真实世界中新型冠状病毒抗体检测结果的探究

背景　新型冠状病毒肺炎（COVID-19）疫情早期,胶体金法检测新型冠状病毒（SARS-CoV-2）抗体首先获国家药品监督管理局批准用于临床,但SARS-CoV-2抗体检测结果假阳性的干扰因素尚不明确。目的　探讨临床如何分析解读SARS-CoV-2抗体检测阳性结果。方法　收集2020年3-6月北京大学国际医院同时送检SARS-CoV-2 IgM/IgG抗体和核酸的8 678例受检者的临床资料进行回顾性分析,收集受检者流行病学史、临床表现及实验室指标（包括SARS-CoV-2抗体和核酸检测结果、类风湿因子、补体、免疫球蛋白）。采用胶体金法检测SARS-CoV-2 IgM/IgG抗体,抗体阳性复核采用磁微粒化学发光法。SARS-CoV-2核酸检测采用RT-PCR方法。使用嗜异性抗体阻断试管（HBT）处理胶体金法检测阳性的标本,然后再次进行检测。结果　（1）8 678例受检者标本中,8 677例SARS-CoV-2核酸检测阴性,胶体金法检测SARS-CoV-2 IgM抗体阳性者25例（0.288%）,SARS-CoV-2 IgG抗体阳性者5例（0.058%）,SARS-CoV-2 IgM和SARS-CoV-2 IgG抗体同时阳性者0例。使用化学发光法复核后,仅3例受检者SARS-CoV-2抗体阳性,27例抗体均为阴性。1例受检者SARS-CoV-2核酸检测阳性,同时抗体IgM和IgG均为阴性。（2）30例胶体金法检测SARS-CoV-2抗体阳性者均无流行病学史,且同时SARS-CoV-2核酸检测结果均为阴性,排除感染SARS-CoV-2或既往感染SARS-CoV-2的可能,其中有10例SARS-CoV-2 IgM抗体阳性者进行2次以上动态监测结果仍为阳性,其余20例受检者未进行动态监测。（3）胶体金法检测SARS-CoV-2 IgM抗体假阳性率为0.288%,SARS-CoV-2 IgG抗体假阳性率为0.058%。采用HBT对胶体金法检测SARS-CoV-2抗体阳性的标本进行处理后,25例SARS-CoV-2 IgM抗体阳性的标本中,除1例结果仍为阳性外,其余结果均转为阴性;而5例SARS-CoV-2 IgG抗体阳性的标本结果依然为阳性。（4）30例SARS-CoV-2抗体阳性者的类风湿因子、补体、免疫球蛋白水平均在参考范围内。结论　SARS-CoV-2抗体检测结果可出现假阳性,SARS-CoV-2 IgM抗体阳性绝大多数是嗜异性抗体干扰所致,SARS-CoV-2 IgG抗体阳性者可能还存在其他潜在未知的干扰因素。嗜异性抗体对胶体金法的干扰大于化学发光法。因此,非疑似COVID-19患者或确诊COVID-19患者不宜进行SARS-CoV-2抗体检测指导临床,一定要考虑实验的干扰因素。     

新型冠状病毒IgM-IgG抗体检测试剂盒的制备及对15例患者临床应用初试

目的 开发一种快速检测SARS-CoV-2病毒的IgM-IgG抗体的胶体金免疫层析检测试剂盒,并优化研发及应用策略,分析IgM-IgG抗体联合检测在新冠病毒检测中的临床应用价值。 方法 表达纯化SARS-CoV-2病毒S蛋白的RBD和NTD结构域,通过胶体金制备工艺包被抗原及多克隆抗体,制备IgM-IgG抗体检测试剂盒;收集15例阳性患者的血清进行抗体检测分析,计算试剂盒检测的阳性率,分析SARS-CoV-2抗体IgM-IgG对病毒响应的过程。 结果 在15例核酸RT-PCR检测阳性的患者血清样本中,IgM-IgG联合抗体检测的阳性率为73.33%,其中IgM阳性占总标本数的53.33%,IgG阳性占总标本数的60.00%;5例境外人员中有3例为抗体阳性;对患者的流行病学分析发现,病毒感染1周以上的患者共7例,抗体检测全部为阳性;抗体检测试剂盒的灵敏度73.33%,特异性95.00%。 结论 IgM-IgG联合抗体检测法具有快速、方便、易操作等特点,可以作为核酸检测的辅助手段对疑似患者(尤其是境外人员及无症状患者)进行初筛;且IgM-IgG的检测结果可以作为推测患者病毒感染过程的依据;快速检测IgM-IgG抗体将为COVID-19疾病的诊断和治疗提供帮助。     

