大鼠无心跳供体热缺血损伤后供肝组织学与超微结构的动态变化

目的动态观察移植肝热缺血损伤后组织学与超微结构的变化特点，预测无心跳供体（NHBD）中供肝耐受热缺血的安全时限。方法实验动物按供肝热缺血时间分别为0、10、15、20、30、45、60min，随机分为7组。按各组条件分别作原位肝移植，动态观察单纯热缺血期和肝移植术后6h、24h、48h各组移植肝组织学、组织化学和超微结构变化规律。结果NHBD的供肝不仅发生热缺血阶段缺血缺氧造成的损伤，在移植肝复流后，也存在再灌注损伤，且再灌注期肝组织损伤的程度与热缺血时间长短有密切关系。热缺血30min以前，移植肝仅出现组织细胞的变性，未见明显坏死。45min组，肝组织可见小灶状的坏死，在小叶中央区首先发生。60min组，肝细胞坏死的范围扩大，呈片状或弥漫性分布；肝窦内皮细胞明显肿胀呈泡状或气球状，肝血窦阻塞，呈微循环障碍。结论大鼠供肝经受30min以内热缺血损伤，肝组织损伤处在可复性阶段。热缺血60min以后，呈现不可逆性的形态学改变。     

移植肝热缺血损伤后糖原及酶组织化学活性的动态变化

目的：探讨不同热缺血时间下大鼠移植肝组织糖原及酶组织化学活性变化规律，预测供肝耐受热缺血性的安全时限。方法：用组织化学和细胞化学的方法，对大鼠移植肝组织进行动态观察，按热缺血时间随机分为0、15、30、45、60min5组，观察肝移植后的恢复性变化。结果：随热缺血时间的延长，肝组织琥珀酸脱氢酶（SDH）、细胞色素氧化酶（CO）和三磷酸腺苷酸（Mg^2 ,ATPase)活性逐渐降低，糖原减少，热缺血30min以前各组酶活性变化轻微，而45、60min组均出现明显的酶活性降低和高碘酸－无色品红（PAS）反应减低，15、30min组，在复流后24h糖原颗粒逐渐增多，呈明显的恢复，酶活性逐渐恢复至接近正常水平，45、60min组，复流后24hPAS反应和酶活性仍无明显恢复趋势，结论：移植肝热缺血在30min以内，肝组织损伤仍处在可复性阶段，复流后能逐渐恢复至正常的形态和功能，移植肝糖原含量，酶组织化学活性的变化以及术后其恢复性的潜能可作为衡量供肝质量的重要标准。     

肝移植时供肝耐受无心跳热缺血的安全时限实验研究

目的 探讨肝移植时供肝耐受无心跳热缺血损伤的安全时限。方法 建立广西巴马小型猪原位肝移植动物模型并按移植前供肝经历心脏停搏时间0、30、45、60min分为4组，观测肝移植后各组一周存活率、肝功能、肝脏病理和肝脏能量代谢以及术中肝脏复流后微循环改变。结果上述各组术后一周存活率分别为：100％(5／5)、100％(5／5)、60％(3／5)、20％(1／5)。肝脏能量代谢等指标的改变在供肝无心跳热缺血时间30min前是可逆的，随心跳热缺血时间的延长远渐向不可逆演变。结论 在本实验条件下，巴马小型猪心脏停搏供体肝移植时供肝耐受无心跳热缺血损伤的安全时限约为30min。     

