鞘内注射Roscovitine对小鼠骨癌痛行为学的影响

目的 探讨鞘内给予细胞周期依赖性激酶5(cyclin-dependent kinases,Cdk5)特异性拮抗剂Roscovitine对小鼠骨癌痛行为学的影响.方法 24只C3H/Hej 小鼠采用随机数字表法随机分为3组,S组(假手术后14 d+溶媒)、C组(接种后14d+溶媒)、R组(接种后14 d+Roscovitine),每组8只.C组和R组将含2×105个纤维肉瘤NCTC 2472细胞的最小必需培养基(α-MEM)20μl注射到小鼠右侧股骨远端骨髓腔内,制作骨癌痛模型.S组只注入不含肿瘤细胞的α-MEM.术后14 d,R组小鼠鞘内注射含有20μg Roscovitine的二甲基亚砜(DMSO)5μl,C组及S组小鼠鞘内注DMSO 5 μl.观察给药前及给药后1、6、24、48、72 h检测小鼠痛行为学的变化:机械缩足阈值(paw uithdrawal mechanical threshold,PMWT)和热缩足潜伏期(Paw withdrawal thermal latency,PWTL).结果 各组术前基础机械缩足阈值及热缩足潜伏期比较差异无统计学意义(P＞0.05).接种后7 d,C组PMWT(1.08±0.24)g,与S组(1.85±0.28)g相比明显降低(P＜0.05);接种后10 d,C组PTWL(12.7±1.4)s较S组(18.6±2.1)s明显缩短(P＜0.05),C组小鼠的痛行为学随时间逐渐加重,与S组小鼠比较差异有统计学意义(P＜0.05);与C组及给药前基础值相比,鞘内注射Roscovitine 20μg后6 h PMWT(0.70±0.19)g显著增加(P＜0.05),PTWL(14.16±1.07)s显著延长(P＜0.05),并随时间逐渐增加,12 h达最大值,后逐渐降低,72 h降低到C组水平.结论 鞘内注射Roscovitine可有效缓解小鼠骨癌痛.     

大鼠鞘内注射JWH015对瑞芬太尼诱发痛觉过敏的影响

目的 在大鼠切口痛模型基础上探讨大麻素受体2(cannabinoid receptor 2,CB2R)激动剂JWH015对瑞芬太尼诱发的痛觉过敏的影响.方法 30只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠采用随机数字表法分成5组(每组6只):对照组(C组)、切口痛组(I组)、瑞芬太尼组(R组)、切口痛+JWH015组(JI组)、切口痛+瑞芬太尼+JWH015组(JR组).JI组与JR组在造模前30 min鞘内注射10 μg JWH015,而C组、Ⅰ组、R组均给予20％的二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)溶液,容积均为10μl.除C组外,其余各组均制作切口痛模型,R组和JR组在造模的同时皮下泵注瑞芬太尼0.04 mg/kg,其余组皮下泵注生理盐水,容积均为0.4 ml,30 min泵完.测定术前24h及术后2、6、24和48 h大鼠切口手术同侧后爪的机械缩足反射阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和热缩足反射潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL). 结果 与C组和基础值比较,Ⅰ 组术后各时间点PWMT和PWTL均降低(P＜0.05);与Ⅰ组比较,R组术后各时间点PWMT(6.3±0.8)、(6.3±0.8)、(6.3±1.0)、(6.8±0.9)g和PWTL (12.8±1.2)、(12.2±0.9)、(13.4±1.1)、(13.5±1.3)s均明显降低(P＜0.05);与R组相比,JR组术后6、24和48 h的PWMT(7.9±1.0)、(9.9±1.1)、(8.4±1.1)g和PWTL(17.3±1.9)、(19.9±1.3)、(17.7±1.2)s明显升高(P＜0.05).结论 鞘内注射JWH-015可以有效缓解由瑞芬太尼诱发的切口周围组织痛觉过敏.     

