原发性肝细胞癌中WAF1/CIP1基因的表达及其临床病理意义

目的　探讨原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）中ＷＡＦ１／ＣＩＰ１ 基因ｍＲＮＡ 的表达与临床病理学指标的关系和意义。方法　采用半定量ＲＴＰＣＲ方法,检测ＷＡＦ１／ＣＩＰ１ 基因在３０ 例ＨＣＣ及其癌旁肝组织中的表达。结果　肝癌组织ＷＡＦ１／ＣＩＰ１ｍＲＮＡ 表达相对值低于其相应癌旁肝组织［（１ ．１０±０ ．４３）Ｕ 对（１．３１±０．４１）Ｕ,Ｐ＜０ ．０５］ ,有卫星灶形成的肝癌低于无卫星灶形成的肝癌［（０．８６ ±０．２９）Ｕ 对（１ ．３２ ±０．４４）Ｕ,Ｐ＜ ０．０１］ ,但其在ＨＣＣ的其他病理学指标中差异无显著性（ Ｐ＞０ ．０５） 。结论　ＷＡＦ１／ＣＩＰ１ 基因的表达异常可能参与ＨＣＣ的发生、发展,并与肝癌细胞的浸润和转移分子机制有关。     

人肝癌裸鼠移植模型癌瘤及癌周组织雄激素受体的动态变化

目的了解雄激素受体（ＡＲ）在肝癌（ＨＣＣ）进展过程中的动态变化规律。方法使用人ＨＣＣ裸小鼠原位移植模型，动态测定癌瘤及癌周组织的雄激素受体ＡＲ含量的变化。结果原位移植后４周９０％的裸鼠可见瘤结节，１０周见肿瘤坏死，１２周癌瘤大片坏死。测定原位移植瘤ＡＲ，无论是癌瘤或癌周组织，其总量均在肿瘤生长初期最高，分别为１０２３２±２１４２ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白和７２４５±１０１１ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白，然后随时间递减，到第１０周为４０９８±２１１１ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白、５３３９±７０１ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白，每２周之间差异均有显著的统计学意义。胞核和胞浆变化相同。结论雄激素在肿瘤的发生过程中由于ＡＲ的存在而起促进作用；在成瘤后雄激素的作用可能减弱，故在成瘤后再作抗雄激素治疗可能是无效的。     

男性包皮组织胞浆和核内雄激素受体分析及其初步应用

本文报道以氚标记Ｒ１８８１为特异性配基，直接测定男性包皮组织胞浆和核内雄激素受体（ＡＲ）的方法和结果。成年男性包皮组织直接制备胞浆；粗核沉淀经洗脱后用０．６ｍｏｌ／ＬＫＣｌ溶液抽提核浆。按Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图法分析了１１例样品及６份作为阳性对照的小鼠肝脏组织胞浆ＡＲ和核内ＡＲ。包皮组织胞浆ＡＲ最大受体结合容量（Ｂｍ）为２４．０３±７．１９ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白，解离常数（Ｋｄ）为１５．１３×１０－１０ｍｏｌ／ｌ；核内ＡＲ的Ｂｍ为２０４．３７±１１９．６２ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白，Ｋｄ为６．３８×１０－１０ｍｏｌ／Ｌ。３例完全型对雄激素不敏感综合征患者会阴皮肤活检组织的胞浆ＡＲ和核内ＡＲ均明显低于正常，核内ＡＲ的受体容量仅为６．１１～１１．２２ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白。由于不需经过组织和细胞培养，本方法更简便易行。     

