贝美格致痫大鼠皮层、海马γ—氨基丁酸和谷氨酸免疫反应细胞的改变

目的 γ－氨基丁酸（GABA）和谷氨酸（Glu）是脑内重要的抑制性和兴奋性神经递质，二者与癫痫发作密切相关，为了阐明癫痫发病的病理生理机制。方法 我们采用免疫细胞化学及PAP法，观察了贝美格（Bemegride,Be)腹腔致痫大鼠顶叶大脑皮层、海马CA1、CA3、齿状回Glu和GABA免疫反应细胞的改变。结果 图像分析结果显示：Be致痫组大脑皮层、海马Glu免疫反应平均阳性细胞数及光密度较正常对照组明显增加（P＜0．01）；GABA细胞数及光密度减少（P＜0．01）。结论 提示贝美格致痫作用与调节脑内GABA和Glu系统的兴奋性有关。     

癫痫大鼠海马区白细胞介素1受体1免疫反应阳性细胞的观察

目的：探讨白细胞介素１受体１在海马区的表达与癫痫发病的关系。方法；用免疫细胞化学法，观察成年和美解眠致痫大鼠海马区ＩＬ－１Ｒ１免疫反应阳性细胞分布。结果：成年大鼠海马区存在ＩＬ－１Ｒ１－ＩＲ阳性细胞，美解眠致痫后，海马区该阳性细胞数显著增多；致痫前后给予尼莫地平，海马区该阳性细胞增较癫痫大鼠显著减少，与正常比较无显著差异。     

TOLL样受体4及细胞因子在致痫大鼠发病机制中的作用

目的探讨海马组织中TOLL样受体4（TLR-4）和白细胞介素1B（IL-1β）、肿瘤坏死因子。（TNF-α）及白细胞介素10（IL-10）在致痼大鼠发病机制中的作用。方法应用戊四氮（PTZ）腹腔注射建立大鼠致痫模型后,观察大鼠致痫过程中的行为学变化,分别于14、21、28和35d留取大鼠海马组织,用酶联免疫吸附测定方法（ELISA）检测海马组织中TLR-4、IL-1β、TNF-α和IL-10的蛋白含量,用实时荧光定量PCR方法检测海马组织中TLR-4mRNA的表达水平。结果随着致痫时间的延长,大鼠癫痫发作程度逐渐加重,但是致痈30d后癫痫发作程度有所减轻。随着癫痫发作的进展,海马组织中TI。R-4、IL-1β、TNF-1β和IL-10的蛋白含量逐渐升高（P〈0．01）,海马组织中TLR-4mRNA表达水平明显增强（P〈0．1）5或P〈0．01）,而在35d有所下降。TLR-4的蛋白含量与IL-1β、TNF-α和IL-10含量呈正相关（P〈0．01）。结论TOI．L样受体4表达增强及炎症因子和抗炎因子的表达失衡在致痫发病过程中发挥着重要作用。     

癫癎大鼠海马区白细胞介素1受体1免疫反应阳性细胞的观察

目的:探讨白细胞介素1受体1(IL-1R1)在海马区的表达与癫(疒间)发病的关系。方法:用免疫细胞化学法,观察成年和美解眠致(疒间)大鼠海马区IL-1R1免疫反应(IL-1R1-IR)阳性细胞分布。结果:成年大鼠海马区存在IL-1R1-IR阳性细胞。美解眠致(疒间)后,海马区该阳性细胞数显著增多(P＜0.01);致(疒间)前后给予尼莫地平,海马区该阳性细胞均较癫(疒间)大鼠显著减少(P＜0.01),与正常比较无显著差异(P＞0.05)。结论:海马区IL-1R1参与癫(疒间)的病理过程,其机制可能与其介导该区细胞内信号传导有关。尼莫地平不仅可以阻止癫(疒间)发作,而且可以减轻其继发的脑损伤。     

