骨纤维结构不良中癌基因蛋白的表达及意义

了解骨纤维结构不良中癌基因蛋白的表达情况。方法应用免疫组化法对３７例骨纤维结构不良行多种癌基因蛋白检测。结果３７例实验组中ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ蛋白均有高表达（Ｐ＜０．０１）。ｒａｓｐ２１蛋白在该病恶变组中有高表达（Ｐ＜０．０５）。结论ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ蛋白过度表达在骨纤维结构不良的发生发展中起重要作用，ｒａｓｐ２１蛋白过度表达在该病的恶性变过程中起作用。本研究结果对骨纤维结构不良的诊断和治疗具有广阔的应用前景。     

p21 ras和nm23-H1表达与胃癌淋巴结转移的关系

为探讨ｐ２１ｒａｓ和ｎｍ２３－Ｈ１表达与胃癌淋巴结转移的关系,采用ＬＳＡＢ法观察了８０例胃癌患者的ｐ２１ｒａｓ和ｎｍ２３Ｈ１的表达,并分析其与淋巴结转移的关系,结果：有淋巴结转移（ＬＮＭ）组ｐ２１ｒａｓ表达阳性率（６２．５％）明显高于无ＬＮＭ组（４２．５％）但ｎｍ２３－Ｈ１表达阳性率（２７．５％）则明显低于无ＬＮＭ组（４７．５％）ＬＮＭ数为１－３枚和ｐ２１ｒａｓ表达阳性率（３３．３％）明显低于４－     

中药三棱对多囊肾病囊肿衬里上皮细胞增殖及上皮生长因于受体磷酸化的影响

目的 探讨中药三棱对体外培养的常染色体显性遗传多囊肾病（ＡＤＰＫＤ）囊肿衬里上皮细胞增殖及上皮生长因子受体（ＥＧＦ－Ｒ）磷酸化的影响。方法 体外培养的囊肿衬里上皮细胞经ＥＧＦ、三棱作用后，采用 Ｂｒｄｕ掺入法测定细胞增殖，流式细胞仪测定细胞周期，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测ＥＧＦ－Ｒ磷酸化。结果 与对照组比较，ＥＧＦ（２．５～２０ ｎｇ／ｍｌ）可刺激衬里上皮细胞增殖（Ｐ＜０．０１）；与对照血清比较，三棱含药血清（１％～５％）能明显抑制经ＥＧＦ刺激后的衬里上皮细胞增殖（Ｐ＜００１），阻止细胞从Ｇ_０－Ｇ_１期进入Ｇ_２－Ｍ期，其作用效果呈浓度依赖性；三棱含药血清能抑制囊肿衬里上皮细胞ＥＧＦ－Ｒ的磷酸化（Ｐ＜０．０５）。结论 ＥＧＦ在多囊肾病发病中起促进作用，三棱可能通过对ＥＧＦ－Ｒ磷酸化的干预而达到抑制细胞增殖的作用，从而为延缓多囊肾病的发生与发展提供理论根据。     

补肾中药对肾虚骨质疏松症大鼠红细胞膜PKC、 Ca2+-Mg2+- ATP酶活性影响的实验研究

本实验研究切除卵巢造成肾虚骨质疏松症大鼠模型。通过观测红细胞膜蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）和Ｃａ２＋－Ｍｇ２＿－ＡＴＰ酶的活性，探讨肾虎骨质疏松症病理机制中肌醇脂质系统的变化，并结合全身和脊柱骨密度（ＢＭＤ）指标观察了补肾中药（密骨灵）的疗效，与正常对照组、模型空白组和阳性药（骨疏康颗粒剂）对照组进行对照，探讨补肾法的防治机理。结果表明；模型空白组大鼠红细胞膜ＰＫＣ和Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶、Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶的活性明显低于正常组（ｐ均＜０．０５）；密骨灵组与骨疏康组大鼠全身、脊柱ＢＭＤ和红细胞膜ＰＫＣ、Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶的活性均明显高于模型空白组（ｐ均＜０．０５），并且与正常组大鼠无明显差别（ｐ均＞０．０５）；密骨灵组大鼠红细胞膜Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性高于模型空白组和骨疏康组（ｐ＜０．０５），并且与正常组无显著性差异（ｐ＞０．０５）；密骨灵组大鼠红细胞膜ＰＫＣ活性高于骨疏康组（Ｐ＜０．０５）。结论：肾虎骨质疏松症具有红细胞膜ＰＫＣ和Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶、Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性的改变；密骨灵可以恢复肾虎骨质疏松症大鼠全身骨量，达到防治目的；补肾中药可以恢复红细胞膜ＰＫＣ活性和钙镁泵的活性，是补     

