补肾、健脾、益气、活血法对衰老细胞周期基因表达的调控作用

目的：比较补肾、健脾、益气、活血法对衰老细胞周期基因表达的调控作用。方法：采用上述4种不同的含药血清对衰老的人胚肺二倍体成纤维细胞2Bs细胞株进行处理,通过细胞寿命实验、流式细胞仪、RT—PCR、Westemblot方法研究不同中药对衰老细胞周期及其相关基因(P16^INK4、Cyclin D1及PCNA)的mRNA转录和蛋白表达的影响。结果：补肾、益气中药对衰老细胞周期有一定的促进作用,并可下调衰老细胞增殖抑制基因P16和周期蛋白Cyclin D1的mRNA／蛋白表达;上调细胞周期促进增殖基因PCNAmRNA／蛋白的表达。而健脾、活血中药对细胞周期及其相关基因和蛋白表达的作用不明显。结论：补肾、益气方药对细胞周期有促进作用,其中的作用可能是通过促进P16途径的基因表达来实现。     

益气、补肾、活血、健脾四组方药对老年大白鼠肝脏形态学变化影响的比较研究

本实验分别用益气、补肾、健脾、活血四类不同的方药作用于老年大白鼠。21个月龄时,取其肝脏作组织学及组织化学的比较研究。结果显示:中药组肝脏组织结构的退化程度明显较老年对照组轻。其中以益气与补肾方药组的效果为佳,健脾与活血组较为逊色。中药组大白鼠肝脏中琥珀酸脱氢酶、6-磷酸葡萄糖酶、三磷酸腺苷酶的变化均比老年对照组较为接近青年对照组。亦以益气、补肾组的效果最佳。揭示:益气、补肾中药有延缓大白鼠肝脏衰老的作用。     

补肾健脾对衰老肝细胞增殖和凋亡变化的作用

目的:观察补肾健脾中药影响自然衰老大鼠肝组织细胞增殖和凋亡的作用.方法:利用自然衰老大鼠模型随机分3组老年对照组,老年补肾组,老年健脾组各连续给药4个月,观察补肾和健脾方药对模型动物肝脏组织细胞增殖和凋亡衰老性变化的治疗作用.结果:①与年轻大鼠对照,老年大鼠肝组织的G0-G1期细胞比例增加(P＜0.01),而S期细胞及G2-M期细胞比例减少(P＜0.01);同时凋亡细胞的比例增加(P＜0.01).②与老年大鼠对照,补肾和健脾方药组动物肝脏组织的G0-G1期细胞比例减少(P＜0.01)、G2-M期细胞比例增加(P＜0.01);健脾方药组S期细胞比例增加(P＜0.01),但补肾组S期细胞与老年对照组差异不显著(P＞0.05),且健脾组G2-M期细胞明显多于补肾组(P＜0.01).③补肾和健脾方药皆能减少老年大鼠肝脏组织细胞的凋亡(P＜0.01),但健脾方药抑制细胞凋亡的作用明显优于补肾方药(P＜0.01).结论:自然衰老大鼠肝组织细胞增殖减少而细胞凋亡增加;健脾方药对自然衰老大鼠肝组织细胞增殖和凋亡的作用,均优于补肾方药.     

益气,补肾,活血,健脾四组方药对老年大白鼠肝脏形态学变化影…

本实验分别用益气、补肾、健脾、活血四类不同的方药作用于老年大白鼠。２１个月龄时，取其肝脏作组织学及组织化学的研究。结果显示：中药组肝脏组织结构的退化程度明显较老年对照组轻。其中以益气与补肾方药组的效果为佳，健脾与活血组较为逊色。     