移植肝热缺血损伤后糖原及酶组织化学性的动态变化

目的探讨不同热缺血时间下大鼠移植肝组织糖原及酶组织化学活性变化规律,预测供肝耐受热缺血的安全时限.方法用组织化学和细胞化学的方法,对大鼠移植肝组织进行动态观察.按热缺血时间随机分为0、15、30、45、60min 5组,观察肝移植后的恢复性变化.结果随热缺血时间的延长,肝组织琥珀酸脱氢酶(SDH)、细胞色素氧化酶(CO)和三磷酸腺苷酶(Mg2+-AT Pase)活性逐渐降低,糖原减少.热缺血30min以前各组酶活性变化轻微,而45、60min组均出现明显的酶活性降低和高碘酸-无色品红(PAS)反应减低.15、30min组,在复流后24h糖原颗粒逐渐增多,呈明显的恢复,酶活性逐渐恢复至接近正常水平.45、60min组,复流后24h PAS反应和酶活性仍无明显恢复趋势.结论移植肝热缺血在30?min以内,肝组织损伤仍处在可复性阶段,复流后能逐渐恢复至正常的形态和功能.移植肝糖原含量、酶组织化学活性的变化以及术后其恢复性的潜能可作为衡量供肝质量的重要标准.     

不同热缺血时间对大鼠移植肝功能状态及存活期的影响

目的：探讨不同热缺血时间条件下，大鼠原位肝移植术后肝脏功能和组织形态变化规律，并对动物远期存活情况进行观察，预测无心跳供体（NHBD）中供肝耐受热缺血的安全时限。方法：实验动物按供肝热缺血时间分别为0、10、15、20、30、45、60min，随机分为7组。然后按各组条件分别作原位肝移植，观察肝移植后24、48h、3和5d各组肝脏功能和组织形态的恢复性变化，并统计生存时间。结果：供肝经受30min以内热缺血损伤，各组移植术后生存天数差异无显著性，热缺血30min组，肝移植术后1周的存活率达到83.3％（10/12），1个月和3个月存活率分别为58.3％（7/12）和50.0％（6/12）。热缺血45min组，术后1周的存活率为66.7％（8/12），但1个月和3个月存活率分别为33.3％（4/12）和8.3％（1/12）。至于热缺血60min组，1周的存活率仅为8.3％（1/12）。结论：大鼠的供肝可以安全地耐受30min以内的热缺血。45min的热缺血损伤，虽对术后1周存活率无明显影响，但大鼠肝移植术后的远期存活时间明显缩短。60min以后，移植肝组织的结构和功能均难以恢复，大鼠术后生存天数显著降低。     

热缺血损伤对大鼠移植肝组织能量代谢及存活期的影响

目的：探讨不同热缺血时间下大鼠肝组织能量代谢变化规律,预测供肝耐受热缺血的安全时限。方法：实验动物按供肝热缺血时间分别为0、10、15、20、30、45和60min,随机分为7组。采用反相高效液相色谱法测定单纯热缺血后肝组织能量代谢指标并进行超微结构的观察。然后按各组条件分别作原位肝移植,观察移植后24、48h各组肝组织能量代谢指标的恢复性变化,并统计生存时间。结果：供肝经受热缺血损伤后,肝组织ATP含量和EC水平远逐渐下降,其中前30min下降比较急剧,以后趋向平缓。热缺血30min内肝组织ATP含量和EC水平在肝移植再复流24h后基本得到恢复,术后大鼠仍可以获长期存活。45min组,移植肝在48h后能量代谢的功能也基本恢复,虽不足以影响术后的1周存活率,但对大鼠肝移植术后的3个月存活率影响显著。60min组,肝脏能量代谢储备功能难以恢复,大鼠术后生存天数显著降低。结论：供肝组织三磷酸腺苷（ATP）含量和能荷（EC）水平以及其移植术后恢复的潜能是衡量供肝质量的重要标准。供肝热缺血损伤的时间与肝组织能量代谢功能的恢复及术后动物生存情况密切相关。     

