miR-338-3p对甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1增殖、侵袭、迁移和上皮-间质转化的调控作用

目的 探讨微小RNA-338-3p(miR-338-3p)过表达靶向沉默信息调节因子（SIRT）6对人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1增殖、侵袭、迁移和上皮-间质转化（EMT）的影响。方法 采用荧光素酶报告实验分析miR-338-3p与SIRT6的靶向关系。构建SIRT6 pcDNA载体过表达SIRT6,将miR-338-3p mimic与pcDNA-SIRT6单独或联合转染至TPC-1细胞,根据转染质粒的不同分为6组：对照组（不作处理）、mimic-NC组（转染mimicNC）、miR-338-3pmimic组（转染miR-338-3pmimic）、pcDNA-SIRT6组（转染pcDNA-SIRT6）、mimicNC+pcDNA-SIRT6组（共转染mimic-NC和pcDNA-SIRT6）和miR-338-3p mimic+pcDNA-SIRT6组（共转染miR-338-3p mimic和pcDNA-SIRT6）。分别检测各组TPC-1细胞的克隆形成率、侵袭细胞数、划痕愈合率及上皮型钙黏蛋白（E-cad）、神经型钙黏蛋白（N-cad）和波形蛋白的表达量。结果 miR-338-3p的...     

miR-432-5p靶向调控DDX41对胃癌细胞增殖、转移和放疗敏感性的影响

目的 探讨微小RNA(miR)-432-5p对胃癌细胞增殖、转移和放疗敏感性的作用及在此过程中与DEAD-盒解旋酶41(DDX41)的靶向调控关系。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同胃癌细胞中miR-432-5p、DDX41的表达,将HGC-27细胞进行转染并分为NC组(未转染质粒)、miR-NC组(转染miR-432-5p mimics阴性对照)、miR-432-5p组(转染miR-432-5p mimics)、miR-432-5p+pcDNA-NC组(转染miR-432-5p和pcDNA-DDX41阴性对照)、miR-432-5p+pcDNA-DDX41组(转染miR-432-5p mimics和pcDNA-DDX41)。48 h后采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-432-5p、DDX41的表达,MTT检测各组细胞增殖活性,Transwell实验检测各组细胞的迁移能力,克隆形成实验和流式细胞术检测各组细胞的放疗敏感性,双荧光素酶报告基因实验验证miR-432-5p和DDX41的靶向关系,建立裸鼠移植瘤模型并检测肿瘤生长情况,蛋白质印迹法检测裸鼠肿瘤组织中D...     

miR-218-5p在非小细胞肺癌中的表达及其对TPD52的靶向调控作用

目的 分析miR-218-5p在非小细胞肺癌中的表达及其对TPD52的靶向调控作用。方法 回顾性收集2020年9月至2021年12月青岛大学附属青岛市中心医院行手术切除的治疗NSCLC患者39例,术中收取患者的癌组织及癌旁组织,实时定量PCR检测miR-218-5p表达,体外培养H1975细胞株,将H1975细胞分为NC组(mimics NC转染)、miR-218-5p组(miR-218-5p mimics转染)、TPD52-siRNA组(TPD52-siRNA转染)和miR-218-5p+TPD52-siRNA组(转染miR-218-5p mimics后再加入TPD52-siRNA试剂进行转染)。平板克隆形成实验检测H1975细胞的克隆形成数目,Transwell检测H1975细胞侵袭,划痕实验检测H1975细胞迁移,双荧光素酶实验测定miR-218-5p和TPD52靶向关系,蛋白质印迹检测TPD52蛋白表达。结果 NSCLC组织中miR-218-5p的表达明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P <0.05)。miR-218-5p的表达与性别、年龄、吸烟无相关性(P> 0...     

