盐酸埃他卡林对H2O2所致PC12细胞损伤的保护

目的:研究KATP 通道开放剂盐酸埃他卡林(iptakalimhydrochloride ,Ipt)对H2 O2 所致PC12细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法:采用培养的PC12细胞,MTT法测定细胞存活率,HPLC法测定细胞培养液中谷氨酸(Glu)的含量,荧光法测定胞内钙离子([Ca2 ]i)浓度。结果:Ipt可浓度依赖性的拮抗H2 O2 介导的细胞毒性,提高细胞生存率,降低胞外Glu的释放以及胞内Ca2 浓度。该保护作用可被2 0 0 μmol·L- 15 - HD(线粒体KATP通道阻断剂)部分拮抗。结论:Ipt可拮抗H2 O2 介导的细胞损伤作用,该保护作用可能与线粒体ATP敏感性钾通道相关。     

盐酸埃他卡林对脑神经元钠、钾、钙通道的影响

目的　研究盐酸埃他卡林 (Ipt)对脑神经元钠、钾、钙通道的影响。方法　在原代培养的大鼠海马神经元上 ,应用膜片钳全细胞记录技术观察Ipt对钠、钾、钙离子通道电流的影响。结果　Ipt对钠、钙电流幅度以及电流 -电压曲线无影响 ,可增强外向钾电流幅度 ,使电流 -电压曲线上移。其中 ,Ipt 1、10、10 0 μmol·L-1分别使钾通道电流峰值增大为给药前的 (12 1 9± 8 1) %、(114 7± 7 1) %和 (10 9 1±10 0 ) % (P <0 0 1～ 0 0 5 )。给予盐酸埃他卡林 1μmol·L-1的同时给予ATP敏感性钾通道拮抗剂格列本脲 30 μmol·L-1时 ,对钾通道电流无影响。结论　盐酸埃他卡林对脑神经元ATP敏感性钾通道具有激活作用 ,它不影响神经元钠通道和钙通道     

开放线粒体KATP通道对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的观察ATP敏感性钾通道(KATP)开放剂二氮嗪对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法采用过氧化氢(500 μmol·L-1)诱导法制备大鼠培养心肌细胞氧化应激损伤模型,通过检测培养液中乳酸脱氢酶以及用流式细胞仪结合罗丹明-123和碘化丙啶双标记法检测线粒体膜电位和细胞存活状态,观察二氮嗪(100 μmol·L-1)对氧化应激损伤的保护作用.结果二氮嗪预处理后,细胞培养液中乳酸脱氢酶活性较过氧化氢处理组显著降低(P＜0.01),细胞存活率升高,并可减少氧化应激造成的线粒体膜电位的丢失,其作用可被线粒体KATP通道阻断剂5-羟基癸酸酯所拮抗.结论二氮嗪对过氧化氢造成的培养心肌细胞氧化应激损伤具有保护作用,其可能通过激活线粒体KATP通道介导.     

盐酸埃他卡林对缺氧诱导神经细胞凋亡的影响

目的 :探讨盐酸埃他卡林 (Ipt)对缺氧诱导的大鼠皮质神经细胞凋亡的影响。方法 :用电镜和流式细胞分析技术 ,检测原代培养的大鼠皮质神经细胞凋亡 ;应用免疫组化法 ,观察凋亡相关蛋白Bcl 2、Bax表达的改变。结果 :Ipt 10 μmol·L-1可减轻缺氧诱导的细胞染色质浓缩现象 ,逆转缺氧诱导的Bcl 2表达的下调 ,对Bax表达无显著影响 ;Ipt(0 .1～10 μmol·L-1)能剂量依赖性地降低凋亡细胞百分率 ,以 10 μmol·L-1浓度组效果最好 ,其作用可被ATP敏感性钾通道特异性阻断剂格列本脲 (Gli)所拮抗。结论 :Ipt对缺氧诱导的神经细胞凋亡有明显的抑制作用 ,其作用机制与ATP敏感性钾通道、Bcl 2表达相关。     