表皮生长因子受体,多胺与肺癌的关系

探讨表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）和多胺（ＰＡ）对人肺癌及正常肺组织生长、分化的影响。方法放射性配体结合法检测ＥＧＦＲ含量；高效液相色谱分析法测ＰＡ含量。结果肺癌组织中ＥＧＦＲ的含量（５．６２±４．２６ｆｍｏｌ／ｍｇ膜蛋白）高于非癌肺组织（３．９０５±２．２７９ｆｍｏｌ／ｍｇ膜蛋白），有显著性差异（Ｐ＜０．０１）；肺癌组织ＰＡ的含量亦高于正常肺组织（Ｐ＜０．０１）。结论ＥＧＦＲ和ＰＡ可促使肺癌发展，可作为肺癌的肿瘤标记物     

老年鼠睾丸糖皮质激素受体的变化

应用放射配体结合测定法，研究老年鼠睾丸糖皮质激素受体（ＧＲ）的变化。结果表明，老年鼠睾丸细胞液ＧＲ的最大结合容量（Ｒｏ）为４８．４３±１１．８７ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白，显著低于成年鼠的５９．６９±１２．７３ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白（Ｐ＜０．０１），ＧＲ的平衡解离常数（Ｋｄ）无显著性变化（Ｐ＞０．０５）。同时测定了血浆皮质醇、睾酮浓度及外周血白细胞ＧＲ的特异结合量（Ｒｓ）和睾丸细胞液磷脂酶Ａ２的含量，探讨了ＧＲ变化与衰老发生的关系。     

大鼠卵巢内皮素－1受体的动态变化

应用放射配基结合分析法（ＲＢＡ）检测了大鼠不同发育阶段卵巢内皮素－１（ＥＴ－１）受体的动态变化。结果表明：大鼠卵巢上存在有特异性ＥＴ－１受体，受体最大结合量（Ｂｍａｘ）于窦前期卵泡含量最高（３５８．２±７３．２ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白），随卵泡发育到排卵前卵泡时显著降低（１６２．７±１７．２ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白）（Ｐ＜０．０１），排卵后的早期黄体化卵巢降至最低值（３７．８±３．４ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白）（Ｐ＜０．０１），于晚期黄体化卵巢又再次升高（９５．３±４．９ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白）（Ｐ＜０．０１）。受体亲和力（Ｋｄ值）也随卵泡和黄体发育的不同阶段呈现动态变化，在排卵前卵泡卵巢ＥＴ受体对ＥＴ－１的亲和力最低，晚期黄体化卵巢最高。结果提示，ＥＴ－１可能通过与ＥＴ－１受体结合参与卵泡和黄体发育的调节。本结果为ＥＴ－１作为卵巢内局部调节肽提供实验依据。     

nm23-H1基因mRNA在人肝细胞癌中的表达

目的　研究人肝细胞癌中肿瘤转移抑制基因ｎｍ２３Ｈ１ 的ｍＲＮＡ表达状况,并探讨其表达水平与肿瘤各项临床病理指标间的相关性。方法　应用半定量ＲＴＰＣＲ 方法检测分析人肝细胞癌组织、相应癌旁肝组织中ｎｍ２３Ｈ１ 的ｍＲＮＡ表达。结果　１５ 例肝癌及癌旁肝组织ＲＴＰＣＲ结果均为阳性,未见ｎｍ２３Ｈ１ 基因表达缺失或较大变异;肝癌组织中ｎｍ２３Ｈ１ ｍＲＮＡ表达水平明显高于相应癌旁组织（ Ｐ＝ ０－０３５）;ＡＦＰ阳性组ｎｍ２３Ｈ１ ｍＲＮＡ表达水平明显高于ＡＦＰ阴性组（ Ｐ＝０－００５） 。结论　人肝细胞癌中ｎｍ２３Ｈ１ 基因ｍＲＮＡ的异常表达可能与肿瘤的恶性生物学特征密切相关。     

不稳定心绞痛与急性心肌梗死血脂变化比较

目的：探讨不稳定心绞痛（ＵＡＰ）和急性心肌梗死（ＡＭＩ）之间血脂变化。方法：对１０９例ＵＡＰ和１４３例ＡＭＩ病人血脂值进行统计学处理分析。结果：ＵＡＰ组ＴＧ（１７１．２±１４６．９）ｍｇ／ｄｌ高于ＡＭＩ值（１３６．９±８４）ｍｇ／ｄｌ（Ｐ〈０．００５）,结论,ＵＡＰ病人ＬＤＬ－Ｃ／ＨＤＬ－Ｃ比值增高可能与其血管病变严重性相关。     

