K562-DC融合瘤苗刺激的CIK/NK细胞在荷瘤NOD/SCID小鼠体内的杀瘤活性

目的 探讨经K562细胞-树突细胞(DC)融合瘤苗刺激的脐血源性细胞因子诱导的杀伤(CIK)/自然杀伤(NK)细胞在荷瘤NOD/SCID小鼠体内的杀伤效能及其安全性.方法 通过不同细胞因子的组合分别诱导脐血单个核细胞(MNC)成为DC和CIK/NK细胞,通过聚乙二醇(PEG)将灭活K562细胞与DC融合形成K562-DC融合瘤苗.以10:1比例在CIK/NK细胞培养体系中加入K562-DC融合瘤苗,制备K562-DC融合瘤苗刺激的CIK/NK细胞.小鼠均经尾静脉接种K562细胞1×106诱导荷瘤鼠;于接种肿瘤细胞后24 h按不同分组分别经尾静脉输注K562-DC融合瘤苗刺激的CIK/NK细胞1×107、CIK/NK细胞1×107,同时设相应的非荷瘤鼠对照.比较各组小鼠的生存率、存活时间;用流式细胞术检测小鼠外周血、肝、肺组织中人CD13+细胞和外周血人CD56+细胞.结果 在接种1×106K562细胞后未经处理的小鼠39 d内全部死亡,8只鼠中肉眼可见瘤块的小鼠5只,其中位于肝脏的4只、脾脏的1只.接种K562细胞后接受K562-DC瘤苗刺激的CIK/NK细胞治疗的8只小鼠第65天时死亡1只,抗瘤有效率为87.5%;接受CIK/NK细胞治疗小鼠死亡2只,时间分别为接种K562细胞后第56天及第62天,抗瘤有效率为75.0%,均未发现肉眼可见瘤块.该两组小鼠存活时间分别为(69.4±1.8)d、(67.2±5.3)d,两组间差异无统计学意义(P＞0.05),均高于未予治疗的荷瘤对照组[(30.4±4.6)d](P＜0.01),荷瘤后接受K562-DC瘤苗刺激的和未经瘤苗刺激的CIK/NK细胞治疗的两组其余小鼠存活均超过70 d.经CIK/NK细胞治疗的两组存活小鼠外周血,肝、肺组织中人CD13+细胞率差异无统计学意义,均显著低于荷瘤未治疗组(P＜0.01),而治疗的两组存活小鼠外周血人CD56+细胞率与输注不同CIK/NK细胞的非荷瘤对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 经过灭活肿瘤细胞预孵育的脐血源性CIK/NK细胞接种在动物体内具有抗瘤活性,无致瘤性.     

黛力新及其组分对大鼠体内他莫昔芬及其代谢物的药动学影响

目的 探讨黛力新与其组分氟哌噻吨、美利曲辛在大鼠体内对他莫昔芬及其代谢物的药动学影响。方法 将20只雌性SD大鼠随机分为他莫昔芬组、他莫昔芬+氟哌噻吨组(0.21 mg/kg)、他莫昔芬+美利曲辛组(4.21 mg/kg)和他莫昔芬+黛力新组(氟哌噻吨0.21 mg/kg+美利曲辛4.21 mg/kg),每组各5只。通过尾静脉采血法采血,使用蛋白沉淀法处理生物样本,采用超高液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定大鼠血浆中他莫昔芬及其代谢产物的含量,使用药动学软件求算药动学参数,通过比较药动学参数变化来评估黛力新及其组分对大鼠体内他莫昔芬代谢的影响。结果 与他莫昔芬对照组比较,氟哌噻吨能显著降低他莫昔芬和N-去甲基他莫昔芬的AUC和C_max,增加CL_z/F。美利曲辛能显著增加N-去甲基他莫昔芬的CL_z/F和Vz/F。黛力新能显著降低他莫昔芬的C_max,同时能显著降低N-去甲基他莫昔芬AUC(0-t)。结论 黛力新对他莫昔芬的代谢过程有一定的诱导作用,黛力新与他莫昔芬联用治疗乳腺癌患者的抑郁症...     