一种快速检测甲型流感病毒的方法

目的 开发一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法（GICA）的试剂盒，以用于对甲型流感病毒的检测。方法以柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记抗甲型流感病毒内部抗原的单克隆抗体。硝酸纤维素膜上包被两种抗甲型流感病毒单克隆抗体的混合液，制成免疫层析试纸。待测样品中的甲型流感病毒首先与胶体金标记抗体结合，后移动至硝酸纤维素上与固定的单克隆抗体发生反应，形成肉眼可见的红色带。结果GICA试纸条与甲1型和甲3型流感病毒共16种毒株均能发生特异性反应，与乙型流感病毒、副流感病毒、腺病毒和呼吸道合胞病毒无交叉反应。用三种不同甲型流感病毒毒株的不同浓度标本与美国同类经过FDA批准的产品比较，灵敏度相同。结论GICA试纸条灵敏度能够达到临床使用的要求，并具有简便快速、无需特殊仪器设备等优点，对甲型流感的诊断和流行病学调查具有十分重要的应用价值。     

新型冠状病毒中和抗体酶联免疫检测试剂盒的制备及应用

目的 开发一种新型冠状病毒中和抗体酶联免疫检测试剂盒,分析新型冠状病毒中和抗体在新冠疫苗效果监测中的临床应用价值。方法 表达纯化SARS-CoV-2病毒S蛋白RBD结构域和人ACE2蛋白,将RBD蛋白偶联HRP、ACE2蛋白偶联生物素(Bio),制备新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒;收集15例注射新冠疫苗志愿者血清,检测新冠疫苗注射前后机体中和抗体水平。结果 注射新冠疫苗前SARS-CoV-2中和抗体阳性率为0.00%,第1、2、3针新冠疫苗注射后11～15 d,阳性率分别为13.33%、93.33%、100.00%,第2针注射后第180～190 d,阳性率降低到33.33%;性能检测分析显示,最低检出限为0.06μg/mL,批内CV<5%,批间CV<10%,线性检测范围为0.030～3.125μg/mL,分析灵敏度验证值为0.040μg/mL,与微量细胞中和试验进行对比,确认与其具有高度一致性。结论 新型冠状病毒中和抗体酶联免疫检测试剂盒性能评价良好,检测方法具有快速、方便、易操作等特点,可以用于评估新冠疫苗的保护效果。     

新型冠状病毒特异性抗体微流控法定量检测能力评价及应用

目的：建立并评价新型冠状病毒即严重急性呼吸综合征冠状病毒2型（severe acute respiratory syndrome coronavirus2,SARS-CoV-2）特异性抗体定量检测方法,为新型冠状病毒肺炎（corona virus disease-2019,COVID-19）疫情防控提供血清学研判支持。方法：采集2020年1—2月SARS-CoV-2感染者及其密切接触者的血清和咽拭子样本,分别用RT-qPCR法检测SARSCoV-2核酸,微流控法和胶体金法检测SARS-CoV-2特异性抗体,并比较分析检测结果的一致性。结果：微流控法、胶体金法检测SARS-CoV-2特异性IgG抗体的结果均与RT-qPCR方法一致。发病早中期（<14 d）与后期（≥14 d）微流控法IgG抗体阳性率差异有统计学意义。结论：微流控法是一种新型可定量的SARS-CoV-2抗体检测法,检测结果准确且耗时短。     

