Furin抑制剂α1-PDX对宫颈癌HeLa细胞生长、转移和成瘤的影响

目的研究α1-PDX对宫颈癌细胞株HeLa细胞生长、转移及成瘤的影响并探讨其机制。方法α1-PDX转染HeLa细胞,通
过MTT细胞增殖实验,Boyden细胞迁移和侵袭实验观察HeLa细胞的生长,迁移和侵袭能力。采用蛋白印迹法检测细胞Furin
及产物膜性Ⅰ型金属蛋白酶（MT1-MMP）蛋白量的变化,荧光酶底物实验检测Furin活性。制作HeLa细胞致瘤裸鼠模型研究
肿瘤体内生长。结果细胞增殖实验结果显示,与对照组相比24 h α1-PDX组HeLa细胞体外生长抑制18.4%,差异有统计学意
义（P<0.01）;细胞迁移和侵袭实验结果显示,α1-PDX处理组穿过滤膜和基质胶的HeLa细胞数量均明显少于对照组（P<0.01）;
HeLa/PDX可显著降低Furin的活性和MTI-MMP的蛋白水平。HeLa/PDX致瘤裸鼠的成瘤机率及皮下肿瘤体积明显小于对照
组。结论α1-PDX可有效抑制人宫颈癌HeLa细胞的生长、转移及成瘤能力,机制可能与降低Furin活性及产物MTI-MMP的表
达有关。
     

姜黄素对人宫颈癌细胞Caski侵袭转移的影响

 【目的】 研究姜黄素对人宫颈癌细胞Caski侵袭转移的影响并探讨其可能的机制。【方法】 以10, 25, 50 μmol/L姜黄素处理Caski细胞24,48,72 h后,MTT法检测其对Caski细胞的生长抑制作用。应用Transwell小室进行人工重组基底膜(Matrigel)侵袭和运动实验,观察姜黄素对Caski细胞侵袭和转移的影响。Western blot检测细胞中MMP-2。MT1-MMP和NF-κB蛋白水平变化。 【结果】应用姜黄素处理后人宫颈癌细胞生长受到抑制且作用呈时效-量效依赖关系;同时细胞侵袭和迁移能力明显降低;MMP-2, MT1-MMP 和 NF-κB 蛋白的表达均明显减弱。【结论】 姜黄素能够减弱人宫颈癌细胞Caski的侵袭和转移,其机制可能与降低MMP-2, MT1-MMP and NF-κB的表达有关。     

MTA1基因对宫颈癌细胞HeLa侵袭转移的影响

目的 探索MTA1基因与宫颈癌细胞HeLa侵袭迁移能力的关系.方法 以脂质体LipofectamineTM2000介导的方法将含有MTA1全长基因的质粒pEGFP-C1/MTA1转染HeLa细胞,应用Western blotting检测转染效果,细胞黏附实验检测细胞黏附能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化,Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 MTA1质粒转染的宫颈癌HeLa细胞中,MTA1蛋白的表达、黏附能力、迁移及侵袭能力均明显高于转染空载体组及未转染组(P<0.05).结论 MTA1基因与宫颈癌细胞的侵袭迁移能力有关,MTA1基因可能成为宫颈癌治疗的一个新的靶点.     

特异性ILK-siRNA对膀胱癌EJ细胞侵袭和迁移的影响

目的设计合成有效的ILK-siRNA,并检测其对EJ细胞侵袭和迁移的影响。方法构建针对ILK基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体pGenSil-1 siRNA1、pGensil-1 siRNA2和1个阴性对照载体pGenSil-1 siRNA3。稳定转染膀胱癌EJ细胞后,通过RT-PCR检测EJ细胞中ILK mRNA水平的表达,并通过Western blot和细胞免疫荧光检测ILK蛋白水平的表达;观察EJ细胞形态变化;检测EJ细胞迁移、黏附和侵袭能力及基质金属蛋白酶的变化。结果重组质粒构建成功。干扰组细胞ILK mRNA及蛋白的表达分别较3个对照组(未转染组、转空质粒组和转阴性对照质粒组)比较,呈显著性下降(P<0.05);HE染色结果显示,细胞铺展良好,核质比减小;转染干扰质粒的2个实验组细胞的黏附能力相对于对照组分别增加87%和76%,黏附能力显著升高,迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05);与3个对照组比较,转染pGenSil-1 siRNA1与pGensil-1 siRNA2质粒到EJ细胞后,MMP-2及MMP-9的表达水平明显降低(P<0.05)。结论成功构建的干扰质粒能抑制ILK基因及蛋白水平的表达,显著抑制细胞的生长、侵袭及迁移能力。     