格列本脲和亚甲蓝对缺氧诱发离体猪冠脉—过性舒张的影响

缺氧可诱发KC1 25 mmol·L~(-1)预收缩离体猪冠脉产生双相反应,先短暂(持续4.3±s0.8 min)舒张,随后持续收缩;除去内皮可消除缺氧诱发的冠脉舒张反应,并几乎完全消除收缩反应,格列本脲0.1,0.5,2.5和亚甲蓝5,10μmol·L~(-1)均可浓度依赖地抑制缺氧诱发的冠脉舒张反应;格列本脲2.5和亚甲蓝10μmol·L~(-1)合用可几乎完全消除此种舒张反应,提示缺氧诱发离体猪冠脉一过性舒张可能由ATP敏感性钾通道和内皮舒张因子(EDRF)共同中介。     

牛磺酸对次氯酸诱导的大鼠肝细胞核核苷三磷酸酶损伤的保护作用

目的探讨牛磺酸对次氯酸(hypochlorous acid,HOCl)诱导的大鼠肝细胞核核苷三磷酸酶(NTPase)损伤的保护作用。方法体外分离大鼠肝细胞核,用HOCl单独或与牛磺酸共同孵育,分别以ATP和GTP作底物检测核NTPase的活性。结果ATP和GTP作底物时,HOCl(1×10^-9～5×10^-6 mol·L^-1)以浓度依赖的方式抑制NTPase活性。牛磺酸(1×10^-6～1×10^-4 mol·L^-1)可显著拮抗HOCl(1×10^-6 mol·L^-1)导致的NTPase活性降低。另外,牛磺酸(1×10^-6～1×10^-4 mol·L^-1)单独孵育肝细胞核,对NTPase有轻度刺激作用。结论牛磺酸可浓度依赖地拮抗HOCl诱导的肝细胞核NTPase活性下降,此作用可能是其保护机制之一。     

大鼠胃平滑肌细胞收缩模型及其药物研究

目的 建立胃平滑肌收缩的实验模型并且对相应治疗药物的作用进行评价。方法 采用分离大鼠胃底平滑肌,用胶原酶和胰蛋白酶进行消化培养,得到离体平滑肌细胞悬液。用Trypan blue稀释法检查,通过带刻度显微镜观察和标测细胞的形态和长度,并观察在不同的时间范围内细胞形态和长度的变化情况,计算细胞存活率和存活时间。于细胞悬液加入各种神经介质乙酰胆碱(ACh)、5-羟色胺(5-HT、组织胺(His)引起刺激反应,同时加入其相应的拮抗剂阿托品(atropine)、多潘立酮(Domp)、苯海拉明(Diph)时,观察细胞形态和长度的前后变化,从而对模型和药物的作用进行评价。结果 每只大鼠胃底均能收获1×10~6以上个细胞,细胞存活率在95％以上,细胞至少可存活2.5 h。ACh能引起胃平滑肌细胞的收缩,具有明显的量效关系,1×10~(-8)mol·L~(-1)即可产生最大收缩反应(38.0％)。atropine对乙酰胆碱的拮抗作用有明显的量效关系。5-HT对大鼠胃底平滑肌细胞具有明显的收缩作用,井有明显的量效关系。Domp能够拮抗5-HT的细胞收缩作用,并具有一定的量效关系。5-HT的量效曲线比较平坦,可能至少有2种受体参与细胞的收缩作用,它们引起细胞收缩的最大效应分别为20.7％和10.5％。His引起的平滑肌细胞收缩,在1×10~(-13)～1×10~(-10) mol·L~(-1)内有?     

6种黄酮类化合物拮抗肝细胞毒性作用的比较

目的观察芹菜素、木犀草素、白杨素、高良姜素、山奈酚、黄芩素6种结构相近的黄酮类化合物对肝毒性物质诱导的人正常肝细胞株L-02细胞及小鼠原代肝细胞损伤的保护作用,并对其保护肝细胞损伤活性的强弱进行比较及结构分析。方法培养的L-02细胞及小鼠原代肝细胞分别给予10mmol·L~(-1)四氯化碳(CCl_4)、500μmol·L~(-1)牛磺酸脱氧胆酸(TDCA)、2μmol·L~(-1)川楝素(toosendanin,TSN)和25μmol·L~(-1)千里光碱(senecionine,SENE)诱导细胞凋亡。6种黄酮类化合物(100μmol·L~(-1))分别与细胞预孵15min后,加入肝毒性物质,48h后MTT法检测细胞存活率。结果与空白对照组相比,4种肝毒性药物都能明显降低肝细胞的存活率(P<0.01)。黄酮类化合物处理后,黄芩素和山奈酚能不同程度地提高肝细胞损伤模型组的细胞存活率(P<0.01)。其他4种黄酮类化合物对肝细胞存活率无显著作用。结论黄芩素和山奈酚具有抑制肝毒性物质诱导的L-02细胞和小鼠原代肝细胞毒性的作用,有潜在的抗氧化保肝活性,而芹菜素、木犀草素、白杨素、高良姜素无明显的拮抗肝毒性作用。     

