西妥昔单抗对人肝癌细胞HepG2的体外效应

目的探讨西妥昔单抗（爱必妥,cetuximab,Erbitux）对人肝癌细胞HepG2的体外效应。方法流式细胞术检测HepG2细胞表面表皮生长因子受体（EGFR）的表达。细胞划痕及Transwell实验检测西妥昔单抗对HepG2细胞迁移能力的影响。Western印迹检测西妥昔单抗对HepG2细胞EGFR、AKT及ERK表达及活化的影响。碘化丙啶（propidium lodide,PI）染色检测西妥昔单抗对细胞周期的影响。结果流式细胞分析结果显示,HepG2细胞表面存在较高水平的EGFR表达;细胞划痕及Transwell结果表明,西妥昔单抗对HepG2细胞迁移能力具有明显的抑制效应;Western印迹结果证明西妥昔单抗能显著降低HepG2细胞内EGFR、AKT及ERK的磷酸化水平;细胞周期分析显示西妥昔单抗作用24 h剂量依赖性影响HepG2细胞周期进程,并将其阻抑在G0/G1期。结论西妥昔单抗可以抑制高表达EGFR的肝癌细胞系HepG2胞内关键信号蛋白的活化,阻滞其细胞周期,抑制肝癌细胞的迁移能力。     

间充质干细胞来源外泌体对视网膜光感受器细胞PI3K/AKT通路及Ang-1蛋白水平作用的研究

目的 探讨间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)下外泌体对视网膜光感受器细胞PI3K/AKT通路及Ang-1蛋白水平的影响。 方法 应用免疫印迹检测人脐带间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells,h UCMSCs)外泌体表面标志蛋白CD63及CD90 ,应用流式细胞仪检测光损伤661W细胞凋亡,应用免疫荧光检测Ang-1,应用免疫印迹检测PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。 结果 形态学及免疫印迹检测CD63、CD90表达结果证实h UCMSCs外泌体。线粒体膜电位检测结果以及细胞形态学鉴定661W细胞建立光损伤模型成功。流式细胞仪、免疫荧光检测结果显示,与正常组比较模型组细胞凋亡率及Ang-1阳性表达增加,在经过h UCMSCs干预后有所降低,且呈现出明显的浓度依赖性（P<0.05）。免疫印迹结果显示,与正常组比较,模型组PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT表达降低,经过h UCMSCs干预后有所升高（P<0.05）,且高浓度组PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT表达水平与激动剂组比较无差异（P>0.05）,模型组PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT表达水平高于抑制剂组（P<0.05）。 结论 间充质干细胞下外泌体可能是通过激活PI3K/AKT通路,抑制了视网膜光感受器细胞的凋亡以及Ang-1的水平,从而对光损伤视网膜起保护作用。     

安罗替尼对人肾癌细胞ACHN增殖和迁移的抑制作用

目的 观察安罗替尼(anlotinib)对人肾癌细胞增殖和迁移能力的影响,探讨其抑制肾癌细胞生长、迁移能力的机制,以及在肾癌治疗领域的临床应用前景.方法 体外培养肾癌ACHN细胞,采用不同浓度(0、1.25、2.5、5和10 μmol/L)的安罗替尼处理ACHN细胞24、48和72h,MTT法检测安罗替尼对ACHN细胞增殖的影响,计算半数抑制浓度(IC50);划痕修复实验检测安罗替尼对ACHN细胞迁移能力的作用,计算迁移率;克隆形成实验检测细胞贴壁后细胞的成活能力,计算克隆数目;Western印迹法检测安罗替尼对PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达和活性的影响,用灰度分析方法计算其灰度值.结果 安罗替尼能显著抑制ACHN细胞增殖,具有明显的浓度依赖性;与对照组相比,安罗替尼处理后,能明显抑制ACHN细胞的克隆形成、迁移和信号通路相关蛋白的活化(P＜0.05).结论 安罗替尼能显著抑制人肾癌ACHN细胞的增殖、克隆形成和迁移能力,其机制与PI3K信号通路的抑制相关.     