MTAl基因对宫颈癌细胞HeLa侵袭转移的影响

目的探索MTAl基因与宫颈癌细胞HeLa侵袭迁移能力的关系。方法以脂质体LipofectamineTM2000介导的方法将含有MTAl全长基因的质粒pEGFP—C1／MTAl转染HeLa细胞,应用Westernblotting检测转染效果,细胞黏附实验检测细胞黏附能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化,Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果MTAl质粒转染的宫颈癌HeLa细胞中,MTAl蛋白的表达、黏附能力、迁移及侵袭能力均明显高于转染空载体组及未转染组（P〈0．05）.结论MTAl基因与宫颈癌细胞的侵袭迁移能力有关,MTAl基因可能成为宫颈癌治疗的一个新的靶点。     

姜黄素对人宫颈癌细胞Caski侵袭转移的影响

【目的】研究姜黄素对人宫颈癌细胞Caski侵袭转移的影响并探讨其可能的机制。【方法】以10,25,50μmol/L姜黄素处理Caski细胞24,48,72h后,MTT法检测其对Caski细胞的生长抑制作用。应用Transwell小室进行人工重组基底膜（Matrigel）侵袭和运动实验,观察姜黄素对Caski细胞侵袭和转移的影响。Westernblot检测细胞中MMP-2、MT1-MMP和NF-κB蛋白水平变化。【结果】应用姜黄素处理后人宫颈癌细胞生长受到抑制且作用呈时效-量效依赖关系;同时细胞侵袭和迁移能力明显降低;MMP-2,MT1-MMP和NF-κB蛋白的表达均明显减弱。【结论】姜黄素能够减弱人宫颈癌细胞Caski的侵袭和转移,其机制可能与降低MMP-2,MT1-MMPandNF-κB的表达有关。     

Rab26诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡并抑制其迁移

目的 研究调控Rab26蛋白表达对宫颈癌HeLa细胞凋亡及迁移的影响.方法 常规培养HeLa细胞,分别将含有Rab26 cDNA全长的真核表达载体(过表达组)、含有Rab26 siRNA序列的真核表达载体(siRNA组)瞬时转染HeLa细胞,同时设立正常细胞组及空载体转染组作为对照.转染48 h后,分别用RT-PCR和Westem blot检测各组细胞中Rab26的mRNA及蛋白表达水平;采用流式细胞仪(FCM)检测各组细胞的凋亡率;同时采用划痕实验检测各组细胞迁移速度.结果 与正常细胞组及空载体转染组相比,过表达组HeLa细胞中Rab26 mRNA及蛋白表达水平显著上调(P＜0.05),而siRNA组细胞中Rab26 mRNA及蛋白表达水平显著下调(P＜0.05),过表达组HeLa细胞凋亡率增高并抑制细胞迁移速度(P＜0.01),siRNA组则促进细胞迁移(P＜0.05).结论 Rab26与HeLa细胞的凋亡及细胞迁移有关,故调控Rab26的表达有望成为治疗宫颈癌的新靶点.     

MTA1通过β-catenin、MMP-9调节HeLa细胞粘附、侵袭、转移

目的观察转染转移相关基因1(metastasis-associated 1,MTA1)基因对人宫颈癌细胞HeLa迁移、侵袭、粘附能力以及β-catenin、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法 Western blot法检测HeLa、SiHa细胞中MTA1表达;以脂质体LipofectamineTM2000介导的方法将含MTA1全长基因的质粒pEGFP-C1-MTA1转染HeLa细胞,Western blot法检测目的基因表达;划痕、侵袭、粘附试验分别检测HeLa细胞迁移、侵袭、粘附能力变化;Western blot法检测β-catenin、MMP-9表达变化。结果与SiHa细胞相比,MTA1在HeLa细胞中表达较低(P<0.05);MTA1质粒转染的HeLa细胞中,MTA1表达、划痕愈合、Matrigel侵袭、Matrigel粘附能力均明显高于未转染及转染空载体对照组(均P<0.05);β-catenin、MMP-9表达在转染后均上调(均P<0.05)。结论 MTA1基因过表达可促进HeLa细胞转移、侵袭和粘附,上调β-catenin、MMP-9表达,MTA1基因可能成为肿瘤治疗靶点。     