不同中药含药血清对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的:研究中药骨康及其中补肾、健脾、活血各成分吸收后不同血清对离体大鼠成骨细胞增殖的影响及其对成骨细胞分泌白介素-6(1L-6)的影响。方法:采用胶原-胰蛋白酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞,然后以中药骨康及其中补肾、健脾、活血成分吸收后血清,加入体外培养成骨细胞中进行培养,MTT法测成骨细胞增殖,ELISA法测培养上清中IL-6含量。结果:发现中药骨康吸收后血清能促进成骨细胞的增殖和分化,补肾成分吸收后血清亦能促进成骨细胞的增殖和分化,健脾、活血各成分吸收后血清对成骨细胞无明显影响,同时,中药骨康及其中补肾成分含药血清可作用于成骨细胞,使分泌其IL-6的能力下降。而中药骨康含药血清的作用明显优于补肾成分含药血清的作用。结论:中药骨康及其中补肾成分含药血清能够促进成骨细胞的增殖与分化从而促进骨形成,同时可抑制成骨细胞分泌IL-6,健脾、活血二法是补肾法的良好补充。     

健脾补肾活血方对大鼠骨髓源内皮祖细胞生物学功能的影响

目的:探讨健脾补肾活血方对大鼠骨髓源内皮祖细胞增殖、迁移及黏附的影响。方法:体外分离培养大鼠骨髓源内皮祖细胞,设空白对照组、健脾补肾活血方低剂量组(0.35 g/ml)、健脾补肾活血方中剂量组(0.65 g/ml)、健脾补肾活血方高剂量组(1.0 g/ml)。药物干预24 h后,MTT法检测细胞增殖水平,Transwell检测细胞迁移能力,黏附实验检测细胞黏附能力。结果:与空白对照组比较,不同浓度的健脾补肾活血方以剂量依赖方式显著提高大鼠骨髓源内皮祖细胞的增殖水平,促进细胞迁移,增强细胞的黏附能力,且健脾补肾活血方高剂量组对细胞增殖、迁移及黏附的影响最大。结论:健脾补肾活血方能促进大鼠骨髓源内皮祖细胞的增殖、迁移及黏附功能,具有恢复细胞生物学功能的作用。     

补肾、健脾、活血类中药复方对老龄小鼠免疫功能作用的对比研究

本研究以老龄（１８月龄）小鼠为实验对象，对补肾的右归饮、健脾的四君子汤、活血的桃红四物汤对免疫功能的影响作对比研究。结果表明：老年对照组Ｔ、Ｂ淋巴细胞转化（淋转）、ＯＫＴ＿３细胞均明显低于成年（３月龄小鼠）对照组。经喂中药４周后，活血化瘀组、健脾益气组Ｔ、Ｂ淋转明显高于老年对照组；补肾益精组Ｔ、Ｂ淋转没有明显变化，ＯＫＴ３细胞明显低于老年对照组。这一结果提示：补肾益精方对衰老或肾虚状态下的免疫机能似乎与活血化瘀方、健脾益气方有不同的作用。     

活血、健脾、补肾法方药对结肠炎大鼠MSC移植后结肠黏膜细胞增殖的影响

目的:探讨活血、健脾、补肾法方药对结肠炎大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)移植后结肠黏膜细胞增殖的影响。方法:雌性SD大鼠以5%2、4、6,三硝基苯磺酸(TNBs)诱导形成结肠炎模型,造模后随机分为模型对照组、MSC移植组、活血组、健脾组、补肾组,第2天将体外分离培养的雄性SD大鼠MSC经尾静脉注射到各组雌性大鼠体内。活血、健脾、补肾各组分别以桃红四物汤、参苓白术散、金匮肾气丸灌胃,每天1次,共15天。疗程结束后,取大鼠结肠组织,免疫组化方法检测其增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,流式细胞仪分析其细胞周期的变化。结果:活血组大鼠增殖细胞指数(LI)明显增高,G0/1期细胞明显减少而G2/M期细胞增加,与移植组比较有显著性意义(P0.05)。结论:活血法代表方药桃红四物汤可明显促进结肠炎大鼠MSC移植后结肠黏膜细胞的增殖。     