乙型肝炎伴早期肝硬化microRNA表达谱及其诊断价值

目的探讨乙型肝炎伴早期肝硬化和乙型肝炎microRNA(miRNA)差异表达谱,寻找具有诊断价值的miRNA标志物。方法利用miRNA芯片技术检测7例乙型肝炎伴早期肝硬化患者和11例乙型肝炎患者肝组织中miRNA的表达水平。应用ROC曲线评价各miRNA的诊断价值。结果与单纯肝炎组织相比,伴早期肝硬化的肝炎组织中表达上调超过1.5倍的miRNA有miR-625-3p、miR-325、miR-596等5种,表达下调超过1.5倍的miRNA有miR-365、miR-362-5p、miR-139-5p等10种。ROC曲线分析结果表明,miR-139-5p诊断乙型肝炎伴早期肝硬化的特异性和敏感性最高。结论乙型肝炎伴早期肝硬化组织和乙型肝炎组织相比有其特异的miRNA表达谱,miR-139-5p可能是诊断乙型肝炎伴早期肝硬化的一个标志物。     

miRNA-192-5p在多发性骨髓瘤中的表达水平及其调控机制研究

目的 探讨miR-192-5 p在多发性骨髓瘤中的表达水平及其调控机制.方法 选取骨髓瘤细胞株U266作为研究对象,利用荧光定量PCR检测多发性骨髓瘤细胞中miR-192-5 p的表达水平;使用生物信息学网站预测miR-192-5 p潜在靶基因USP1并利用双荧光素酶报告实验验证其靶向关系;利用细胞转染实验对多发性骨髓...     

miR-203a-5p靶向调控JAG1对多发性骨髓瘤细胞增殖、周期调控的作用及机制研究（英文）

目的:探讨miR-203a-5p在多发性骨髓瘤(MM)中的生物学功能及其调控机制。方法:采用稳健排序整合方法对GEO数据库中的3个miRNA表达谱(GSE16558、GSE24371和GSE17498,包含131个MM样本和17个正常浆细胞样本)进行差异性表达整合分析。用慢病毒构建了能稳定过表达miR-203a-5p的MM细胞株。采用qRT-PCR方法检测MM细胞株RPMI8226及U266中miR-203a-5p的表达情况，并检测miR-203a-5p表达上调后对MM细胞增殖及细胞周期表型的影响。应用稳定表达miR-203a-5p的U226细胞进行裸鼠成瘤实验，评价miR-203a-5p在体内肿瘤发生中的作用。利用Target Scan和miRanda等生物预测软件预测miR-203a-5p的候选靶基因，利用荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和Western blot研究MM细胞中miR-203a-5p的潜在靶点。结果:miR-203a-5p在MM细胞系中的表达显著低于正常浆细胞。miR-203a-5p过表达可以抑制RPMI8226和U266细胞的增殖和细胞周期进展。动物体内实验表...     

MiR140-5p在HepG2细胞中对对氧磷酶1表达的调控及其临床应用

目的探讨微小RNA(miRNA)对对氧磷酶1(paraoxonase 1,PON1)表达的影响及其在非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)患者中的临床应用价值。方法采用生物信息学方法对PON1相关调控miRNA进行预测分析;构建PON1荧光素酶报告基因载体,分析双荧光素酶活性;在HepG2细胞中上/下调miRNA水平,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组miRNA的表达情况,并采用western blot检测HepG2细胞中PON1蛋白的表达水平;采用qRT-PCR分析健康人群和NASH患者血清中miR140-5p的水平。结果 Target Scan数据库预测到miR140-5p能与PON13'-UTR端互补结合。双荧光素酶报告基因活性分析显示,miR-140-5p模拟物对PON1野生型载体的报告荧光有明显的下调作用(P0.01)。qRT-PCR结果显示,与正常细胞对照组、模拟物阴性对照组相比,miR-140-5p模拟物组均呈现出过表达(P0.01),而miR-140-5p抑制剂组则出现相应的低表达(P0.05)。western blot结果表明,转染miR140-5p模拟物对PON1有明显的下调作用(P0.01),而miR140-5p抑制剂对PON1有明显的上调作用(P0.01)。与健康人对照组相比,NASH患者血清中miR140-5p表达水平降低(P0.01)。结论 miR140-5p可能通过对PON1的转录后水平基因表达调控,参与NASH的进展。     

