酶终点法测定血清唾液酸

化学法和酶法测定血清唾液酸已被应用于炎症、癌症和其它疾病的诊断.唾液酸苷酶和N—乙酰神经氨酸(NANA)参与的酶法有两种:利用乳酸脱氢酶(LDH)的紫外分光光度法和丙酮酸氧化     

血清唾液酸丙酮酸氧化酶测定新法的研究及应用

目的探讨建立一种血清唾液酸测定的新方法以及临床应用。方法应用N-乙酰神经氨酸酶、丙酮酸氧化酶、抗坏血酸氧化酶、N-乙酰神经氨酸醛缩酶、过氧化物酶与色原系统3-甲基-N-乙基(β-羟乙基)苯胺、4-氨基安替比林进行血清唾液酸浓度的酶法测定。结果磷酸盐缓冲液最适浓度为50mmol/L、pH 7.2,最大吸收峰值为510nm,线性范围为0～4 500mg/L,显色稳定。精密度为批内(n=30)变异系数(CV)=1.90%～3.3%,批间(n=30)CV=1.98%～3.5%,回收率为95.2%～105.1%,平均回收率为99.6%。与酶偶联速率法比较,相关系数(r)=0.996,回归方程Y=1.028 X+0.40,两法高度相关,正常参考值范围50～90mg/L。结论该方法具有高度的特异性和准确性,操作简便、灵敏快速、标本用量少、结果稳定,适用于全自动、半自动生化分析仪,更适用于中小型医院,有较高的推广使用价值。     

β-己糖胺酶及其同工酶

β-己糖胺酶(β-Hexosaminidase,缩写β-Hex)的全名是β-2-氨基乙酰-2-脱氧-D-己糖苷氨基乙酰脱氧己糖水解酶(EC3.2.1.52),当其作用于β-氨基己糖类底物时,显示出β-N-乙酰葡糖胺酶和β-N-乙酰半乳糖胺酶的活性。此二种酶的活性比值为8.6。故亦称此酶为足β-2-氨基乙酰-2-脱氧-D-葡糖苷氨基乙酰脱氧葡糖水解酶(缩写NAG,EC3.2.1.30)。β-Hex属外切糖苷酶,在酸性pH时,能催化水解存在于简单的糖苷、寡糖、多糖及复合糖(如糖脂、糖蛋白)之末端的β-N-乙酰氨基葡糖或β-N-乙酰氨基半乳     

全液体试剂测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶:PNP-NAG连续检测法

目的评价一种以PNP-NAG为基质的全液体试剂测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性.方法尿样中NAG作用于底物PNP-NAG水解游离PNP(对硝基酚),其生成速率与酶活性在一定范围内成正比.结果该方法线性范围达200U/L,平均回收率为99.5%,批内变异系数(CV)和批间变异系数分别为2.7%和4.3%.与CNP-NAG基质法有良好的相关性,线性回归方程和相关系数分别为Y=1.004X-0.084,r=0.9972.103例健康体检者尿样NAG活性参考范围为:1.33～11.17U/gCr(x+2s).结论全液体稳定试剂(PNP-NAG基质法)测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶具有操作简单、快速灵敏,结果可靠的优点,适合临床应用.     

全液体试剂测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶：PNP-NAG连续检测法

目的评价一种以PNP-NAG为基质的全液体试剂测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性.方法尿样中NAG作用于底物PNP-NAG水解游离PNP(对硝基酚),其生成速率与酶活性在一定范围内成正比.结果该方法线性范围达200U/L,平均回收率为99.5%,批内变异系数(CV)和批间变异系数分别为2.7%和4.3%.与CNP-NAG基质法有良好的相关性,线性回归方程和相关系数分别为Y=1.004X-0.084,r=0.9972.103例健康体检者尿样NAG活性参考范围为1.33～11.17U/gCr(x+2s).结论全液体稳定试剂(PNP-NAG基质法)测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶具有操作简单、快速灵敏,结果可靠的优点,适合临床应用.     

血清总唾液酸与肺癌,肺结核的关系

唾液酸(Sialic Acid,SA)化学名称N-乙酰神经氨酸(NeuAc)。体内唾液酸已知存在三种形式:糖蛋白结合唾液酸、脂质结合唾液酸和游离唾液酸。所测血清总唾液酸(Total Sialic Acid,TSA)     

试纸法测定全血乳酸

血液乳酸浓度增加表明组织缺氧,血流不足,出现了无氧代谢。带酶传感器的电极法测定血乳酸,克服了费时、复杂的常规酶法。作者利用乳酸在乳酸氧化酶作用下生成H_2O_2和丙酮酸,H_2O_2再与     

尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶水平测定在慢性肾小球肾炎诊断中的价值评估

目的 研究尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)测定在慢性肾小球肾炎(慢性肾炎)诊断中的价值.方法 研究对象共53例,其中病例组慢性肾炎24例,健康对照组29例.采用6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)法分析受试者尿NAG水平,采用免疫透射比浊法分析受试者尿微量清蛋白(UmAlb)含量,采用谷氨酸脱氢酶法检测血清尿素氦(SBUN)浓度;采用肌氨酸氧化酶法测定血清肌酐(SCr)和尿肌酐(UCr)含量.结果 独立样本t检验结果表明,在病例组和健康对照组之间,NAG和UmAlb水平差异有统计学意义(P＜0.05),SBUN和SCr水平差异无统计学意义(P＞0.05);双变量相关分析显示,NAG与SBUN、SCr、UmAlb的相关系数分别为0.367、0.450和0.824;诊断效果评价表明,NAG、SBUN、SCr和UmAlb水平在ROC曲线下的面积分别为0.728、0.432、0.628和0.888.结论 在实验室建立可靠参考区间的前提下,尿NAG测定可应用于慢性肾炎患者早期肾功能损害的评估.     

