GR的表达下降,提示两者的失衡在AR的发病中发挥重要作用。