蛛网膜下腔注射Ro25-6981对切口痛大鼠的镇痛作用研究

目的 研究蛛网膜下腔注射Ro 25-6981,一种新型选择性的N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体NR2B亚基拮抗剂,对切口痛大鼠的镇痛作用.方法 雄性SD大鼠60只,将大鼠采用随机数字表法分为4组,每组15只:对照组(C组)、切口痛组(Ⅰ组)、鞘内注射Ro 25-6981 50μg/25μl组(R1组)、鞘内注射Ro 25-6981 200μg/25μl组(R2组),每组15只.C组和Ⅰ组均鞘内注射5%DMSO溶剂25 μl.Ⅰ组、R1组和R2组在鞘内注射后行右后足切口痛模型制备.所有动物接受鞘内注射和手术均在吸入七氟醚麻醉下进行.术前24 h、术后2、6、24h检测大鼠痛行为学指标,包括50%机械缩足阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和热缩足反射潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL),同时测定鞘内给药前后大鼠的运动功能.结果 与C组和术前基础值比较,Ⅰ组术后各时间点50%PWMT(7.0±0.9)、(6.7±0.7)、(6.4±1.2)g和PWTL(10.3±1.4)、(10.1±1.0)、(10.0±1.0)s均降低(P＜0.05);与Ⅰ组比较,R1组各时间点50%PWMT和PWTL差异无统计学意义(P＞0.05);R2组术后2 h 50%PWMT(9.0±0.8)g和PWTL(13.7±1.0)s与Ⅰ组相比均升高(P＜0.05),6、24 h痛行为学差异无统计学意义;鞘内给药前后大鼠运动功能差异无统计学意义(P＞0.05).结论 鞘内注射选择性的Np2B拮抗剂Ro 25-6981 200.0μg可以对切口痛大鼠产生明显的镇痛作用而不影响运动功能.

Abstract：

Objective To investigate the analgesic effects of intrathecal administration of Ro 25-6981, a selective antagonist of the NR2B subunit of NMDA receptors (NR2B), in a rat model of incision pain. Methods Sixty SD rats were randomly divided into 4 groups: control group (C); incisional pain group (Ⅰ); intrathecal group of Ro 25-6981 at the dose of 50 μg/25 μl(R1);intrathecal group of Ro 25-6981 at the dose of 200 μg/25 μl(R2). Intrathecal injection of 5% DMSO solvent at the dose of 25 μl was administrated in group C and Ⅰ. Rat models of incisional pain on the right hind were prepared after intrathecal injection in group Ⅰ,R1 and R2. All rats were anesthetized with sevoflurane. The 50% paw withdrawal mechanical threshold (PWMT) and paw withdrawal thermal latency (PWTL) were tested to evaluate the behavioral changes and measured at 24 h before incision and at 2,6,24 h after incision. And the locomotor functions were also examined at the same time points. Results Compared with group C and baseline,the decreases of 50% PWMT (7.0±0.9), (6.7±0.7), (6.4±1.2) g and PWTL (10.3±1.4), ( 10. 1±1.0), (10.0±1.0) s were observed at each time point after incision in group Ⅰ (P＜0.05); Compared with group Ⅰ, significant changes of 50% PWMT and PWTL were not observed at each time point in group R1 (P＞0.05); Compared with group Ⅰ, increases of both 50% PWMT (9.0±0.8) g and PWTL (13.7±1.0) s were observed at 2 h after incision in group R2 (P＜0.05), while no significant changes of 50% PWMT and PWTL were observed at 6 h and 24 h after incision in group R2. No significant changes in locomotor functions were observed before and after intrathecal administration in rats (P＞0.05). Conclusion Intrathecal injection of Ro 25-6981 at the dose of 200.0 μg, the selective antagonist of the NR2B, exerts significant analgesic effects on incision pain in rats without affecting of locomotor functions.     