METTL3对肝内胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨m6A甲基转化酶样蛋白3(METTL3)对肝内胆管癌细胞系QBC939和RBE细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,以及可能的分子机制.方法 通过嘌呤霉素筛选的方法将携带METTL3基因的重组质粒转染肝内胆管癌细胞系QBC939和RBE,得到稳定过表达METTL3的肝内胆管癌细胞系;采用小干扰RNA(siRNA)瞬时敲低肝内胆管癌细胞系中的METTL3;采用Western印迹检测肝内胆管癌细胞系中METTL3蛋白的表达水平,验证过表达和敲低METTL3的效果;采用细胞增殖实验(CCK-8法)检测METTL3对肝内胆管癌细胞系增殖能力的影响,Transwell法验证METTL3对肝内胆管癌细胞系迁移和侵袭能力;采用Western印迹检测过表达或敲低METTL3后p-ERK蛋白的表达水平,Log-rank检验比较METTL3高表达组和低表达组胆管癌患者的生存期差异.结果 过表达METTL3可显著促进QBC939和RBE细胞的增殖、迁移及侵袭能力,而敲低METTL3显著抑制QBC939和RBE细胞的增殖、迁移及侵袭能力.过表达METTL3促进磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)的蛋白表达水平,而敲低METTL3则抑制p-ERK的蛋白表达水平.METTL3在肝内胆管癌组织中上调表达,且其高表达与胆管癌患者的不良预后可能相关.结论 METTL3通过促进肝内胆管癌细胞系的增殖、迁移及侵袭能力而发挥癌基因的功能.     

miR-633通过调节蛋白激酶B影响缺氧诱导H9C2细胞生物学功能研究

目的探讨miR-633对缺氧诱导的H9C2细胞生物学功能调节作用。方法缺氧诱导培养H9C2细胞,利用实时定量荧光PCR检测缺氧后细胞中miR-633表达情况。通过MTT实验和Transwell实验检测缺氧对细胞增殖和迁移的调节作用。在缺氧H9C2细胞中下调miR-633的表达,通过MTT实验和Transwell实验检测miR-633对缺氧后细胞增殖和迁移的调节作用。miRDB软件预测miR-633可能打靶的蛋白,荧光素酶报告基因实验分析miR-633对蛋白激酶B(AKT)的靶向调节作用。通过Western blot检测miR-633对缺氧后H9C2细胞中AKT、细胞周期素D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)与基质金属蛋白酶2(MMP2)的影响。结果缺氧诱导后H9C2细胞中miR-633表达上调,缺氧诱导抑制H9C2细胞的增殖和迁移能力。MTT和Transwell实验证明,miR-633受到抑制后能够显著促进H9C2细胞的增殖和迁移。miR-633与AKT的3′UTR区域具有结合位点,miR-633可以抑制AKT的生物学活性,下调miR-633能够促进AKT、Cyclin D1、bcl-2与MMP2蛋白的表达。结论 miR-633可以通过调节AKT的活性促进缺氧诱导的H9C2细胞的增殖与迁移。     

CUL3对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用及其机制

目的 探讨泛素连接酶Cullin3(CUL3)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法基于TCGA数据库分析CUL3在胃癌和癌旁组织中的表达及其与临床预后的关系。采用CUL3 shRNA和空载慢病毒转染HGC-27和BGC-823细胞，构建CUL3敲低胃癌细胞系组(shCUL3组)与空载慢病毒转染组(空载组)。采用CCK-8法、克隆形成实验、EdU染色、划痕实验和Transwell实验检测两组的增殖、迁移和侵袭能力；采用Western blotting检测两组上皮-间质转化(EMT)相关蛋白和PI3K/Akt/GSK3β通路蛋白的表达情况；应用PI3K激动剂740 Y-P后检测shCUL3组细胞迁移和侵袭能力的变化。结果 TCGA数据库中CUL3在胃癌中呈高表达，且与胃癌患者预后不良明显相关。CCK-8、克隆形成实验和EdU染色结果显示，与空载组比较，shCUL3组胃癌细胞增殖能力受到抑制(P<0.05)，且CUL3 shRNA可明显抑制细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05)。与空载组比较，shCUL3组E-cadherin蛋白表达升高，波形蛋白、β-caten...     