益气活血方含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的：探讨益气与活血中药含药血清对骨髓间充质干细胞（ bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs ）增殖能力的影响。方法全细胞贴壁培养法获取、纯化BMSCs,体外培养,建立大鼠骨髓间充质干细胞的培养体系,采集空白对照大鼠、益气药、活血药、益气活血中药灌胃大鼠含药血清,用10%浓度以上不同含药血清培养第三代BMSCs,置于37℃,5% CO2培养箱中孵育。用流式细胞术鉴定BMSCs。噻唑基四唑比色法（ methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）测细胞活性,绘制生长曲线,观察10%益气、活血、益气活血中药含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响。结果采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs,经流式细胞术检测,CD44、CD106呈阳性表达,基本不表达CD45、CD34;MTT法检测结果显示,培养第2、4、5天细胞快速增长,均较前一天增长明显（ P 〈0．05）,第6天时活血方血清组与益气活血方血清组细胞增长已呈下降趋势,而其它三组在第6天细胞增长达最大,与前一天比较仍有差异（ P〈0．05）,到第7天呈下降趋势。 BMSCs去除基线增殖率组间比较,培养第2天时,各组间比较虽无差异,但活血方血清组达最大（71．39±177;4．98%）;第4、6天时,益气活血方组达最大（66．40±177;1．47%）,与其它三组比较P〈0．01,活血方血清组次之;培养第6天时,益气方血清组较其它三组大,益气活血方血清组次之,活血方血清组最低。结论全细胞贴壁培养的大鼠骨髓间充质干细胞在细胞形态与表形表达上均具备BMSCs特征;益气活血中药含药血清对培养BMSCs增殖影响最大,活血方含药血清对细胞增殖影响出现最早、益气方含药血清对细胞增殖影响时间最长。     

黄芪和当归的主要活性成分配伍促进衰老造血干细胞增殖作用的研究

目的探讨黄芪和当归的主要活性成分黄芪甲苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷和阿魏酸配伍对衰老造血干细胞(HSCs)增殖的影响,并从细胞周期调控研究其作用机制。方法以三丁基过氧化氢(T-BHP)构建小鼠HSCs衰老模型,研究不同质量浓度5种活性成分对HSCs衰老和增殖的影响,寻找可促进细胞增殖的主要活性成分。在此基础上,采用正交试验研究5种活性成分配伍对HSCs衰老和增殖的影响,寻找5种活性成分促进细胞增殖的合理配伍。最后,采用HSCs衰老模型,制备黄芪-当归1∶1配伍含药血浆,设立对照组、模型组、空白血浆组、阿魏酸组、黄芪甲苷组、芒柄花素组、毛蕊异黄酮组、毛蕊异黄酮苷组、活性成分配伍组、黄芪-当归1∶1含药血浆组,药物作用于衰老细胞,以SA-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色法测定HSCs衰老率,CCK-8法测定细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期分布,Western blotting法检测Cyclin D1、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)蛋白表达。结果阿魏酸、黄芪甲苷、芒柄花素均可显著促进衰老HSCs增殖和降低细胞衰老率,而毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷单独应用对HSCs增殖和细胞衰老率无显著影响。正交试验发现,以阿魏酸、芒柄花素和黄芪甲苷为基础因子,毛蕊异黄酮和毛蕊异黄酮苷为次要因子进行配伍的5种活性成分组合促细胞增殖和降低细胞衰老率的作用最强。阿魏酸、黄芪甲苷、芒柄花素、活性成分配伍、含药血浆均可降低细胞衰老率,使G0/G1期细胞减少,G2/M+S期细胞增加,并使Cyclin D1和CDK4蛋白表达增强。以上效应以活性成分配伍组和含药血浆组最强。结论黄芪和当归的主要活性成分阿魏酸、黄芪甲苷和芒柄花素对衰老HSCs具有促增殖和改善衰老作用,而毛蕊异黄酮和毛蕊异黄酮苷单用时并无明显的作用。当5种活性成分配伍后对衰老HSCs的促增殖作用最强,并可改善HSCs衰老,促进衰老HSCs由静止期向增殖期转换。黄芪和当归的主要活性成分及其配伍促HSCs增殖和抗HSCs衰老的作用可能与调节细胞周期相关蛋白表达及促进细胞周期转换有关。     

