卵巢癌顺铂耐药细胞系的建立及耐药机制的研究

顺铂 (ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ,ＤＤＰ)是一种有效的抗肿瘤药物 ,耐药的产生极大地影响卵巢癌患者对化疗的敏感程度 ,限制了其临床疗效[1] 。本研究采用中等浓度、间歇作用[2 ] 的方法 ,于 1998年 12月到 1999年 5月建立了人卵巢癌细胞株ＳＫＯＶ3对顺铂耐药细胞系ＳＫＯＶ3/ＤＤＰ ,对耐药指数、细胞周期分布、细胞内谷胱甘肽 (ＧＳＨ )含量、拓扑异构酶Ⅱ(ＴＯＰⅡ )含量及活性进行检测 ,从细胞水平、分子生物学水平对其基本特征及耐药机制进行研究。1　材料与方法1 1　研究资料　人卵巢癌细胞株ＳＫＯＶ3购自北京医科大学妇科教研室 ,细胞株…     

维生素D代谢产物联合卡铂对人卵巢癌细胞株的作用

近年来 ,有关研究报道 ,肿瘤细胞株中可检测到维生素Ｄ(ＶｉｔＤ)受体 (ＶＤＲ) ,并观察到维生素Ｄ在体内的活性代谢产物 1,2 5 (ＯＨ) 2 ＶｉｔＤ3在许多肿瘤细胞中的抗增殖和诱导分化作用[1 ,2 ] 。本研究通过体外实验 ,观察单用 1,2 5(ＯＨ) 2 ＶｉｔＤ3及其与卡铂联合应用 ,对卵巢癌ＡＯ及ＳＫＯＶ3细胞株增殖的影响。一、材料与方法1.研究材料 :卵巢癌ＳＫＯＶ3细胞株引自中国协和医科大学 ;ＡＯ细胞株引自中国科学院细胞研究所。 1,2 5 (ＯＨ) 2 ＶｉｔＤ3由美国Ｓｉｇｍａ公司生产 ;大鼠抗人 ＶＤＲ ＩｇＧ 2ｂ抗体 (9Ａ7) ,由美国…     

生长抑制DNA损伤基因45与p53对卵巢癌细胞凋亡作用的研究

目的：研究生长抑制ＤＮＡ损伤基因（ｇｒｏｗｔｈａｒｅｓｔａｎｄＤＮＡｄａｍａｇｅ,ＧＡＤＤ）对卵巢癌细胞的作用及与ｐ５３蛋白表达的关系。方法：利用ＲＴ－ＰＣＲ鉴定卵巢癌ＳＫＯＶ３和３ＡＯ细胞株ＧＡＤＤ４５的表达;采用ＲＴ－ＰＣＲ和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ鉴定ＳＫＯＶ３和３ＡＯ细胞株ｐ５３蛋白的表达。通过载体构建将目的基因ＧＡＤＤ４５重组于ｐｃＤＮＡ－Ⅲ真核质粒内。利用脂质体（ＤＯＴＡＰ）法转染ＳＫＯＶ３和３ＡＯ细胞株;Ｇ４１８抗性筛选,ＲＴ－ＰＣＲ进行表达鉴定。采用流式细胞仪分析（ＦＣＭ）以及ＤＮＡ梯度法对细胞凋亡现象进行检测。结果：卵巢癌ＳＫＯＶ３和３ＡＯ细胞株ＧＡＤＤ４５表达阴性。ＳＫＯＶ３细胞株ｐ５３蛋白表达阳性;３ＡＯ细胞株ｐ５３蛋白表达阴性。转染ＧＡＤＤ４５基因的ＳＫＯＶ３细胞株经化学药物足叶已甙（ＶＰ１６）和紫外线诱导后,可以使该细胞产生凋亡现象,而对转染ＧＡＤＤ４５基因的３ＡＯ细胞株经诱导后,未见细胞凋亡现象。结论：转染ＧＡＤＤ４５基因,对ｐ５３蛋白表达阳性的细胞株ＳＫＯＶ３经诱导后,可使细胞进入凋亡状态。对ｐ５３蛋白表达阴性的细胞株３ＡＯ转染ＧＡＤＤ４５基因后,经诱导细胞无凋亡现象,证实ＧＡＤ?     