雷公藤红素对人急性早幼粒白血病荷瘤模型小鼠黏附分子及细胞周期的影响

目的:观察雷公藤红素对人急性早幼粒白血病(APL)荷瘤模型小鼠黏附分子及细胞生物学特性的影响.方法:将18只SCID beige小鼠尾静脉注射NB4细胞株(5x106/只)以构建人APL荷瘤模型,然后随机分为荷瘤组、三氧化二砷组和雷公藤红素组,另取6只不造模并设为对照组;3周后向对照组和荷瘤组腹腔注射生理盐水并进行对照...     

LY294002对小鼠体内调节性T细胞的影响

背景:研究已证实,磷酸肌醇3激酶特异性阻滞剂LY294002在体外具有剂量依赖性抑制细胞活性的作用,可以用于诱导肿瘤细胞凋亡,但LY294002对正常免疫系统的影响尚不清楚.目的:观察抗肿瘤药物LY294002对C57BU6小鼠体内调节性T细胞的影响.设计、时间及地点:以调节性T细胞比例为观察对象,分组对比实验,于2008-08/12在广州南方医科大学珠江医院移植免疫研究所完成.材料:14只8周龄SPF级C57BL/6小鼠随机分成实验组与对照组,每组7只.LY294002购自广州英韦创律公司.方法:实验组腹腔注射LY294002溶液200 μL(0.1 mg),对照组给予等体积PBS.1 0 h后后眼眶静脉从采血,并分离脾脏、胸腺,制备单细胞悬液,流式细胞术检测小鼠外周血、脾细胞和胸腺细胞中的CD4+CD25high T细胞.主要观察指标:小鼠外周血、脾细胞和胸腺细胞中CD4+CD25high T细胞的比例.结果:实验组小鼠外周血、脾脏、胸腺中CD4+CD25high T细胞比例分别为(0.787±0.036)%,(0.921±0.063)%,(1.230±0.131)%,对照组小鼠外周血、脾脏、胸腺中CD4+CD25high T细胞比例分别为(0.640±0.030)%,(0.639±0.046)%,(0.857±0.077)%.实验组和对照组比较差异有显著性意义(P＜0.01,P＜0.05).结论:腹腔注射LY294002可提升小鼠体内调节性T细胞的比例,提示其有可能会抑制机体免疫反应,从而不利于治疗.     

扶正消积汤对小鼠肺癌模型肿瘤的生长抑制及免疫功能的改善研究

目的 探讨扶正消积汤对肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响.方法 选取无特定病原体(SPF)级雄性C57BL/6小鼠30只,将其中6只正常小鼠设为对照组,另外24只通过皮下注射法构建肺癌荷瘤小鼠模型并随机分为模型组(等量生理盐水)、低剂量组(125 mg/kg扶正消积汤)、中剂量组(250 mg/kg扶正消积汤)、高剂...     