人肝癌裸鼠转移模型中纤溶酶原激活物抑制剂变化与肝癌生物学特性

目的研究纤溶酶原激活物抑制剂（ＰＡＩ１）与肝细胞癌（ＨＣＣ）生物学特性的关系。方法构建ＬＣＩＤ２０人肝细胞癌裸鼠转移模型（肝癌转移模型）４０例,用ＰＡＩ１试剂盒和ＰＡＩ１单抗分别做酶活性检测和免疫组化,观测肝癌转移模型发展过程中ＰＡＩ１的变化。结果肝癌转移模型从肿瘤发生早期（２周）至晚期（５周）,血浆ＰＡＩ１从６２±１８Ａｕ／ｍｌ增至１５４±０７Ａｕ／ｍｌ,Ｐ＜００５。肿瘤组织中ＰＡＩ１从０４±０１Ａｕ／ｍｇ增至０８±０３Ａｕ／ｍｇ;血浆中ＰＡＩ１改变与肿瘤大小和ＡＦＰ变化相关（ｒ＝０９６４８和ｒ＝０９５４４,Ｐ＜００５和Ｐ＜００５）。结论肝癌转移模型肿瘤组织及血浆中ＰＡＩ１随ＨＣＣ病程进展逐步升高。ＰＡＩ１与ＨＣＣ肿瘤增长和ＡＦＰ升高有良好的相关性。ＰＡＩ１与ＨＣＣ侵袭性及预后密切相关     

基质金属蛋白酶-9与肝细胞癌侵袭转移性的关系

目的：揭示基质金属蛋白酶－９（ＭＭＰ－９）与肝细胞癌（ＨＣＣ）侵袭转移性的关系,并探索ＭＭＰ－９判断肝细胞癌侵袭转移性的作用。方法：通过逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）对正常肝、ＨＣＣ及其癌旁肝组织、癌栓组织中的ＭＭＰ－９ ｍＲＮＡ进行半定量研究,并与ＨＣＣ侵袭转移的病理指标进行统计分析。结果：正常肝、ＨＣＣ及其癌旁组织、癌栓组织中均有ＭＭＰ－９ ｍＲＮＡ表达;癌组织、癌栓组织中,ＭＭＰ－９ ｍＲＮＡ水平增高与ＨＣＣ侵袭转移性有关;癌组织ＭＭＰ－９ ｍＲＮＡ水平高于癌旁组织,ＭＭＰ－９是判断ＨＣＣ侵袭转移性的重要指标。结论： ＭＭＰ－９与ＨＣＣ侵袭转移性有关,ＨＣＣ组织中的ＭＭＰ－９ ｍＲＮＡ水平是否高于癌旁组织可作为ＨＣＣ侵袭转移性的指标。     

人肝癌裸鼠移植模型癌及癌周组织雄激素受体的动态变化

OBJECTIVE: To research into the law of androgen-receptor (AR) dynamic change in developing course of human HCC. METHOD: Dynamic measurement of AR in tumor and peritumorous tissue was performed in nude mice model with orthotopic transplanted human HCC. RESULT: Tumor nodules were present in 90% nude mice 4 weeks after transplantation, tumor necrosis was found in the 10th week, and remarkable necrosis occurred in the 12th week. The quantity of AR in tumor and peritumorous tissue was highest in the early stage of tumor (102.32 +/- 21.42 fmol/mg protein and 72.45 +/- 10.11 fmol/mg protein respectively), and then decreased progressively with time to the 10th week (40.98 +/- 21.11 fmol/mg protein and 53.39 +/- 7.01 fmol/mg protein respectively). The difference in AR between each two weeks was significant. CONCLUSION: Androgen promotes the development of tumor because of existence of AR, and its action may decline after establishment of tumor. Therefore, antiandrogen treatment may be ineffective after establishment of tumor.     