miR-142-2p通过TCF7调控骨肉瘤细胞侵袭、迁移以及凋亡的分子机制

目的研究miR-142-2p对骨肉瘤细胞迁移、侵袭、凋亡的影响,并探讨其机制。方法运用Western blot检测癌旁组织、骨肉瘤组织或U-2OS细胞中TCF7的蛋白表达;将miR-142-3p组(转染miR-142-3p mimics)、miR-con组(转染miR-con)、si-TCF7组(转染si-TCF7)、si-con组(转染si-con)均用脂质体法转染至U-2OS细胞; qRT-PCR法检测各组细胞中miR-142-2p的表达; Transwell法检测各组细胞的迁移、侵袭;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与癌旁组织相比,骨肉瘤组织中miR-142-3p表达显著降低,TCF7表达显著升高(P 0. 05);过表达miR-142-3p、敲减TCF7可抑制U-2OS细胞的迁移侵袭,促进凋亡; miR-142-3p可靶向负调控TCF7的表达。结论 miR-142-3p可抑制骨肉瘤细胞迁移、侵袭,促进凋亡,其机制可能与靶向TCF7有关,将可为骨肉瘤的治疗提供新靶点。     

精神分裂症患者白细胞中循环miRNA的表达及其临床意义

目的探讨白细胞中循环miRNA在精神分裂症SZ的表达水平及其诊断价值。方法收集90例SZ患者作为疾病组,90例双相情感障碍(BPAD)患者作为病例对照组,90例体检健康者作为健康对照组,采用实时荧光定量PCR检测各组白细胞中8个miRNA(miR-31-5p、miR-99b-5p、miR-107、miR-134-5p、miR-487b-3p、miR-181b-3p、miR-431-5p和miR-433-5p)的表达水平,并进行统计学分析,以验证差异表达的miRNA;绘制受试者工作曲线(ROC)曲线,建立人工神经网络(ANN)诊断模型,并分析其诊断价值。结果 SZ患者存在6个显著低表达的miRNA,其ROC曲线下面积(AUCROC)分别为miR-31-5p:0.931,miR-487b-3p:0.887,miR-99b-5p:0.869,miR-431-3p:0.763,miR-134-3p:0.756,miR-107:0.721;在ANN模型中,最优模型的AUCROC为0.960,敏感性86.7%,特异性95.6%。结论白细胞中6个差异表达的miRNA可能作为SZ诊断的非侵袭性生物学标志物,而ANN诊断模型可以提高miRNA对SZ的诊断价值。     

长链非编码RNA X失活特异转录物调控miR-340-5p对卵巢癌细胞上皮间质转化的影响

目的 探讨长链非编码RNA X失活特异转录物（lncRNA XIST）通过调控miR-340-5p对卵巢癌细胞上皮间质转化（EMT）的影响。方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测卵巢癌组织和细胞系中lncRNA XIST和miR-340-5p表达水平。A2780细胞分为Control组、si-NC组、si-lncRNA XIST组、si-lncRNA XIST+NC inhibitor组、si-lncRNA XIST+miR-340-5p inhibitor组。双荧光素酶实验证实lncRNA XIST和miR-340-5p的调控关系；划痕实验和Transwell法检测迁移和侵袭能力；RT-qPCR、Western blot和免疫荧光染色分析EMT标志蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）的mRNA和蛋白表达。结果 在卵巢癌组织和细胞系中，lncRNA XIST高表达，miR-340-5p低表达（P <0.05）。选择lncRNA XIST表达最高的A2780细胞作为转染对象。lncRNA XIST能够直接靶向下调miR-340-5p表达（P ...     

miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响及机制

目的探讨miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响以及潜在的作用机制。方法设置miR-con组、miR-219a-5p组、anti-miR-con组、anti-miR-219a-5p组、miR-219a-5p+pcDNA组、miR-219a-5p+pcDNA-SMC4组、miR-con+SMC4-WT组、miR-con+SMC4-MT组、miR-219a-5p+SMC4-WT组、miR-219a-5p+SMC4-MT组,转染均用脂质体法。qRT-PCR检测miR-219a-5p和SMC4 mRNA表达水平;Western Blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果相较于人正常皮肤细胞HaCaT,皮肤鳞状细胞癌细胞HSC-2、Colo-16、SCL-1中SMC4 mRNA和蛋白表达水平显著升高,miR-219a-5p表达水平显著降低(P<0.05)。过表达miR-219a-5p可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡;促进Caspase-3蛋白表达,抑制Cyclin D1蛋的表达;抑制Wnt/β-catenin信号通路激活。miR-219a-5p靶向负调控SMC4的表达,转染SMC4野生型表达载体的HSC-2细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05);而转染SMC4突变型表达载体的HSC-2细胞荧光素酶活性差异不显著。且过表达miR-219a-5p,SMC4表达水平显著降低;抑制miR-219a-5p表达,SMC4表达水平显著升高。过表达SMC4能逆转miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞HSC-2的增殖抑制和凋亡促进的作用。结论miR-219a-5p可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与Wnt/β-catenin及SMC4信号通路有关,将为皮肤鳞状细胞癌的预防和治疗提供新靶点。     

LncRNA TUG1通过调控microRNA-132-3p/SIRT1减轻脂多糖诱导的小肠上皮细胞损伤

目的探讨LncRNA-TUG1在脂多糖(LPS)诱导的小肠黏膜上皮细胞损伤中的作用和机制。方法使用LPS处理HIEC-6人类小肠黏膜上皮细胞24 h构建脓毒症损伤模型。全转录组RNA测序分析LPS处理后HIEC-6细胞中的mRNA、microRNA及lncRNA表达变化。实时荧光定量(qRT-PCR)及western blot检测LncRNA-TUG1、microRNA-132-3p(miR-132-3p)、SIRT1 mRNA及SIRT1蛋白的表达在LPS处理后HIEC-6细胞中的表达变化。体外转染技术改变LncRNA-TUG1、microRNA-132-3p及SIRT1的表达水平。qRT-PCR及western blot分析LncRNA-TUG1对miR-132-3p及SIRT1的表达调控。CCK-8及流式细胞术分析LncRNA-TUG1、miR-132-3p及SIRT1对HIEC-6细胞增殖和凋亡的影响。双荧光素酶报告分析验证LncRNA-TUG1、miR-132-3p及SIRT1之间的靶向关系。统计学分析采用SPSS 17.0进行,两组间的差异比较采用独立样本t检验。结果RNA测序结果显示LPS处理后的HIEC-6细胞中出现LncRNA-TUG1及SIRT1表达降低(t=3.26,P<0.05以及t=2.55,P<0.05),但是miR-132-3p表达升高(t=4.12,P<0.05)。在体外细胞实验中,LPS处理后HIEC-6细胞后,LncRNA-TUG1及SIRT1表达降低(t=5.69,P<0.05以及t=5.712,P<0.05),而miR-132-3p表达升高(t=3.88,P<0.05)。LncRNA-TUG1过表达能够增加LPS处理后细胞的增殖率(t=6.55,P<0.05)同时降低其凋亡率(t=3.94,P<0.05)。上调LncRNA-TUG1可以降低miR-132-3p的表达(t=4.66,P<0.05),同时增加SIRT1 mRNA(t=3.91,P<0.05)及蛋白的水平。转染miR-132-3p mimic可以抑制SIRT1 mRNA(t=4.08,P<0.05)及蛋白的水平。在LPS处理的细胞中,与仅转染pcDNA3.1-LncRNA-TUG的细胞相比,共转染miR-132-3pmimic和siRNA-SIRT1的细胞增殖率较低(t=4.55,P<0.05以及t=5.67,P<0.05),凋亡率较高t=3.90,P<0.05以及t=4.22,P<0.05)。结论lncRNA-TUG1可能作为ceRNA调控miR-132-3p/SIRT1从而减轻LPS造成的HIEC-6细胞损伤。干预lncRNA-TUG1/microRNA-132-3p/SIRT1调控通路可能成为防治脓毒症引起小肠损伤的潜在策略。     