原癌基因c-jun、c-fos 在小鼠胚泡着床前后的表达

为了解胚泡着床前后ｃ ｊｕｎ、ｃ ｆｏｓ表达的动态变化。采用逆转录聚合酶链反应方法检测小鼠子宫内膜原癌基因ｃ ｊｕｎ、ｃ ｆｏｓ的表达。结果表明：（１）小鼠正常内膜有一定的ｃ ｊｕｎ、ｃ ｆｏｓ基因的表达；（２）胚泡着床前（孕３天）的内膜ｃ ｊｕｎ、ｃ ｆｏｓ基因的表达明显高于正常内膜（Ｐ＜０．００１）；（３）着床后，孕５与孕７天内膜ｃ ｆｏｓ、ｃ ｊｕｎ基因的表达低于着床前，至孕７天已低于正常水平（Ｐ＜０．００１）。提示原癌基因ｃ ｊｕｎ、ｃ ｆｏｓ与小鼠胚泡着床有关。     

脑转移瘤中mtp53,二磷酸核苷激酶／nm23—H1的表达和临床 …

目的 探讨突变体ｐ５３蛋白（ｍｔｐ５３）和二磷酸核苷激酶（ＮＤＰＫ）／ｎｍ２３－Ｈ１在脑转移瘤中的表达和预后关系。方法 采用免疫组织化学卵白素－生物素复合物（ＡＢＣ）法检测ｍｔｐ５３和ＮＤＰＫ／ｎｍ２３－Ｈ１在３１例脑转移瘤中的表达。结果３１例中１９例（６１．３％）ｍｔｐ５３、４例（１２．９％）ＮＤＰＫ／ｎｍ２３－Ｈ１表达阳性细胞。ｍｔｐ５３与ＮＤＰＫ／ｎｍ２３－Ｈ１表达呈负相关。ｍｔｐ５３阳性     

酪氨酸激酶途径在成骨细胞增殖及c-fos表达中的作用

目的探讨酪氨酸激酶信息传递途径在成骨细胞增殖及ｃ－ｆｏｓ表达中的作用。方法采用阶段性酶消化法分离拳头新生大鼠颅盖骨居骨细胞,用ＭＴＴ法观察成骨细胞增殖,用免疫组化ＳＰ法结合计算机图像处理系统检测成骨细胞ｃ－ｆｏｓ表达。结果酪氨酸激酶抑制剂Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ和ＨｅｒｂｉｍｙｃｉｎＡ抑制成骨细胞增殖,且两者均部分阻断血清刺激的成骨细胞ｃ－ｆｏｓ表达。结论血清刺激和维持成骨细胞增殖及诱导ｃ－ｆｏｓ表达均     

黄芪当归合剂降低肾病综合征大鼠血脂机制的探讨

目的　探讨黄芪当归合剂降低肾病综合征（ＮＳ）大鼠血脂的机制。方法　采用加速型肾毒血清肾炎致ＮＳ模型。治疗组灌服黄芪当归合剂,正常组和肾病对照组灌水。检测各组血清脂谱,以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交检测肝脏羧甲基戊二酰辅酶Ａ（ＨＭＧＣｏＡ） 还原酶和低密度脂蛋白受体（ＬＤＬＲ）ｍＲＮＡ表达。结果　肾病大鼠呈高脂蛋白血症,该组肝脏ＨＭＧＣｏＡ还原酶的ｍＲＮＡ在早期呈短暂上调（ Ｐ ＜ ０－００１） ,ＬＤＬ受体ｍＲＮＡ 表达随病程逐渐下调（ Ｐ ＜ ０－００１）;黄芪当归治疗组,血清胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白低于肾病对照组,虽肝脏ＨＭＧＣｏＡ 还原酶ｍＲＮＡ 无明显变化,但ＬＤＬ受体ｍＲＮＡ表达较肾病对照组显著上调（ Ｐ＜ ０－０１） 。结论　黄芪当归组显著降低ＮＳ大鼠血脂水平,这一改善脂代谢紊乱的作用可能部份是通过肝脏ＬＤＬ受体ｍＲＮＡ 表达上调而实现。     