B超发现的未能扪及的睾丸肿块

探讨对于临床上体检不能扪及而由Ｂ超检查发现的睾丸肿块的诊治方法。对方法对有关病例的超声检查表现及其病理结果进行回顾性分析。结果近１０年来６００多例因子各种原因行阴囊超声检查的患者中,共发现１４例１６处体检未能扪及的睾丸肿块。患者平均年龄４２．４岁,肿块直径平均１２．１ｍｍ,除１例外其余肿块均表现为低回声团块。     

Mechanistic Background and Clinical Applications of Indocyanine Green Fluorescence Imaging of Hepatocellular Carcinoma

Background

Although clinical applications of intraoperative fluorescence imaging of liver cancer using indocyanine green (ICG) have begun, the mechanistic background of ICG accumulation in the cancerous tissues remains unclear.

Methods

In 170 patients with hepatocellular carcinoma cells (HCC), the liver surfaces and resected specimens were intraoperatively examined by using a near-infrared fluorescence imaging system after preoperative administration of ICG (0.5 mg/kg i.v.). Microscopic examinations, gene expression profile analysis, and immunohistochemical staining were performed for HCCs, which showed ICG fluorescence in the cancerous tissues (cancerous-type fluorescence), and HCCs showed fluorescence only in the surrounding non-cancerous liver parenchyma (rim-type fluorescence).

Results

ICG fluorescence imaging enabled identification of 273 of 276 (99 %) HCCs in the resected specimens. HCCs showed that cancerous-type fluorescence was associated with higher cancer cell differentiation as compared with rim-type HCCs (P < 0.001). Fluorescence microscopy identified the presence of ICG in the canalicular side of the cancer cell cytoplasm, and pseudoglands of the HCCs showed a cancerous-type fluorescence pattern. The ratio of the gene and protein expression levels in the cancerous to non-cancerous tissues for Na⁺/taurocholate cotransporting polypeptide (NTCP) and organic anion-transporting polypeptide 8 (OATP8), which are associated with portal uptake of ICG by hepatocytes that tended to be higher in the HCCs that showed cancerous-type fluorescence than in those that showed rim-type fluorescence.

Conclusions

Preserved portal uptake of ICG in differentiated HCC cells by NTCP and OATP8 with concomitant biliary excretion disorders causes accumulation of ICG in the cancerous tissues after preoperative intravenous administration. This enables highly sensitive identification of HCC by intraoperative ICG fluorescence imaging.     

载脂蛋白M在肝癌组织中的表达

目的 分析肝细胞肝癌患者血浆中载脂蛋白M(ApoM)的水平,观察ApoM mRNA水平在肝癌癌组织与癌旁组织中的表达.方法 使用Dot-blot技术检测36例肝癌患者及64例正常人血浆中APOM的水平,应用实时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测ApoM mRNA在肝癌癌组织与癌旁组织中的水平,并采用Elivision TMplus免疫组织化学染色法对肝癌癌组织与癌旁组织ApoM组织学分析.结果 肝癌患者血浆中ApoM的水平为(0.61±0.30)ODu·mm-2,明显高于正常人(0.37±0.07)ODu·mm-2,两者差异有统计学意义(P<0.01).肝癌组织APOM mRNA表达明显低于肝癌癌旁组织水平(P<0.05),免疫组织化学染色进一步证实了肝癌组织ApoM阳性显色低于癌旁癌组织.结论 肝癌癌组织APOM mRNA水平明显低于肝癌癌旁组织,而血浆中ApoM的水平明显高于正常人.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ和PTEN在肝癌组织中的表达及意义

