肝细胞癌中Lumican 的表达及意义

目的 探讨肝细胞癌组织中Lumican 蛋白的表达及意义.方法 应用免疫组化SP 法检测62 例肝细胞癌患者癌组织及癌旁正常组织Lumican 蛋白的表达并分析其与临床病理因素之间的关系.结果 肝细胞癌组织中Lumican 阳性表达率为35.48%,癌旁正常组织的阳性表达率66.13%,两者具有统计学差异(P<0.05...     

原发性肝细胞癌病人肝组织中螺杆菌的检测及分析

目的检测并分析原发性肝细胞癌病人组织中螺杆菌的存在情况。方法取配对的80对肝癌、癌旁组织标本及13例正常肝组织标本，抽提组织DNA，分别以细菌特异性和螺杆菌属细菌特异性16SrRNA基因引物进行巢式PCR检测，RCR产物T-A克隆后进行测序和基因进化树分析；对16SrRNA基因归属于幽门螺杆菌的组织样品，PCR检测幽门螺杆菌特异性26KDa基因及cagA、vacA、rps4、g1mM四个功能相关基因，进一步验证幽门螺杆菌的存在；应用抗幽门螺杆菌抗体对肝癌／癌旁组织及正常肝标本进行免疫组化验测。结果39份肝癌组织标本（39／80，48．75％）及37份癌旁组织标本（37／80，46．25％）检出螺杆菌属16SrRNA基因，其中，肝癌组织及癌旁组织均阳性的共有20例，正常肝组织无一例阳性（P〈0．01）。对其中50份16SrRNA基因的进化树分析提示它们与幽门螺杆菌的同源性超过99％，与此相关的组织样本中，幽门螺杆菌特异性26KDa基因阳性37份，cagA基因阳性8份，g1mM基因阳性9份，vacA基因以及rps4基因未检出。免疫组化显示26份癌组织（26／80，32．5％）及24份癌旁组织（24／80，30．0％）检出幽门螺杆菌，且主要分布于肝窦、汇管区及小肝管，正常肝组织无一例阳性（P〈0．01）。结论原发性肝细胞癌病人的癌组织及（或）相应的癌旁组织内存在螺杆菌，螺杆菌感染与原发性肝癌发生可能存在某种关联。     

原发性肝细胞癌以及近癌旁组织微血管密度CD105表达及其临床意义

目的 研究肝细胞癌(HCC)及其近癌旁组织微血管密度(MVD-CD105)分布,探讨MVD-CD105在HCC、近癌旁组织的分布规律、临床意义以及CD105标染HCC组织微血管的特异性.方法 采用免疫组织化学方法检测63例HCC组织、近癌旁组织MVD-CD105,比较HCC组织和近癌旁组织MVD-CD105分布特点及其与临床参数的关系.结果 63例HCC及其近癌旁组织血管CD105阳性表达率为100％,近癌旁组织表达强度高于癌组织(χ2=9.184,P＜0.01).HCC组织MVD-CD105为(58.37±21.45)/0.74mm2,近癌旁组织为(81.62±19.86)/0.74mm2,近癌旁组织MVD-CD105分布显著高于癌组织(t=2.438,P＜0.05).HCC组织中的MVD-CD105阳性表达分布与肿瘤转移及TNM分期有关(P＜0.01).近癌旁组织的MVD-CD105阳性表达分布与肿瘤TNM分期及2年存活时间有关(P＜0.05).结论 CD105标染HCC组织MVD未体现出肿瘤微血管标染特异性.HCC组织MVD-CD105高表达、分布意味着肿瘤的局部转移和进展.CD105分子不能作为抗肝癌肿瘤血管生成靶向治疗的靶标,但肝癌MVD-CD105的检测对于后续综合治疗有指导意义.     