鞘内注射KN93对神经病理性疼痛大鼠痛行为学的影响

目的 观察鞘内注射钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)抑制剂KN93对腰背根神经节慢性压迫(chronic compression of dorsal root ganglion,CCD)大鼠神经病理性疼痛的影响. 方法 SD雄性大鼠48只,按随机数字表法分为3组:假手术组(S组,11只)、CCD模型组(C组,11只)、KN93组(K组,26只).C组、K组制备CCD模型,S组仅暴露L5-6椎间隙.术后14dS组和C组鞘内注射10％溶媒二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)25μl,K组鞘内注射溶于10％DMSO的KN93 50 μg/25μl.各组在造模前1 d(t1),造模后4(t2)、7(t3)、10(t4)、14 d(t5)随机取8只大鼠检测热缩足反射潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL)和机械缩足反射阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT);并于鞘内注射DMSO或KN93后2(t6)、4(t7)、10(t8)、12(t9)、24 h(t10)时进行相同的行为学检测.各组于给药前以及K组的给药后各时间点(t6～t9)随机取3只大鼠处死并取脊髓腰膨大部分,采用Western blot方法检测CaMKⅡ蛋白表达水平.结果 鞘内给药后t6～t9时点,K组PWTL [(14.7±1.6)、(18.6±1.8)、(21.2±2.5)、(15.3±2.0)s],PWMT [(12.0±1.0)、(15.4±1.4)、(17.5±1.7)、(14.9±1.6)g]比C组PWTL[(11.6±1.8)、(10.7±1.7)、(11.7±2.4)、(9.9±1.7)s],PWMT[(8.4±0.9)、(9.6±1.6)、(10.6±1.7)、(8.9±1.3)g]升高,差异有统计学意义(P＜0.05).给药前及给药后t10时,K组PWTL、PWMT与C组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).和t5时CaMKⅡ值(1.55±0.12)比较,给药后t6～t9时间点CaMKⅡ蛋白[(1.37±0.11),(1.15±0.12)、(0.75±0.08)、(0.86±0.12)]表达下降(P＜0.05). 结论 鞘内注射KN93可有效缓解神经病理性疼痛大鼠的疼痛反应.     

加巴喷丁对糖尿病神经病理痛大鼠背根神经节Toll样受体4表达的影响

目的 探讨加巴喷丁(gabapentin,GBP)对糖尿病神经病理性疼痛(diabetic neuropathic pain,DNP)大鼠背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)表达的影响. 方法 108只成年健康雄性SD大鼠,采用完全随机分组法分为4组:对照组(C组)、模型组(DNP组)、生理盐水(SC)+DNP组和GBP+DNP组(每组27只).观察链脲佐菌素(streptozocin,STZ)注射前1d及注射后3、7、10、14、21、28 d测定缩足反射机械刺激阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和缩足反射热辐射潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL),SC+DNP组和GBP+DNP组于STZ注射15d起分别腹腔注射生理盐水或GBP 50 mg/kg,1次/d,连续7d,并于21、28 d测定PWMT和PWTL.行为学测试完成后选择21 d大鼠用免疫组化和Western blot方法检测大鼠DRG中TLR4的表达. 结果 与C组比较,DNP组PWMT (3.9±0.9)g降低,PWTL[(6.1±0.8)s]缩短,DRG中TLR4蛋白的表达显著上调(P＜0.05);与DNP组比较,SC+DNP组大鼠在腹腔注射生理盐水后,PWMT、PWTL和TLR4蛋白的表达无明显改变(P＞0.05);与DNP组和SC+DNP组比较,GBP+DNP组PWMT(8.3±0.8)g升高,PWTL[(9.9±1.2)s]延长,DRG中TLR4蛋白的表达下调(P＜0.05). 结论 GBP可通过抑制DRG中TLR4表达,从而减轻大鼠DNP.     