肺癌小鼠模型中删除MDSCs对CD8+T细胞的影响

目的在路易斯肺癌LLC荷瘤小鼠模型中通过删除外周血中骨髓来源的抑制细胞(MDSCs),探讨MDSCs对CD8+T细胞数量和功能、体内肿瘤生长及小鼠生存期的影响。方法将C57小鼠皮下接种LLC,尾静脉注射Gr-1抗体删除荷瘤小鼠血液中的MDSC或注射对照抗体,于不同时间点采尾血,应用流式细胞术检测外周血中MDSC和CD8+T细胞的变化,记录肿瘤生长情况和小鼠生存期,比较两组荷瘤小鼠的脾细胞对LLC细胞的杀伤作用。结果 LLC荷瘤7 d后小鼠中MDSCs比例(%)(23.870±1.350)显著高于正常小鼠(7.600±0.677)(P0.001),CD8+T细胞比例(%)(7.906±0.428)显著低于正常小鼠(11.220±0.606)(P0.001);荷瘤7 d注射Gr-1删除抗体或对照抗体,3 d后删除组外周血MDSCs比例(%)较未删除组显著降低(分别为1.578±0.299 vs 38.340±3.214,P0.001),CD8+T细胞比例(%)显著高于未删除组(分别为9.464±0.820 vs 4.024±0.488,P0.001);抗体注射10 d后删除组MDSCs比例(%)较之前显著增加(31.980±3.595),但仍然低于普通荷瘤组(63.660±5.763)(P=0.001 6),CD8+T细胞比例(%)较之前降低(5.806±0.554),仍高于普通荷瘤组(2.894±0.330)(P=0.001 9);MDSCs删除组小鼠肿瘤生长减缓(P0.05)、生存期延长(P=0.036,中位生存期46 d vs 53 d)。结论在LLC荷瘤小鼠中删除MDSC能解除其对CD8+T细胞的抑制,减缓肿瘤生长,延长小鼠生存期。     

微波消融联合树突状细胞瘤苗免疫治疗小鼠乳腺癌的疗效及免疫学机制探讨

目的观察微波消融联合树突状细胞（DC）瘤苗免疫治疗小鼠乳腺癌的疗效并探讨其免疫学机制。 方法采用随机数字表法将48只BALB/c小鼠分为模型组、微波消融组、DC瘤苗免疫组及联合治疗组。将上述小鼠制成乳腺癌实验动物模型，微波消融组于荷瘤14d时给予微波消融治疗，DC瘤苗免疫组于荷瘤7d时给予DC瘤苗免疫，联合治疗组分别于上述时间点给予DC瘤苗免疫及微波消融治疗。观察各组小鼠存活、肿瘤生长及肺转移情况；于微波消融处理完后第14天时采用流式细胞术检测各组小鼠脾细胞中CD3+、CD4+  T细胞比例变化；采用酶联免疫吸附法（ELISA法）检测各组小鼠血清干扰素-γ（IFN-γ）和白介素-4（IL-4）水平。 结果联合治疗组小鼠存活时间［(56.4±4.3)d］、肿瘤面积［(67.3±6.1)mm2］及肺转移指数(0.6±0.4)均明显优于微波消融组及DC瘤苗免疫组（P<0.05）；联合治疗组脾细胞中CD3+ T细胞比例［(27.8±10.3)%］、CD4+ T细胞比例［(16.7±8.3)%］均较微波消融组及DC瘤苗免疫组明显增加（P<0.05）；另外联合治疗组血清中IFN-γ浓度［(41.8±22.9)pg/ml］较微波消融组及DC瘤苗免疫组显著升高（P<0.05），而IL-4浓度［(15.4±6.4)pg/ml］则较微波消融组及DC瘤苗免疫组明显降低（P<0.05）。 结论联合采用微波消融及DC瘤苗免疫治疗乳腺癌小鼠具有协同作用，与单纯微波消融或DC瘤苗免疫比较，该联合疗法能进一步抑制实验小鼠乳腺癌肿瘤生长，其治疗机制可能与增强小鼠免疫反应有关。     

抑制Yes-相关蛋白表达促进芬太尼诱导乳腺癌细胞凋亡的研究

目的 探讨芬太尼调控Yes-相关蛋白(YAP)在乳腺癌细胞增殖凋亡中的作用及机制.方法 细胞增殖试验(MTT)检测乳腺癌细胞MCF-7增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blots检测相关蛋白表达,荷瘤小鼠体内验证芬太尼及YAP对乳腺癌生长的作用,Student t检验用于比较两组间的差异.结果 芬太尼(2μ...     

改良根治术联合他莫昔芬治疗早期乳腺癌的临床效果

目的 探究改良根治术联合他莫昔芬治疗早期乳腺癌的临床效果.方法 将2018年10月至2019年10月在我院接受手术治疗98例早期乳腺癌患者作为研究对象,按照治疗方式的差异将其分为研究组(49例,改良根治术+他莫昔芬)和对照组(49例,改良根治术).比较两组的临床疗效、肿瘤标志物水平、预后情况、术后生命质量及并发症发生情...     