骨肉瘤特异性细胞毒T淋巴细胞的诱导及其抗肿瘤特性的研究

目的 诱导崩肉瘤特异性细胞毒Ｔ淋巴细胞（ｏｓｔｏｓａｒｃｏｍａ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ,ＯＳＳ－ＣＴＬ）观察其体内外的抗肿瘤特性。方法 通过生化方法从ＨＯＳ－８６０３细胞系中提取纯化骨肉瘤相关抗原（ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ,ＯＳＡＡ）,并与低剂量ＩＬ－２,ＣＤ３单体协同刺激骨肉瘤致敏的淋巴细胞诱导产生ＯＳＳ－ＣＴＬ。结果     

N—ras,c—myc反义寡核苷酸与p53,p16基因联合抑制人肝癌细胞 …

目的 研究反义癌基因与抑癌基因联合抑制肝癌细胞生长的效果。方法 利用基因重组方法构建携带ｐ１６基因,ｐ５３基因的融合表达载体,利用基因合成仪体外合成Ｎ－ｒａｓ,ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸,并将Ｎ－ｒａｓ,ｃ－ｍｙｃ反应寡核苷酸与ｐｃＤＮＡ１６－５３融合表达载体转染到人肝癌细胞系ＳＭＭＣ７７２１细胞中,观察肝癌细胞生长情况及软琼脂集落形成能力。结果 联合治疗组肝癌细胞增殖速度最慢,软琼脂集落形成个数量少     

酪氨酸激酶抑制剂对人囊肿衬里上皮细胞增殖及信号转导通路的影响

目的 研究表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂CL-387,785对人常染色体显性多囊肾病(ADPKD)囊肿衬里上皮细胞增殖和信号转导通路的作用。方法 体外条件下用CL-387,785处理囊肿衬里上皮细胞;四氮唑盐法(MTT)测定囊肿细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期及凋亡;Western印迹检测EGFR磷酸化程度;细胞免疫化学方法检测核因子表达水平。结果 纳摩尔水平的CL-387,785能有效抑制细胞增殖(P<0.001),且没有明显毒性。细胞周期停滞于G_0/G_1期,未出现明显细胞凋亡。EGFR的磷酸化水平下降,核因子c-jun、c-fos表达水平显著降低(P<0.05)。结论 酪氨酸激酶抑制剂CL-387,785通过非细胞毒性作用明显抑制人多囊肾病囊肿衬里上皮细胞的增殖,其机制可能是阻断了EGFR介导的信号转导通路。     

Role of keratinocyte growth factor in the pathogenesis of autosomal dominant polycystic kidney disease.

BACKGROUND: Previous studies have shown that the expression and distribution of keratinocyte growth factor (KGF), also known as FGF-7 (fibroblast growth factor-7) or HBGF-7 (heparin-binding growth factor-7), may be implicated in kidney cyst formation and expansion. However, there are no data on KGF expression in human autosomal dominant polycystic kidney disease (ADPKD) tissue, and it is unknown whether it affects ADPKD cyst-lining epithelial cell epithelial cell proliferation. METHODS: The expression and distribution of KGF and KGF receptor (KGFR) mRNA in ADPKD cystic and normal kidney tissues were examined using quantitative real-time polymerase chain reaction (PCR) and in situ hybridization. KGF and KGFR protein expression in the above tissues was analysed by immunohistochemistry and western blot. The effect of KGF on cyst-lining epithelial cell proliferation was assessed by MTT assay, and its effect on the cyst-lining epithelial cell cycle was analysed by flow cytometry. The effect of KGF on cyclin D1 and P21(wafl) gene expression in cyst-lining epithelial cells was also determined. RESULTS: KGF and KGFR mRNA expression in ADPKD cysts was higher than in normal kidney tissues. KGF and KGFR protein expression was also higher in ADPKD cysts and was localized to cyst-lining epithelial cells, tubular and interstitial cells. In vitro experiments revealed that KGF promoted cyst-lining epithelial cell proliferation, and decreased the ratio of G0/G1 phase but increased that of S phase. In response to KGF, the expression of the cyclin D1 gene in cyst-lining epithelial cells increased markedly while P21(wafl) expression decreased. CONCLUSIONS: KGF and KGFR expression was upregulated in ADPKD kidney tissues. KGF stimulated the proliferation of cyst-lining epithelial cell in vitro by regulating the expression of cyclin D1 and P21(wafl) genes. KGF may play a role in pathogenesis of ADPKD.     