鞘内注射Roscovitine缓解大鼠慢性神经病理性疼痛

目的 在SD大鼠脊髓后根神经节慢性压迫(CCD)模型上观察鞘内注射Roscovitine的镇痛效果.方法 用不锈钢棒(长4 mm,直径0.7 mm)持续件压迫脊髓背根神经节(DRG)建立慢性神经病理性疼痛模型.术后第7天鞘内注射溶解于DMSO 10 μl中的Roscovitine 50 μg(R组);同时设CCD术后第7天只给予鞘内注射二甲基亚砜(DMS0)10 μl的CCD组(C组)和非CCD处理、并给予鞘内注射DMSO 10 μl的假手术组(S组).三组均于CCD术前、术后第7天(给药前)及给药后2、24、72 h榆测机械痛缩足阈值(PWMT)和热痛缩足潜伏期(PWTL).CCD术前及给药后72 h用免疫组化技术检测脊髓背角N-甲基-D天冬门氨酸(NMDA)受体2A亚基(NR2A)的表达水平.结果 R组和C组给药前PWMT均较术前显著降低[(3.64±0.40)g vs.(14.38±1.53)g,(3.50±0.77)g vs(13.25±2.21)g],也明显低于S组的(11.31±1.13)g(P<0.05).R组和C组给药前PWTL均较术前显著缩短[(9.28±1.18)s vs(18.34±1.23)s,(8.91±1.08)s vs.(18.59±1.92)s],也短于S组的(18.45±1.44)s(P<0.05).R组PWMT在给药后24 h较给药前和C组显著增加[(7.32±0.69)g vs.(3.64±0.40)g,(3.86±1.14)g](P<0.05),而给药后2 h PWTL,较给药前和C组显著延长[(15.464±1.51)s vs.(9.28±1.18)s,(9.91±1.07)s(P<0.05).给药后72 h,R组脊髓背角NR2A受体表达水平明显低于C组[(0.21±0.02)vs.(0.26±0.01)](P<0.05).结论 鞘内注射Roseovitine能有效改善CCD大鼠痛行为学反应;其作用可能与抑制脊髓背角NR2A受体表达有关.     

CB2受体激动剂JWH015对大鼠神经病理性疼痛的治疗作用

目的 研究鞘内注射CB2受体激动剂JWH015对背根节慢性压迫(chronic compression of the dorsal root ganglia,CCD)大鼠痛阈和脊髓背角磷酸化NMDA受体NR2B亚基表达的影响,探讨CB2受体激动剂的镇痛作用及其可能机制.方法 鞘内置管成功后的雄性SD大鼠84只,随机分为3组:假手术+50%二甲基亚砜(dimethyl sulphoxide,DMSO)组(Sham组)、CCD+50%DMSO组(Vehicle组)、CCD+JWH015组(JWH015组).Sham组和Vehicle组各有6只大鼠在假手术或CCD后第7天(鞘内未给药)取脊髓标本,作为免疫组织化学法检测脊髓背角Tyr-1472磷酸化NR2B亚基表达的基础值.其余大鼠在假手术或CCD后第7天分别鞘内注射50%DMS010μl或JWH015 10μg.假手术或CCD之前、鞘内给药之前、之后1、2、4、8、24、72 h分别记录机械刺激缩足反射阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和热刺激缩足反射潜伏期(paw withdrawalthermal latency,PWTL)(n=6),鞘内给药之后4、8、24、72 h分别取脊髓标本(n=6),应用免疫组织化学法检测脊髓背角Tyr-1472磷酸化NR2B亚基的表达情况.结果 鞘内给药前Vehicle组和JWH015组大鼠的PWMT和PWTL均较基础值明显下降(P<0.01);与Vehicle组相比,JWH015组在给药后1、2、4 h PWMT和PWTL显著升高(P<0.01),但在给药后8、24、72 h差异无统计学意义(P>0.05);Sham组大鼠脊髓背角Tyr-1472磷酸化NR2B业基均呈低水平表达,但在CCD后第7天表达水平明显增强;鞘内注射50%DMSO后在各时间点均未能减弱CCD大鼠脊髓背角Tyr-1472磷酸化NR2B亚基的表达;鞘内注射JWH015在给药后4、8 h能明显减弱CCD大鼠脊髓背角Tyr-1472磷酸化NR2B亚基的表达,但在给药后24、72 h Tyr-1472磷酸化NR2B亚基的表达再次增强.结论 CB2受体激动剂JWH015对大鼠的神经病理性疼痛有治疗作用,该作用可能与抑制脊髓背角Tyr-1472磷酸化NR2B亚基的表达有关.     