CD4~+ CD25~+ T细胞在脂多糖诱导多器官功能障碍综合征小鼠中的保护作用研究

目的探索CD4+CD25+T细胞在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)小鼠中的作用。方法选择雄性BALB/c小鼠,以LPS 9.0 mg/kg腹腔注射制备小鼠MODS模型作为建模组(60只),对照组小鼠(10只)同法注射0.9%氯化钠注射液,应用流式细胞术在第2、5天分别检测两组小鼠体内CD4+CD25+T细胞水平;选择180只小鼠,于-2 d分别腹腔注射磷酸盐缓冲液、IgG1及200μg Anti-CD25 mAb,再于0 d注射LPS分别建立LPS组、IgG1+LPS组和Anti-CD25 mAb+LPS组小鼠模型,每组60只,计算各组CD4+CD25+T细胞百分比,并取各组小鼠肺脏组织行HE染色,观察组织细胞学改变;再建立LPS组小鼠54只,IgG1+LPS组小鼠34只,Anti-CD25 mAb+LPS组小鼠32只,观察3组小鼠的生存率。结果建模组小鼠CD4+CD25+T细胞比例与对照组相比,在2 d时下降(t=2.873,P=0.006),在5 d时上升(t=2.963,P=0.004)。Anti-CD25 mAb+LPS组注射LPS后2 d、5 d CD4+CD25+T细胞比例均下降,与其余两组比较差异均有统计学意义(P均0.01)。肺组织HE染色结果提示中和CD4+CD25+T细胞会加重LPS诱导MODS小鼠的肺部损伤,并增加小鼠的死亡率。结论 CD4+CD25+T细胞在LPS诱导的MODS中起保护作用。     

人脐血间充质干细胞促进脐血CD34+细胞在NOD/SCID小鼠体内植入的实验研究

目的探讨人脐血间充质干细胞(MSC)联合人脐血CD34+细胞移植,能否促进CD34+细胞在NOD/SCID小鼠体内植入及加速其造血恢复.方法NOD/SCID小鼠于60Co 2.5 Gy照射后24h内由尾静脉输注胎儿脐血CD34+细胞1×105/只(低细胞量移植组)或1×106/只(高细胞量移植组),联合移植组同时输注脐血MSC 1×106/只.动态观察移植后小鼠外周血白细胞、血红蛋白和血小板恢复情况,于移植后第8周用流式细胞术检测存活小鼠骨髓中人CD45+、CD45+CD3+、CD45+CD19+和CD45+CD33+细胞的含量.结果①低细胞量移植时,联合移植组的植入率明显高于单纯移植组,分别为26.02%和16.52%(P＜0.05);高细胞量移植时,联合移植组和单纯移植组的植入率相近,分别为43.71%和39.23%(P＞0.05).②高细胞量联合移植组和单纯移植组的存活率分别为80%和70%;低细胞量联合移植组和单纯移植组的存活率分别为70%和50%.③无论高细胞量还是低细胞量组,联合移植小鼠白细胞、血红蛋白和血小板的恢复明显早于单纯移植组.④移植8周后,小鼠骨髓中人CD45+CD19+、CD45+CD33+细胞含量在低细胞量移植时,联合移植组高于单纯移植组;但在高细胞量移植时,两组之间差异无统计学意义.CD45+CD41a+细胞的含量无论在低细胞量和高细胞量移植时,联合移植组均高于单纯移植组.各组小鼠骨髓中CD45+CD3+细胞的含量均较少,且各组之间差异无统计学意义.结论①低细胞量移植时,人脐血MSC联合移植可提高人脐血CD34+细胞在小鼠体内的植入率.②人脐血MSC与人脐血CD34+细胞联合移植,加速NOD/SCID小鼠各系造血恢复,提高移植小鼠存活率.③MSC联合移植可促进人脐血CD34+细胞在NOD/SCID小鼠体内向粒系、B淋巴系和巨核系定向分化.     

乌司他丁对脓毒症小鼠调节性T细胞凋亡及细胞因子分泌的影响

目的观察乌司他丁对脓毒症小鼠调节性T细胞(Treg)凋亡及细胞因子分泌的影响。方法将60只小鼠分为假手术组、模型组和乌司他丁组,每组20只。采用盲肠结扎穿孔方法制备脓毒症大鼠模型,假手术组除不结扎和穿刺盲肠外,其余手术步骤相同,乌司他丁组小鼠术后30 min尾静脉给药100 000 U/kg。采用流式细胞仪检测各组小鼠CD4+CD25+Treg的凋亡率,采用酶联免疫吸附试验检测各组小鼠白细胞介素2(IL-2)、IL-4、干扰素γ的水平。结果假手术组、模型组和乌司他丁组小鼠CD4+CD25+Treg细胞的凋亡率比较,差异有统计学意义[(20.1±1.0)%、(10.9±0.8)%、(13.7±0.8)%,F=10.236,P=0.030],且乌司他丁组小鼠显著低于假手术组,而高于模型组(P均0.05)。同时,与假手术组比较,模型组与乌司他丁组IL-2[(352±76)、(172±59)、(249±64)ng/L]和干扰素γ[(177±25)、(56±14)、(109±18)ng/L]均显著下降,而IL-4显著升高[(46±15)、(328±81)、(242±62)ng/L],且与模型组比较,乌司他丁组IL-2和干扰素γ均明显升高,而IL-4明显降低(P均0.05)。结论乌司他丁可诱导脓毒症小鼠Treg细胞凋亡,上调IL-2和干扰素γ,降低IL-4水平。     

miR-328-5p通过调节自噬影响乳腺癌细胞对紫杉醇化疗敏感性的机制

目的 探究miR-328-5p通过调节自噬影响乳腺癌细胞对紫杉醇(Taxol)化疗敏感性的作用机制.方法 选取乳腺癌MCF-7细胞为研究对象,根据目的不同分为miR-NC组(转染阴性对照)、miR-328-5p组(转染miR-328-5p mimics)、miR-NC+Taxol组和miR-328-5p+Taxol组,...     

小鼠脐血移植模型的建立及角质细胞生长因子增强移植后免疫重建的机制研究

目的 探讨角质细胞生长因子(KGF)在小鼠异基因脐血移植(UCBT)后免疫重建中的作用及其机制.方法 取孕19.5 d胎鼠外周血作为脐血移植物.第1批UCBT实验中32只BALB/c小鼠随机分为4组,每组8只,分别输注PBS、1×10~6、2×10~6、3×10~6个脐血单个核细胞(MNC).第2批UCBT实验中24只BALB/c小鼠随机分为3组,每组8只,分别输注1×10~6、2×10~6、3×10~6个脐血MNC,所有小鼠+8 d输注1×10~9个血小板支持.第3批UCBT实验中16只BALB/c小鼠随机分为2组,每组8只,KGF组小鼠TBI前注射KGF,对照组注射PBS,两组都输注2×10~6个脐血MNC,+8 d输注血小板支持.以生存期、脾脏淋巴细胞亚群、胸腺输出功能为观察指标.结果第1批UCBT实验中PBS组小鼠+13.5 d内全部死亡,输注1×10~6、2×10~6、3×10~6个MNC三组小鼠+100 d分别生存2只、3只、3只.第2批UCBT中输注1×10~6、2×10~6、3×10~6个MNC三组小鼠+100 d分别生存7只、8只、8只.第3批UCBT实验中,移植后对照组小鼠脾T细胞、NKT细胞、NK细胞和B细胞数分别为(9.57±0.74)×10~6、(0.64±0.06)×10~6、(1.43±0.10)×10~6、(19.13±1.50)×10~6个.KGF输注组分别为(13.47±0.74)×10~6、(0.89±0.03)×10~6、(1.79±0.04)×10~6、(20.50±0.91)×10~6个.KGF输注组T细胞、NKT细胞、NK细胞较对照组高(P＜0.05);对照组小鼠sjTREC水平为(182.2±10.7)拷贝/105个细胞;KGF输注组为(224.2±9.6)拷贝/105个细胞,KGF输注组明显高于PBS对照组(P=0.019).结论 孕19.5 d胎鼠外周血富含造血干细胞,+8 d输注血小板浓缩物可建立异基因UCBT小鼠模型.KGF具有增强小鼠异基因UCBT后胸腺输出功能及促进T细胞免疫重建作用.     

全身放疗对U14荷瘤小鼠肿瘤微环境免疫细胞及RGS5、CXCR4的影响

目的探究全身放疗对U14荷瘤小鼠肿瘤微环境免疫细胞及G蛋白调节信号蛋白5(RGS5)、趋化因子受体4(CXCR4)的影响。方法 60只BALB/c小鼠随机分为3组,即对照组、模型组和放疗组。模型组和放疗组通过皮下注射U14细胞建立荷瘤裸鼠模型,对照组注射等量的生理盐水。放疗组在建模后第5天接受全身放疗。分别在建模后第4天,6天,8天,10天和12天检测肿瘤体积和脾脏调节性T细胞(Treg)细胞含量。使用Western blot和qRTPCR检测基质金属蛋白酶、G蛋白调节信号蛋白5(RGS5)、趋化因子受体4(CXCR4)蛋白和mRNA的水平。结果模型组小鼠的肿瘤体积随着时间显著升高(P 0. 001),在放疗第6天、8天、10天和12天,放疗组的肿瘤体积显著低于模型组(P 0. 001)。模型组的基质金属蛋白酶2(MMP2)和MMP9水平显著高于对照组(P 0. 001),放疗组的MMP2和MMP9蛋白和mRNA的水平显著低于放疗组(P 0. 001)。放疗前模型组和放疗组的Treg细胞比率显著高于对照组(P 0. 001),放疗后放疗组的Treg细胞比率显著低于模型组(P 0. 001),并且在放疗后第8天和第10天与模型组无显著差异(P 0. 05)。模型组的RGS5和CXCR4水平显著高于对照组(P 0. 001),放疗组的RGS5和CXCR4蛋白和mRNA的水平显著低于放疗组(P 0. 001)。结论全身放疗可有效抑制U14荷瘤裸鼠肿瘤组织的生长,同时下调MMP2和MMP9的水平抑制转移。可能的机制是全身放疗可通过抑制RGS5和CXCR4的水平抑制血管生成并抑制肿瘤的转移。     

MCF-7荷瘤小鼠血清及树突状细胞上清液中炎性细胞因子水平变化及意义

目的探讨MCF-7荷瘤小鼠模型血清和树突状细胞(dendritic cells,DCs)上清液中细胞因子水平的变化,为免疫治疗提供依据。方法裸鼠(对照组)及MCF-7裸鼠模型(荷瘤组)各10只,应用ELISA法检测血清及DCs上清液中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-12水平。结果荷瘤组血清TNF-α水平((314.81±103.36)pg/mL)低于对照组((371.87±115.30)pg/mL),但2组比较差异无统计学意义(P>0.05),DCs上清液TNF-α水平((1.88±0.10)ng/mL)高于对照组((1.72±0.07)ng/mL)(P<0.05);荷瘤组血清IL-6水平((170.72±54.51)pg/mL)高于对照组((122.35±20.65)pg/mL)(P<0.05),DCs上清液IL-6水平((57.18±5.06)pg/mL)高于对照组((44.53±4.86)pg/mL)(P<0.05);荷瘤组血清及DCs上清液IL-12水平((119.80±33.53)pg/mL和(89.76±8.89)pg/mL)均低于对照组((186.22±51.91)pg/mL和(157.98±48.31)pg/mL)(P<0.05)。结论 MCF-7荷瘤小鼠血清IL-6可能参与该类乳腺癌肿瘤细胞的生长;DCs可能参与产生TNF-α,促进IL-6分泌,抑制IL-12分泌,对肿瘤细胞的杀伤作用减弱。     

运动及运动强度对荷瘤小鼠移植肿瘤生长的影响

目的:通过不同运动强度的游泳运动,探讨运动及运动强度对小鼠接种肝癌H22和黑色素瘤B16-F10移植瘤生长的影响及机制。方法:将小鼠随机分为正常对照组、荷瘤对照组、持续有氧组、持续力竭组、荷瘤后有氧组、荷瘤后力竭组6组:其中正常对照组不荷瘤,不采取其他实验措施;所有荷瘤组小鼠均在实验开始1周后接种肿瘤细胞:ICR小鼠接种小鼠肝癌细胞H22,C57BL/6小鼠接种小鼠黑色素瘤细胞B16-F10;荷瘤对照组小鼠接瘤建模前后不采取其他实验措施;持续有氧组小鼠每天进行有氧游泳训练,时间从30min逐渐延长至60min,荷瘤后有氧组小鼠从接瘤以后开始进行上述有氧训练;持续力竭组小鼠进行每天负重游泳至力竭的训练,荷瘤后力竭组小鼠从接瘤以后开始进行上述力竭训练。所有组小鼠21d后安乐死,测定其体重、瘤重、胸腺重、脾脏重,计算胸腺指数、脾指数,并检测小鼠脾淋巴细胞增殖能力和脾NK细胞杀伤能力。结果:荷瘤后有氧组ICR小鼠瘤重明显降低(P0.05),C57BL/6小鼠瘤重没有明显变化,荷瘤后有氧组ICR和C57BL/6小鼠脾指数升高(P0.001,P0.01),荷瘤后有氧组ICR小鼠脾淋巴细胞增殖能力和脾NK细胞杀伤能力均明显提高(P0.01,P0.001),而且ICR小鼠荷瘤后有氧组胸腺指数显著升高(P0.05),荷瘤后有氧组C57BL/6小鼠胸腺指数没有明显变化;持续力竭组C57BL/6小鼠瘤重显著增加(P0.05),ICR小鼠瘤重没有明显变化,持续力竭组C57BL/6小鼠脾淋巴细胞增殖能力和脾NK细胞杀伤能力均明显下降(P0.05,P0.001),而持续力竭组ICR小鼠脾淋巴细胞增殖能力虽有下降趋势,但与脾NK细胞杀伤能力一样,与荷瘤对照组相比无显著性差异,胸腺指数却显著升高(P0.01)。结论:在实验时间范围内,运动及运动强度对小鼠肿瘤的生长有明显影响,瘤重的变化与运动强度对小鼠脾脏和胸腺功能的影响相关。     

霉酚酸酯诱导Balb/c小鼠调节性T细胞的分化和增殖

目的:观察霉酚酸酯对Balb/c小鼠调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)分化和增殖的影响,进一步探讨其可能的免疫耐受诱导机制。方法:取8周龄的SPF级Balb/c小鼠24只,随机分为3组,霉酚酸酯组(MMF组):每只灌胃霉酚酸酯40mg/(kg·d),环孢素组(CsA组):每只灌胃CsA10mg/(kg·d),对照组:灌胃每天予等体积生理盐水。3周后眼眶静脉取血,无菌条件下分离脾脏,制备单细胞悬液。采用流式细胞仪检测小鼠外周血和脾细胞CD4+CD25+Treg细胞,免疫组化法检测小鼠脾脏Foxp3蛋白的表达。结果:霉酚酸酯组小鼠外周血和脾细胞中CD4+CD25+Treg细胞的比例分别为(6.35±0.09)%和(11.62±1.10)%,CsA组小鼠外周血和脾细胞中CD4+CD25+Treg细胞的比例分别为(2.57±0.09)%和(5.46±0.75)%,对照组小鼠外周血和脾细胞中CD4+CD25+Treg细胞的比例分别为(4.64±0.13)%和(7.61±0.73)%,差异均有显著性(P<0.01)。霉酚酸酯组小鼠脾脏Foxp3蛋白的表达水平明显高于对照组,差异有显著性(P<0.01),CsA组小鼠脾脏Foxp3蛋白的表达水平明显低于对照组。结论:霉酚酸酯能够明显诱导Balb/c小鼠体内CD4+CD25+Treg细胞的增殖,并能提高Foxp3蛋白的表达,有利于免疫耐受的形成,其免疫抑制机制与CsA不同。     