目的检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和PTEN蛋白在肝癌组织与癌旁组织的表达情况,探讨两种蛋白表达㈦临床病理各参数的关系及意义。方法收集100例中山大学附属第一医院手术切除的肝癌㈦癌旁组织标本,构建组织微阵列芯片,应⒚免疫组化染色检测PPARγ和PTEN蛋白的表达。在体外实验中,应用Western blotting法检测人肝癌Huh7细胞中PPARγ活化对PTEN蛋白的影响。结果PPARγ、PTEN蛋白在肝癌组织中阳性表达率分别为82%和62%,明显低于癌旁组织的表达率(分别为95%和92%),差异有统计学意义(P0.05)。肝癌组织中PPARγ蛋白的表达与癌组织的分化程度密切相关,PTEN蛋白表达与癌组织的分化程度和肿瘤门静脉浸润关系密切。体外实验证实Huh7细胞中PPARγ活化后上调PTEN蛋白表达。结论PPARγ和PTEN蛋白在肝癌组织中阳性表达率均低于癌旁组织,PPARγ活化后上调PTEN蛋白表达,两种蛋白在肝癌发生发展中起着重要作用。     

肝动脉灌注化疗后肝细胞癌8-OHdG、p53和p21~(waf1/cip1)的表达研究

目的 探讨肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者经导管肝动脉灌注化疗(transcathcter arterial chemotherapy,TAC)后肝组织8-羟基-2'脱氧鸟嘌呤核苷(8-hydroxy-2'-deoxyguanosine,8-OHdG)、p53和p21_(waf1/cip1)蛋白的表达.方法 HCC患者分为两组,术前行TAC治疗的HCC患者39例(TAC组),术前未行TAC治疗的HCC患者50例(非化疗组),肝血管瘤和肝内胆管结石患者15例为对照组.免疫组织化学法检测肝组织的8-OHdG、p53和p21~(waf1/cip1)蛋白表达水平.结果 8-OHdG表达在癌组织中表现为非化疗组高于TAC组(F=9.516,P＜0.05),对照组最低(F=9.516,P＜0.01);在TAC组与非化疗组均为癌组织高于痛旁组织(分别t=7.101,t=8.020,均P＜0.001);癌旁组织与对照组的8-OHdG水平差异尤统计学意义;TAC组与非化疗组巾的癌组织和癌旁组织的8-OHdG表达呈正相关(r=0.651,r=0.493,均P＜0.001).p53表达在TAC组和非化疗组差异无统计学意义.p21~(waf1/cip1)三组间有差异表达.在癌组织中和癌旁组织p21~(waf1/cip1)表达均为对照组最高(F=13.459,F=16.613,均P＜0.001),TAC组高于非化疗组(F=13.459,F=16.613,均P＜0.01),但癌组织和癌旁组织比较差异无统计学意义.21_(waf1/cip1)在非化疗组中癌组织和癌旁组织表达的水平呈正相关(r=0.872,P＜0.001).结论 HCC痛组织的8-OHdG、p53和p21~(waf1/cip1)的表达高于痛旁和非HCC肝组织;癌细胞可能经由增强的氧化应激修复机制逃脱介入化疗.     