脱氧氟尿苷用于提高人卵巢癌细胞株对顺铂敏感性的研究

肿瘤细胞减灭术及术后化学药物治疗 (化疗 )是目前治疗卵巢癌的主要手段 ,以铂类为基础的联合化疗明显改善了晚期卵巢癌患者的治疗效果 ,但耐药性的产生严重影响其化疗效果。本研究采用四甲基偶氮唑蓝 (ＭＴＴ)比色法、免疫细胞化学链霉菌抗生物素 过氧化物酶连接 (ＳＰ)法和流式细胞术等方法 ,分析了脱氧氟尿苷 (ＦＵＤＲ)作用后卵巢癌细胞株ＣＡＯＶ3对顺铂敏感性的变化 ,并初步探讨其机理 ,为临床制定有效的联合化疗方案提供理论依据。一、材料与方法1 材料 :( 1)卵巢癌细胞株 :ＣＡＯＶ3为顺铂耐药株[1] ,购自北京大学人民医院妇科肿瘤…     

人卵巢癌细胞分泌转化生长因子－β对外周血单个核细胞增殖的影响

观察人卵巢癌细胞株ＣＯＣ＿１和ＣＯＣ＿２来源的患者癌性腹水（ＡＳ＿１，ＡＳ＿２）、癌细胞无血清条件培养液（ＳＦＣＭ＿１，ＳＦＣＭ＿２）及荷瘤裸鼠血清（ＮＳ＿１，ＮＳ＿２）对植物血凝素（ＰＩＩＡ）和白细胞介素－２（ＩＬ－２）诱导的外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）增殖的作用，及与转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）的关系。结果：ＡＳ＿１和ＡＳ＿２对ＰＢＭＣ增殖有剂量依赖性抑制作用。ＳＦＣＭ和ＮＳ也具有明显抑制ＰＢＭＣ增殖的作用；但在浓度很低时，ＳＦＣＭ＿２对ＰＨＡ诱导，ＳＦＣＭ＿１、ＮＳ＿１和ＮＳ＿２对ＩＬ－２诱导的ＰＢＭＣ增殖，具有一定促进作用。上述作用特点与ＴＧＦ－β作用相似，并可被抗ＴＧＦ－β中和抗体部分阻断。提示：人卵巢癌细胞可通过产生ＴＧＦ－β，抑制宿主免疫。     

三苯氧胺对卵巢癌细胞增殖及凋亡影响的实验研究

本研究采用多种检测手段 ,观察三苯氧胺对卵巢癌细胞系ＨＯ - 8910体外增殖及凋亡的影响 ,以期寻找卵巢癌治疗的有效方法。1　材料与方法1 1　材料卵巢癌细胞株ＨＯ - 8910来源于人卵巢浆液性囊腺癌。三苯氧胺 (ＴＡＭ )为Ｓｉｇｍａ公司产品 ,细胞凋亡检测试剂盒 (ＴＵＮＥＬ)为德国宝灵曼公司产品 ,鼠抗人Ｂｃｌ- 2单克隆抗体、ＦＩＴＣ -标记羊抗鼠ＩｇＧ购自北京中山生物技术公司。1 2　方法1 2 1　细胞培养　ＨＯ - 8910细胞按常规方法培养在10 %小牛血清ＲＰＭＩ 1640完全培养基中 ,培养条件为 :3 7℃ ,5 %ＣＯ2 ,相对湿度 90 %。待…     

顺铂、维拉帕米和环孢菌素诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的 探讨顺铂（ＤＤＰ）,维拉帕米（ＶＰ）及３′－酮基－去甲基苏氨酸１－缬氨酸２－环孢菌素（ＰＳＣ８３３）诱导卵巢癌细胞凋亡的作用机理。方法 以人卵巢癌亲代细胞株ＣＯＣ１及其耐ＤＤＰ亚细胞株ＣＯＣ１／ＤＤＰ为材料,根据所加药物的不同分为ＤＤＰ组,ＶＰ组,ＰＳＣ８３３组,ＤＤＰ联合ＶＰ组,ＤＤＰ联合ＰＳＣ８３３组和对照组,计算各组细胞生长抑制率,细胞凋亡率同时进行细胞周期分析。结果 ＤＤＰ联合ＶＰ组     