肝移植术中应用S-腺苷-L-蛋氨酸对供肝热缺血损伤的影响

目的探讨术中S-腺苷-L-蛋氨酸（SAMe）加入UW液和血浆冲洗液对热缺血损伤供肝及其恢复的影响。方法建立10min热缺血大鼠肝移植模型，分为A组：UW液灌注＋乳酸钠林格氏液冲洗、B组：UW液灌注＋血浆冲洗、C组：SAMe加入UW液灌注＋血浆冲洗和D组：UW液灌注＋SAMe加入血浆冲洗4组，观察肝组织组织病理学变化和电子显微镜下超微结构变化，并检测血清AST和透明质酸。结果C组和D组术后24h血清AST均低于B组（P〈0．05）。A组术后3h和24h血清HA高于B组（P〈0．05），B组复流后3h及24h血清HA均高于C组和D组（P〈0．05）。组织病理学表现B组复流后3h和24h肝细胞损伤和微循环紊乱较C组和D组明显；超微结构表现，A组复流后3h线粒体肿胀，肝窦内皮细胞肿胀，细胞核不规则，可见内皮细胞凋亡，大部分区域肝窦状隙明显狭窄，内皮层结构模糊，红细胞淤积，受压变形，白细胞附壁，可见内皮层完整性破坏；复流后24h，可见线粒体嵴断裂，核融解。B组内皮细胞损伤较A组轻，C组和D组超微结构表现微循环紊乱和肝细胞损伤表现较B组轻。结论供肝切取术中UW液中加入SAMe灌注保存，血浆冲洗液中加入SAMe可改善热缺血供肝微循环，减轻缺血再灌注损伤，并减轻肝细胞热缺血损伤，有利于10min热缺血供肝功能的恢复。     

大鼠心脏停搏供体肝移植的实验研究

目的 探讨大鼠原位肝移植过程中,供肝可能耐受心脏停搏热缺血损伤的时间极限,方法 雄性SD大鼠,以供肝获取前供体大鼠经历心脏停搏时间0、15、30、45、60min分为5组（HB组、N-15组、N-30组、N-45组和N-60组）,而后行大鼠原位肝移植,比较各组的术后肝功能、肝脏病理和存活率。结果 HB、N-15、N-30、N-45和N-60的大鼠肝移植术后1周存活率分别为：100%（8/8）、75%（6/8）、62.5%(5/8)、25%（2/8）和0%（0/8）。其中HB、N-15、N-30组和N-45组的大鼠肝移植最长存活时间超过30d。结论 大鼠供肝对于热缺血损伤的时间应越短越好,但耐受30min心脏停搏热缺血损伤时,仍可使1周存活率达62.5%,极限时间为45min。     

猪肝移植时无心跳供体耐受热缺血时间的研究

目的 探讨猪肝移植时供肝耐受无心跳热缺血损伤的安全时限。方法 对24头小型家猪根据供肝热缺血时间0、15、30、45min，随机分为4组，而后行原位肝移植，分析移植后肝脏丙氨酸氨基转移酶（ALT）、乳酸脱氢酶（LDH）、三磷酸腺苷（ATP）的含量以及病理变化。结果 WI-45组胆管吻合前无胆汁流出。WI-15、30、45组血清ALT、LDH、肝细胞ATP的含量与WI-0组比较，差异有统计学意义（P〈0．05），WI-15、30组间差异无统计学意义（P〉0．05），但WI-45组与WI-15、30组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。电镜下观察WI-15、30组肝组织呈可复性改变，WI-45组则呈不可逆性改变。结论 猪肝移植时，供肝耐受无心跳热缺血损伤的的安全时限为30min。     

供体热缺血时间对移植肝的影响

目的 探讨大鼠动脉化原位肝移植中供体热缺血时间对移植肝的影响.方法 实验分为4组:对照组(C)和移植组,移植组根据供肝获取前经历供体心脏停搏时间的不同分为三组:热缺血0 min(W0)、热缺血15 min(W15)和热缺血30 min(W30),其后建立近交系大鼠动脉化原位肝移植模型,每组均为30只大鼠,分别于术后3、7、14和30 d处死,每个时间点各取6只大鼠,分别测定移植肝组织学、肝功能的变化.此外,移植组各组随机选取6只大鼠观察长期生存率(＞100 d).结果 随着供肝热缺血时间的延长,移植肝损伤加重,恢复过程延长.移植组和对照组术后3、7、14和30 d血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)变化无显著性差异.血清碱性磷酸酶(ALP)随着供肝热缺血时间的延长逐渐增高,14 d达到高峰后逐渐下降.术后3、7、14和30 d ALP与供肝热缺血时间具有显著相关性.术后热缺血0、15、30 min长期生存率组分别为100.0%(6/6)、83.3%(5/6)、66.7%(4/6),3组间比较差异无统计学意义(P=0.285).结论 肝移植过程中供肝热缺血主要损伤肝细胞,并随着供肝热缺血时间的延长移植肝细胞损伤加重,肝细胞功能恢复早于其形态学恢复.肝移植术后早期存在胆汁淤积,供肝热缺血时间的延长明显加重胆汁淤积的程度,胆汁淤积的恢复明显晚于肝细胞损伤指标的恢复.在热缺血30 min内来自于心脏停搏的供肝肝移植术后是安全的.     