盐酸埃他卡林对PD模型大鼠脑内突触体谷氨酸摄取的影响

目的　研究谷氨酸转运体功能改变与帕金森病(Parkinson’sdisease ,PD)发病的相关性 ,探讨新型ATP敏感性钾通道 (ATPsensitivepotassiumchannel,KATP)开放剂盐酸埃他卡林 (Iptakalimhydrochloride ,Ipt)对PD模型大鼠脑内突触体摄取谷氨酸的影响及其机制。方法　采用 6 hydrox ydopamine(6 OHDA)建立PD大鼠模型 ,制备脑组织突触体 ;用同位素标记法测定L [3 H] glutamate摄取活性。 结果　PD模型大鼠纹状体和皮层的谷氨酸转运功能明显降低 ;Ipt(10、5 0和 10 0 μmol·L-1)具有恢复转运功能的作用 ,此作用可被KATP阻断剂Glibenclamide (2 0 μmol·L-1)逆转。结论　谷氨酸转运体功能下降与PD发病密切相关 ;Ipt通过激活KATP发挥促进谷氨酸摄取的作用 ,有望成为新一代PD治疗药物     

吡那地尔对低氧低糖诱导神经细胞凋亡的抑制作用

目的　探讨ATP敏感性钾通道 (KATP)开放剂吡那地尔 (Pin)对低氧低糖再复氧诱导的大鼠皮质神经细胞凋亡的影响。方法　用电镜和流式细胞分析技术 ,检测原代培养的大鼠皮质神经细胞凋亡。结果　低氧低糖再复氧可诱导大鼠皮质神经细胞凋亡。Pin ( 10 - 5,10 - 6 ,10 - 7mol·L- 1 ) 3个剂量组均能降低凋亡细胞百分率 ,以 10 - 5mol·L- 1 组效果最好。上述作用可被KATP特异性阻断剂格列苯脲 (Gli)所拮抗。结论　Pin对低氧低糖再复氧诱导的大鼠皮质神经细胞凋亡有明显的抑制作用 ,提示KATP通道在调控细胞凋亡的过程中可能起着重要的作用。     

盐酸埃他卡林对心肌ATP-敏感性钾通道的作用

目的　在急性分离的豚鼠心室肌细胞上观察盐酸埃他卡林 (iptakalimhydrochloride ,Ipt)对钾电流的影响 ;研究Ipt对 [3 H]格列本脲 (glibenclamide ,Gli)与心肌ATP敏感性钾通道 (ATP sensitivepotassiumchannel,KATP)的硫脲受体(Sulfonylureareceptor,SUR2A)结合特征以及 [3 H]Gli与心肌膜KATP结合和解离动力学过程的影响 ,以评价Ipt对心肌KATP的作用。方法　分离豚鼠心室肌细胞 ,用全细胞记录技术记录细胞钾电流 ,通过浴槽内灌流给药 ,观察盐酸埃他卡林对钾电流的影响。KATP拮抗剂 [3 H]Gli与大鼠心肌膜特异性结合与解离的动力学试验。结果　①Ipt在浓度为 1和10 0 μmol·L-1时 ,均可明显引起豚鼠心室肌外向钾电流I U曲线上移 ,Ipt作用后 5min内细胞外向钾电流强度分别增强为初始电流强度的 12 4 9%± 9 5 % (n =5 )和 15 1 6 %±11 2 % (n =7) ,与溶媒对照组 (6 9 8%± 3 5 % ,n =7)比较差异均有统计学意义 (P <0 0 1)。在相同条件下 ,KATP开放剂吡那地尔 (pinacidil,Pin)的作用与之相似 ,也可明显引起豚鼠心室肌外向钾电流I U曲线上移 ,显著增强细胞外向钾电流。②非标记Gli与 [3 H]Gli和大鼠心肌膜标本在 2 5℃孵育 6 0min ,可浓度依赖性地抑制 [3 H]Gli与心肌膜SUR2A的特异性结合 ,其IC50 值为 (     