c—erbB2反义核酸对卵巢癌细胞系生物学行为及药物敏感性的影响

目的：探讨ｃ－ｅｒｂＢ２反义核酸对卵巢癌细胞生物学行为及其化疗药物敏感性的影响。方法：应用ｐＵＣ－ｅｒｂＢ２和ｐＤＯＲ－ｎｅｏ质粒，构建了含反义ｅｒｂＢ２ｃＤＮＡ３．８ｋｂ的重组逆转录病毒表达载体ｐＤＯＲ－ｅｒｂＢ－ｎｅｏ，经脂质体转染ｅｒｂＢ２高表达的人卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３，再经Ｇ４１８（一种新霉素类似物）筛选得到新霉素抗性细胞，命名为ＳＫＯＶ３－Ａ２。结果：Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交分析表明，反义ｅｒｂＢ２３．８ｋｂ已完全整合到ＳＫＯＶ３细胞中，与亲本细胞及转染ｐＤＯＲ－ｎｅｏ的对照组细胞相比，ＳＫＯＶ３－Ａ２的生长和ＤＮＡ合成均受到抑制，且对５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）及顺铂（ＤＤＰ）的药物敏感性明显增加。结论：ｃ－ｅｒｂＢ２反义核酸在卵巢癌基因治疗中有一定作用；ｃ－ｅｒｂＢ２癌基因可能与卵巢癌细胞耐药有关。     

羟基喜树碱和topotecan对人卵巢癌细胞株体外作用的研究

目的 观察１０－羟基喜树碱（羟基喜树缄）和９－二甲基氨基－１０羟基喜树缄（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）对卵巢癌细胞株体外生长的影响。方法 采用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）比色法,测定羟基喜树碱和ｔｏｐｏｔｅｃａｎ对卵巢癌细胞株ＳＫＯＶ３和ＣＡＯＶ３生长的抑制作用,并绘制浓度－抑制率曲线,观察这两种药物对ＳＫＯＶ３和ＣＡＯＶ３的生长及集落形成的抑制作用,并与顺铂进行对比;用末端脱氧核酰转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸     

粒细胞集落刺激因子对人卵巢癌细胞株生长的影响

了解粒细胞集落刺激因子对人卵巢癌细胞株生长的影响,方法采用ＸＴＴ比色法,检测Ｇ－ＣＳＦ对卵巢癌细胞株ＳＫＯＶ３、３ＡＯ及ＧＡＯＶ３生长的影响;对有影响的细胞株进行流式细胞仪检测和Ｇ－ＣＳＦ受体的检测,观察外源性Ｇ－ＣＳＦ对该细胞株的裸鼠皮下瘤生长的影响。结论Ｇ－ＣＳＦ对所检测的卵巢癌细胞株生长无显著影响。     

舒林酸对裸鼠腹腔内人卵巢癌基质金属蛋白酶及其抑制物基因表达的影响

舒林酸能够显著抑制动物及人结直肠癌的发生 ,使家族性直肠息肉退化[1 3 ] ,对乳腺癌等也表现出抑制作用[4] 。本研究通过观察舒林酸对人卵巢浆液性上皮癌细胞株(ＳＫＯＶ3)诱导的裸鼠腹腔内肿瘤基质金属蛋白酶及其组织抑制物基因表达的影响 ,探讨舒林酸的作用机理。一、资料与方法1 材料 :(1)细胞系 :人卵巢浆液性囊腺癌细胞株ＳＫＯＶ3由美国休斯敦安德森癌症中心郁茵华教授惠赠。 (2 )主要试剂 :ＤＭＥＭ细胞培养基、Ｔｒｉｚｏｌ(ＲＮＡ提取试剂 )及逆转录聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)试剂均购于美国ＧＩＢＩＣＯＬ公司 ;舒林酸购于中美…     

野生型p53基因对人卵巢癌细胞株的生长抑制作用

目的：探讨野生型ｐ５３(ｗｔ ｐ５３)基因对人卵巢癌细胞株的生长抑制作用。方法：利用脂质体介导，将含有人全长ｗｔ－ｐ５３基因ｃＤＮＡ的真核表达载体质粒ｐＣＥＰ４／ｐ５３和空载体质粒ｐＣＥＰ４分别转染卵巢癌ＳＫＯＶ３细胞株，分别命名为ＳＫＯＶ３－ｐＣＥＰ４／ｐ５３细胞(C组)、ＳＫＯＶ３－ｐＣＥＰ４细胞(B组)，另设ＳＫＯＶ３细胞为正常对照组（Ａ组）。观察细胞体外生长情况和凋亡变化。结果：外源性ｐ５３基因在Ｃ组细胞中获表达，细胞生长曲线显示ｐ５３的导入使ＳＫＯＶ３细胞生长受到明显抑制，Ｃ组平均细胞集落数（１８．６±１．８个）少于Ａ组（２４．３±２．２个）和Ｂ组（２２．７±２．６），差异有显著性（Ｐ（005）。ＭＴＴ法检测C组细胞活力明显低于Ａ、Ｂ组。Ｃ组细胞Ｇ０～Ｇ１期百分比（５７．７９％）及凋亡细胞百分比（13．９1％）均高于Ｂ组（４６．０２％、２．０８％）和Ａ组（４３．６２％、０）。结论：ｗｔ－ｐ５３基因可介导ＳＫＯＶ３细胞Ｇ１期停滞和细胞凋亡，抑制细胞体外生长。     