氯胺酮预防瑞芬太尼痛觉过敏的实验研究

目的 观察预先皮下注射氯胺酮对瑞芬太尼诱发切口痛模型大鼠痛觉过敏的影响.方法 雄性SD大鼠60只,将大鼠随机分为5组:对照组(C组)、切口痛组(Ⅰ组)、氯胺酮(K组)、瑞芬太尼组(R组)、氯胺酮+瑞芬太尼组(K+R组).Ⅰ组,K组,R组和K+R组行右后足跖肌切口;K组和K+R组术前单次皮下注射氯胺酮0.1 ml(10mg/kg);R组和K+R组切皮开始同时皮下泵注瑞芬太尼0.4 nl(0.04 mg/kg),泵注时间为30 min,所有动物手术和接受微量泵皮下输注均在吸入七氟醚麻醉下进行.于术前24 h、术后2、6、24、48 h检测痛行为学指标,包括机械缩足阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和热缩足反射潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL).结果 与C组和基础值比较,Ⅰ组术后各时间点PWMT和PWTL均降低(P＜0.05);与Ⅰ组相比,R组术后2 h PWMT(6.48±1.23)g和PWTL(11.13±1.95)s即开始降低,此水平持续至术后48h(P<0.05);K+R组术后各时间点PWMT(9.36±1.76,9.41±1.50,10.18±1.42,10.15±1.48)g和PWTL(15.66±2.42,16.24±2.55,15.13±3.07,15.66±2.44)s均高于R组(P＜0.05).结论 术前预先皮下注射氯胺酮可有效预防瑞芬太尼诱发的切口痛模型大鼠痛觉过敏.     

鞘内注射地塞米松对背根节压迫大鼠镇痛作用的行为学观察

目的 在大鼠慢性背根神经节压迫模型中观察鞘内注射地塞米松的镇痛效果.方法 制作慢性背根神经节压迫模型(CCD组),同时制作不给予背根神经节压迫的假手术模(sham组).所有的实验大鼠在术前3d,术后第3、4、7、10、13、14、15天检测痛行为学指标.包括机械痛缩足阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和热痛缩足潜伏期(paw with-drawal themud latencv,PWTL).CCD模型组分为10%DWSO对照组(C组)、早期治疗组(ET组)、后期治疗组(LT组)和二次治疗组(TT组).10%DWSO对照组在术后第3天和第13大鞘内给予10%DWSO,早期治疗组于术后第3天分别给予地塞米松,第13天给予10%DWSO.后期治疗组于术后第3天给予10%DWSO,第13天给予地塞米松,二次治疗组术后第3、13天均给予地塞米松.结果 术后3 d空白对照组PWMT(2.67±1.03)较sham组PWMT(11.33±2.94)和术前基础值PWMT(13.33+2.58,13.33±2.58.13.33±2.58)有显著降低(P<0.05)、C组PWTL(8.82±1.82)较sham组(22.14±2.34)和基础值(22.52±1.94,21.59~2.49.22.46±1.52)明显缩短(P<0.05).鞘内给药之后ET组和TT组PWMT增高(P<0.05),PWTL延长(P<0.05);但LT组PWTL、PWMT无明显变化(P>O.05).结论 鞘内注射地塞米松可以有效改善慢性背根神经节压迫引起的痛行为学反应,但具有时间依赖性.     

大鼠切口痛模型中鞘内注射不同剂量KN93对瑞芬太尼诱发的痛觉过敏的影响

目的 观察不同剂量KN93对瑞芬太尼痛觉过敏大鼠痛行为的影响. 方法 采用完全随机分组方法,将36只雄性SD大鼠分为6组(每组6只):①空白对照组;②切口组;③瑞芬太尼组;④KN93 25 μg组;⑤KN93 50 μg组;⑥KN93 100 μg组.除空白对照组外,其余各组均制作切口痛模型、瑞芬太尼组及KN93 3个剂量组,手术过程中皮下输注瑞芬太尼(40 μg/kg,1 mg溶于40 ml生理盐水中)30 min.各组大鼠分别于术前24h、术后2、6、24、48 h测定术侧机械缩足阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和热缩足潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL). 结果 与切口组比较,瑞芬太尼组术后出现痛觉过敏表现PWMT (20.9±2.6,19.6±1.8,21.9±2.0,22.3±1.9)及PWTL[(8.5±1.5)s,(8.6±1.5)s,(8.5±2.0)s,(9.1±1.5)s],P＜0.05.鞘内注射KN93 25 μg对痛觉过敏大鼠痛行为无改善作用,鞘内注射KN93 50、100 μg能剂量依赖性改善瑞芬太尼所致痛觉过敏大鼠痛行为,P＜0.05. 结论 瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏;KN93剂量依赖性的改善瑞芬太尼诱发的痛觉过敏.     