岩白菜素通过下调PI3K-AKT-mTOR通路抑制恶性胶质瘤的恶性生物学行为

目的 探究岩白菜素对恶性胶质瘤细胞的抑制作用及可能机制。方法 常规培养U251和U87细胞,以一定浓度梯度（0、0.5、1、2、4、8μM）的岩白菜素与U251和U87细胞共孵育,MTT法检测细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测集落形成能力,Transwell小室迁移和侵袭实验检测纵向迁移能力,划痕愈合实验检测横向迁移能力,Hoechst细胞凋亡检测试剂盒检测凋亡,免疫印迹检测PI3K-AKT-mTOR通路的变化,MTT检测与PI3K抑制剂共孵育后岩白菜素对U251细胞抑制作用的变化。同时利用MTT评估岩白菜素对正常人脑胶质HEB细胞的细胞毒性。结果 与一定浓度梯度的岩白菜素共孵育后,MTT法检测发现U251和U87细胞的增殖能力以时间依赖性和浓度依赖性下降,平板克隆形成实验检测发现U251和U87细胞的集落形成能力浓度依赖性下降,Transwell小室迁移和侵袭实验检测发现U251细胞的纵向迁移和侵袭能力浓度依赖性下降,划痕愈合实验发现U251细胞的横向迁移能力浓度依赖性下降,Hoechst细胞凋亡检测试剂盒检测发现与一定浓度的岩白菜素共孵育后凋亡细胞增多,免疫印迹检测发现,总PI3K...     

xCT调节乳腺癌细胞转移的作用机制研究

目的：探讨xCT调节人类乳腺癌细胞株MDA－MB－231转移的作用及其机制。方法采用细胞划痕实验和Transwell实验分析xCT受到抑制和敲低后,人类高转移乳腺癌细胞株MDA－MB－231迁移及侵袭能力的改变。用Western印迹法和RT－PCR检测其自噬相关标志物LC3,上皮细胞间充质化（ EMT）过程相关标志物钙黏蛋白E （E－cadherin）、波形蛋白（vimentin）以及Snail表达水平的改变。结果抑制和敲低MDA－MB－231细胞株中xCT的表达后,钙黏蛋白E表达升高,波形蛋白表达降低,转录因子Snail的蛋白水平降低,但其 mRNA水平无明显变化,自噬相关蛋白LC3－Ⅱ／LC3－Ⅰ的比值升高。结论抑制和敲低xCT的表达可使MDA－MB－231细胞株发生自噬,降解转录因子Snail,从而抑制EMT,降低MDA－MB－231细胞株的转移能力。     

IL-8通过整合素调控肝癌HepG2细胞迁移

目的：研究IL-8对肝癌细胞HepG2增殖、迁移的影响,探讨整合素α亚基在调控HepG2细胞迁移中的作用。方法以不同浓度（0～125 ng／ml）的IL-8刺激HepG2细胞,分别采用MTT法检测IL-8对肝癌细胞的增殖作用;细胞划痕损伤模型测定不同处理组在0、4、8、12和24 h各时间点对HepG2细胞水平迁移的影响;Transwell法检测刺激24 h后HepG2细胞纵向迁移能力;免疫荧光检测0、125 ng／ml IL-8刺激HepG2细胞8 h后细胞骨架的变化;Western印迹测定整合素α亚基的表达变化规律。结果与对照组相比,IL-8促进HepG2细胞增殖,但各浓度间无明显差异;细胞划痕损伤实验和Transwell实验均表明IL-8可促进HepG2细胞迁移,且具有浓度依赖性; IL-8诱导HepG2细胞骨架重排,使丝状伪足样凸起数目增多;Western印迹结果显示,IL-8上调整合素α亚基的表达,但各亚基具有浓度性差异。结论 IL-8可通过上调整合素α亚基的表达促进HepG2细胞迁移,各α亚基调控作用可能具有差异性。     