腺病毒介导胸苷激酶基因治疗卵巢癌的动物试验研究

目的：探讨腺病毒介导Ｒｏｕｓ肉瘤病毒驱动的单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ）基因人氧鸟苷（ＧＣＶ）治疗卵巢癌的有效性和毒性，方法：首先以卵巢浆液性腺癌细胞系Ｏｖ－ｃａ－２７７４建立荷人卵巢癌裸鼠腹水瘤模型，再分别单用ＡＤＶ／ＲＳＫ－ｔｋ或ＧＣＶ（单药组）或联合应用ＡＤＶ／ＲＳＫ－ｔｋ及ＧＣＶ（联合用药组）进行治疗，观察空白对照组，单药组及联合用药级裸鼠的平均生存时间及药物毒怀，结果：单药     

C-erbB2及C-myc基因反义脱氧寡核苷酸对卵巢癌COC1细胞的作用

近年来 ,有关卵巢肿瘤的基因治疗研究方兴未艾 ,特别是反义基因治疗取得了一些明显的效果[1] 。但随着分子生物学和分子遗传学技术的深入发展 ,人们已逐渐认识到肿瘤的发生是一个涉及多基因、多步骤的复杂过程 ,单一癌基因的反义阻断不能完全抑制或逆转其恶性表型。本研究通过体外实验探讨联合反义基因治疗对ＣＯＣ1细胞Ｃ ｅｒｂＢ2 、Ｃ ｍｙｃ基因表达及细胞增殖的影响。一、材料与方法1 材料来源 :卵巢癌ＣＯＣ1细胞系由武汉大学中南医院肿瘤研究所提供。引物及Ｃ ｅｒｂＢ2 、Ｃ ｍｙｃ反义脱氧寡核苷酸(ＡＳ ＯＤＮｓ)的合成、修饰[2 …     

卵巢癌SKOV3ipl细胞团簇耐药蛋白表达与细胞周期的关系

耐药是困扰卵巢癌患者化学药物治疗 (化疗 )疗效提高的重要因素。目前提出的耐药机制很多[1 ] ,但由于体内外条件的差异 ,这些耐药机制对临床耐药的影响尚难肯定。由肿瘤细胞形成的多细胞团簇是体外实体瘤研究的良好模型[2 ] ,对多细胞团簇的研究将有助于解决实体瘤治疗中的有关问题。本研究旨在进一步探讨卵巢癌ＳＫＯＶ3ｉｐ1多细胞团簇Ｐ 糖蛋白 (Ｐ ｇｐ)、多药耐药相关蛋白 (ＭＲＰ)表达情况及其与细胞周期的关系。一、材料与方法1 材料来源 :(1 )细胞系 :ＳＫＯＶ3ｉｐ1细胞由卵巢浆液性囊腺癌ＳＫＯＶ3细胞系中克隆出来的腹水瘤亚系…     

单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因/羟甲基无环鸟苷系统对人卵巢癌裸鼠网膜移植瘤的作用

目的观察单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因（ＨＳＶ１ｔｋ）／羟甲基无环鸟苷（ＧＣＶ）系统对人卵巢癌的体内治疗作用。方法先将人卵巢癌细胞ＡＯ及携有ＨＳＶ１ｔｋ基因的ＡＯ细胞（ＡＯ／ＨＳＶ１ｔｋｃ）注射于裸鼠皮下,形成肿瘤后再移植于裸鼠网膜,并以病毒生产细胞（ＶＰＣ／ＨＳＶ１ｔｋｃ）的培养液对ＡＯ网膜移植瘤进行体内转染,然后以ＧＣＶ对体外ＡＯ／ＨＳＶ１ｔｋｃ转移的肿瘤及经体内转染的ＡＯ肿瘤进行治疗。结果ＨＳＶ１ｔｋ／ＧＣＶ基因治疗系统对ＡＯ裸鼠网膜移植瘤的抑制率为４６．８％,而ＡＯ／ＨＳＶ１ｔｋｃ裸鼠网膜移植瘤经ＧＣＶ治疗后,多数仅残留显微镜下可见的癌灶。结论ＧＣＶ在腹腔内对携有ＨＳＶ１ｔｋ基因的肿瘤具有更为显著的杀伤效应;ＨＳＶ１ｔｋ／ＧＣＶ基因治疗系统在卵巢癌的治疗上可能具有良好的应用前景。     