谷胱甘肽S转移酶π高水平表达抑制人类宫颈癌HeLa细胞的生长、转移和浸润

目的研究胎盘型谷胱甘肽S转移酶π（GSTπ）在宫颈癌细胞中的高表达对其生物学特性的影响。方法通过脂质体介导转染,在人类宫颈癌HeLa细胞建立GSTπ基因高表达稳定转染株;采用细胞计数和MTT法测定细胞的生长;采用划痕法和Boyden小室法检查细胞的转移、浸润能力;采用RT-PCR和Western blot技术检测宫颈癌细胞中相关mRNA和蛋白的表达水平。结果成功构建了GSTπ高表达和空质粒转染的HeLa细胞株;GSTπ基因高表达明显地抑制HeLa细胞的生长、转移和浸润。结论GSTπ可以明显抑制HeLa细胞的生长、转移和浸润,为GSTπ作为一种新的抑癌基因提供了临床前实验数据和依据。     

脱氧胞苷激酶对HeLa细胞放化疗敏感性的影响

目的：研究脱氧胞苷激酶（DCK）对人宫颈癌细胞HeLa药物敏感性与辐射敏感性的影响,为宫颈癌的基因治疗提供理论依据。方法：采用FuGENE 6转染HeLa细胞构建细胞模型,实验分为空白对照组、空载体阴性对照组及DCK基因沉默（siRNA）组,实时荧光定量PCR及Western blotting检测转染前后DCK mRNA及蛋白的表达变化,细胞计数法检测细胞的增殖情况,MTT法检测细胞对阿糖胞苷（AraC）的药物敏感性,克隆形成实验检测细胞的辐射敏感性。结果: 与空白对照组及阴性对照组比较,siRNA转染HeLa细胞后DCK mRNA及蛋白表达水平明显降低 (P<0.05);3组细胞生长曲线无明显差异;siRNA组HeLa细胞对AraC药物的敏感性降低,辐射敏感性增高(P<0.05)。结论：抑制DCK基因表达可以降低宫颈癌细胞对药物的敏感性,增强辐射敏感性。     

Furin和Fyn在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨蛋白前体转化酶 Furin 和 Fyn 在宫颈癌组织中的表达及临床意义。方法常规方法提取41例宫颈癌和12例正常宫颈上皮的 RNA 及蛋白,RT － PCR 方法检测 Furin 和 Fyn mRNA 表达水平,Western Blot 检测二者蛋白表达水平。收集相关病理学资料进行统计学分析并研究二者蛋白表达与临床分期、病理分级和淋巴结转移等临床病理因素的关系。结果宫颈癌组织 Furin 和 Fyn 的 mRNA 表达及蛋白表达水平均明显高于正常宫颈组织,二者在宫颈癌组织中的蛋白阳性表达率分别为58．5％和65．9％,其表达均与临床分期、浸润深度及淋巴结转移有显著相关性（P ＜0．05）。 Furin 与 Fyn 的表达呈正相关（r＝0．438,P＜0．01）。 结论 Furin 和 Fyn 与宫颈癌的发生、发展有关,可作为宫颈癌诊断及临床监测的分子标志物。     

绿豆胰蛋白酶抑制剂对蛋白质前体加工酶的抑制活性

目的:从绿豆中提纯天然的绿豆胰蛋白酶抑制剂(MBTI) ,并测定了它对前体加工酶的抑制活性.方法:通过硫酸铵沉淀、分子筛层析、离子交换、亲和层析和反相高压液相等一系列层析方法,纯化了MBTI;通过筛选得到两种蛋白质前体加工酶Kexin和Furin的高表达酵母菌株和COS-7细胞,用硫酸铵沉淀和分子筛的方法纯化这两种前体加工酶,并测定和计算MBTI对其的抑制活性.结果:纯化的MBTI在HPLC上洗脱为单峰,在SDS-PAGE中为单一条带.MBTI对Kexin的抑制常数达到3.9×10-9mol/L,对Furin有一定的抑制活性,但是抑制活性较弱 .结论:MBTI对于Kexin和Furin两种蛋白前提加工酶都有抑制活性,尤其对Kexin抑制活性明显,如经进一步改造将有望成为理想的蛋白前体加工酶抑制剂.     

