心肌组织、耳缘静脉给予养心通脉方剂含药血清内皮祖细胞混悬液的AMI兔心功能观察

目的观察养心通脉方剂含药血清的内皮祖细胞(EPCs)对急性心肌梗死(AMI)兔心功能及血管新生密度影响。方法 35只雄性SPF级兔随机分为7组各5只;A、B、C、D、E组均制备AMI模型(手术结扎冠状动脉),A、B组于制模15 min后心肌分别注射8×10⁵/mL的养心通脉方剂EPCs混悬液、EPCs,C、D组制模后即刻经耳缘静脉注射1×10⁷/mL的养心通脉方剂EPCs混悬液、EPCs;F组只开胸穿线,不结扎左冠状动脉前降支,耳缘静脉注射1 mL生理盐水;G组不作处理。制模后2周采用心脏彩超检测各组兔左室舒张末期内径(LVDd)、左室收缩末期内径(LVDs)、射血分数(EF),观察心脏梗死心肌区和缺血心肌区CD34阳性反应强度,计算心脏梗死心肌区和缺血心肌区血管新生密度。结果 A组和C组LVDs、LVDd低于B、D、E组,EF高于E、B、D组(P均<0.05);A、C组梗死心肌区及缺血心肌区血管新生密度、CD34阳性反应强度高于其余各组(P均<0.05)。结论养心通脉方剂含药血清EPCs可以改善心功能,机制可能为促进血管新生,耳...     

急性心肌梗死患者急性期外周血内皮祖细胞和血清中血管内皮生长因子水平的意义

目的探讨急性心肌梗死患者（AMI）外周循环中内皮祖细胞（EpCs）数目和内皮生长因子（VEGF）水平的变化意义。方法人选35例心肌梗死患者（实验组）和30例健康人（对照组）,分别在AMI患者入院时以及治疗两周后采血,用密度梯度离心法获得单个核细胞（MNCs）,用CD34、VEGF和ACl33标定EPCs,用流式细胞仪（FCM）检测外周血中EPCs细胞数目,并用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测患者血清中VEGF水平以及高敏C反应蛋白水平（hs-CRP）。结果AMI患者人院时EPC数目以及血清中VEGF以及CRP水平明显高于对照组（p〈0．05）,在治疗两周后患者外周血中EPCs和VEGF仍高于正常水平（p〈0．05）,但是CRP已经恢复到正常水平。入院时患者EPCs数目和患者血清中hs-CRP水平呈正相关（r=0．5898,p=0．002）;治疗两周后EPCs数目和患者血清中VEGF水平相关性（r=0．5915,p=0．0002）。结论AM]患者早期循环中EPCs数量增加可能与急性炎症反应有关。而两周后EPC的数目增加可能VEGF对EPCs的动员有关,均有利于心梗部位的修复。     

芎归六君子汤对心肌梗死大鼠G-CSF含量和VEGF、bFGF表达的影响

目的探讨芎归六君子汤对心肌梗死大鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)含量、血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、消心痛组、复方丹参滴丸组和芎归六君子汤组。采用左冠状动脉前降支结扎法复制心肌梗死模型,假手术组只穿线不结扎。造模结束后,分别给予生理盐水及对应药物灌胃,1次/d,连续28 d。下腔静脉取血,检测外周血G-CSF含量;取梗死边缘心肌,测定VEGF和bFGF蛋白和基因表达。结果各给药组血清G-CSF含量升高,心肌梗死边缘VEGF、bFGF蛋白和基因表达增强,与模型组相比差异显著,且芎归六君子汤组上述指标优于复方丹参滴丸和消心痛组(P0.01)。结论芎归六君子汤能够通过提高G-CSF含量、改善VEGF和bFGF表达,促进梗死心肌微血管再生,提示从脾胃论治心肌梗死具有重要应用价值。     

养心通脉片对动脉粥样硬化白兔VEGF的表达和新生血管数的影响

目的观察养心通脉片对动脉粥样硬化（AS）白兔血管内皮生长因子（VEGF）的表达和新生血管数的影响和机制.方法利用高脂饲料喂养白兔造模,正常组和模型组用双蒸水灌胃,养心通脉片组用养心通脉液灌胃.1个月后,取出白兔主动脉,运用免疫组化法来观察VEGF和新生血管数.结果模型组和养心通脉片组主动脉斑块都可见棕黄色阳性表达,模型组表达较为强烈,两者比较有统计学意义（P〈0.05）.两组主动脉斑块都可见大于10 μm的颗粒,养心通脉片组颗粒较少,与模型组比较有统计学意义（P〈0.01）.结论养心通脉片在动脉粥样斑块形成后,通过影响VEGF和新生血管的表达来有效地逆转或消退AS斑块.     