Protective effects of iptakalim, a novel ATP-sensitive potassium channel opener, on global cerebral ischemia-evoked insult in gerbils

AIM: To investigate the protective role of iptakalim, a novel ATP sensitive potassium channel opener, on global cerebral ischemia-evoked insult in gerbils and glutamate-induced PC12 cell injury. METHODS: Global cerebral ischemia was induced by occluding the bilateral common carotid arteries in gerbils for 5 min. The open field maze and T-maze were employed to investigate the experimental therapeutic value of iptakalim on ischemic brain insult (n=8). The pyramidal cells in the hippocampal CA1 regions were counted to assess the protective effects of iptakalim. Glutamate released from the gerbil hippocampus and PC12 cells were determined by HPLC. Intracellular calcium was measured by Fluo-3 AM with A Bio-Rad Radiance 2100TM confocal system in conjunction with a Nikon TE300 microscope. Astrocyte glutamate uptake measurements were determined by liquid scintillation counting. RESULTS: Iptakalim (0.5-4.0 mg/kg per day, ip) could reduce the high locomotor activity evoked by ischemia and improve global cerebral ischemia-induced working memory impairments. Histological studies revealed that iptakalim could increase the survival neuron in the hippocampus CA1 zone in a dose-dependent manner. Moreover, iptakalim could reverse ischemia-evoked increases of glutamate in the hippocampus of gerbils. In an in vitro study, iptakalim protected PC12 cells against glutamate-induced excitotoxicity, reduced the [Ca(2+)](i) increases, and enhanced the glutamate uptake activity of primary cultured astrocytes. CONCLUSIONS: Iptakalim plays a key role in preventing global cerebral ischemia-evoked insults in gerbils and glutamate-induced PC12 cell injury by anti-excitotoxicity. Iptakalim might be a promising novel candidate for the prevention and/or treatment of stroke.     

补肾方含药血清促进PC12细胞增殖及其拮抗谷氨酸神经毒作用的研究

目的运用中药血清药理学方法研究补肾复方含药血清(BS)促进体外培养的PC12细胞增殖及其拮抗谷氨酸兴奋性神经毒损伤的作用.方法以MTT法观察BS对体外培养的PC12细胞活力的影响及其拮抗谷氨酸损伤的作用,采用流式细胞仪观察BS对谷氨酸所诱导PC12细胞凋亡的影响.结果 BS含药血清可以增强PC12细胞活力,拮抗谷氨酸的兴奋性神经毒作用且在20%浓度时作用最强,并且能够抑制谷氨酸诱导的PC12细胞早期凋亡.结论补肾方BS可能具有神经保护作用.     

垂体腺苷酸环化酶激活肽诱导PC12细胞突起生长的作用

目的　研究垂体腺苷酸环化酶激活肽（ＰＡＣＡＰ） ３８与ＰＡＣＡＰ２７ 在ＰＣ１２ 细胞突起生长中的作用，并探讨介导其作用的受体和细胞内第二信使机制。方法　采用ＰＣ１２细胞分散培养法，观察接种７２ ｈ 时ＰＣ１２ 细胞突起生长阳性细胞的百分比。结果　当ＰＡＣＡＰ３８ 和ＰＡＣＡＰ２７ 的浓度为１ ×１０－ ７ ～１ ×１０－ １１ ｍｏｌ·Ｌ－１ 之间时，均能诱导ＰＣ１２细胞突起生长，其中以１×１０ －９ ｍｏｌ·Ｌ－ １ 的浓度作用最明显，量效曲线呈“钟”形。ＰＡＣＡＰ Ⅰ型受体拮抗剂ＰＡＣＡＰ６～３８和ｃＡＭＰ依赖的蛋白激酶抑制剂ＲｐｃＡＭＰＳ 能显著地抑制ＰＡＣＡＰ诱导ＰＣ１２ 细胞突起生长的作用，而蛋白激酶Ｃ 抑制剂Ｈ７ 却没有这个作用。结论　ＰＡＣＡＰ３８ 和ＰＡＣＡＰ２７均能诱导ＰＣ１２ 细胞突起生长，该作用是由ＰＡＣＡＰ Ⅰ型受体介导的，是通过细胞内ｃＡＭＰ 依赖的蛋白激酶系统实现的     

Effects of systemic administration of iptakalim on extracellular neurotransmitter levels in the striatum of unilateral 6-hydroxydopamine-lesioned rats.