原发性肝细胞癌中EphA7蛋白的表达及其临床意义

目的 探讨酪氨酸蛋白激酶 EphA7 蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组化和 Western blot 方法检测 EphA7 蛋白在40例原发性肝细胞癌及相应的癌旁肝组 织和10例正常肝组织中的表达情况,并分析其与原发性肝细胞癌的临床病理因素之间的关系.结果 EphA7蛋白的表达主要位于原发性肝细胞癌细胞或肝细胞的胞质,以及纤维间隔内的血管内皮细胞.原发性肝细胞癌组织、癌旁肝组织及正常肝组织中均有EphA7蛋白的表达,Western blot分析结果显示EphA7蛋白在肝细胞癌组织(0.58±0.26)中的表达水平高于癌旁肝组织(0.40±0.22,P<0.05)和正常肝组织(0.32±0.16,P<0.05),而在癌旁肝组织和正常肝组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05);EphA7蛋白的表达水平与原发性肝细胞癌细胞的分化程度、门静脉癌栓、淋巴结转移和甲胎蛋白水平等临床病理因素相关(P<0.05).结论 EphA7 蛋白的表达与原发性肝细胞癌的生物学行为密切相关,可能在原发性肝细胞癌的恶性转化、侵袭和转移过程中发挥重要作用.     

人肝细胞癌中CD44表达的研究

目的 探讨ＣＤ４４在人肝细胞癌中的行为及价值。方法 应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ及ＲＴ－ＰＣＲ方法对３０例人肝细胞中ＣＤ４４表达进行研究。结果 Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ结果表明，３０例癌组织中有１１例阳性，３０列癌旁肝组织有５例阳性，ＣＤ４４在肝细胞癌组织中的表达与癌周肝组织中的表达无显著差异（Ｐ〉０．０５）。ＲＰ－ＰＣＲ研究表明，３０例癌组织中有１６例阳性，３０例癌旁肝组织中有１０例阳性，ＣＤ４     

金属硫蛋白在肝细胞癌中表达的临床意义

目的 探讨金属硫蛋白（metallothionein,MT)在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC)组织中、癌旁组织和正常肝组织中的表达及其临床意义。方法 对30例HCC病人的癌组织、10例癌旁组织和10例正常肝组织标本进行免疫组化染色，观察MT的表达状况，分析MT在HCC中的表达与癌旁组织、正常肝组织、细胞分化和预后等的关系。结果 正常肝组织有很强而稳定的MT染色；癌旁组织（包括肝硬化结节）有较高的MT着色；癌组织中MT染色很弱，甚至无MT染色。相互比较有显著性差异（P＜0．05）。MT在肝细胞癌组织中的表达与生存率之间存在着正相关关系（P＜0．05）。结论 MT在正常肝组织、癌旁组织和肝细胞癌组织中的表达呈递减趋势，肝细胞癌组织中MT表达与癌细胞分化无关，而与瘤体组织坏死及肝切除术后病人生存状况相关。     

肝细胞癌抗原基因在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的　探讨肝细胞癌抗原 (HCA)基因mRNA在肝细胞癌 (HCC)组织中的表达。方法　用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法对HCC患者的癌组织和相应癌旁组织及肝硬化和正常肝组织中的 4种HCAmRNA的表达进行检测 ;结合临床病理资料进行分析。　结果　 46例HCC患者中 ,HCA90、HCA51 9、HCA52 0、HCA587基因mRNA阳性率分别是 65 2 %、76 1 %、45 7%和 32 6 % ;至少表达一种HCA者达 82 6 % ;而癌旁组织中仅HCA51 9基因有 6 5 %mRNA表达为阳性。 1 0例肝硬化和正常肝组织中 4种HCA基因均不表达。 4种HCA的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、血清AFP水平、HBV和HCV感染无显著相关性 (P >0 0 5)。在部分AFP正常的患者中存在HCA基因的表达。　结论　HCA基因在HCC中呈高比例、高特异性表达 ,为HCC免疫治疗提供了新的潜在靶位     

EphrinA1在原发性肝细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨原发性肝细胞癌中EphrinA1的mRNA和蛋白表达水平及其临床意义。方法应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫组织化学方法检测EphrinA1的mRNA及蛋白在40例肝癌及相应的癌旁肝组织和10例正常肝组织中的表达水平,并分析其与临床病理学特点之间的关系。结果40例肝癌组织及相应的癌旁肝组织和10例正常肝组织中均有EphrinA1 mRNA的表达。RT-PCR分析显示EphrinA1mRNA在肝癌组织（0．5413±0．1527）中的表达显著高于癌旁肝组织（0．3895±0．0549,P〈0．05）和正常肝组织（0．3770±0．1055,P〈0．05）,而在癌旁肝组织（0．3895±0．0549）和正常肝组织（0．3770±0．1055）中的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。从正常肝组织、癌旁肝组织到肝癌组织,EphrinA1蛋白的阳性表达率分别为20％（2／10）、35％（14／40）和62％（25／40）,呈递增趋势（x^2=14．762,P〈0．05）。EphrinA1蛋白的过表达与肝癌细胞的分化程度、门静脉癌栓的形成及淋巴结转移等临床病理因素有关（P〈0．05）。结论EphrinA1蛋白的过表达与肝癌细胞的分化程度、淋巴结转移和门静脉癌栓有密切联系,提示其可能在肝癌的恶性转化、侵袭和转移过程中发挥重要作用。     