miR-363-3p促进人浆细胞样树突细胞干扰素α分泌的机制研究

目的 :观察miR-363-3p对人浆细胞样树突细胞(plasmacytoid dendritic cells,pDCs)分泌干扰素α(interferon,IFN-α)的影响,探讨其在Ⅰ型IFN通路中的调控作用及其可能的作用机制。方法:通过磁珠分选获得高纯度的人外周血pDCs,予TLR7刺激剂活化。采用体外脂质体转染使pDCs高表达miR-363-3p,检测其活化后分泌的IFN-α。采用生物信息学预测miR-363-3p可能作用的靶蛋白,并用双荧光报告基因系统证实其与靶蛋白间的相互作用。结果:磁珠分选获得的pDCs纯度大于95%,其活化后分泌高浓度的IFN-α。体外过表达miR-363-3p可促进pDCs分泌IFN-α。生物信息学预测miR-363-3p作用的靶蛋白可能为信号调节蛋白α(signal-regulatory protein alpha,SIRPα);双荧光报告实验结果提示,miR-363-3p过表达能显著抑制重组SIRPα3′UTR荧光素酶表达载体的荧光素酶活性。结论:miR-363-3p可能通过作用于其靶基因SIRPα,进而促进pDCs分泌IFN-α。本研究进一步阐明了Ⅰ型IFN通路的调控机制,为Ⅰ型IFN相关自身免疫病的诊断、治疗提供了新的生物学靶点。     

青少年肥胖非酒精性脂肪肝患者血清外泌体源性miRNA表达谱的初步研究

目的分析非酒精性脂肪肝(NAFLD)与单纯肥胖对照者血清外泌体微小RNA(miRNA)表达谱的差异,为筛选外泌体源性miRNA作为NAFLD早期诊断标记物提供依据。方法选择5例NAFLD患者(NAFLD组)和5例单纯肥胖患者(对照组),采集外周血血清,使用高通量测序方法测定外泌体源性miRNA表达谱,并通过实时荧光定量PCR验证部分差异性表达的miRNA,预测靶基因及功能分析。结果NAFLD组与对照组相比差异表达的外泌体源性miRNA共30种(P<0.05),当倍比值>2且P<0.05的差异性miRNA有9种,其中5种表达上调(miR-122-5p,miR-3591-3p,miR-335-5p,let-7g-3p和miR-27a-5p),4种表达下调(miR-6753-3p,miR-129-2-3p,miR-6760-5p,miR-6516);对miR-122-5p、miR-335-5p、miR-27a-5p进行实时荧光定量PCR,结果与测序结果一致。差异表达miRNA的功能分析结果提示涉及葡萄糖稳态、脂质代谢、肝脏发育等。结论NAFLD组血清外泌体源性miRNA表达谱与对照组有明显差异,miR-122-5p、miR-335-5p、miR-27a-5p可能参与了NAFLD的发病机制,可以作为NAFLD早期诊断的标记物。     