狂犬病抗体免疫金标检测试纸的研制

目的应用酶联免疫原理和胶体金层析技术,研制狂犬病抗体免疫金标检测试纸。方法采用特殊的生产工艺,在玻璃纤维膜包被胶体金标记狂犬病抗原,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被狂犬病抗原和兔抗狂犬病抗体,制成狂犬病抗体免疫金标检测试纸(人用)。结果当待检样品阳性时,在检测线处形成抗原抗体的免疫复合物而凝聚显色;当待检样品阴性时,检测线处不形成抗原抗体免疫复合物不显色。整个试验过程只需15 m in。试纸与ELISA试剂比较,两者都具有微量、特异、准确的优点,且金标试纸独具操作方便、快速和结果直观、容易判定的优点。结论应用胶体金免疫层析技术建立的"狂犬病抗体免疫金标检测试纸",可以准确地检测出被检样品是否带有狂犬病抗体,同时还可以通过检测线颜色的深浅判定抗体的含量高低。     

三种甲型流感病毒抗原POCT的应用比较

目的 比较甲型流感病毒抗原即时检验(POCT)免疫荧光法、乳胶免疫层析法和免疫胶体金法的临床诊断效能。方法 以q RT-PCR为诊断标准,比较3种甲型流感病毒抗原POCT对甲型流感病毒的检出限、分析特异性和在临床样本检测中的诊断灵敏度和诊断特异性。结果 免疫荧光法、乳胶免疫层析法和免疫胶体金法对H1N1pdm09的检出限分别为1∶10 000、1∶1 000和1∶100,对季节性流感H1N1、H1N1(PR8株)、H3N2(Aichi株)、禽流感病毒H6N2和H7N3的检出限分别为1∶100 000、1∶10 000和1∶1 000。检出限从低到高依次为免疫荧光法、乳胶免疫层析法和免疫胶体金法。3种甲型流感病毒抗原POCT对除甲流外的25种临床呼吸道感染常见病原体均无交叉反应。与qRT-PCR相比,免疫荧光法、乳胶免疫层析法、免疫胶体金法的诊断灵敏度分别为74.63%、56.72%和40.30%,免疫荧光法的诊断灵敏度高于乳胶免疫层析法,差异有统计学意义(χ²=46.13,P<0.05),免疫荧光法的诊断灵敏度高于免疫胶体金法,差异有统计学意义(χ^...     

新型冠状病毒检测技术的研究进展

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)具有高传染性和高隐蔽性,并且不断发生变异,产生不同类型病毒变异株,其主要传播途径是呼吸道飞沫传播、接触传播、气溶胶传播。快速准确的病毒检测技术对疫情防控工作具有重要意义。本文就SARS-CoV-2的病原学结构特点和当前实验室主要检测技术(病毒分离鉴定、高通量测序、荧光定量PCR、反转录环介导恒温扩增、基因芯片、抗原抗体检测和基于CRISPR/Cas系统的核酸检测)作一综述。     

超高压对CB3V毒力及免疫原性的影响

目的：通过超高压(HHP）对柯萨奇病毒B₃（CB₃V）毒力和病毒免疫原性的影响,探讨既能降低病毒毒力又能保留病毒免疫原性的有效方法,为制备CB₃V疫苗提供新的途径。 方法：病毒毒力检测采用 50%组织细胞感染量试验（TCID₅₀）法;病毒免疫原性检测采用巨噬细胞吞噬功能测定、抗体检测、T淋巴细胞转化实验。结果：压力达到680 MPa时,病毒毒力降低,病毒TCID₅₀由10^-5上升为10^-4;高于700 MPa时,病毒被灭活。对病毒进行加热、压力减毒及压力灭活,小鼠巨噬细胞吞噬功能、抗体产生量及T淋巴细胞转化率与盐水对照组比较差异有显著性（P<0.05）,加热组、减毒组与灭活组之间比较差异无显著性（P>0.05）。结论：CB₃V对压力的抵抗力强,灭活CB₃V的临界压力为700 MPa;压力灭活的CB₃V免疫原性不受影响。     