原发性肝细胞癌、癌旁及肝硬化组织中CD3+细胞的研究

摘要：为探讨CD3在原发性肝细胞癌、癌旁、肝硬化及正常肝组织中的表达，并探讨CD3+细胞与肝癌、肝硬化的关系。笔者对60例原发性肝细胞癌组织、62例单纯性肝硬化及21例正常肝组织，用SP免疫组化法进行染色，定量分析其阳性细胞数。结果示： (1)CD3+细胞平均数从高到低依次为：肝癌癌旁组织、癌组织、肝硬化及正常肝组织（P<0.05）；(2)肝癌组织中CD3+细胞平均数与组织学分级和临床TNM分期无关；(3)肝癌15个月内有转移组的癌组织中CD3+细胞数少于无转移组（P<0.01）。提示CD3+细胞可作为反映机体抗肿瘤免疫状态及判断患者预后的重要指标。     

人肝细胞性肝癌性激素受体的表达

目的：研究人肝细胞性肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织中雄激素受体（AR）和雌激素受体（ER）的表达水平及分布规律。方法：应用单克隆抗体免疫组化法检测50例肝细胞性肝癌标本的肿瘤组织、癌旁组织和10例肝内胆管结石的肝组织中AR和ER的表达情况。结果：在肝癌组织、癌旁组织和肝内胆管结石的肝组织中，AR的阳性表达率分别为30％、8％和0％，除癌组织显著高于癌旁组织外（P＜0．01），其它各组无显著性差异（P＞0．05）；ER的阳性表达率分别为12％、10％和20％，在三组中均无显著性差异（P＞0．05），在所有阳性片中，AR和ER的标记指数（LI）均＜25。结论：AR和ER在肝细胞性肝癌组织中的表达率很低。     

E-钙粘附蛋白,CD44V6在原发性肝细胞癌中表达的研究

目的　 E-钙粘附蛋白 (E- Cad) ,CD4 4 V6在原发性肝细胞癌中的表达及意义。方法　高压锅抗原修复免疫组化技术。结果　正常肝组织 E- Cad表达显著高于癌旁组织和肝癌组织 (P<0 .0 5 ) ,CD4 4 V6仅在肝癌组织中见到表达 ,E- Cad表达与原发性肝细胞癌的包膜是否完整及癌细胞分化程度密切正相关 ,与有无门静脉瘤栓形成密切负相关 (P<0 .0 5 ) ,CD4 4 V6的表达与原发性肝细胞癌有无门静脉瘤栓形成密切正相关 (P<0 .0 1) ,单因素分析显示 E- Cad、CD4 4 V6的表达与原发性肝细胞癌患者的预后相关 (P<0 .0 5 ) ,Cox比例风险模型分析表明 E- Cad、CD4 4 V6、门静脉瘤栓、肝癌细胞分化程度可作为影响预后的指标 (P<0 .0 5 )。结论　 E- Cad和 CD4 4 V6表达对预测肝癌转移和评估预后是一重要的指标     

原发性肝癌中Clusterin异常表达与多药耐药关系的研究

目的 探讨聚集素(Clusterin)蛋白在原发性肝细胞癌(human hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及与多药耐药的关系.方法 采用免疫组化S-P法检测41例原发性肝癌标本及10例正常肝组织、10例肝硬化组织中凋亡抑制基因Clusterin及Caspase-3、P-gp的表达.结果 Clusterin在HCC中的阳性表达率为82.93%,在肝硬化和正常肝组织中表达阴性或弱阳性(82.93% vs 10.00% χ2=28.89,P=0.00);Clusterin阳性表达与患者的年龄、性别、AFP值、HBsAg及肝硬化等无关,与Edmondson组织学分级有相关性.Caspase-3与P-gp在肝癌组织中的阳性表达率分别为34.15%和70.73%.肝癌组织中,Clusterin与Caspase-3表达呈负相关(r=-0.36,P=0.02),Clusterin与P-gp表达呈正相关(r=0.42,P=0.006).结论 Clusterin在HCC中呈过表达,与临床耐药密切相关,有望成为肝癌靶向治疗的一个新靶点;Clusterin通过直接或间接调控Caspase-3的活性从而抑制肝癌细胞凋亡,促进HCC的发生、发展及恶性增殖.     