乙酰唑胺对慢性癫痫大鼠海马NF-κB p65、IL-1β、IL-6及TNF-α表达的影响

目的观察戊四氮(Pentylenetetrazole,PTZ)致慢性癫痫大鼠发作以及应用AQP4抑制剂乙酰唑胺(Acetazolamide,AZA)干预后对海马核因子-κB p65(NF-κB p65)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达影响,探讨AQP4与炎症因子表达间的关系及乙酰唑胺抑制癫痫发作的可能机制。方法将50只健康成年SD大鼠随机分为对照组(每日腹腔注射生理盐水)、致痫组(每日腹腔注射亚惊厥剂量PTZ35 mg/(kg·d)建立慢性癫痫大鼠模型)、乙酰唑胺干预组[每日先腹腔注射AZA35 mg/(kg·d)预处理,30 min后再腹腔注射亚惊厥剂量PTZ]。连续注射28 d,每天记录大鼠的发作级别。最后一次给药1 d后处死所有大鼠以备实验,RT-q PCR和ELISA检测大鼠海马中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达;Western blot检测海马内NF-κB p65表达。结果对照组无明显癫痫发作,RT-q PCR和ELISA检测结果显示致痫组IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著高于对照组(P<0.001);乙酰唑胺干预组的三者水平明显低于致痫组(P<0.05),但仍高于对照组(P<0.05);Western blot结果显示致痫组海马组织NF-κB p65的表达与对照组相比显著升高(P<0.01),而乙酰唑胺干预组表达量与致痫组相比明显下降(P<0.05),但仍高于对照组(P<0.05)。结论乙酰唑胺抑制癫痫的发作的作用机制可能与乙酰唑胺抑制星形胶质细胞膜上AQP4的表达、改善星形胶质细胞水肿损伤状况、下调炎性因子表达有关。     

癫痫动物模型的建立及多药耐药基因产物P－糖蛋白的表达

目的：建立局限性癫痫动物模型，探讨多药耐药基因产物P－糖蛋白的表达规律以及癫痫耐药机制。方法：42只Wistar大鼠随机分为对照组，海人酸致痫组，苯妥英钠（phenytoin sodium,PHT) 苯巴比妥（phenobarbital,PB)和加巴喷丁（gabapentin）抗癫痫药物干预组。。致痫组大鼠于右侧海马区注射海人酸，于给药后第6h、24h、3d、5d和7d处死；干预组大鼠在注射海人酸前30min，分别行加巴喷丁（20mg/kg)或PHT（30－90mg/kg) PB(30mg/kg)腹腔注射，然后注射海人酸，给药后第6h、3d、6d和7d处死。所有动物均采用免疫组织化学法检测多药耐药基因－1的表达产物P－糖蛋白。结果：对照组大鼠无癫痫发作。致痫组大鼠均出现癫痫发作，经抗癫痫药物干预的大鼠，癫痫发作的开始时间延迟、持续时间缩短（P＜0．01）。不同剂量PHT组大鼠癫痫发作开始和持续时间有所不同，组间比较差异有显性意义（P＜0．01）；随PHT剂量的增加，P－糖蛋白表达增高。干预组阳性细胞数高于致痫组（P＜0．01）。注射海人酸后6h，出现P－糖蛋白强烈表达，3－5d后减弱，7d后完全消失；但干预组大鼠，在给药后第3d仍强烈表达，并逐渐增强，直至第7d仍无减弱趋势。结论：（1）一侧海马区注射海人酸，可成功地建立癫痫模型；（2）抗癫痫药物可使多药耐药基因－1的表达产物P－糖蛋白表达增强，且随药物剂量增加而逐渐增强。     