鞘内注射Akt抑制剂Ⅳ对注射式根性神经痛大鼠痛行为学的影响

目的 探讨鞘内给予Akt抑制剂Ⅳ对注射式根性神经痛大鼠痛行为学的影响.方法 选择成功鞘内置管后无运动障碍的雄性SD大鼠18只,用分段随机分组法分为假手术组(S组)、溶剂对照组(C组)和Akt抑制剂组(A组),每组6只.C组和A组均采用注射surgiflo制备注射式根性神经痛模型,A组于造模前30 min给予Akt抑制剂...     

脊髓背角卡配因在大鼠足底炎性痛形成中的作用

目的 探讨脊髓背角卡配因在大鼠足底炎性痛形成中的作用.方法 雄性SD大鼠48只,6周龄,体重160～200 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组:正常对照组(C组,n=8)、PBS组(n=16)和酵母多糖诱发足底炎性痛组(Z组,n=24).Z组于大鼠左侧后足足底皮下注射酵母多糖1.25 mg,制备酵母多糖诱发足底炎性痛模型,PBS组给予等容量PBS 100μl.分别于给药前(T0)、给药后30 min(T1)、1 h(T2)、2 h(T3)、4 h(T4)、8 h(T5)、24 h(T6)和48 h(T7)时测定左侧后足机械刺激缩足阈值(MWT)、热缩足反应潜伏期(PWTL)和左侧后足足底最大厚度.PBS组于T4时处死8只大鼠,Z组分别于T4、T6和T7时各处死8只大鼠,取左侧脊髓L4～6节段,采用Western blot法测定脊髓背角spectrin αⅡ降解产物、IκBα、环氧化酶-2(COX-2)的表达和NF-κB活性.结果 与C组比较,Z组MWT降低,PWTL缩短,足底最大厚度增厚,脊髓背角spectrin αⅡ降解产物和COX-2的表达上调,IκBα表达下调,NF-κB活性升高(P＜0.05或0.01),PBS组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脊髓背角卡配因活化参与了大鼠足底炎性痛的形成,其机制与激活NF-κB,上调COX-2表达有关.     

神经痛大鼠脊髓胶质细胞源性神经营养因子参与多巴胺D2受体激动剂对痛觉过敏的调制作用

目的 研究鞘内注射多巴胺D2受体激动剂喹吡罗对坐骨神经慢性压迫损伤大鼠脊髓水平胶质细胞源性神经营养因子表达的影响,探讨其介导抗伤害作用的可能机制. 方法 实验1：采用完全随机分组方法将30只成年雄性SD大鼠制作坐骨神经慢性压迫损伤（chronic constriction injury of sciatic nerve,CCI）模型分为5组（每组6只）：CCI＋生理盐水（NS组）、CCI＋喹吡罗0.1 μg（Q0.1组）、CCI＋喹吡罗1μg（Q1组）、CCI＋喹吡罗5 μg（Q5组）、CCI＋喹吡罗10 μg（Q10组）,分别在建模后第7天鞘内注射0.1、1、5、10 μg喹吡罗,NS组单次鞘内注射生理盐水10μl.于给药前及给药后0.5、1、2、4、8、16h测定大鼠术侧后足机械缩足反射阈值（paw withdrawal mechanical threshold,PWMT）和热缩足反射潜伏期（paw withdrawal thermal latency,PWTL）.实验2：将54只成年雄性SD大鼠制作CCI模型,并采用完全随机分组方法分为3组（Q5组、Q10组、NS组,每组18只）：Q5组、Q10组分别在建模后第7天鞘内注射5、10μg喹吡罗后0.5、1、2、4、8、16h处死取材,NS组单次鞘内注射生理盐水10μl;另取6只正常大鼠作为模型对照组（M组）,另取6只正常大鼠作为对照组（C组）.采用免疫印迹法测定脊髓背角胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic fact,GDNF）蛋白表达的变化. 结果 实验1：与NS组比较,Q0.1组注药后各时间点PWMT和PWTL差异无统计学意义（P＞0.05）,Q1组注药后2 h PWMT[（4.3±1.5）g]及PWTL[（13.2±1.6）s],Q5组注药后1,2、4 h PWMT[（4.7±1.6）、（5.3±1.6）、（4.7±2.1）g]和PWTL[（14.0±1.7）、（15.2±1.5）、（13.4±1.6）s],Q10组注药后1、2、4 h PWMT[（6.0±1.3）、（7.3±1.0）、（5.3±2.1）g]和PWTL [（15.3±1.8）、（17.5±1.2）、（14.9±1.7）s]明显升高（P＜0.05）.实验2：与C组比较,M组GDNF表达（0.95±0.09）明显升高（P＜0.05）.与M组和NS组比较,GDNF的表达Q     