不同治则延缓衰老中药对大鼠外周血淋巴细胞DNA损伤修复能力影响的比较研究

实验通过紫外线（UV）损伤、同位素3H-TdR掺入等方法，观察比较补肾。活血、益气、健脾及上述治则复方等五类延缓衰老中药对大鼠外周血淋巴细胞DNA损伤修复能力的影响，发现补肾组、活血组与老年对照组比较有显著差异（P＜0．02），而其他各组与老年对照组比较无显著差异，提示补肾与活血类中药有提高遗传物质DNA稳定性的作用。     

补肾活血延缓衰老作用的实验研究

探讨补肾活血延缓衰老的机理，测定Ｄ－半乳糖诱导的亚急性衰老小鼠海马、皮层丙二醛（ＭＣＡ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）及胸腺指数，观察补肾活血中药对上述指标的影响。结果 衰老小鼠海马、皮层ＭＤＡ含量升高，ＳＯＤ活性降低，胸腺萎缩，补肾活血中药能使上述变化逆转。提示补肾活血中药能改善机体自由基代谢紊乱，推迟或阻止胸腺萎缩，从而达到延缓衰老的目的。说明补肾活血是延缓衰老的有效方法，并为衰老的“肾虚血瘀”观     

补肾活血方对大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的观察中药补肾活血方对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化的影响。方法取新生的SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞：应用MTT法,对硝基苯磷酸盐法（PNPP）及茜素红染色方法观察不同浓度补肾活血方对体外培养成骨细胞在24、48、72h不同时段的增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性及矿化结节形成的影响。结果不同浓度的补肾活血方均可促进成骨细胞增殖率提高,以中、高浓度组的作用较为明显（P〈0．01）;不同浓度补肾活血方可使ALP活性增强（P〈0．01）;中、高浓度组补肾活血方矿化结节数量,显著多于对照组（P〈0．01）。结论补肾活血方具有促进成骨细胞的增殖、分化及矿化的作用。     

补肾活血法调控大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性的实验研究

目的:探讨补肾活血汤及其拆方含药血清调控大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖活性的作用。方法:体外骨髓贴壁法分离培养大鼠BMSCs,取第3代细胞,免疫荧光法鉴定细胞表面抗原,成骨及成脂诱导证实其多向分化潜能;实验分为补肾活血汤全方组、补肾组、活血组及空白对照组,运用补肾活血汤及其拆方含药血清干预第3代BMSCs 48h,并用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)观察细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期。结果:MTT结果显示:体积分数5%及10%补肾活血汤全方含药血清均有促进大鼠BMSCs增殖的作用;流式细胞仪检测细胞周期显示:运用补肾活血汤含药血清干预后,处于增值分裂期(S+G2+M期)的BMSCs百分率增多,与其他3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:补肾活血汤全方含药血清有促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖的作用。     

血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖迁移及温经活血中药的干预作用

目的：观察温经活血中药对AngⅡ诱导VSMC增殖和迁移的抑制作用及其对相关因子的影响。方法：用组织贴块法培养兔VSMC，以AngⅡ作为诱导因素，复制VSMC增殖迁移模型。用温经活血中药血清进行干预。应用MTT法测定VSMC增殖活性，用免疫细胞化学检测方法测定细胞增殖核抗原（PCNA）及血小板源性生长因子（PDGF-BB）。结果：AngⅡ作用后细胞增殖活性和迁移距离明显增加。而中药组则降低。AngⅡ组PCNA阳性细胞数和吸光度明显高于空白对照组、PDGF—BB呈强阳性表达，中药组则均显著降低。结论：温经活血中药可抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖和迁移、抑制PCNA和PDGF—BB的蛋白表达。     