尿液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶自动化测定

目的建立用对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷自动化测定尿液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的方法.方法采用两点终点法,无需做尿样空白,用自动生化分析仪直接测定.结果线性范围0～90U/L,精密度批内CV2.3%,批间CV2.8%,与手工终点法比较,Y(本法)=0.7831X(手工法)+0.5238,r=0.9719.结论该法简便,试剂稳定,适用于尿液NAG活力的自动分析.     

MPT-NAG测定N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的应用价值

目的 应用新型底物6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)建立检测N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的紫外动力学新方法,用于尿液中NAG活性测定.方法 基于NAG催化水解对硝基苯-N-乙酶-β-D-氨基葡萄糖苷生成有色的对硝基酚这一反应,对缓冲液离子强度、pH值、底物浓度等最佳反应条件及各种实验参数进行研究.用该法测定了多种病尿样中NAG活活性.结果 该法最低检出限为1.5 U/L,线性范围可达250 U/L(r=0.998 9),批内CV为＜3%,批间CV＜5%,回收率为101.3%.结论 本法灵敏度高,线性、精密度好,结果准确,且操作简便快速,适用于全自动生物化学分析仪操作.     

尿液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶自动化测定

目的建立用对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷自动化测定尿液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的方法。方法采用两点终点法,无需做尿样空白,用自动生化分析仪直接测定。结果线性范围0～90U/L,精密度批内CV2.3%,批间CV2.8%,与手工终点法比较,Y(本法)=0.7831X(手工法) 0.5238,r=0.9719。结论该法简便,试剂稳定,适用于尿液NAG活力的自动分析。     

阴道分泌物功能酶检测联合常规镜检在阴道微生态改变中的应用价值

目的探讨阴道分泌物功能酶检测联合常规镜检在阴道微生态变化中的应用价值。方法对来该院妇科门诊就诊的患者样本进行阴道分泌物功能酶和常规镜检联合检测,并对结果进行综合分析。结果在13 175例检测样本中,功能酶指标过氧化氢(H2O2)、白细胞酯酶(LE)、β-葡萄糖醛酸苷酶(GUS)、唾液酸酶(SNa)、凝固酶(GADP)阳性率分别为82.72%、79.97%、12.34%、15.63%、14.45%;H_2O_2阳性率随年龄增长呈上升趋势,差异有统计学意义(P0.05)。在阴道清洁度Ⅰ～Ⅱ度的样本中,H_2O_2、LE、GUS、SNa、GADP的阳性率分别为79.29%、73.38%、3.66%、3.46%、6.81%,SNa+H_2O_2、GUS+GADP、GUS+H_2O_2、GADP+H_2O_2的阳性率分别为3.11%、0.43%、5.83%、2.31%。结论阴道分泌物功能酶检测联合常规镜检可提示阴道微生态的早期改变,功能酶多指标联合分析有助于全面了解阴道微生态状况,对有效诊治阴道感染性疾病有重要的临床意义。     

血清α-葡萄糖苷酶和N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶同工酶的测定

α-葡萄糖苷酶和N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)是糖蛋白、糖脂等物质降解过程中的水解酶,二者均存在同工酶。作者用荧光物质4-甲基伞形酮作底物,采用不同的试验条件,在正常人新鲜血清中检测到以下同工酶:酸性α-葡萄糖苷酶、肾型α-葡萄糖苷酶、NAG-A、NAG-B。前两种同工酶分别使用不同pH 的缓冲液,NAG-A 和NAG-B的检测是根据它们对热稳定性的不同,将血清与pH4.4缓冲液按比例混合,在55℃中加热15分钟可使NAG-A 失活,再测定NAG 的活性,基本等于NAG-B。NAG-A 活性为NAG 总活性与NAG-B 活性之差。这种枪验方法简便易行,优于过去使用的ED-     

尿素对尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 (NAG)的混合性抑制作用

尿素是尿中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)及其同工酶的抑制物,这种抑制作用可通过尿样预处理去除,如凝胶过滤和稀释。在最适pH值     