多西紫杉醇诱导卵巢癌细胞凋亡及对PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨多西紫杉醇诱导卵巢癌细胞凋亡及对磷脂酰肌醇 3-激酶（phosphoinositide 3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,AKT）信号通路的影响。方法选择人卵巢癌细胞株HO-8910,按照多西紫杉醇药物浓度分为Ho组（0 μg/mL）、Hd组（10 μg/mL）、Hz组（20 μg/mL）、Hg组（80 μg/mL）,RT-PCR、Western Blot法分别检测PI3K、AKT水平、蛋白表达变化,Transwell法、MTT法检测HO-8910细胞的迁移、活力变化,流式细胞仪测定HO-8910细胞凋亡率。结果Ho组PI3K、AKT水平高于其他3组,4组差异有统计学意义（P<0.05）;Ho组PI3K、AKT蛋白最高,其余3组PI3K、AKT蛋白表达从低至高依次为Hg组、Hz组、Hd组,4组差异有统计学意义（P<0.05）;Hg组细胞凋亡率最高,其次为Hd组、Hz组、Ho组,4组调亡率差异有统计学意义（P<0.05）;Ho组细胞迁移能力最高,其次为Hd组、Hz组、Hg组,4组细胞迁移能力差异有统计学意义（P<0.05）;Ho组细胞增殖能力最高,其次为Hd组、Hz组、Hg组,4组增殖能力差异有统计学意义（P<0.05）。结论多西紫杉醇可促进HO-8910细胞大量凋亡,其作用机制可能为通过抑制PI3K/AKT信号通路活性来实现的。     

HIP1基因沉默对人前列腺癌PC-3细胞增殖的影响

目的研究HIP1基因沉默对人前列腺癌PC-3细胞增殖的影响。方法构建靶向HIP1的shRNA表达载体pSilence-shHIP1,应用脂质体转染到PC-3细胞,RT-PCR检测HIP1基因沉默效果,Western blotting确认有效作用靶点。通过细胞划痕实验和细胞生长曲线研究HIP1基因对PC-3细胞增殖的影响。结果转染PC-3细胞后,沉默HIP1基因效率达83%(P<0.01);Western blotting证实该基因片段为抑制HIP1的有效作用靶点。细胞划痕实验和生长曲线显示HIP1基因沉默可抑制PC-3细胞的增殖。结论 pSilence-shHIP1表达载体可特异性地抑制HIP1基因的表达,沉默HIP1基因可抑制PC-3细胞增殖和迁移。     

调控Cox-2基因表达与食管癌细胞放射敏感性机制的初步探讨

目的 通过调控环氧合酶-2(Cox-2)基因表达来探讨影响食管癌细胞放射敏感性的机制.方法 通过构建C ox-2特异性siRNA,转染EC9706细胞,调控细胞内Cox-2表达,检测不同辐射剂量后MMP-2 、Bcl-2 mRNA、AKT蛋白和磷酸化AKT的表达,以及观察集落形成、细胞增殖、细胞凋亡、体外细胞侵袭能力,结果采用单因素方差分析进行统计学处理.结果 2和4 Gy照射后,上调组Bcl-2 mRNA表达量升高(F=3.36、4.32,P＜0.05);下调组MMP-2 mRNA表达量降低(F=3.86、8.09,P＜0.05),Bcl-2 mRNA表达量降低(F=3.73、5.64,P＜0.05),Bax mRNA表达量升高(F=7.03、7.42,P＜0.05).而各组细胞总AKT蛋白和磷酸化AKT蛋白印迹呈现上调组最强印迹,下调组最浅印迹.下调组细胞随照射量的增加凋亡率上升陡度最大,且差异有统计学意义(F=317.40,P＜0.05).G0～G1期细胞比例逐渐升高,S和G2～M期细胞比例逐渐降低,细胞增殖抑制率明显升高,体外侵袭实验穿透细胞数下降陡度最大.结论 调控C ox-2基因表达影响食管癌细胞放射敏感性的机制可能是,下调细胞内Cox-2 mRNA表达继而下调MMP-2、Bcl-2 mRNA表达,上调Bax表达,导致肿瘤细胞的侵袭及转移能力的降低,促进其向G0 ～G1期细胞转换,诱导细胞凋亡.同时使AKT和磷酸化AKT(pAKT)水平下降,影响PI3 K/Akt信号转导途径降低其放疗抗拒的能力.     