外源性碱性成纤维细胞生长因子对Ⅲ级静脉炎模型兔VEGF表达的影响

目的探讨外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对Ⅲ级静脉炎血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及其作用。方法选用20%甘露醇建立实验兔的Ⅲ级静脉炎模型,皮下注射bFGF并与硫酸镁对比,观察炎症反应及VEGF的表达,探讨其对Ⅲ级静脉炎的修复作用。结果bFGF组中VEGF表达24 h达高峰,维持72¹20 h,168 h后下降,用药后120 hⅢ级静脉炎消退;硫酸镁组VEGF表达24 h达峰值,但分泌量明显低于bFGF组,随即下降至较低水平,168 h静脉炎症明显消退;生理盐水组VEGF表达低下,168 h炎症略消退。结论 bFGF和硫酸镁对Ⅲ级静脉炎均有修复作用,bFGF优于硫酸镁,生理盐水对Ⅲ级静脉炎无修复作用。     

心肌样细胞和内皮祖细胞联合移植对兔心肌梗死面积的影响

目的:评价心肌样细胞和内皮祖细胞联合移植对心肌梗死面积影响是否优于单项细胞移植。方法:骨髓穿刺提取、分离、培养骨髓间充质干细胞(mensenchymal stemcell,MSC),向心肌样细胞和内皮祖细胞定向诱导分化。心肌梗死模型制作成功2周后沿梗死周边区域注射100μl培养基或心肌样细胞、内皮祖细胞及二者混合悬液各3×108/100μl。实验前、后4周行心脏超声检查心功能,TTC染色评价梗死面积。结果:①诱导后MSC呈现心肌样细胞超微结构特征,PCR检查表达心肌收缩、舒张特异性蛋白肌球蛋白重链、受磷蛋白以及心房颗粒;内皮祖细胞呈"铺路石"外观,高表达CD133并随时间推移表达逐步下降。②与对照组[(35.17±1.76)%]相比,细胞移植能降低梗死面积(均P<0.05);心肌样细胞组[(28.61±1.24)%]、内皮祖细胞组[(29.73±2.11)%]与联合细胞移植组[(22.82±3.12)%]比较,均P<0.05。结论:MSC可定向分化心肌样细胞和内皮祖细胞,两者联合细胞移植在改善心肌缺血及心肌细胞坏死,降低梗死面积方面效果优于单项细胞移植。     

内皮祖细胞移植对兔心肌梗死后心功能的影响

目的:探讨移植内皮祖细胞(EPCs)对兔心肌梗死后心功能的影响。方法:通过密度梯度离心法体外分离兔单个核细胞,接种于人纤连蛋白包被的培养板上,并给予含血管内皮生长因子(VEGF)20μg/L的EBM-2完全培养液培养2周。取健康大耳白兔,结扎左冠状动脉前降支,并将制作心肌梗死模型成功的大耳白兔随机分为两组,即对照组和实验组,每组20只。2周后实验组心外膜下直接注射EPCs(1.6×1010/L)悬液,对照组注射无菌PBS液。此外,两组均给予心肌梗死后常规药物治疗。术后4周,分别行超声心动图检查和血浆脑钠肽(BNP)浓度测定及计数移植区毛细血管。结果:实验组左室舒张末期内径(LVEDD)与术前及对照组相比均无统计学差异,而实验组左室射血分数(LVEF)与术前及对照组相比有统计学差异(P0.05)。实验组血浆BNP水平较术前降低,差异有统计学意义(P0.01),且与对照组相比,血浆BNP水平明显降低(P0.05)。移植细胞4周后,实验组梗死边缘区毛细血管密度与对照组有显著性差异(P0.05)。结论:心外膜下直接注射移植EPCs能够改善兔心肌梗死后的心功能,延缓慢性心力衰竭的发生和发展。     