The portosystemic shunt protects liver against ischemic reperfusion injury.

BACKGROUND: The goal of this study was to characterize the importance of splanchnic viscera in liver ischemic reperfusion injury and to enhance the tolerance of liver to warm ischemia injury with portosystemic shunt. METHODS: The hepatic blood flow of male Sprague Dawley rats was subjected to 45, 60, 120, and 150 min liver warm ischemia with or without portosystemic shunt (splenic-caval shunt). The production of tumor necrosis factor a (TNFa), nuclear factor-kappaB activation, inducible NO synthase (iNOS) expression, and apoptosis were examined. RESULTS: A total of 67% of rats with 45 min liver warm ischemia (n=6) and 100% of rats with 60 min liver warm ischemia (n=6) died within 1 day. However, all rats with 120 min (n=8) liver warm ischemia in splenic-caval shunt group survived for over 1 day, 6/8 for over 3 days, and 5/8 for over 5 days without significant histological changes of the liver. Serum tumor necrosis factor levels in liver warm ischemic rats were increased, This increase was significantly reversed after portosystemic shunt. After challenge with lipopolysaccharide (1 mg/kg, p.v.), naive rats survived for over 5 days (n=4) with the peak value of rat tumor necrosis factor (240 pg/ml) at 90 min. In contrast, all rats died within one day (n=5) with the peak value of rat tumor necrosis factor a (465 pg/ml) at 45 min after administration of lipopolysaccharide in the rats with liver warm ischemia plus splenic-caval shunt. iNOS expression and nuclear factor-kappaB activation were very strongly increased in the hepatocytes after liver warm ischemia with portosystemic shunt, compared with liver ischemia without portosytemic shunt. CONCLUSIONS: We conclude that the splanchnic viscera can contribute to liver ischemic reperfusion injury. Portosystemic shunt enhances the tolerance of liver to warm ischemia through the protective role of iNOS and nuclear factor-kappaB (NF-kappaB).     

Study of the Changes of Serum Hyaluronic Acid During Porcine Liver Transplantation: Influence of Warm Ischemia

Abstract: Twelve porcine liver transplantations were performed to investigate whether serum hyaluronic acid (HA) serves as a marker of warm ischemic injury. Group 1 was a control without warm ischemia (n = 7), and pigs in Group 2 were sacrificed by intracardiac KC1 injection 60 min before harvesting (n = 5). All pigs survived more than 4 days in Group 1. In Group 2, all died within 2 days due to graft failure. Arterial and hepatic venous glutamic-oxaloacetic transaminase (GOT) in Group 2 were higher after revascularization. However, there were no differences between the 2 groups in arterial and hepatic venous HA levels. HA clearance by the graft also showed no differences between the groups. Although GOT reflected the degree of warm ischemia, HA and its hepatic clearance were not influenced by warm ischemic damage. In conclusion, HA was not thought to serve as a marker of liver injury when the graft suffered from warm ischemia.     