人类红细胞血型抗原的遗传

人类红细胞血型抗原是研究最早的抗原 ,迄今已发现2 3个血型系统 (表 1)。除Ｘｇ血型和ＸＫ血型为Ｘ连锁遗传外 ,其余均为常染色体遗传。其中ＡＢＯ血型系统和Ｒｈ血型系统在人类遗传学及临床医学中意义最大。表 1　人类红细胞 2 3个血型系统编码系统命名　　　系统符号　　基因命名　　　染色体定位0 0 1ＡＢＯＡＢＯＡＢＯ 9ｑ34 1—ｑ34 20 0 2ＭＮＳＭＮＳＧＹＰＡ ,ＧＹＰＢ,ＧＹＰＥ 4ｑ2 8—ｑ310 0 3ＰＰ1Ｐ12 2ｑ11 2—ｑｔｅｒ0 0 4ＲｈＲｈＲＨＤ ,ＲＨＣＥ 1ｐ36 2—ｐ340 0 5ＬｕｔｈｅｒａｎＬＵＬＵ 19ｑ12—ｑ130 0 6Ｋｅ…     

脂质体—C—erbB2反义脱氧寡核苷酸对人卵癌裸鼠网膜移植瘤 …

目的 探讨脂质体－Ｃ－ｅｒｂＢ２反义脱氧寡苷酸（Ｃ－ｅｒｂＢ２ Ｓ－ＯＤＮｓ２）对人卵巢癌裸鼠网膜移植瘤生长及顺铂（ＤＤＰ）敏感性的影响。方法 对２０只裸鼠建立人卵巢癌裸鼠网膜移植模型,分为对照组（腹腔注射无菌水）、观察组（腹腔注射脂质体－Ｃ－ｅｒｂＢ２ Ｓ－ＯＤＮｓ）、化疗组（腹腔注射无菌水及ＤＤＰ）、观察＋化疗组（腹腔注射脂质体－Ｃ－ｅｒｂＢ２ Ｓ－ＯＤＮｓ及ＤＤＰ）。治疗期间观测裸鼠体重变化     

《中国实用妇科与产科杂志》国家级继续医学教育试题

(答题卡见本期插页 )选择题 (Ａ型题 )1　长期应用下列哪种药物可减少卵巢癌发生的危险性 :Ａ　雌激素　　　　　　Ｂ　睾酮　　Ｃ　避孕药Ｄ　肾上腺皮质激素　　Ｅ　ＦＳＨ2　下列哪种细胞因子可能具有抑制卵巢癌细胞增殖的作用 :Ａ　ＴＧＦ - β　　Ｂ　ＴＧＦ -α　　Ｃ　ＳＩＰＤ　ＫＬ　　Ｅ　ＥＧＦ3　与外阴癌发病关系最密切的ＨＰＶ病毒类型是 :Ａ　ＨＰＶ18　　Ｂ　ＨＰＶ16　　Ｃ　ＨＰＶ33Ｄ　ＨＰＶ31　　Ｅ　ＨＰＶ454　下列哪点不符合外阴癌老年患者的特点 :Ａ　一般分化较好 ,常伴角化Ｂ　癌周邻近鳞状上皮组织内常见ＶＩＮ…     

单纯疱疹病毒胞腺嘧啶核苷激酶基因羟甲基无环岛苷系对人卵 …

观察单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激素酶基因羟甲基无环鸟苷系统对人卵巢癌的体内治疗作用。方法先将人卵巢癌细胞ＡＯ及携有ＨＳＶ１－ｔｋ基因的ＡＯ注射于裸鼠皮下,形成肿瘤后再移植于裸鼠网膜,并以病毒生物细胞的培养液对ＡＯ网膜移植瘤进行体风转染,然后以ＧＣＶ对体外ＡＯ／ＨＳＶ１－ｔｋｃ转移的肿瘤及经体内转染的ＡＯ肿瘤进行治疗。