奥美沙坦酯对急性心肌梗死大鼠内皮祖细胞动员的影响

目的:探讨奥美沙坦酯对急性心肌梗死(AMI)大鼠骨髓内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)动员的影响.方法:结扎SD大鼠左冠状动脉前降支制作AMI模型,将术后24 h存活的24只大鼠随机分为3组:AMI组、奥美沙坦酯1 mg*kg-1*d-1组(OML组)和奥美沙坦酯3 mg*kg-1*d-1组(OMH组);另设假手术组(8只)作为对照.灌胃给药共2周.大鼠尾动脉血压计测量大鼠收缩压,ELISA法测定血清血管内皮生长因子(VEGF)含量,以 DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)及FITC标记的单叶豆凝集素1(FITC-BS-1)双色荧光标记鉴定循环及骨髓EPCs并对其计数.结果:在术前,术后24 h、1周及2周各组大鼠尾动脉收缩压之间差异无统计学意义;与假手术组比较,AMI组、OML组和OMH组的血清VEGF含量、循环和骨髓EPCs数量均明显升高;与AMI组比较,OML组和OMH组血清VEGF含量无明显变化,循环和骨髓EPCs数量却明显增加.结论:大鼠AMI后2周骨髓EPCs的动员增加,奥美沙坦酯能显著促进AMI大鼠骨髓EPCs的动员,增加循环EPCs数量,此效应与VEGF途径及血压降低无明显相关.     

心肌内注射碱性成纤维细胞生长因子基因对兔缺血心肌血管新生的促进作用

目的 :探讨心肌内注射碱性成纤维细胞生长因子基因 (b FGF基因 )治疗兔急性心肌梗死模型的效果。方法　碱裂解法大量制备质粒 ;采用开胸结扎兔冠状动脉左前降支 (L AD)法 ,建立兔急性前壁心肌梗死模型。模型制备成功后将动物分为治疗组 (n=19)和对照组 (n=18) ,并于心肌内分别注射 pc DNA3- b FGF10 0 μg和 pc DNA310 0 μg,饲养至 2 ,6 ,12周处死 ;免疫组化观察蛋白表达 ;行病理切片观察心肌梗死组织学变化和缺血心肌内血管新生的情况。结果　 (1)术前术后描记的心电图证实兔急性心肌梗死模型制作成功 ;(2 )免疫组化观察注射 pc DNA 3- b FGF处心肌组织在 6周内有 b FGF蛋白的表达 ;(3)病理切片行图像分析计算血管密度发现 ,治疗组毛细血管密度和小动脉密度显著高于对照组。结论　心肌内注射 b FGF基因能促进缺血心肌内血管新生 ,有可能成为一种新的冠心病治疗方法     

红花注射液对溃疡性结肠炎大鼠VEGF和bFGF表达的影响

目的:观察红花注射液(safflower solution,SS)对2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)诱导的大鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的疗效及其对大鼠结肠组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basal fibroblast growth factor,bFGF)表达的影响.方法:将30只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、红花组,每组10只.用TNBS灌肠法复制大鼠UC模型,红花组同时给予腹腔注射SS2mL/(kg·d)干预治疗,模型组与对照组给予等量生理盐水.造模10d后,收集标本.对大鼠行疾病活动指数(disease activity index,DAI)、结肠大体形态评分及组织学损伤评分,分别用免疫组织化学法及实时荧光定量PCR(real time-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测大鼠结肠黏膜中VEGF、bFGF的表达.结果:与正常对照组相比,红花组、模型组DAI评分,结肠大体形态损伤评分和组织学损伤评分均显著增高(P<0.01);而与模型组相比,红花组能显著改善UC症状(P<0.05).模型组大鼠VEGF、bFGF表达水平明显高于正常组(P<0.01);与模型组相比,红花组VEGF表达显著降低(P<0.05).结论:SS能够显著改善UC大鼠结肠损伤及炎症反应,这可能与其有效下调VEGF的表达,抑制病理性血管生成有关.     

基因重组细胞生长因子对AMI患者心脏功能的影响

目的:了解基因重组细胞生长因子(bFGF)对急性心肌梗塞(AMI)患者心脏收缩和舒张功能的影响.方法:将同期住院的70例AMI患者分为治疗组和对照组两组,两组在年龄、性别、梗塞部位及面积方面无明显差异,治疗组给予bFGF 1600U肌肉注射,每日一次,连用4周,于4周时用门控平衡法心血池心室显像复查心脏收缩和舒张功能并与对照组比较.结果:治疗组(bFGF组)心脏左室射血分数较对照组提高约20%(0.477±0.138:0.274±0.09,P=0.0003),左室峰充盈率也较对照组明显提高(2.362±0.918:1.318±0.398,P<0.005),治疗组患者的梗塞后心绞痛及室壁瘤发生率也较对照组明显下降.结论:bFGF可以促进AMI患者梗塞区血管的形成,有利于侧枝循环的建立,可以明显的改善AMI患者的心脏收缩及舒张功能,减少梗塞后心绞痛和室壁瘤的发生,可能成为一种新的有希望的AMI基因治疗方法.     