葡萄糖调控的胰岛素原真核表达载体的构建

【目的】构建胰岛素原真核表达载体,在肝细胞内实现葡萄糖调控下的成熟胰岛素的表达。【方法】(1)RT-PCR方法从胎儿胰腺获取野生型人胰岛素原cDNA;(2)重叠延伸PCR法在人胰岛素原cDNA上制造两个点突变,该胰岛素原cDNA片段命名为胰岛素/furin(INS/furin);(3)将INS/furin亚克隆至含葡萄糖反应元件(GlRE)的p(GlRE)3BP-1Luc的多克隆位点上。【结果】HindⅢ和EcoRV酶切及测序均证实载体p(GlRE)3BP-11×furin构建成功。【结论】含葡萄糖反应元件的点突变胰岛素原基因真核表达载体p(GlRE)3BP-11×furin有望成为糖尿病基因治疗理想的候选载体之一。     

国人小肠长度的测量

本文报道和分析测量了139具尸体的小肠长度。成年男性54例,均长414.30±9.60厘米;成年女性47例,均长345.87±8.19厘米;男女两性小肠均长382.48±6.40厘米,且两性小肠长度存在非常显著性差异。男性胎儿13例,均长218.46±8.76厘米;女性胎儿25例,均长211.60±7.31厘米;胎儿两性小肠均长213.95±5.68厘米,两性间无差异。求相关系数表明,r=0.039,小肠长度与身高完全无关。     

国人下颌孔的定位研究

用200例(男124、女76)长春市郊出土的干燥成人下颌骨进行了下颌孔定位的研究。所测得的数据,均通过统计学处理。结果发现下颌孔的位置是变化的,但下颌孔主要位于冠突最高点与下颌角连线的上五分之三与下五分之二交界处。同时进行了男、女性别之间及同一性别两侧之间的对比研究。从研究结果看,除下颌孔至下颌角的距离在男、女性别之间存在着明显性别差异以外,其余各项未看出明显性别差异。     

猫直肠的初级传入和传出神经元节段性分布(HRP法研究)

本文用成年猫8只,向直肠壁浆膜下层和肌层内多点注入10％HRP溶液200微升,研究结果证明①猫直肠初级传入神经来自双侧(?)_1至腰_5和骶_1至尾_1的脊神经节,其高峰节段是腰_2和骶_2节段。②脊神经节内直肠的初级传入神经元胞体多为圆形和椭圆形,少数是梭形和不规则形。③直肠初级传入神经元的中枢突经李氏束深面进入骶髓_(13)节段,围绕后角形成较大的外侧束和较小的内侧束。两束沿后角外侧阳内侧缘行向腹侧,其终末均终止于灰质Ⅱ,Ⅲ层和Ⅴ、Ⅶ层.④直肠副交感节前神经元位于双侧骶_1至尾_1节段的中间带外侧核,并在网状核、侧素、后外侧核、中界核和前角后外侧核也见到标记细胞。     

国人腹主动脉不成对脏支起点高度的观察

在162例成年尸体上观察的结果如下:腹腔动脉起点的高度,以平L_1上1/3者最多,平Th_(12)下1/3者次之,平均在L_1上1/3上部。肠系膜上动脉起点的高度,以平L_1上1/3者最多,平L_1下1/3者次之,平均在L_1中1/3下部。肠系膜下动脉起点的高度,以平L_3下1/3者最多,平L_3中1/3者次之,平均在L_3下1/3上部。腹腔动脉起始部下缘与肠系膜上动脉起始部上缘间的距离,以在0.1～0.5厘米之间者最多,平均距离为0.41厘米。肠系膜上动脉起始部下缘与肠系膜下动脉起始部上缘间的距离,以在5.0～7.0厘米之间者最多,平均距离为6.36厘米。腹腔动脉、肠系膜上动脉和肠系膜下动脉起始部下缘与腹主动脉分叉角顶之间的距离,分别以在12.0～14.0厘米、10.0～13.0厘米和3.0～5.0厘米之间者最多,它们的平均距离分别为13.03厘米、11.28厘米和4.21厘米。     

兔胰腺器官内淋巴管

本文对家兔胰腺器官内的淋巴管进行了光镜和电镜观察。胰腺毛细淋巴管和淋巴管存在小叶间和被膜下。毛细淋巴管的超微结构与其他器官所见相同。     

弱视治疗中的有关因素分析

本文报导了83例119眼弱视治疗及随访情况,其中经随访一个月以上的93眼中,56眼(60%)视力恢复三排以上或达1.0以上。 视力恢复与开始治疗的年龄有明显的关系,5岁以前开始治疗者疗效较5岁以后开始治疗者显然好得多。非中心凹注视者疗效不一定比中心凹注视者差,而大多数非中心凹注视眼视力提高者转变为中心凹注视。定期随访,严格认真地遮盖健眼,及强迫多使用弱视眼是治疗弱视的重要原则。