肝细胞生长因子及其受体c-met在肝细胞癌中的表达与预后价值

目的研究肝癌切除前、后血清肝细胞生长因子(HGF)的动态变化及其受体c met在癌组织中的表达,探讨HGF/c met对手术切除后肝癌患者的预后价值。方法收集手术切除的25例肝细胞癌患者血清及组织标本,用酶联免疫法(ELISA)测定术前1d、术后第3、7、10天血清HGF浓度,分别用免疫组织化学及逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法检测肝癌及癌旁组织中c met蛋白及mRNA的表达。分析术前血清HGF水平及癌组织中c met表达程度与不同临床病理因素之间的关系及影响手术后血清HGF水平变化的因素。以20例健康献血员为正常对照组,22例慢性乙型肝炎患者及22例乙型肝炎肝硬化肝功能失代偿(ChildB或C级)患者作为慢性乙肝组和肝硬化失代偿组。结果肝癌患者血清HGF浓度高于正常对照组及慢性乙肝组[(1.03±0.09)ng/ml比(0.69±0.02)、(0.74±0.09)ng/ml,P<0.05],但与肝硬化失代偿组[(1.04±0.11)ng/ml]比较差异无统计学意义。术后HGF浓度上升高峰出现在术后第3天,术后第7、10天逐渐下降,但仍高于正常水平。术前、术后各组的血清HGF组间比较,仅术后第3天组差异有统计学意义。影响术前血清HGF水平的主要因素有:肿瘤直径>5cm、伴有结节肝硬化、门静脉癌栓、术前血清甲胎蛋白(AFP)≥400μg/L。从术前到术后第3天,大区段切除比小区段切除者的血清HGF浓度上升更明显(P=0.047)。中度和强阳性c met蛋白表达在肝癌组织中(21/25)明显高于癌旁组织(5/25)。高表达的c metmRNA见于所有肝癌组织中,在癌旁组织中仅6例有高表达。癌组织中c met蛋白表达的强度与有无合并门静脉癌栓有关,与肿瘤大小、血清AFP水平、血清HGF水平、有无肝硬化及肝癌的分化程度无相关性。但在癌旁组织,合并肝硬化组c met蛋白表达高于无肝硬化组。术后有肿瘤复发或转移的病例,其术前血清HGF水平及肿瘤组织中c met蛋白表达显著高于无复发或转移的病例。HGF水平与肿瘤组织中c met表达无相关性。结论肝癌患者有血清HGF及癌组织中c met的高表达,术后血清HGF的持续升高可能与肝癌的早期复发和转移有关。     

Androgen receptor in hepatocellular carcinoma as a prognostic factor after hepatic resection.

Androgen receptors (AR) in the cytosol of hepatocellular carcinoma (HCC) were assayed in 45 unselected patients in whom radical hepatic resection was performed. Thirty-one patients had detectable amounts of ARs in tumors, ranging from 2.3 to 82.6 fmol/mg protein with the dissociation constants (Kd) of 4.1 - 30.9 x 10(-10) M. The receptor was not found in the remaining 14 cases. AR negative HCCs were significantly more common among women and nonalcoholic patients. Otherwise, there were no significant difference in the clinicopathologic background between patients with AR positive HCCs and those with AR negative tumors. Three patients died of liver failure in the former group, whereas two died in the latter; one patient died of liver failure and the other died of pneumonia (results were not statistically significant). Excluding those five operative deaths, the recurrence rates were 67.9% in the group of patients with AR positive HCCs and 33.3% in the group of patients with AR negative tumors (0.1 less than p less than 0.05). The 5-year survival rate was significantly better (p less than 0.05) in patients with AR negative HCCs (62.2%) than in those with the positive tumors (17.3%). In light of the current results and previous experimental works by others, it is likely that testosterones enhance the growth and invasiveness of human HCC, which is mediated by AR in the tumor.     

丙肝病毒基因在肝门部胆管癌组织中的表达及其意义

目的 探讨丙肝病毒核糖核酸（ＨＣＶ ＲＮＡ）及蛋白在肝门部胆管癌组织中的表达及其生物学意义。方法 应用套式逆转录、多聚酶链反应（ｎｅｓｔｅｄ ＲＴ－ＰＣＲ）和免疫组织化学技术检测３６例肝门部胆管癌患者癌组织和癌旁组织中ＨＣＶ ＲＮＡ、非结构蛋白（ＮＳＳ）蛋白水平的表达。结果 ３６例肝门部这癌患者癌组织和癌旁组织中ＨＣＶ ＲＮＡ和ＮＳ５蛋白阳性表达率为８３．３％（３０／３６）４７．２％（１７／３６）