Effect of HIP1 gene silencing on proliferation of PC-3 cells in human androgen-independent prostate tumor

目的 研究HIP1基因沉默对人前列腺癌PC-3细胞增殖的影响.方法 构建靶向HIP1的shRNA表达载体pSilence-shHIP1,应用脂质体转染到PC-3细胞,RT-PCR检测HIP1基因沉默效果,Western blotting确认有效作用靶点.通过细胞划痕实验和细胞生长曲线研究HIP1基因对PC-3细胞增殖的影响.结果 转染PC-3细胞后,沉默HIP1基因效率达83％(P＜0.01); Western blotting证实该基因片段为抑制HIP1的有效作用靶点.细胞划痕实验和生长曲线显示HIP1基因沉默可抑制PC-3细胞的增殖.结论 pSilence-shHIP1表达载体可特异性地抑制HIP1基因的表达,沉默HIP1基因可抑制PC-3细胞增殖和迁移.     

S100A4 siRNA对人胰腺癌BxPc-3细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的观察利用小干扰RNA（small interference RNA,siRNA）技术下调人胰腺癌BxPc-3细胞中钙结合蛋白S100A4表达后对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法设计合成针对S100A4的特异性siRNA,转染至人胰腺癌BxPc-3细胞,以Western印迹检测转染前后S100A4蛋白表达变化;克隆形成率实验检测转染前后BxPc-3细胞增殖能力;Transwell小室模型检测转染前后BxPc-3细胞迁移和侵袭能力变化。结果 Western印迹结果显示BxPc-3细胞转染S100A4siRNA48h后,S100A4蛋白表达明显下调;Transwell小室验证转染S100A4siRNA后细胞的迁移和侵袭能力明显降低。结论本研究结果表明,S100A4表达下调后可抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,提示S100A4可以作为一个潜在的肿瘤治疗靶标。     

核因子E2相关因子2基因沉默对人前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭和转移的影响

 目的 探讨核因子E2相关因子2(NRF2)基因沉默对人前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭和转移的影响及其机制。方法 采用RT- PCR检测人前列腺上皮细胞株RWPE-1和前列腺癌细胞株PC-3中NRF2 mRNA的表达。采用脂质体转染法将NRF2 siRNA-1、NRF2 siRNA-2和NRF2 siRNA-3干扰序列转染至PC-3细胞后,Western blot和RT-PCR检测转染效果,并筛选出干扰效果最好的NRF2 siRNA序列。将体外培养的PC-3细胞分为Con组(未转染)、NC组(转染阴性对照)和NRF2 siRNA组(转染NRF2 siRNA-3),采用CCK-8法、平板克隆实验和Transwell实验分别检测各组细胞的增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力,Western blot检测各组细胞中细胞核增殖相关抗原(Ki67)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、N-钙黏附素(N-cadherin)蛋白的表达。结果 与前列腺上皮细胞株RWPE-1相比,前列腺癌细胞株PC-3中NRF2 mRNA的表达水平明显升高(0.84±0.05 vs 0.22±0.03,P<0.05)。NRF2 siRNA-1、NRF2 siRNA-2和NRF2 siRNA-3干扰序列均能够明显下调PC-3细胞中NRF2蛋白(0.56±0.04,0.39±0.03,0.11±0.02 vs 0.76±0.07)和mRNA(0.80±0.05,0.52±0.03,0.26±0.03 vs 1.00±0.05)的表达,且NRF2 siRNA-3的干扰效果明显大于NRF2 siRNA-1和NRF2 siRNA-2。与Con组相比,NRF2 siRNA组细胞的增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力[存活率:24 h (82.05±5.24)% vs (99.86±5.05)%,48 h (64.57±4.85)% vs (97.28±6.36)%,72 h (45.62±3.76)% vs (94.57±5.49)%;克隆形成率:(39.35±3.26)% vs (66.52±4.85)%;侵袭细胞数:42.00±5.50 vs 85.00±7.50;迁移细胞数:58.00±3.00 vs 118.50±8.00]均明显减弱,同时Ki67、CyclinD1、MMP-9和N-cadherin蛋白的表达(Ki67:0.25±0.03 vs 0.78±0.05;CyclinD1 0.41±0.03 vs 0.85±0.06;MMP-9:0.10±0.02 vs 0.89±0.07;N-cadherin:0.22±0.02 vs 0.49±0.04)均明显降低(P<0.05);而NC组与Con组间无统计学差异(P>0.05)。结论 NRF2基因沉默可抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭和转移,其分子机制可能与下调Ki67、CyclinD1、MMP-9和N-cadherin蛋白的表达有关。     