miR-142-3p靶向HOXA5对急性B淋巴细胞白血病细胞增殖、周期阻滞与凋亡作用的研究

目的:探讨miR-142-3p通过调控同源异型盒基因5(HOXA5)的表达对急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞增殖、周期和凋亡的作用及分子机制。方法:采用实时荧光定量PCR法检测人B-ALL细胞系Nalm6和人B淋巴母细胞系Hmy2-cir中miR-142-3p和HOXA5的表达水平。使用脂质体转染技术将miR-142-3p模拟物、pcDNAHOXA5过表达质粒、miR-142-3p模拟物+pcDNA-HOXA5过表达质粒及对照物转染至Nalm6细胞。根据microRNA.org预测HOXA5与miR-142-3p的结合位点,通过双荧光素酶报告基因实验检测miR-142-3p与HOXA5基因的靶向关系。使用细胞计数盒8(CCK-8)和细胞克隆形成实验检测miR-142-3p对Nalm6细胞增殖能力的影响。采用流式细胞术检测miR-142-3p对Nalm6细胞周期分布与凋亡的影响。通过Western blot检测细胞周期相关蛋白G1/S-特异性周期蛋白-D1(CyclinD1)、周期蛋白依赖性激酶4 (CDK4)以及B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase-3)的表达水平。结果:与Hmy2-cir细胞比较,miR-142-3p在Nalm6细胞中低表达而HOXA5呈高表达(P 0.05)。miR-142-3p与HOXA5 3'-UTR存在互补结合区域,转染miR-142-3p模拟物与野生型HOXA5 3'-UTR组荧光素酶活性较转染miR-142-3p阴性对照与野生型HOXA5 3'-UTR组荧光素酶活性显著下降(P 0.05)。转染48和72 h后,转染miR-142-3p模拟物能够抑制Nalm6细胞增殖能力和细胞克隆数目(P 0.05),使Nalm6细胞发生G1期阻滞,从而抑制CyclinD1与CDK4蛋白表达(P0.01),促进Nalm6细胞的凋亡,并且抑制BCL-2蛋白表达,促进Bax、Caspase-3蛋白表达(P 0.05)。结论:miR-142-3p通过靶向下调HOXA5表达来抑制Nalm6细胞增殖,使细胞G1期阻滞,并促进细胞的凋亡。     

过表达miR-129-5p对胶质瘤细胞增殖、迁移 及CDK6、N-cadherin表达的影响

目的:研究过表达miR-129-5对胶质瘤细胞增殖、迁移及细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达的影响。方法:培养胶质瘤U87细胞并分为转染阴性对照mimic的对照组、转染miR-129-5p mimic的miR-129-5p组,采用MTS实验检测增殖活力、划痕实验检测迁移活力、Western blot检测CDK6及N-cadherin的表达量,验证miR-129-5p对CDK6、N-cadherin的靶向调控作用。结果:miR-129-5p组的OD490值(0.78±0.15),明显低于对照组的(1.21±0.34)(P0.05);相对愈合面积(32.39±8.79)%,明显低于对照组的(73.39±17.85)%(P0.05);CDK6的表达量(0.28±0.09)及N-cadherin的表达量(0.34±0.08),明显低于对照组的(0.88±0.18)及(0.67±0.15)(P0.05);生物信息学分析及双荧光素酶报告表明miR-129-5p靶向调控CDK6、N-cadherin基因mRNA 3’UTR。结论:过表达miR-129-5p能够抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移,其机制可能与靶向调控CDK6、N-cadherin有关。     

不同碘水平下甲状腺结节患者血清外泌体中miRNA生物学标志物的筛选* "(1., b.流行病学教研室,济南250000;2.,山东成武274200;3.泰安市中心医院a.甲状腺外科, b.检验科,山东泰安271000;4.山东第一医科大学第二附属医院a.甲状腺外科,b.检验医学科,山东泰安271000)

摘要:目的比较不同碘水平下甲状腺结节患者与健康人血清外泌体微小核糖核酸( microRNA, miRNA)表达谱的差异,分析其共同点,为筛选不同碘水平下甲状腺结节早期诊断标志物提供参考依据。方法收集10例不同碘水平下甲状腺结节患者及体检健康者的外周血样本,采用砷饰催化分光光度法测定各组血清碘水平;提取外泌体miRNA,利用高通量测序技术测定血清miRNA的表达水平;预测差异靶基因,并进一步进行CO( Gene ontology)分析和KECG(Kyoto Encyclopedia of Genes andGenomes)分析。结果在不同碘水平的甲状腺结节患者与健康人群中存在6个表达下调的miRNA,分别为 miR-324-5p.miR-6511b-3p, miR-9903 ,miR-550a-3p、miR-50O1-3p、miR-3688-3p。差异表达的外泌体 miRNA可调控MAPK信号通路、PI3K-AKT信号通路、VEGF信号通路及NF-KB信号通路。结论筛选出6个差异表达miRNA,有望作为不同碘水平下甲状腺结节早期诊断的生物学标志物。     