脑心通胶囊对急性脑梗死患者血清VEGF、MDA水平影响的研究

目的探讨急性脑梗死患者血清血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和自由基丙二醛(MDA)含量在不同时间段变化及脑心通胶囊的治疗影响。方法选择60例脑梗死患者,随机分为治疗组和对照组,各30例,并设立健康组60名。治疗组给予脑心通胶囊口服。采用双抗体夹心ELISA及比色法动态测定法于1d、3d、7d、14d检测患者血清VEGF及MDA含量,治疗前及治疗后14d进行神经功能评分。结果脑梗死组各时间点血清VEGF的水平明显高于健康组(P<0.01),至病程第7天达高峰,以后开始下降,至14d仍维持高水平,差异有统计学意义(P<0.01);脑梗死组发病24h内及第3天,MDA水平明显高于对照组(P<0.01),在第7天及14天,两组比较无统计学意义。患者血清VEGF水平在发病3d、14d随着梗死面积增大及病情严重程度而升高,3组比较有统计学意义(P<0.01),而血清MDA水平只在发病第3天才与梗死面积及病情严重程度有变化(P<0.01)。应用脑心通胶囊干预治疗后血清VEGF一直保持在一个相对较高的水平,于3d、7d、14d明显高于对照组,而两组的MDA水平在各时间点比较均无统计学意义(P>0.05)。结论急性脑梗死后血清VEGF浓度明显增高,VEGF和MDA共同参与脑梗死急性期血管病理损伤过程,脑心通胶囊干预治疗可增加VEGF含量。VEGF可作为评估急性脑梗死患者病情轻重和预后的客观指标。     

丙戊酸钠对Kasumi-1细胞VEGF、bFGF表达的影响

目的探讨丙戊酸钠（VPA）对白血病细胞株Kasumi-1细胞生长及血管新生的作用机制。方法不同浓度VPA处理Kasumi-1细胞不同时间,RT-PCR及Western Blot法检测Kasumi-1细胞血管内皮细胞生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）mRNA及蛋白水平。结果VPA作用后VEGF mRNA及蛋白表达下调,bFGF mRNA表达下调,均呈剂量依赖性。结论VPA可通过下调VEGF及bFGF表达,抑制血管新生,进而抑制白血病细胞增殖。     

A Single Bolus of a Long-acting Erythropoietin Analogue Darbepoetin Alfa in Patients with Acute Myocardial Infarction: A Randomized Feasibility and Safety Study

Aims: Besides stimulating hematopoiesis, erythropoietin (EPO) protects against experimental ischemic injury in the heart. The present study evaluated the safety and tolerability of EPO treatment in non-anemic patients with acute myocardial infarction (MI). Methods and Results: In this single-center, investigator-initiated, prospective study, patients with a first acute MI were randomized to one bolus of 300 μg darbepoetin alfa or no additional medication before primary coronary intervention. Twenty-two patients (mean age 59 ± 2 years) were included. In the darbepoetin group, serum EPO-levels increased to 130–270 times that of controls, within the first 24 h. After darbepoetin administration, only small and non-significant changes in hematocrit levels were observed, while endothelial progenitor cells (EPCs, CD34+/CD45−) were increased at 72 h (2.8 vs. 1.0 cells/μl in control group, p < 0.01). No adverse events were recorded during the 30-day follow-up. After 4 months, left ventricular ejection fraction was similar in the two groups (52 ± 3% in darbepoetin vs. 48 ± 5% in control group, p = NS). Conclusions: Intravenous single high-dose darbepoetin alfa in acute MI is both safe and well tolerated. Darbepoetin treatment after MI stimulates EPCs mobilization. The results of this first pilot study support a larger scale clinical trial to establish efficacy of EPO administration in patients after acute MI.     

碱性纤维母细胞生长因子对实验性家兔急性心肌梗塞的影响

为探讨碱性纤维母细胞生长因子对急性心肌梗塞的影响及临床应用前景，用冠状动脉结扎法制备了家兔急性心肌梗塞模型．在此模型上亿脉注射碱性纤维母细胞生长因子1．4μg/kg，共6次．结果发现能明显缩小心肌梗塞范围，梗塞心肌重量占心脏重量百分比分别为8．1％±2．7％和8．2％±2．1％，对照组为16．5％±3．2％（P＜0．05）；增加心输出量和心肌收缩力（±LVdq／dtmax显著增加）；增加梗塞区心肌ATP贮备（2．9±0．4和3．2±0．3μmol／g，对照组为2．3±0．3μmol／g，P＜0．01）．结果提示，碱性纤维母细胞生长因子具有促进梗塞心肌愈合和改善心功能的作用，且这一作用明显优于临床上常用的扩血管药硝酸甘油。     