罗格列酮对多囊肾囊肿衬里上皮细胞p38促分裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

目的 探讨罗格列酮对多囊肾囊肿衬里上皮细胞p38促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的作用。 方法 分别用罗格列酮（RGZ,10 μmol/L）、过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）抑制剂GW9662（10 μmol/L）、RGZ（10 μmol/L）+GW9662（10 μmol/L）、p38MAPK特异性抑制剂SB203580（10 μmol/L）、SB203580（10 μmol/L）+RGZ（10 μmol/L）处理体外培养的多囊肾囊肿衬里上皮细胞（PKD细胞）2 h后,再用表皮生长因子（EGF）刺激不同时间,另设置空白对照组和单独EGF刺激组。采用Western印迹方法检测p38MAPK、磷酸化p38MAPK（p-p38）、增殖细胞核抗原（PCNA）表达;RT-PCR检测p38 mRNA表达;免疫细胞化学检测c-fos和c-jun的表达。 结果 (1) 与空白对照组相比,EGF显著上调p-p38、PCNA、 c-fos和c-jun的表达（P ＜ 0.01）。(2) 与EGF单独刺激相比,RGZ显著降低p38活化和基因表达（均P ＜ 0.01）。RGZ组、SB203580+RGZ组p-p38、PCNA、c-fos、c-jun表达明显下调（P ＜ 0.01）,两组间差异无统计学意义。(3) 与RGZ组相比,RGZ+GW9662组部分阻断RGZ的下调作用（P ＜ 0.05）。 结论 罗格列酮抑制多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖的作用机制可能与其降低p38MAPK活性,继而抑制PCNA、c-fos及c-jun表达有关。这种抑制作用是部分非PPARγ依赖的。     

一种新型嘧啶基取代芳基苯酸衍生物对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖抑制的实验研究

目的:观察新型PPARγ激动剂DH9对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞(WT9-12)增殖的影响。方法:予以不同浓度的DH9及罗格列酮作用WT9-12细胞24、48、72、96 h,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术观察细胞周期的改变;AnnexinV+PI双染色流式细胞术测定细胞凋亡率;Western blotting分析cyclinA、P21CIP/WAF1、Bax和Bcl-2的表达。结果:DH9抑制细胞增殖作用明显优于罗格列酮(P<0.05),并呈量-效和时-效关系。比较加入PPAR-γ抑制剂GW9662前后细胞增殖抑制作用差异无统计学意义(P>0.05)。DH9可增加P21CIP/WAF1蛋白合成,减少CyclinA蛋白合成,使细胞阻滞在S期。DH9作用72 h后Bcl-2/Bax的比值分别为较对照组(2.19±0.08)显著减少(P<0.05),具有促进细胞凋亡的作用。结论:DH9抑制WT9-12细胞增殖活性明显优于罗格列酮,且这种增殖抑制作用与DH9作用在细胞周期的不同调节点,促进WT9-12细胞凋亡有关。     

牛磺酸对系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察牛磺酸对系膜细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其作用的可能机制。方法 用噻唑蓝MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期及凋亡，吖啶噔活体染色观察细胞凋亡形态，免疫细胞化学结合计算机图文分析系统检测cjn,cfos表达。结果 在5－50mmol/L浓度范围内牛磺酸能剂量依赖性地抑制系膜细胞增殖，可使G0－G1期细胞增多，S期细胞减少，并能明显抑制c-jun,c-fos的表达（P＜0．01），而牛磺酸并不诱导系膜细胞的凋亡。结论 牛磺酸可显著抑制系膜细胞增殖，使系膜细胞阻滞于G0－G1期；牛磺酸对系膜细胞增殖的抑制作用与其抑制c-jun,c-fos的表达有关。牛磺酸对系膜细胞凋亡无诱导作用。     