The function of ATP-sensitive potassium (KATP) channels in nigrostriatal pathway in Parkinson's disease (PD) was studied by employing a novel KATP channel opener iptakalim (Ipt). Apomorphine-induced rotation behavior test and microdialysis experiment were carried out in unilateral 6-hydroxydopamine (6-OHDA) lesioned rats. Behavior test showed that systemic administration of Ipt failed to significantly alleviate apomorphine-induced rotation in unilateral 6-OHDA-lesioned PD model rats. However, using in vivo microdialysis in this PD model rats, it was found that Ipt could increase extracellular dopamine levels in the lesioned side of the striatum and decrease dopamine levels in the intact side of the striatum. Meanwhile, Ipt had no influence on glutamate levels in the intact side, but it did decrease glutamate levels in the lesioned side of the striatum of PD rats. Additionally, in primary cultured rat astrocytes, 6-OHDA decreased overall glutamate uptake activity, but this decrease was recovered and glutamate uptake activity was restored by the opening of KATP channels induced by Ipt and pinacidil. The classical KATP channel blocker glibenclamide completely abolished the effects of Ipt and pinacidil. The present study suggests that (i) the function of KATP channels in the lesioned and intact nigrostriatal pathway is different in unilateral 6-OHDA-lesioned PD model rats. (ii) KATP channels regulate extracellular neurotransmitter levels in the striatum of unilateral 6-OHDA-lesioned rats and may play neuroprotective roles due to their effects on glutamate transporters.     

埃他卡林增强星形胶质细胞摄取谷氨酸的作用

目的研究新型ATP敏感性钾通道开放剂(KATPCO)埃他卡林(iptakalim,Ipt)对星形胶质细胞摄取谷氨酸的影响。方法取新生大鼠脑星形胶质细胞作原代培养，将Ipt直接作用于细胞，观察它对正常和6-羟基多巴胺(6-OHDA)损伤模型细胞摄取谷氨酸的影响；分别加入阳性对照药吡那地尔和非特异性钾通道阻断药格列本脲分析Ipt的作用机制。根据［³H］标记的D,L-谷氨酸摄入量判断细胞谷氨酸摄取作用强度。结果Ipt和吡那地尔都能增强星形胶质细胞的谷氨酸摄取作用、逆转6-OHDA引起的谷氨酸摄取抑制效应，预先加入格列本脲后，上述作用均被取消。结论埃他卡林可能通过促进钾通道开放增强星形胶质细胞摄取谷氨酸的作用。     

Iptakalim protects against MPP+-induced degeneration of dopaminergic neurons in association with astrocyte activation

Astrocyte activation observed in the MPTP mouse model and Parkinson's disease patients participates in the cascade of deleterious events that ultimately leads to death of dopaminergic neurons in the substantia nigra pars compacta (SNpc). The present study aimed to elucidate whether inhibiting astrocyte activation was involved in the protective effects of iptakalim (Ipt), a novel ATP-sensitive potassium channel opener, on MPP+-induced degeneration of dopaminergic neurons. The results showed that Ipt could decrease MPP+-induced TNF-alpha release and p38 MAPK activation in reactive astrocytes. The effects of Ipt were reversed by the mitochondrial KATP blocker, 5-hydroxydecanoate, indicating that mitochondrial KATP channels participate in the regulation of astrocyte activation. Moreover, systematic administration of Ipt could significantly alleviate MPP+-induced behavioural symptoms in motor coordination, the loss of dopaminergic neurons, and the activation of astrocyte and microglia in the SNpc. Together, these findings suggest that Ipt may protect against MPP+-induced degeneration of dopaminergic neurons by inhibiting astrocyte activation and subsequent release of pro-inflammatory factors.