脑心通对急性心肌梗死病人运动耐量及血管内皮功能的影响

目的研究脑心通胶囊对急性心肌梗死病人的运动耐量及血管内皮功能的影响.方法将63例急性心肌梗死病人随机分为两组,对照组(30例)予西医常规治疗;治疗组(33例)在西医常规治疗的基础上加用脑心通胶囊治疗,疗程皆为30 d,分别观察两组疗效,并用心电图平板运动试验和二维超声分别测定两组病人运动耐量及肱动脉血管内皮功能.结果经30 d治疗后,治疗组总有效率(93.9%)优于对照组(83.3%,P＜0.05);两组运动耐量均较治疗前明显提高(P＜0.05),肱动脉血管内皮功能均较治疗前明显改善(P＜0.05).结论脑心通胶囊治疗急性心肌梗死不仅可以提高疗效,而且可显著提高病人的运动耐量及改善血管内皮功能.     

重组人碱性成纤维细胞生长因子对缩小兔急性心肌梗死面积作用的观察

目的 :探讨重组人碱性成纤维细胞生长因子 (rhbFGF)对缩小兔急性心肌梗死面积的作用。方法 :将 3 6只日本大耳白兔分为 2组 :①生理盐水对照组 (n =11) ,②rhbFGF组 (n =2 5 )。在无菌条件下开胸结扎兔冠状动脉左前降支 ,建立急性心肌梗死动物模型 ;制备rhbFGF蛋白 ,将其直接 4点注入兔缺血心肌内 ,通过心肌酶学及心电图QRS积分观察rhbFGF对兔急性心肌梗死面积的影响。结果 :①血清心肌酶学观察 :2组左前降支结扎后 2 4h与基础值比较血清谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、乳酸脱氢酶同工酶、肌酸激酶、肌酸激酶MB同工酶、α 羟丁酸脱氢酶均明显增高 ,有非常显著性差异 (P <0 0 1) ,2组左前降支结扎后48h与基础值比较 ,除生理盐水组的谷草转氨酶和rhbFGF组的谷草转氨酶及乳酸脱氢酶同工酶外 ,其它均明显增高 ,有非常显著性差异 (P <0 0 1)。左前降支结扎后 48h ,rhbFGF组较生理盐水对照组乳酸脱氢酶、乳酸脱氢酶同工酶、肌酸激酶及肌酸激酶MB同工酶明显降低 ,有显著性差异 (P <0 0 5 )。生理盐水对照组乳酸脱氢酶同工酶 ,左前降支结扎后48h与左前降支结扎后 2 4h比较升高 ,而在rhbFGF组降低 ,均有显著性差异 (P <0 0 5 )。②心电图QRS积分 :左前降支结扎后 6周rhbFGF组QRS积分 (4 3 0± 0 95 )较生理盐水对     

Intramyocardial Injection of DNA Encoding Vascular Endothelial Growth Factor in a Myocardial Infarction Model

In a previous study, we observed that one injection of 500g of DNA for the plasmid encoding for vascular endothelial growth factor (ph VEGF₁₆₅) into one site in a rat myocardial infarction model resulted in neovascularization confined to angiomatous structures that did not contribute to regional myocardial blood flow. The purpose of the present study was to determine whether a lower dose (125g DNA), which is the same as that being used in some clinical trials, injected into four separate sites could enhance collateral flow and vascularity to the ischemic bed without inducing angiomas. Rats received injections of 125g DNA of the plasmid encoding phVEGF₁₆₅ or control DNA at four separate sites within the anterior free wall of the left ventricle (LV) supplied by the left coronary artery. The left coronary artery was ligated and hearts analyzed at 4 weeks. In vitro studies confirmed that the phVEGF₁₆₅ used was capable of producing VEGF polypeptide in mammalian cells. The infarct size (percentage of endocardial circumference that infarcted) was similar in controls (42±6%) and treated hearts (39±7%); the LV cavity area did not differ between groups. The number of vascular structures per high-power field within the infarct scar was 10.50±0.68 in controls and 10.00±0.85 in phVEGF₁₆₅-treated rats. Relative regional myocardial blood flow determined by radioactive microspheres and expressed as a ratio of radioactive counts within the scar divided by radioactive counts in the noninfarcted ventricular septum was similar in control (0.74±0.25) and treated hearts (0.88±0.30) (p=not significant). No angiomatous structures were observed. Injections of 125g of DNA of phVEGF₁₆₅ into myocardium to become ischemic had no effect on infarct size or LV cavity size. Unlike higher doses of 500g of DNA, it did not cause gross angiomatous structures; however, it failed to improve neovascularization or regional myocardial blood flow in this rodent model of acute myocardial infarction.