多囊蛋白1氨基端肽对常染色体显性多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨多囊蛋白1氨基端肽（PC-1NTP）对常染色体显性多囊肾病（ADPKD）肾囊肿衬里上皮细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响.方法 用噻唑蓝（MTT）法检测PC-1NTP对ADPKD囊肿衬里上皮细胞增殖的影响.用流式细胞仪分析细胞周期与凋亡状况.用荧光定量PCR检测细胞中细胞周期素cyclinD1、p21WAF1、bax、bcl-2和小染色体维护蛋白2（MCM-2）的mRNA表达.结果 PC-1NTP使ADPKD囊肿衬里上皮细胞G0/G1期细胞百分比显著增多,S期细胞百分比显著减少,并明显抑制其增殖和凋亡;同时细胞中p21和bcl-2 mRNA表达明显增高（P＜0.01）,cyclinD1、bax和MCM-2的mRNA表达明显减弱（P＜0.01或P＜0.05）.结论 PC-1NTP能明显抑制ADPKD囊肿衬里上皮细胞的增殖和凋亡,减慢细胞周期进程,其作用机制可能是通过调节G1/S关卡调节因子cyclinD1/p21WAF1和凋亡调节蛋白bcl-2/bax的表达实现的.PC-1NTP有希望成为治疗ADPKD的可选药物.     

吡咯喹啉醌对许旺细胞增殖及c-fos、c-jun、CREB和PCNA表达的影响

目的 观察吡咯喹啉醌(PQQ)对许旺细胞(Sc)的增殖作用,并探讨其对Sc c-fos、c-jun、CREB及PCNA表达的影响.方法 体外原代培养、纯化及鉴定Sc;行无血清培养细胞周期同步化,应用不同浓度PQQ(0、1、10、100、1 000、10 000 nmol/L)作用sc 72 h;流式细胞仪检测细胞周期比例;RT-PCR检测c-fos、c-jun、CREB的mRNA含量;Western blot技术检测PCNA蛋白表达.结果 PQQ处理组表现为G0/G1期细胞比例减少,S期和G2/M期细胞所占比例增加;100 nmol/L PQQ可使c-fos、c-jun、CREB mRNA含量分别增加0.33、0.42和0.52倍(P＜0.05);PQQ浓度为1 000 nmol/L时,上述因子mRNA含量与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);PQQ浓度为10 000 nmol/L时,上述因子mRNA的含量均降低(P＜0.05);PQQ浓度在1～100 nmol/L时,PCNA蛋白表达上调,且当PQQ浓度为100 nmol/L时PCNA蛋白上调效果最为明显,与对照组比较增加了1.17倍(P＜0.05);当PQQ浓度为1000 nmol/L时PCNA的表达与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);当PQQ浓度为10 000 nmol/L时PCNA表达降低(P＜0.05).结论 10～100 nmol/L PQQ可促进Sc增殖,且c-fos、c-jun、CREB、PCNA在PQQ促Sc增殖过程中表达上调.

Abstract：

Objective To investigate the effects of pyrroloquinoline quinine ( PQQ ) on proliferation and expression of c-fos, c-jun, CREB and PCNA in cultured Schwann cells. Methods Schwann cells were cultured and purified in vitro. The purity of Schwann cells was identified by immunofluorescence of S-100. After synchronization of cell cycle by serum-free medium, different concentration of PQQ(0,1,10,100,1 000,10 000 nmol/L ) were added into culture medium for 72 h. Flow cytometry was used to determine cell cycle. The content of c-fos, c-jun, and CREB mRNA were detected by RT-PCR, and the expression of PCNA protein was detected by Western blot. Results After PQQ treatment, the percentage of cells in G0/G1 phase decreased and the percentage of cells in S and G2/M phase increased. After treated by PQQ at concentration of 1-10 000nmol/L, content of c-fos,c-jun, CREB mRNA was increased by 0. 33 , 0. 42 and 0. 52 fold (P＜0. 05 ) . However, at concentration of 1 000 nmo1/L, there was no difference in mRNAs content when compare to control(P ＞0. 05). And it showed a decline at concentration of 10 000 nmol/L(P＜0. 05). PCNA protein expression was up-regulated at PQQ concentration of 1-100 nmol/L. At 100 nmol/L, the expression increased by 1.17 fold (P＜ 0. 05 ) ; However, at 1 000 nmol/L, there was no difference in PCNA expression when compared to control. And 10 000 nmol/L of PQQ inhibited the expression of PCNA (P＜0. 05). Conclusions When treated with PQQ at concentration of 10-100 nmol/L, the proliferation of Schwann cells increased and the expression of c-fos,c-jun,CREB and PCNA was up-regulated.