C-met在肝细胞癌中的表达及意义

目的探讨肝细胞癌组织中C-m et的表达及其临床意义。方法选择2001年1月至2002年12月我院肝脏外科行手术治疗的肝细胞癌病例共47例,收集全部病例术后肝细胞癌组织蜡块并对病例定期随访,确定患者复发转移情况。采用免疫组织化学S-P法检测肝细胞癌组织中C-m et的表达。结果肝细胞癌组织中C-m et的表达阳性率均显著高于正常对照组(P<0.05)。在肝细胞癌病例中,C-m et在多结节组的表达阳性率显著高于单结节组(100.0%vs 60.5%,P<0.05),C-m et在1年内有复发转移组的表达阳性率显著高于1年内无复发转移组(82.1%vs 47.4%,P<0.05)。COX比例危险模型多因素分析表明:C-m et和门静脉癌栓是影响肝细胞癌术后复发转移的风险因素,绘制kap lan-m e ier生存曲线显示:C-m et高表达组的肝细胞癌术后的平均复发时间明显低于C-m et低表达组和阴性组(P<0.05)。结论肝细胞癌组织中C-m et呈高表达,C-m et的表达与肝细胞癌的早期复发转移有关,是肝细胞癌早期复发转移的风险因素。     

肝细胞癌人白细胞ABC和DR抗原的表达及意义

目的探讨人白细胞抗原(HLA)Ⅰ类和Ⅱ类分子在肝细胞癌(简称肝癌)的表达情况及其意义.方法采用免疫组化法分别检测HLA-ABC和HLA-DR抗原在46例人肝癌组织、10例人正常肝组织以及SMMC-7721、HHCC、HCC-9204和BEL-7402等4种人肝癌细胞系和人正常肝细胞系QZG的表达情况,并以图像分析仪进行定量分析.结果肝癌和正常肝组织及其相应细胞系的HLA-ABC和HLA-DR抗原阳性信号均主要定位于细胞浆.肝癌组织表达HLA-ABC的强度明显弱于正常肝组织(P<O.05),而对HLA-DR的表达明显强于正常肝组织(P<0.05).4种肝癌细胞系的HLA-ABC表达强度均明显低于QZG细胞(P<0.05),但对HLA-DR的表达与QZG细胞未见明显差异(P>0.05).结论肝癌组织和肝癌细胞系中HLA-ABC抗原表达有所下降.肝癌组织有HLA-DR抗原表达增强,而肝癌细胞系基本上不表达HA-DR.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体治疗肝细胞癌的研究

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与其受体在肝细胞肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)中的表达及意义,及利用TRAIL对HCC的治疗作用。方法采用免疫组化技术及原位杂交方法分别检测了100例肝癌组织,100例癌旁组织,40例正常肝组织中TRAIL及TRAILR的表达,并结合临床资料进行分析;采用不同浓度TRAIL处理肝癌细胞株HepG2、SMMC7721,观察经药物处理前后肿瘤细胞的凋亡发生率。结果TRAIL在正常肝组织中无表达,癌旁组织中的表达明显高于癌组织。86例肝癌组织不表达诱捕受体DcR1(86%),55例肝癌组织不表达诱捕受体DcR2(55%),40例正常肝组织两种诱捕受体均有表达。肝癌组织中死亡受体为高表达,诱捕受体为低表达,正常肝组织则相反,两者间有显著差异性(P<0.05)。肝癌组织中死亡受体的表达与肿瘤的分化呈正相关(P<0.01),与肿瘤分级呈负相关(P<0.05),与病人的性别、年龄、AFP水平、肿瘤的大小以及是否转移无关。经TRAIL(100ng/ml)处理24h,肝癌细胞凋亡发生率约10%,而Jurkat细胞凋亡率达70%以上,胆管癌细胞QBC939凋亡发生率约50%。结论HCC时,TRAILR普遍表达,但存在受体类型的表达差异,其中DcR1大多缺失,这为利用TRAIL治疗HCC提供了理论依据,然而,单一的TRAIL治疗只能有限的诱导肝癌细胞HepG2、SMMC7721发生凋亡,HCC对TRAIL诱导的凋亡存在耐药现象。     