海马神经元激活物致疒间大鼠大脑皮质和海马γ-氨基丁酸受体的表达

目的 观察大鼠海马神经元在激活物作用下γ-氨基丁酸（GABA。）受体的表达,进一步探讨癫痫发病机制。方法 将大鼠海马神经尢被戊四氮（PTZ）作用后的激活物（实验组）及无血清培养基（对照组）注入大鼠侧脑室后观察其行为、脑电图（EEG）及脑组织GABA,受体表达的变化。结果 实验组大鼠注射后15～30min出现Ⅱ～Ⅲ级惊厥反应,EEG呈短程中高幅尖波、尖慢复合波;对照组的行为及EEG未见异常;各时点实验组大鼠脑组织GABA、免疫反应阳性细胞表达明显低于对照组（均P〈0．05）,对照组GABA,免疫反应阳性细胞广泛分布于大脑皮质、海马回、齿状回。结论 海马神经元激活物具有明显致痫作用,其致痫效应与GABAA受体含量下降有关。     

重复经颅磁刺激预处理对毛果芸香碱致痫作用及海马GAD65表达的影响

目的：观察0．5Hz经颅磁刺激预处理对毛果芸香碱致大鼠癫痫作用的影响及可能机制。方法：将大鼠随机分为0．5Hz重复颅磁刺激（rTMS）组和对照组,分别进行连续2周的相应预处理后腹腔注射毛果芸香碱,观察注药后90min内痫性发作潜伏期和痫性发作行为表现。应用免疫组化学方法观察两组大鼠海马区谷氨酸脱羧酶65（GAD65）的表达。结果：①与对照组相比,rTMS组癫痫发作潜伏期明显延长,发作程度显著减轻（均P〈0．05）;②与对照组相比,rTMS组大鼠海马区表达GAD65神经元的数量明显增多（P〈0．05）。结论：0．5HzrTMS预处理有明显抗癫痫作用,而海马区GAD65阳性表达神经元的增加可能是其抗瘸机制之一。     

侧脑室注射IL-1β、IL-1ra对癫痫大鼠脑皮层、海马Fos蛋白表达的影响

目的　了解外源性和内源性白细胞介素 - 1(IL- 1)对戊四氮 (PTZ)致痫大鼠脑皮层、海马神经元兴奋性的影响。方法　应用流式细胞免疫荧光技术对大鼠大脑皮层、海马 Fos表达进行定量分析。结果　 IL- 1β和IL - 1ra侧脑室注射后再致痫大鼠分别较单纯 PTZ致痫大鼠皮层海马 Fos表达显著增高和下降 (P<0 .0 1,P<0 .0 5)。结论　内源性和外源性 IL- 1β均有增高癫痫大鼠脑皮层及海马神经元兴奋性的作用。     

氯化锂-毛果芸香碱致(痫)大鼠海马髓鞘及少突胶质细胞系变化初步研究

目的 研究氯化锂-毛果芸香碱致(痫)大鼠不同时期海马髓鞘损伤及少突胶质细胞系变化.方法 健康成年雄性SD大鼠建立氯化锂-毛果芸香碱慢性癫(痫)模型,分为对照组、急性期组(致(痫)后24 h内)、潜伏期组(致(痫)后2周内)、慢性期组(致(痫)后2个月),各组(均n=4).采用伊文思蓝法检测各组大鼠海马血脑屏障(BBB)通透性改变;免疫荧光染色法检测海马神经元数目、髓鞘碱性蛋白(MBP)表达水平、2',3'-环核苷酸3'-磷酸二酯酶(CNPase)阳性成熟少突胶质细胞数目、未成熟少突胶质细胞标记物(04)表达水平、硫酸软骨素蛋白多糖(NG2)阳性少突胶质祖细胞数目.结果 大鼠致(痫)后,急性期组、潜伏期组和慢性期组大鼠海马各区域BBB通透性均较对照组增加(P＜0.05),以急性期组增加最为显著.各组大鼠海马不同区域NeuN阳性神经元数目均较对照组显著下降(P＜0.05).潜伏期组和慢性期组海马各区域MBP表达水平及CNPase阳性细胞数目均显著低于对照组(P＜0.05);各组海马CA1、Hilus区O4表达水平及NG2阳性细胞数目均较对照组显著增加(P＜0.05),以潜伏期组增加最为明显.结论 氯化锂-毛果芸香碱致(痫)大鼠海马区BBB通透性增加,未成熟少突胶质细胞和少突胶质祖细胞免疫荧光表达上调,髓鞘及成熟少突胶质细胞存在一定程度损伤.     