HBV相关肝脏纤维化患者血清miRNA差异表达谱建立及筛选

目的：分析并筛选HBV相关肝脏纤维化患者血清中差异表达miRNA。方法：选择2019年3月至2020年3月进入我院确诊为肝纤维化S2~S3期患者10例,以10例健康人作为对照,以血清作为研究样本。采用Illumina miRNA深度测序分析血清miRNA的表达。比较两组间差异表达的miRNA,对序列读数进行分析,以评估统计学意义。采用R平台进行分层聚类分析,以发现肝纤维化特异性表达的候选miRNA。采用qRT-PCR验证候选miRNA在各组中的表达,采用2-ΔΔCT分析miRNA的相对表达量。预测差异表达miRNA的靶基因,对靶基因进行GO分析。结果：在肝纤维化组和健康组之间,共筛选出78个表达具有显著性差异的miRNA。与健康组相比,肝纤维化组中表达上调的miRNA有30个,表达下调的miRNA有23个。其中,miR-505-3p、miR-197-3p、miR-500a-3p和miR-139-5p下调水平最高,miR-1273g-5p、miR-33a-5p 、miR-3960上调水平最高。选择表达变化最显著的miRNA进行qRT-PCR验证,结果与Illumina miRNA测序结果一致。结论：肝纤维化患者血清中miRNA的表达具有特异性,表达差异显著的miRNA有望成为新的肝纤维化临床诊断标志物。     

miRNA在哮喘患儿呼出气冷凝物中的表达水平及诊断价值

目的 探讨呼出气冷凝物(EBC)中微小RNA(miRNA)作为诊断哮喘患儿生物标志物的诊断价值。方法 选取2021年3月至2022年12月华北石油管理局总医院收治的7～12岁哮喘患儿80例作为哮喘组,并选取同期同年龄段的健康志愿者80例作为对照组。检测2组受试者EBC中11种相关miRNA的表达水平。应用主成分分析法和因子分析法对miRNAs进行聚类分析。采用受试者工作特征(ROC)曲线的曲线下面积(AUC)分析miR-133-3p、miR-328-3p、miR-21-5p、miR-155-5p在哮喘患儿中的诊断意义。结果 哮喘组EBC中miR-21-5p和miR-133-3p的相对表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而miR-328-3p和miR-155-5p的相对表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。根据对照组和哮喘组EBC中miR-133-3p、miR-328-3p、miR-21-5p、miR-155-5p的相对表达水平可以形成两个独立亚群,即体检健康者和哮喘患儿。因子分析法发现miR-21-5p、miR-155-5p可以聚成一个亚类...     

miR-142-3p靶向调控mll-af4融合基因的实验研究

本研究探讨mll-af4融合基因的表观遗传学调控机制,以筛选靶向调控mll-af4融合基因的microRNA。利用Targetscan在线分析软件预测特异性靶向mllaf4基因3′端非翻译区域（3′-untranslated region,3′UTR）的microRNA,采用PCR方法从1例健康供者DNA中扩增mll-af4基因3′UTR序列,插入经EcoRI和PstI双酶切的荧光素酶报告载体pGL3-M,采用脂质体SuperFect包裹荧光素酶重组质粒及microRNA表达质粒转染293T细胞,应用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。miR-142-3p mimics以脂质体Hiperfect转染至RS4;11细胞,选用实时定量PCR及Western blot检测mll-af4 mRNA及蛋白的表达。结果表明,成功构建了含有1935bp、2104bp和1371bp的mll-af4基因3′UTR序列的荧光素酶报告重组质粒pGL3-AF4-3′UTR,并通过酶切及基因测序方法鉴定得到证实。荧光素酶报告实验提示,miR-142组荧光素酶活性明显低于对照组。RS4;11细胞中过表达miR-142-3p可以明显下调MLL-AF4融合蛋白及mRNA表达。结论：miR-142-3p通过靶向结合mll-af4基因3′UTR的结合位点特异调控mll-af4基因表达。