Prevention of ischemia-reperfusion-induced hepatic microcirculatory disruption by inhibiting stellate cell contraction using rock inhibitor

BACKGROUND: We demonstrated that hepatic stellate cells (HSCs) isolated from rat livers exposed to warm ischemia are significantly contractile when compared with HSCs from intact rat livers. This suggests that ischemia-reperfusion (IR)-induced impairment of sinusoidal microcirculation results, at least in part, from contraction of HSCs. METHODS: Rho-associated coiled-coil forming protein serine/threonine kinase (ROCK) is one of the key regulators of HSCs motility. Therefore we investigated whether Y-27632, a p160ROCK-specific inhibitor, has beneficial effects on warm IR injury in an in vivo rat partial liver IR model and a rat orthotopic liver transplantation model. RESULTS: After reperfusion following 90 min of warm ischemia, livers in untreated control rats had persistent congestion and impaired mitochondrial respiration, as demonstrated by increasing deoxy-hemoglobin and reduced cytochrome oxidase contents in the hepatic tissues using in vivo near-infrared spectroscopy. Serum levels of transaminase and endothelin (ET)-1 in these rats were markedly increased 1 hr after reperfusion. In contrast, when Y-27632 (3-30 mg/kg) was administered orally, hepatic tissue contents of deoxy-hemoglobin and cytochrome oxidase rapidly normalized. In such animals, the elevation of serum transaminase levels, but not that of ET-1 levels, was significantly suppressed. This is consistent with in vitro data demonstrating that Y-27632 causes HSCs to undergo relaxation even in the presence of ET-1. Moreover, in a rat orthotopic liver transplantation model, Y-27632 pretreatment dramatically improved the survival of recipients with liver grafts subjected to 45 min of warm ischemia. CONCLUSIONS: Y-27632 attenuates IR-induced hepatic microcirculation disruption by inhibiting contraction of HSCs.     

梗阻性黄疸SD大鼠肝热缺血再灌注损伤模型的建立

目的构建阻塞性黄疸合并肝热缺血再灌注损伤的SD大鼠模型。 方法选择SD大鼠40只随机分为4组：假手术组（Sham组）、梗阻7天组（7 d组）、梗阻14天组（14 d组）及梗阻21天组（21 d组）,每组10只。通过双重结扎并切断胆总管建立SD大鼠阻塞性黄疸模型,探索最佳梗阻时间。梗阻7 d后另择SD大鼠62只,再随机分为4组：未缺血组（0 min组,10只）、缺血15 min组（15 min组,12只）、缺血30 min组（30 min组,16只）、缺血45 min组（45 min组,24只）,分别行肝门部血管阻断0、15、30、45 min后再灌注,建立后续肝热缺血再灌注损伤模型,观察生化指标、生存率及病理学改变。 结果梗阻7 d时适合下一步建模。建立阻塞性黄疸模型后,随着肝门部血管阻断时间的延长,肝功能进行性下降,大鼠死亡率逐渐升高,各组间的差异具有统计学意义（P<0.05）;随阻断时间的延长,肝脏损害的病理学表现更为严重。其中肝门部血管阻断30 min时24 h死亡率50%,再灌注2 h后病理学上出现严重的肝细胞变性、坏死改变。 结论对于梗阻性黄疸的SD大鼠,在梗阻7 d后行肝门部血管阻断30 min再恢复血流,可有效建立梗阻性黄疸大鼠的肝缺血再灌注损伤模型。     

外源性三磷酸腺苷-氯化镁预处理对大鼠供肝热缺血损伤的保护作用

目的 观察三磷酸腺苷-氯化镁(ATP-MgCl2)预处理对无心跳大鼠供肝热缺血损伤的保护作用.方法 根据ATP-MgCl2预处理与否及供肝获取前经历的供体心脏停搏时间(即热缺血时间)30min或45min,将实验动物分为4组,即非预处理的30min(N-30min)组和45min(N-45min)组,以及ATP-MgCl2预处理的30min(tN-30min)组和45min(tN-45min)组行原位肝移植,观察存活状况,取材行光学显微镜及电子显微镜检查,移植术后1、3、7d 采集血样检测肝功能.结果 N-30min组和N-45min组的1周存活率分别为50.0%和16.7%,而tN-30min组和tN-45min组的1周存活率分别为83.3%和66.7%,预处理组移植肝脏的病理及肝功能明显好于非预处理组.结论 ATP-MgCl2预处理能够减轻供肝的热缺血损伤,改善肝功能,减轻病理损害,提高大鼠肝移植的存活率.