CD44v6在胆囊癌中的表达及其意义

目的探讨CD44v6与胆囊癌发生及胆囊癌恶性生物学行为的关系.方法应用免疫组织化学法研究CD44v6在29例胆囊癌、16例胆囊腺瘤及8例正常胆囊组织中的表达.结果 CD44v6在正常胆囊组强保未见表达,胆囊癌与胆囊腺瘤中的表达率分别为62.1%和19%,CD44v6的表达与胆囊癌淋巴结转移相关(P＜0.05),未分化及低分化胆囊癌CD44v6的表达率显著高于高分化胆囊癌(P＜0.05).结论 CD44v6参与胆囊癌的发生、发展.     

P27蛋白在肝细胞肝癌组织中的表达及意义

目的 探讨P^27蛋白在肝细胞肝癌组织中的表达及其与临床病理学特征关系。方法 采用免疫组织化学S-P染色法检测33例肝细胞癌组织中P^27蛋白表达，并分析其与临床病理学特征的关系进行分析。结果 P^27蛋白的表达在进展期肝癌组织中显著降低，P^27阳性表达率在高TNM分期5），中低分化（6/20），有癌栓（3/14），直径大于3cm(9/12)的肝癌组织中显著低于TNM分期（13/18），高分化（10/13），无癌栓（13/19），直径小于3cm(7/12)的肝癌组织，P值分别为0.005,0.013,0.013,0.032。结论 p27蛋白表达量的减少和肝细胞肝癌的恶生程度及侵袭性密切相关，可能成为一个新的预后指标。     

生长抑素对肝癌细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的　探讨生长抑素对肝癌细胞血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响。方法　将 2 0只小鼠随机分为 2组 ,每组各10只。每只小鼠于左腋窝皮下注射小鼠肝癌细胞株细胞。A组为实验组 ,皮下接种肿瘤 2 4h后予奥曲肽 (10 0 ug·kg- 1·d- 1 )腹腔注射 ,连用 14d;B组为对照组 ,予以相同容积的无菌生理盐水腹腔注射 ,连用 14d。 14d后处死小白鼠 ,检测肿瘤大小、血管内皮生长因子 (VEGF)。结果　皮下接种 7d天及 14d天后 A组皮下肿瘤的体积均明显小于 B组 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1) .A组 VEGF表达明显低于 B组 ,并统计学差异有显著性 (Ridit检验 ,P<0 .0 5 ) ;A组 MVD亦较 B组为低 ,但统计学差异无显著性 (P=0 .0 75 )。结论　生长抑素对小白鼠肝癌移植瘤具有抑制作用 ,对肿瘤 VEGF的抑制作可能为其机理之一 ,对肿瘤组织血管形成的抑制作用亦可能为其原因。     

放射敏感性自杀基因在肝癌细胞中的表达及其杀伤作用的实验研究

目的　观察可被放射线转录激活的早期生长反应基因 - 1(early gorwth response- 1Egr- 1)启动子驱动单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (herps sim plex virus thym idine kinase tk)在肝癌细胞中的表达以及对肝癌细胞的杀伤作用。方法　构建以 Egr- 1为启动子 ,以 tk为目的基因的重组质粒 p ET,经脂质体介导转染人肝癌细胞株 SMMC- 772 1,经 G4 18抗性筛选、分别以 0、5、7.5、10、15、2 0 Gy剂量 [6 0 ] Co-γ射线照射、RT- PCR半定量分析 ,比较 tk基因的 m RNA表达 ,同时 ,加入前药丙氧鸟苷 (ganciclovir GCV) ,测定其对肝癌细胞的杀伤效应。结果　转染后的肝癌细胞株经γ射线照射后其 tkm RNA的表达较未照射组 (5 5 .2± 7.2 4 )有明显提高 ,以 15 Gy最为显著 (117.2± 11.1) ,同时 ,前药 GCV可明显提高对转染细胞的杀伤效率 (P<0 .0 0 1)。结论　经γ射线照射后 ,可被放射线转录激活的 Egr- 1启动子不仅可引起 tk基因在肝癌细胞中高效表达 ,而且可明显提高对肝癌细胞的杀伤效率 ,从而为提高自杀基因治疗肝癌的疗效以及为肝癌的基因 -放射治疗的实验研究打下了坚实的基础