鞘内注射突触后致密物质-95反义寡核苷酸对神经病理性疼痛小鼠痛行为学的影响

目的 探讨鞘内给予突触后致密物质-95(postsynaptic density protein-95,PSD-95)反义寡核苷酸对坐骨神经结扎小鼠疼痛行为的影响. 方法 选取鞘内置管成功的C57BL/6雄性小鼠48只,采用随机数字表法分为4组(每组12只):假手术组(Sham组)、生理盐水组(NS组)、PSD-95反义寡核苷酸组(A组)、PSD-95错义寡核苷酸组(M组).采用结扎坐骨神经的方法制备小鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(chronic constriction injury,CCI)模型,结扎坐骨神经后第1～14天,NS组、A组、M组分别鞘内注射生理盐水5μl、反义寡核苷酸5 μg/5μl、错义寡核苷酸5μg/5μl,1次/d.于术前1d及术后1、3、5、7、14、17、21 d测定小鼠结扎侧足底机械缩足反射阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和热缩足潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWL). 结果 A组小鼠术后1～14 d的疼痛阈值与Sham组维持一致[第14天,PWMT (5.69±1.34)g,P＞0.05;PWL(9.65±1.44)s,P＞0.05].术后17d,A组小鼠损伤侧足出现疼痛[PWMT (4.24±1.83)g,P＜0.05;PWL (7.18±0.41)s,P＜0.05],但是与NS组[PWMT (1.77±0.38)g,P＜0.05;PWL(4.33±1.21)s,P＜0.05]、M组[PWMT(1.6±0.37)g,P＜0.05;PWL (4.38±0.95)s,P＜0.05]比较,疼痛明显减轻,并且持续到术后第21天. 结论 在CCI所致神经病理性疼痛的发展阶段,连续鞘内给予PSD-95反义寡核苷酸可以完全逆转给药期内小鼠痛行为表现,并且在停止给药后7d仍有明显缓解疼痛的作用.     

脊髓水平神经型一氧化氮合酶在骨癌痛发生中的作用

目的 探讨脊髓水平神经型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)在小鼠骨癌痛发生中的作用.方法 72只C3H/Hej小鼠随机分为肿瘤组(n=40只)和假手术组(n=32只).肿瘤组再分为5组(n=8):T7组(肿瘤细胞接种后7 d),T10组(接种后10 d)和T14组(接种后14 d),L组(接种后14 d+L-NMMA)和C组(接种后14 d+溶剂),假手术组相应分为s7组(假手术7 d)、S10组(假手术10 d)、S14组(假手术14 d)和S组(假手术14 d+溶剂).将含105个纤维肉瘤NCTC 2472细胞的最小必需培养基(α-MEM)注射到小鼠右侧股骨远端骨髓腔内,制作骨癌痛模型.假手术组注入不含肿瘤细胞的α-MEM.按照分组在相应时间点处死小鼠,用RT-PCR的方法检测脊髓腰膨大nNOS mRNA水平.术后14 d,L组小鼠鞘内注射NOS抑制剂L-NMMA 50μg,给药前及给药后2 h、12 h、24 h检测小鼠痛行为学的变化:机械痛缩足阈值(PWMT)和热痛缩足潜伏期(PWTL).结果 肿瘤细胞接种后10 d,脊髓水平nNOS mRNA表达较假手术组增高(P<0.05),而接种后14 d nNOS mRNA水平与假手术鼠无差别;鞘内注射L-NMMA 50 μg明显改善早期骨癌痛小鼠的痛行为.结论 脊髓水平nNOS可能在小鼠骨癌痛发生的早期起作用,而癌痛的维持依赖于其他类型一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS).