双特异单克隆抗体及其在免疫诊断学上的应用

双特异抗体又称双功能抗体。此类抗体的两个抗原结合位点具有不同特异性,可同时结合两个不同的抗原或抗原决定簇,即结构上双价、功能上单价。它实际是一种杂交分子,两条H链之间与两条I链之间的结构不同,两个Fab片段也不同。早期的双特异抗体是用化学重组法制备,量少且活性较低。1983年,Milstein等在单克隆抗体的原理上,进一步运用杂交一杂交瘤技术,以生物学方法制备出双特异性单克隆抗体（简称BSMAb）。BsMAb既可通过融合两个杂交瘤形成来源于4个亲代细胞的四体瘤,也可用特异针对一种抗原的杂交瘤与用另一抗原免疫小鼠脾细胞…     

抗原修复对端粒酶逆转录酶免疫组化染色效果的影响

常规石蜡切片标本 ,一般均用甲醛固定 ,而经甲醛固定的组织 ,其抗原蛋白的氨基与固定液中的醛基交联形成羧甲基而封闭了抗原决定簇 ,使其免疫组化标记的敏感性明显降低。免疫组化染色的成功与否 ,抗原决定簇的保存和暴露是其中一个重要的环节。要充分暴露抗原决定簇 ,目前常用的抗原修复法有微波、高压和酶消化等 ,它们对大多数抗体的标记是有益的 ,但是 ,有些抗体经抗原修复后不再发生反应或阳性率降低。端粒酶逆转录酶蛋白 (ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎ ｓｃｒｉｐｔａｓｅ,ＴＲＴ)是决定端粒酶活性的最主要成分 ,在肿瘤…     

何谓共同抗原和共同决定簇？

答：如果甲乙两种抗原物质表面具有某种相同的抗原决定簇，那么由这两种抗原物质刺激机体产生的抗体，不但能够分别与相应的甲乙两种抗原产生特异性反应，而且能够彼此发生交叉反应，只是反应程度较弱而已。这种性质相同的抗原或抗原决定簇就称为共同抗原或共同决定簇。共同抗原又称为交叉抗原。     

名词注释

用放射性同位素标记已知抗原(或抗体),利用抗原抗体的特异性反应,检测待检样本中的相应抗体(或抗原)的免疫学方法。结果借助于放射性强度显示。以定量的放射性同位素标记的抗原和待测样本中的抗原,与对应抗体的作用,使这两种抗原与抗体竞争性结合。通过测定抗原和抗体复合物(B)和游离抗     

癌胚抗原化学发光免疫分析方法学研究

目的研制化学发光免疫分析法(CLIA)癌胚抗原(CEA)检测试剂盒。方法采用双抗体夹心法用2种不同的单克隆抗体分别与CEA分子上不同的抗原决定簇发生反应。用1株单抗包被微孔板制成固相抗体,用另1株单抗标记碱性磷酸酶(ALP)制成酶标抗体。在包被微孔中加入CEA校准品或待测血清及酶标抗体,温育后即形成固相抗体-抗原-酶标抗体的复合物,充分洗涤后加入化学发光底物液,于30～90 min内测定其发光强度(RLU),根据标准曲线即可算出标本中CEA的含量。结果该试剂盒其敏感性可达0.058 ng/mL;批内和批间变异系数(CV)分别为5.5%～9.3%和10.2%～12.2%。经实验表明,CLIA与免疫放射分析法(IRMA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别呈高度相关,相关系数(r)分别为0.991、0.984;平均回收率为97.3%。结论新研制的CEA CLIA试剂盒各项技术指标均达到了国外同类产品水平。     

高压锅水浴法修复组织抗原防脱片技术的应用

目前用于免疫组化的抗体近千种 ,不同抗体对病理切片的要求不尽相同。有些抗体 (单抗或多抗 )必须在组织切片经高压修复后才能有效使用 ,如ＥＲ、ＰＲ、ｐ5 3及一些多药耐药标记等。用于免疫组化的病理组织 ,经福尔马林固定后许多抗原决定簇被醛基交联封闭 ,无法与抗体结合 ,采用高温高压 (下称常规法 )处理这些组织 ,就可破坏醛基交联 ,使抗原暴露 ,从而与抗体有效结合。但是由于免疫组化操作步骤多 ,历时长 ,整个过程必须在有水的环境中完成 ,组织切片容易从玻片上脱落。曾采用几种常规组织抗原修复方法 ,防脱片效果并不理想。经过实践 ,…     

免疫组化染色中某些抗体最佳修复方式探讨

目的 以存梢蜡块,选择最佳抗原修复液,而进行抗原修复,使抗原决定簇暴露,达到最理想染色结果 .方法 用柠檬酸缓冲液(pH 6.0)、EDTA缓冲液(pH 9.0),及高压加热法,胰蛋白酶消化对CD68、lysozyme,α-AT和S-100不同的抗体进行修复.消化,观杏抗原决定簇暴露.结果 3种抗原修复法的免疫组化切片,胰蛋白酶修复法阳性率显著高于高压加热法与微波加热法且染色背景清晰,高压加热法与微波加热法非特异性着色较深,阳性率低.结论 对不同的抗体选用不同的修复方法 可以达到最佳效果.     

T细胞受体β独特型抗原决定簇DNA疫苗诱导抗淋巴瘤抗体的研究

目的 观察T细胞受体（TCR）β不同独特型抗原决定簇DNA疫苗诱导BALB/c小鼠抗人类CEM淋巴瘤细胞免疫反应的情况。方法 RT-PCR扩增CEM细胞特异性重排的TCRβ基因片段，克隆至真核表达载体pcDNA3中，然后以此为模板，扩增编码不同抗原决定簇的基因片段到pcDNA3中作为DNA疫苗。肌肉注射法免疫小鼠，间接免疫荧光法检测小鼠血清中抗体生成情况。结果 CEM细胞TCRβ共包含5个抗原决定簇，其DNA疫苗免疫的6只小鼠全部产生了特异性抗独特型抗体（最高滴度1：480）；含4个抗原决定簇的DNA疫苗免疫的6只小鼠中有4只产生了特异性抗独特型抗体，但滴度均较低（最高滴度1：80）；仅含2个抗原决定簇的DNA疫苗未能使小鼠产生特异性抗独特型抗体。结论 包含TCRβV区全长，共有5个抗原决定簇的独特型DNA疫苗可以诱导小鼠产生抗淋巴瘤细胞的独特型特异性抗体；含有4个抗原决定簇的DNA疫苗仍可诱导特异性抗体的生成，但这种反应较弱，而仅含有2个抗原决定簇的DNA疫苗则不能诱导小鼠产生抗淋巴瘤的特异性抗体。     

青霉素皮试阴性,有的人注射时为什么还会发生过敏反应?

答:为了回答这个问题,首先需要了解青霉素过敏的发生机理。当青霉素过敏原与过敏者体内的蛋白质或多肽结合成全抗原时,促使机体产生相应的抗体。由于抗原和抗体的相互作用,引起各种类型的过敏反应。青霉素过敏原分为两大类,其性质与反应类型有一定的关系:(1)大抗原决定簇:即青霉噻唑蛋白,是引起大多数过敏反     

因子ⅢⅤ相类抗原的酶免疫测定法

因子Ⅷ相关抗原(FⅧRAg)能表示抗原决定簇与Vou Willebraud因子蛋白质的关系,该抗原可用抗纯化因子Ⅷ制备异种抗血清来测定。在VonWillebrand’s病(乙型血管性假血友病)人血清中,此种抗原的浓度减低或测不出,但在典型的血友病人则正常或增加,故可用FⅧRAg定量测定来鉴别这两种疾病。在血友病A携带者,因子Ⅷ凝血活性与FⅦRAg的比率低于正常,因此ⅧRAg的测定也广泛用于女性血友病A携带者的检查。对于FⅧRAg的测定目前广泛采用Laurell’s免疫电泳法,以及放射免疫、荧光免疫测定法等。作者介绍了一种使用商品辣根过氧化物酶标记抗体的酶联免     

甲胎蛋白与CA 19-9双标记时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的建立钐(Sm3+)标记抗甲胎蛋白(AFP)单克隆抗体(单抗)和铕(Eu3+)标记抗糖类抗原19-9(CA19-9)单抗的双标记时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)法。方法将抗AFP单抗与抗CA19-9单抗混合包被96孔板作为捕获抗体,用Sm3+标记抗AFP单抗、Eu3+标记抗CA19-9单抗作为检测抗体,建立同步检测AFP/CA19-9的TrFIA法。结果建立的TrFIA法检测AFP/CA19-9的灵敏度分别为0.3 ng/mL和2.5 U/mL。AFP分析内和分析间变异系数(CV)分别为2.6%～5.9%和4.3%～8.1%,CA19-9分析内和分析间CV分别为4.9%～5.6%和5.0%～6.3%。分别用建立的TrFIA法与Perkin-Elmer公司解离增强镧系荧光免疫分析(DELFIA)法同时测定血清样本,两法AFP与CA19-9的相关系数分别为0.99与0.98。结论建立的同步检测AFP与CA19-9的TrFIA法灵敏、简便、准确,有助于消化道肿瘤和睾丸癌等的辅助诊断。     

关于标本因素对ELISA检测结果影响的分析

ELISA(enzymelinkedimmunosorbentassay)即酶联免疫吸附试验 ,是一种常用的固相酶免疫测定方法。ELISA的基本原理是 :①使抗原 (或抗体 )结合到某种固相载体表面 ,并保持其免疫活性 ;②使抗原 (或抗体 )与某种酶联结成酶标抗原 (或抗体 ) ,而且此酶标抗原 (或抗体 )既保留其免疫活性 ,又保留其酶活性 ;③测定时将待测标本 (抗体或抗原 )和酶标抗原(或抗体 )按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应 ,再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开 ,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比…     

乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性有何诊断意义?——答贾宜之

目前已卸乙型肝炎病毒(HBV)在宿主体内一般可出现三种抗原体反应:即表面抗原(HB_sA_g)一表而抗体(HB_sA_b),核心抗原(HB_cA_g)一核心抗体(HB_cA_b),E抗原(HB_eA_g)—E抗体(HB_eA_b),它们都属于HBV感染标记。在血清内除了HB_cA_g不能被检测外,其余5个标记皆可在血清内被检测,任何一个标记出现阳性,均表明机体已感染过HBV,但其意义各有不同。     

抗体的亲和力与亲合力有何不同？

答:亲和力是指一个免疫球蛋白分子单体的一条重链与一条轻链所构成的抗原结合部位与抗原决定簇之间的结合力。亲和力是指抗体结合部位(Fab段)与相应抗原决定簇的结合强度;而亲合力则是指整个抗体分子与抗原物质之间的结合强度。——摘自《护士继续教育手册》抗体的亲和力与亲合     

免疫过滤及胶体金染色检测D二聚体

检测血浆中纤维蛋白降解终产物D-二聚体有助于血栓形成性疾病的诊断和治疗监测。以前曾用Latex粒子凝集和多克隆抗体血凝法。作者应用针对D-二聚体的新抗原决定簇的单克隆抗体,用薄膜过滤和胶体金标记抗体的染色法定量D二聚体。     

血小板糖蛋白Ⅱa、Ⅲa和Ⅰb携带血型A和B决定簇

血小板上鉴定出ABH血型决定簇已有多年,但有关该决定簇在血小板膜上定位的资料极少。作者应用多项技术,鉴定出至少有3种不同的血小板糖蛋白(GP)即GP Ⅱ a,Ⅲ a和Ⅰb带有A、B决定簇,其中GP Ⅱ a最为显著。作者应用经血小板吸收和酸洗脱纯化的高效价IgG抗-A、抗-B血清,各种糖蛋白单克隆抗体,以放射免疫沉淀法、免疫印迹术和单克隆抗体固化血小板抗原法(MAIPA),对血小板A、B血型决定簇在血小板糖蛋白上的定位,作了精确的测定。     

Rh(D)抗原:不完全D抗原及相关性低频抗原

Rh(D)抗原的表达有量和质(不完全D抗原)的变化。本文回顾并讨论了已发表的文章和15年来研究D抗原变异的成果。D抗原决定簇决定了单克隆抗D与不完全D抗原的反应模式。不完全D抗原可按D抗原决定簇进行报告,但是有量变化的D抗原(弱D)的细胞抗原决定簇难以通过血液凝集试验进行可靠的鉴定。9种不完全D抗原(Ⅱ～Ⅶ类抗原)DFR抗原和两种以前未报导的抗原,通过其抗原决定簇和与低频抗原的相关性而作出鉴定。单克隆抗-D可鉴别出16种D抗原决定     

HLA抗体所致溶血性输血反应

至今未能肯定HLA抗体是否引起溶血性输血反应。作者在9例均因严重贫血需反复输注红细胞后产出HLA抗体的患者中测定了~(51)Cr标记的红细胞寿命及其破坏部位。供者的ABO、Rh血型及其他的红细胞特异性抗原系统均与患者相同,唯各种HLA抗原不同。用盐水、白蛋白、酶介及间接抗人球蛋白试验进行红细胞血清学试验。放射免疫抗人球蛋白试验(RIAT)作为患者血清与相应供者红细胞洗脱物的交叉试验。用淋巴细胞毒试验过滤患者血清及红细胞洗脱物的HLA抗体。输血后立即注入~(51)Cr标记的红细胞,并于注入后0.5小时以及随后间隔1、24小时心前区、肝脾区闪烁扫描,测定红细胞破坏部     

自检HBV免疫标志物ELISA试剂是否失效

酶联免疫吸附试验(EL ISA)是建立在酶免疫技术上的,是以酶标记的抗体(或抗原)作为主要试剂,将抗原抗体反应的特异性和酶高效催化反应的专一性相结合的一种免疫检测技术,即将生物反应(抗原抗体反应)与酶促反应组合在一起的免疫-酶促反应。其基本原理为:将抗体(或抗原)包被在固相     

抗原修复后内源性生物素对免疫组化染色影响的消除

免疫组织化学是应用免疫学原理，利用特异抗体与组织切片中的抗原相结合，附以可见的标记物，在组织原位使抗原抗体结合物显现出来。免疫组织化学技术因其结果定位明显，操作简单，实验室条件及设备技术要求不高，已被广泛应用于临床病理诊断及各种科研工作。但由于组织在福尔马林中固定，经常导致抗原决定簇被封闭，阻碍了抗原与抗体的结合。因此，抗原修复技术在免疫组化操作过程中成为一个极其重要的环节。我们针对不同的抗原，采用不同的修复方法，取得较为理想的效果。