驱动蛋白家族成员2A与结直肠癌临床特征/预后的关联及其对癌细胞增殖/侵袭的调控作用

目的 旨在探究结直肠癌患者中驱动蛋白家族成员2A（Kinesin Family 2A,KIF2A）的表达,其与患者临床病理特征和预后的相关性,以及敲降KIF2A对结直肠癌细胞HCT116增殖、侵袭、迁移,以及其下游PI3K/AKT信号通路的影响。方法 回顾性分析2016年1月至2019年12月98例经手术切除治疗的结直肠癌患者,并采用免疫组织化学染色方法（Immunohistochemistry,IHC）测定患者术中留存的癌组织和癌旁组织KIF2A的表达,通过在HCT116细胞中转染抑制KIF2A表达的小分子化合物（KIF2A、ShRNA）来探究。结果 根据IHC染色评分,将KIF2A表达水平划分为高表达（IHC评分＞3）和低表达（IHC评分≤3）。收集患者术前肿瘤特征,获取患者的生存随访信息,并计算总体生存期（Overall Survival, OS）。敲降KIF2A对细胞的作用通结果显示,KIF2A在癌组织中显著高于癌旁组织（P <0.001）。且癌组织KIF2A高表达与较大的肿瘤直径、淋巴结转移、较高的N分期和TNM分期相关 （P <0.05）。此外,KIF2A高表达患者OS显著低于KIF2A低表达患者;进一步分析结果显示,KIF2A高表达是较差OS的独立预测因素（P <0.05）。此外,细胞实验结果表明,敲降KIF2A可通过靶向PI3K/AKT信号通路,从而抑制HCT116的恶性增殖和迁移,促进其凋亡。结论 KIF2A与结直肠癌的肿瘤特征以及不良预后相关,且敲降KIF2A可抑制PI3K/AKT信号通路的激活,从而抑制结直肠癌细胞恶性增殖、迁移能力,促进其凋亡,表明其有成为结直肠癌标志物的潜能。     

miR-34 a通过ERK1／2通路部分逆转CEES染毒对角质形成细胞迁移的抑制

目的：研究半硫芥（2-氯乙基乙基硫醚,2-chloroethyl ethyl sulfide ,CEES）染毒对角质形成细胞迁移的影响以及miR-34a作用机制。方法体外建立CEES染毒HaCaT细胞模型,采用化学合成miR-34a抑制物转染HaCaT细胞沉默miR-34a,荧光显微镜观察细胞转染效率,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Western 印迹检测细胞分化标志物K5和K10、ERK1／2总蛋白及磷酸化水平改变。结果采用0．5 mmol／L CEES染毒后HaCaT细胞迁移显著降低。细胞形态、干性标志物K5和分化标志物K10没有明显变化。 miR-34 a沉默可以增加细胞迁移能力,迁移相关的信号蛋白ERK1／2通路激活,ERK1／2信号通路抑制剂U0126使用后可以显著降低细胞迁移。结论 miR-34 a沉默可以显著增加角质形成细胞迁移,并部分逆转CEES的抑制作用,miR-34a沉默可能部分是通过ERK1／2信号通路激活引起染毒细胞迁移增加。     

基于PI3K/AKT通路探讨洋甘菊提取物改善PCOS大鼠生殖功能的研究

目的 基于磷酸酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B通路（phosphatidylinositol 3-kinase and protein kinase B,PI3K/AKT）通路探讨洋甘菊提取物改善多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）大鼠生殖功能的影r响。 方法 从55只成年雌性大鼠中取10只作为假手术组,剩余大鼠经造模后分为PCOS组、洋甘菊提取物低剂量组及高剂量组,各15只。测量各组大鼠体质量与子宫指数;酶联免疫吸附法检测雌激素水平,HE染色观察其卵巢病理变化,免疫印迹法检测组织PI3K/AKT蛋白表达,并通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法检测其PI3K/AKT mRNA表达量。 结果 与假手术组比较,PCOS组体质量与子宫指数显著上升,差异有统计学意义（P<0.05）;与PCOS组比较,洋甘菊提取物低剂量与高剂量组大鼠体质量与子宫指数显著下降,且高剂量组比低剂量组更低,差异有统计学意义（P<0.05）。与假手术组比较,PCOS组促黄体生成素（luteinizing hormone,LH）水平显著上升,促卵泡生成激素（follicle stimulating hormone,FSH）、雌二醇（estradiol,E2）、孕酮（progesterone,P）、睾酮（testosterone,T）水平下降,差异有统计学意义（P<0.05）;与PCOS比较,洋甘菊提取物低剂量与高剂量组LH水平下降,FSH、E2、P、T水平上升,且高剂量组激素水平改善更佳,差异有统计学意义（P<0.05）。与假手术组比较,PCOS组卵巢组织PI3K、AKT蛋白表达下调,差异有统计学意义（P<0.05）;与PCOS比较,洋甘菊提取物低剂量与高剂量组PI3K、AKT蛋白表达上调,且高剂量组PI3K、AKT蛋白上调高于低剂量组,差异有统计学意义（P<0.05）。与假手术组比较,PCOS组卵巢组织PI3K、AKT mRNA降低,差异有统计学意义（P<0.05）;与PCOS比较,洋甘菊提取物低剂量与高剂量组PI3K、AKT mRNA上升,且高剂量组PI3K、AKT mRNA高于低剂量组,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 洋甘菊提取物能上调PCOS大鼠血清雌激素水平,提高子宫容受性,且稳定雌激素水平,其病情改善呈现浓度依懒性,其作用机制可能与PI3K/AKT通路有关。     

Ras同源物基因家族成员B对肾透明细胞癌细胞生长及迁移能力的影响

目的研究干扰Ras同源物基因家族成员B（Ras homolog gene family member B,RhoB）表达后对肾透明细胞癌（renal clear cell carcinoma,RCCC）细胞生长及迁移能力的影响。方法检测RhoB在RCCC细胞中的蛋白表达水平,采用脂质体转染方法转染RhoB真核表达载体pcDNA3.0-Flag-RhoB和沉默RhoB的小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）即si-RhoB序列及相应空载体和对照序列,应用Western Blot法检测转染后RhoB的蛋白表达情况,通过3-（4,5-二甲基吡啶-2-基）-5-（3-羧基甲氧基苯基）-2-（4-磺苯基）-2H-四唑[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,MTS]法、平板克隆和Transwell小室细胞迁移实验检测细胞生长和细胞迁移能力的变化。结果RhoB在RCCC细胞中表达降低。与转染空载体组比较,转染pcDNA3.0-Flag-RhoB重组质粒组RhoB的蛋白表达水平明显上调;与转染对照组比较,si-RhoB转染组RhoB的蛋白表达水平明显下调。在RCCC细胞786-O和Caki-1中,上调RhoB的表达后,在4、5、6 d经MTS法测定光密度值明显降低（P＜0.05）;在786-O细胞中上调RhoB表达后细胞克隆数明显减少;转染48 h后Transwell细胞迁移数明显减少（P＜0.05）。而下调RhoB表达后,细胞生长和Transwell细胞迁移数没有明显变化。在相对高表达RhoB的正常人肾小管上皮细胞中下调RhoB表达后细胞生长和细胞迁移数明显增多。结论过表达RhoB后明显抑制RCCC细胞生长和迁移能力。