甲型H1N1流感病毒小鼠肺炎-肠炎模型的建立及验证

目的 建立稳定的H1N1流感病毒肺炎-肠炎小鼠模型,为胃肠型流感的病理基础及抗病毒药物研究提供工具和手段。方法 BALB/c小鼠随机分为4组(n=6),10倍半数组织培养感染剂量(median tissue culture infective dose, 10 TCID₅₀)组、1 TCID₅₀组、0.1 TCID₅₀组和对照组。除对照组外,其他3组小鼠滴鼻感染不同剂量的H1N1流感病毒。感染病毒后,每天测量小鼠的肛温、体重,观察小鼠皮毛及精神状态等,连续7 d。处死后测定小鼠脏器指数、RT-PCR检测肺组织中甲型流感病毒H1N1 M基因及小肠组织中视黄酸受体相关孤儿受体γt(retinoid-related orphan nuclear receptor, ROR-γt)的mRNA表达量。对筛选出的最佳感染剂量进行实验验证。结果 与对照组小鼠相比,模型组小鼠10 TCID₅₀组和1 TCID₅₀组体重呈显著下降趋势,肺指数明显升高(P<0.01),胸腺指数明显降低(P&...     

鱼类致病性迟钝爱德华氏菌胶体金快速检测试纸的研制

制备迟钝爱德华氏菌胶体金快速检测试纸并对其性能进行检测。以柠檬酸三钠作为还原剂制备胶体金颗粒,标记迟钝爱德华氏菌多克隆抗体,将羊抗兔IgG和纯化后的迟钝爱德华氏菌多克隆抗体包被于NC膜上作为质控线和检测线,以检测样品中的迟钝爱德华氏菌(E. tarda)。结果表明：所研制的试纸特异性良好,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鳗弧菌、哈维氏弧菌、嗜水气单胞菌等常见细菌或病原菌进行测试未出现交叉反应;敏感度达到105 CFU/mL,反应时间仅为5~10 min,可以用于感染迟钝爱德华氏菌大菱鲆腹水的现场检测,具有操作     

基于量子点标记技术的免疫层析法检测新型冠状病毒N蛋白IgG抗体研究

背景 基于目前新型冠状病毒（SARS-CoV-2）引起的新型冠状病毒肺炎（COVID-19）,早诊断、早隔离、早治疗是防控传染的重要方法。建立方便快捷的免疫层析检测技术,对于防控SARS-CoV-2的传播十分必要。 目的 建立基于量子点标记技术的免疫荧光层析法检测抗SARS-CoV-2 N蛋白IgG抗体的方法,判断被检测者是否感染过SARS-CoV-2或者是否接种过SARS-CoV-2灭活疫苗。 方法 2020年8月将制备好的鼠抗人二抗和抗N蛋白抗体固定至硝酸纤维素（NC）膜上,分别作为检测线（T）和质控线（C）,然后将量子点标记的SARS-CoV-2 N蛋白均匀喷洒在玻璃纤维上,干燥后组装、切割、包装成试纸条。用该试纸条分别检测35例COVID-19患者和50例健康人的血清,以酶联免疫吸附测定法（ELISA）试剂盒初筛结果作为对照,计算量子点荧光免疫层析法的检测特异度和灵敏度,并利用N蛋白抗体标准品检测试纸条灵敏度。 结果 本研究制备的试纸条特异度为100.00%,灵敏度为94.29%,灵敏性为8.53~17.06 ng/ml抗体浓度。 结论 采用量子点标记技术检测血清中的抗N蛋白IgG抗体,操作简单、快速,灵敏度及特异度强。     

3例新型冠状病毒肺炎患者不同标本检测分析

目的 分析新型冠状病毒肺炎（COVID-19）患者临床表现及治疗后咽拭子、粪便、尿液的严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）核酸检测阴转情况,探讨新型冠状病毒肺炎（COVID-19）病人的出院标准。方法 回顾性分析3例海南省人民医院收治的COVID-19病例,对其临床表现及治疗后咽拭子、粪便、尿液的严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）核酸检测结果进行描述。结果 3例COVID-19病例治疗后咽拭子核酸转阴性,粪便核酸检测仍呈阳性,合并尿液核酸阳性1例,1例患者病程3周后出现SARS-CoV-2抗体lgM、lgG均阳性(滴度分别为4.416和18.485)。结论 建议严格把握出院标准,推荐增加粪便、尿液核酸检测,出院后仍需集中医学观察14 d以最大限度降低消化道传播风险的可能。     

新型冠状病毒假病毒的构建及其在血清中和抗体测定中的应用

目的 构建新型冠状病毒(SARS-CoV-2)假病毒,优化假病毒制备条件并应用于中和抗体活性检测.方法 优化合成SARS-CoV-2刺突蛋白(S)基因,进行假病毒包装;通过Western blot检测S基因的表达;应用定量ELI-SA检测接种新冠灭活疫苗后血清中新型冠状病毒IgG抗体的滴度,同时应用假病毒中和实验对接种...     