氩氦刀治疗小鼠肺腺癌后瘤周注射树突状细胞对冷冻免疫效应的影响

目的探讨氩氦刀治疗小鼠肺腺癌后,在瘤体周围注射树突状细胞(dendritic cells,DCs)是否可提高冷冻免疫效应。方法 38只T739荷瘤小鼠(LA795肺腺癌,瘤体位于右后肢皮下,直径7±0.5mm)随机分成2组(19只/组)。实验组:双循环氩氦冷冻消融后于瘤周注射DCs;对照组:双循环氩氦冷冻消融。术后第3、7、14d脱颈处死小鼠,眼眶采血(3只/组/时间点),流式细胞术微球阵列法检测细胞因子IL-12,IFN-γ,IL-4,IL-10浓度;流式细胞术检测CD4+T、CD8+T细胞比例;每组10只小鼠用于观察生存时间。结果实验组在各时间点IL-12、IFN-γ浓度均高于对照组,IL-4、IL-10浓度均低于对照组;实验组CD4+T细胞比例在各时间点均高于冷冻治疗组,CD8+T细胞在术后第7、14d均高于对照组。以上所有差异均具有统计学意义(P0.05)。在术后第3d,实验组CD8+T细胞比例高于对照组,但其差异无统计学意义(P0.05)。实验组生存率高于对照组,其差异具有统计学意义(P0.05)。结论氩氦冷冻消融术后在瘤周注射DCs可显著提高冷冻治疗的抗肿瘤免疫效应,并延长生存时间。     

栀子苷预处理对大鼠心肌缺血再灌注后PI3K/Akt信号通路的研究

目的探索栀子苷(GEN)对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)后心肌细胞氧化应激水平及心肌凋亡的影响极其与PI3K/Akt信号通路的关系。方法60只SD大鼠随机分为3组:缺血再灌注组(I/R),栀子苷预处理+缺血再灌注组(GEN+I/R),栀子苷+缺血再灌注组+PI3K/Akt信号通路抑制剂(LY294002)组(GEN+I/R+LY),GEN+I/R组在I/R造模前给予50 mg/kg GEN预处理,GEN+I/R+LY组在GEN预处理前给予0.3 mg/kg LY294002。ELISA法检测大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)、心肌组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)以及钙泵(Ca~(2+)-ATPase)水平;Western blot检测心肌组织p-e NOS,p-Akt,Akt以及Bcl-2、Bax蛋白表达;免疫组织化学染色检测p-e NOS,p-Akt蛋白表达。结果与I/R组比较,GEN+I/R组LDH、MDA含量显著降低,SOD、Ca~(2+)-ATPase显著升高(P0.05);与GEN+I/R组比较,GEN+I/R+LY组LDH、MDA含量显著升高,SOD、Ca~(2+)-ATPase显著降低(P0.05)。并且,与I/R组比较,GEN+I/R组p-eNOS、p-Akt、Akt、Bcl-2表达量以及p-e NOS,p-Akt免疫荧光强度显著提高(P0.05),Bax蛋白表达显著降低(P0.05);与GEN+I/R组比较,GEN+I/R+LY组p-eNOS、p-Akt、Akt、Bcl-2表达量以及pe NOS、p-Akt免疫荧光强度显著降低,Bax蛋白表达量显著升高(P0.05)。结论栀子苷可通过激活PI3K/Akt信号通路抑制心肌缺血再灌注后氧化应激及细胞凋亡从而发挥保护作用。