血清胱抑素C尿β2-微球蛋白和尿NAG酶在糖尿病早期肾损伤中的意义

目的探讨血清胱抑素C(CysC)、尿β2-微球蛋白(β2-MG)和尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGenzymuria)在2型糖尿病早期肾损伤的意义。方法采用免疫比浊法检测尿液微量清蛋白,比色法测定尿NAG,乳胶增强散射比浊法测定血清胱抑素C、尿β2-MG。根据尿清蛋白排泄率(UAER),将Ⅱ型糖尿病患者71例分成两组,即UAER正常组和微量清蛋白尿组,同健康对照组(n=35),进行组间比较。结果 UAER正常组与健康对照组比较,CysC结果已经升高,阳性率为28.5%,但β2-MG,NAG和健康对照组比较差异无统计学意义。微量清蛋白组CysC阳性率为88.5%,β2-MG阳性率为80.0%,NAG阳性率为65.7%,和健康对照组比较差异有统计学意义。结论 血清胱抑素C和β2-MG和尿NAG酶可反映早期肾损害,且升高的程度与肾损伤的程度成正相关。若联合检测,可提高糖尿病肾损伤的早期检出率。     

乙型病毒肝炎患者血清NAG测定的临床意义

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)存在于各种组织细胞的溶酶体中,主要参与糖蛋白氨基多糖分子内葡萄糖苷键的水解。在正常人体的血和尿中含量甚少[1]。近几年人们发现在肾病、肝病、糖尿病、部分恶性肿瘤和妊娠时,血清NAG活性会升高,特别是肝细胞损害时增高更明显。为探求NAG在乙型病毒性肝炎患者血清中的水平,我们选择患有慢性活动性和重症乙型病毒性肝炎、乙肝后肝硬化患者各对其血清中NAG水平进行测定,报告如下。1材料和方法1.1对象82例乙型病毒肝炎患者,其中HbsAg+HbcAb+HbeAg+(大三阳)18例,HbsAg(+)HbcAb(+)HbeAb(+)(小三阳…     

尿液NAG同工酶测定及其临床意义

作者应用新合成的基质Sodio-M-cresol-sul-fonphthaleinyl-N-acetyl-β-D-glueosaminde(以下简称MCP-NAG)作尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)同工酶醋纤膜电泳,具有操作简易、灵敏度高和结果准确等优点。方法的原理是NAG 与MCP-NAG 作用后,游离出MCP 与Na_2CO_3碱液呈紫色反应,用光密度计测定NAG 同工酶的A和B 组分的相对百分含量。     

沉默CFTR对H_2O_2诱导的大鼠神经元细胞凋亡的影响

目的探讨沉默囊性纤维化跨膜传导调节因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)对大鼠过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)诱导的神经元细胞凋亡的影响。方法 48只新生SD大鼠取其脑组织分离海马神经元,分为空白对照组(不进行转染)、阴性对照组(转染阴性对照siRNA)、CFTR siRNA组(转染CFTR siRNA),CFTR siRNA组再分为50MOI亚组(转染50MOI CFTR siRNA)和100MOI亚组(转染100MOI CFTR siRNA)。各组采用Western blot法测定神经元细胞CFTR蛋白表达量,将生长良好的神经元细胞分为对照组(不转染、不加H_2O_2培养)、H_2O_2组(不转染、加H_2O_2培养)、H_2O_2+阴性对照组(转染阴性对照siRNA、加H_2O_2培养)、H_2O_2+CFTR siRNA组(转染CFTR siRNA、加H_2O_2培养),采用流式细胞仪测定神经元细胞凋亡率。结果 100MOI亚组神经元细胞CFTR蛋白相对表达量(0.32±0.05)低于50MOI亚组(0.58±0.06)(P0.05),50MOI和100MOI亚组低于空白对照组(1.00±0.02)和阴性对照组(1.04±0.08)(P0.05),空白对照组与阴性对照组神经元细胞CFTR蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P0.05);H_2O_2组、H_2O_2+阴性对照组、H_2O_2+CFTR siRNA组神经元细胞凋亡率[(23.25±4.28)%、(22.07±3.67)%、(53.62±6.79)%]明显高于对照组(4.31±0.64)%(P0.05),H_2O_2+CFTR siRNA组高于H_2O_2组和H_2O_2+阴性对照组(P0.05),H_2O_2组与H_2O_2+阴性对照组神经元细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P0.05)。结论沉默CFTR可降低大鼠海马神经元细胞中CFTR蛋白表达,促进H_2O_2诱导的神经元细胞凋亡。     

糖尿病人尿中u-mAlb、NAG两指标的观察

近年来,国内糖尿病发病率呈增高趋势。随着病程的延长,其并发症也相继发生,糖尿病肾病就是较严重的并发症之一。尿微量白蛋白(MCA ormAlb)测定的应用被称为“对糖尿病学的两大贡献之一”,u-mAlb测定对糖尿病肾病的早期诊断和改善预后具有划时代的意义[1]。而N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(NAG)是一种溶体酶,尿中NAC活性     

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶同工酶等电聚焦测定及初步临床应用

本文建立了一种测定N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)同工酶的管状聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦分析法,胶浓度5%。pH 梯度3.5～10.结果表明,尿NAG-A 同工酶等电点为5.5,NAG-B为7.2.38例糖尿病患者尿液分析显示,糖尿病微血管病组NAG-B 活性显著高于无微血管病变组,NAG-B 活性对反映糖尿病性肾损害有一定价值.