微滴式数字聚合酶链式反应技术在新型冠状病毒检测中的应用与评价

目的 分析微滴式数字聚合酶链式反应（droplet digital polymerase chain reaction, ddPCR）对新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome corona virus-2, SARS-CoV-2）的核酸检测结果，并与实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR）检测结果相比较，评价其检测优缺点，为优化新型冠状病毒的核酸检测方案提供数据支持。方法 根据中国疾病预防控制中心公布的SARS-CoV-2特异性引物探针，设计针对SARS-CoV-2的ddPCR检测方法，选取1份样本梯度稀释后进行灵敏度试验；选取季节性H3N2流感病毒等6种呼吸道病毒核酸阳性的样本与SARS-CoV-2阳性样本进行特异性试验；选取5份SARS-CoV-2阳性样本进行重复性试验，并选取SARS-CoV-2阳性30份、阴性20份样本进行多临床样本检测，与qRT-PCR检测结果进行分析比较。结果 ddPCR法能特异检出SARS-CoV-2，并直接得到...     

隐球菌抗原检测试剂盒敏感性和特异性的实验室评价

目的 用比对试剂评价待评价试剂,以了解待评价试剂的敏感性和特异性。方法 选取隐球菌31株、隐球菌近缘菌36株及其他肺部感染常见菌种33株,共28属100株菌株作为检测对象,配置0.5 麦氏（M）浓度菌液用于检测试剂的特异性,0.5 M阳性的菌株再以10倍连续稀释液作为敏感性检测浓度菌液,以2 M和4 M浓度菌液作为钩状效应的检测菌液,并以美国Immuno Mycologics公司（IMMY）生产的隐球菌抗原检测（胶体金免疫层析法）试剂盒作 为比对试剂,比较南京黎明生物制品有限公司生产的隐球菌抗原检测（乳胶免疫层析法）试剂与IMMY试剂的一致性。结果 在31株隐球菌属菌株中,检测阳性25株和检测阴性6株;在16株毛孢子菌属菌株中,检测阳性12株和检测阴性4株; 1株Cutaneotrichosporon curvatum检测结果为阳性;52株肺部感染常见菌种的检测结果均为阴性;敏感性实验结果显示隐球菌最低检出限是1.0×10² CFU/mL;2 M和4 M浓度菌液均未出现钩状效应;对已知菌株检测的敏感性和特异性与IMMY试剂比对结果高度一致。结论 结果表明,待评价试剂对隐球菌检测敏感性高,特异性检测结果显示存在一定的属内和属外交叉反应结果,实验中未发现有钩状效应。待评价试剂与比对试剂的检测结果高度一致。     

基于胶体金检测方法的蛋白芯片体系的建立

目的 构建一个检测尿液中HCG抗原的蛋白质芯片初级模型;方法 在硝酸纤维素膜上包被HCG单克隆抗体(抗a-HCG),加尿样后,标本中HCG抗原(标准品)与硝酸纤维素膜的抗体特异结合,再加入胶体金标记的单克隆抗体(抗á-HCG),使其特异结合,完成对标本中抗原的染色.最后应用芯片扫描仪对光学信号的灰度值进行分析,从而绘制出标本中不同浓度的HCG对光学信号灰度值的标准曲线;结果 与现有方法 相比,该方法将检测的最低浓度降至25 mIU/ml,具有良好的梯度、线性关系和重复性.结论 该方法 是一种快速、简便、有较强操作性的检测HCG的方法 .     