党参、黄芪化学组份对IEC-6细胞增殖、ODC及hephaestin表达的影响

目的:研究党参提取物D8、黄芪注射液和黄芪甲苷对IEC-6细胞增殖、ODC及hephaestin蛋白表达的影响,探讨益气健脾中药对小肠隐窝细胞的药理作用.方法:培养大鼠小肠隐窝细胞IEC-6,药物刺激24 h,3H-TdR法检测药物对细胞增殖的影响;药物刺激12 h,用ELISA法检测细胞ODC、hephaestin蛋白的表达.结果:党参D8与黄芪注射液、黄芪甲苷能部分促进细胞的增殖及ODC和hephaestin蛋白的表达.结论:党参与黄芪化学组份对IEC-6细胞具有明显的药理作用.     

活血健脾补肾法对MSC移植在结肠炎大鼠肠道增殖分化的影响

目的：探讨中医活血健脾补肾法对骨髓间充质干细胞（MSC）移植在结肠炎大鼠肠道增殖分化的影响。方法：雌性SD大鼠以5%2、4、6,三硝基苯磺酸（TNBs）诱导形成结肠炎模型,造模后随机分为模型对照组、MSC移植组、活血组、健脾组、补肾组,第2天将体外分离培养的雄性SD大鼠MSC经尾静脉注射到各组雌性大鼠体内。疗程结束后,取大鼠结肠组织,免疫组化法检测其肠道干细胞标记物Musashi-1、端粒酶逆转录酶（TERT）的表达。结果：免疫组化检测到MSC移植组及中药治疗各组大鼠结肠黏膜组织Musashi-1及TERT均有阳性表达,其中活血组与MSC移植组比较差异有显著性意义。结论： 活血法代表方药桃红四物汤较明显促进MSC在结肠炎大鼠肠道增殖分化。     

健脾补肾活血方对再生障碍性贫血患者骨髓造血细胞凋亡及Caspase-3酶活性的影响

目的:采用体外细胞培养的实验方法,探讨健脾补肾活血方治疗再障、抑制造血细胞凋亡的作用机制。方法:选择慢性再障10例,分离骨髓单个核细胞加入高、低剂量的健脾补肾活血方药后,检测细胞凋亡率及Caspase-3酶活性。结果:再障患者骨髓造血细胞经健脾补肾活血方干预,细胞凋亡率明显下降,高剂量组可降低Caspase-3酶活性。结论:健脾补肾活血方可明显降低骨髓细胞凋亡率,降低Caspase-3酶活性。推测健脾补肾活血方临床治疗再障的作用机制是通过Caspase-3酶通路而减少和抑制骨髓造血细胞凋亡的发生,促进恢复造血。     

补肾填精健脾益气法对抗衰老的观察

补肾填精健脾益气法对抗衰老的观察吉林省人民医院（１３００２１）夏文静三叉河镇医院刑宏云【关键词】衰老症补肾填精健脾益气临床研究笔者采用补肾添精，健脾益气法对衰老症进行观察，其结果如下：１病例选择和疗效标准共收治老年病人７２例，其中男５９例，女１３例；...     

复方中药含药血清对大鼠成骨细胞增殖及矿化功能的影响

目的：观察补肾健脾活血方中药含药血清对大鼠成骨细胞增殖及矿化功能的影响。方法：制备补肾健脾活血方复方中药含药血清，取不同浓度剂量干预体外培养的成骨细胞，用MTT法检测成骨细胞增殖率，用茜素红染色法显示矿化结节的形成。结果：补肾健脾活血方含药血清能明显增加成骨细胞增殖率和矿化结节形成数，且与含药血清浓度呈正相关。结论：补肾健脾活血方能明显促进成骨细胞的增殖，并能促进成骨细胞对骨机质的矿化功能。