寨卡病毒NS1抗原的金标免疫层析检测试纸条研制

目的研制一种快速检测寨卡病毒(ZIKV)NS1抗原的胶体金免疫层析试纸条。方法以胶体金标记的抗寨卡病毒NS1单克隆抗体为特异性识别及信号产生的探针,抗寨卡病毒NS1单抗和羊抗鼠多克隆抗体IgG分别固定于硝酸纤维素膜,作为检测线和质控线以制备金标免疫层析试纸条。通过肉眼对检测线上条带进行判断、读取灰度值比等方式对试纸条结果进行分析。通过检测逐级稀释的寨卡病毒NS1抗原标准品,考察该试纸条的灵敏度。进一步通过检测分别感染了寨卡病毒、登革病毒、基孔肯雅病毒、日本脑炎病毒的细胞上清及血清样品,评价该试纸条检测的特异性。考察存储温度及放置时间对试纸条检测寨卡病毒NS1样品的影响,评价该试纸条的稳定性。结果所研制的试纸条在寨卡病毒NS1抗原标准品浓度为100 ng/mL时能够有效检测寨卡病毒培养上清,并与感染了登革病毒、基孔肯雅病毒以及日本脑炎病毒的细胞上清及血清样品均无交叉反应。此外,室温(22～25℃)或4℃储存条件下存放时间为36周的试纸条检测效果未受影响。结论本研究研制的金标免疫层析试纸条特异性好、稳定性高,快速、简便,该方法在即时检测、大样本疾病初筛等应用领域具备一定潜力。     

三种SARS-CoV-2抗体胶体金试剂诊断效能评价及假阳性控制策略探讨

目的探讨胶体金免疫层析法(GICA)在新型冠状病毒(SARS-CoV-2)检测中的价值。方法收集四川大学华西医院2020年1至2月期间12例SARS-CoV-2感染患者的33份血清,以及45例排除SARS-CoV-2感染患者的45份血清,采用三种不同厂家的GICA检测试剂盒进行检测。结果三种GICA试剂的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为66.7%～90.9%、73.3%～100.0%、71.4%～100.0%和80.4%～91.7%。漏诊率为9.1%～33.3%,误诊率为0～26.7%,约登指数为0.64～0.79。检出率随样本稀释滴度的增加而降低,1∶4及以上滴度水平时所有试剂的阳性检出率均超过50%。检测干扰因素主要包括人类免疫缺陷病毒感染、高类风湿因子、溶血。结论临床实验室应注意不同试剂的检测能力和潜在交叉反应的差异,或使用多种抗体的组合。     

应用抗SjP38的单克隆抗体建立血吸虫感染的胶体金免疫层析检测体系

目的 建立一种检测日本血吸虫感染的胶体金免疫层析方法.方法 将已获得的单抗用protein-G亲和层析纯化,通过间接ELISA测定每株单抗的亲和常数.按改良过碘酸钠标记法,8株单抗标记辣根过氧化物酶(HRP)后进行不同株单抗配对,选出亲和力高、稳定性强的单抗配对组合.胶体金标记株抗体,选择最佳反应模式,建立胶体金免疫层析方法,并对弓形虫感染鼠血样、血吸虫感染前和感染后2、3、、5、6周的鼠血样进行检测.结果 8株抗SjP38单克隆抗体经纯化后纯度达95%以上,其亲和常数介于1×10^-8mol/L～2.82×10^-10mol/L.根据配对实验,1A6与9H6、1A6与9G7、6G12与9H6、6G12与9G7以及9H6与9G7为最佳配对组合.标记1A6、6G12、9H6与9G7这株单抗后筛选出最佳反应模式,即以9G7为包被抗体,包被浓度为2.5μg/μl;当1A6为金标抗体,抗体稀释浓度为1:时,检测效果最佳.对rSjp38的最低检测量为12.5 ng/ml.抗检测感染3、、5、6周小鼠血清,阳性率分别为0%、50%、60%、80%,而弓形虫感染鼠和血吸虫感染前小鼠血样的检测结果为100%阴性.结论 通过抗体配对、最佳包被量和金标抗体稀释倍数条件的优化,建立了快速、简便、特异的胶体金免疫层析方法,自制的rSjP38试纸条能检测血吸虫早期感染鼠血清中的循环抗原SjP38.