白藜芦醇对戊四氮致痫大鼠脑脊液、血清S100B蛋白的影响

目的研究白藜芦醇（Res）对戊四氮致痫大鼠脑脊液、血清S100B蛋白的影响。方法采用戊四氮（PTZ）腹腔注射建立慢性癫痫模型,造模成功后予以Res（15mg／kg·d）灌胃干预10d;采用酶联免疫吸附法测定脑脊液、血清S100B蛋白含量,海马标本行Nissl染色。结果经28d连续给药,18只大鼠符合Racine点燃标准,Res干预组大鼠痫性发作潜伏期明显延长,且发作时间明显低于癫痫模型组、二甲基亚砜组（P〈0．05）。海马Nissl染色提示Res干预对大鼠海马CAl、CA3区神经元有保护作用（P〈0．05）,而对齿状回保护作用不明显（P〉0．05）。Res干预组大鼠脑脊液、血清S100B蛋白含量低于癫痫模型组、二甲基亚砜组（P〈0．05）。结论Res降低PTZ致痫大鼠脑脊液、血清SIOOB蛋白含量,或许减缓癫痫发作脑损伤发挥神经保护作用。     

银杏叶提取物对戊四氮诱导的癫痫发作的脑保护研究

目的探讨银杏叶提取物（GBE）对癫痫发作的影响及对癫痫发作后脑损伤的保护作用。方法实验SD大鼠42只,随机分为两组,每组21只,分别用于银杏内酯B（GB）对钙超载的影响检测和活体下观察GBE对致痫大鼠的影响。结果GB剂量越大,对癫痫大鼠海马CA3区的钙超载减轻越明显;GBE剂量越大,癫痫发作的严重程度越轻,癫痫发作的潜伏期越长,海马CA3区的神经元丢失和神经细胞的凋亡数越少。结论GBE可以减轻癫痫状态下的钙超载,减轻癫痫发作的严重程度,减少神经元的丢失和神经元凋亡,对致痫大鼠具有脑保护作用。     

雌激素对海人藻酸致癎大鼠皮层和海马雌激素β受体表达的影响

目的观察添加雌激素后海人藻酸(Kainic acid,KA)致癎大鼠皮层和海马的雌激素β受体(ER-β)的变化.方法用荧光免疫组化法.结果ER-β免疫阳性细胞广泛分布于大鼠的皮层、海马、下丘脑以及杏仁核区域,主要位于细胞核.单纯添加雌激素(17-βestradiol,E2)组、海人藻酸致癎(KA)组、添加雌激素后海人藻酸致癎(E2加KA)组海马的ER-β免疫阳性细胞数较对照组(OIL组)明显减少(P＜0.05),以DG(齿状回,Dentate Gyrus)区的变化最明显;皮层(Cortex)的ER-β免疫阳性细胞表达变化不显著.E2+KA组的ER-β免疫阳性细胞与KA组相比减少,(P＜0 05).结论大剂量雌激素下调ER-β免疫阳性细胞的表达,且此作用有区域性.添加雌激素后致癎,ER-β免疫阳性细胞下调更显著,雌激素可能是通过下调DG区ER-β的表达加重癫癎的发作.     

地塞米松对癫痫大鼠脑组织内IgG免疫反应阳性细胞分布的影响

目的：研究地塞米松对大鼠脑免疫反应的影响，探讨其对某些类型癫痫的治疗机理。方法：美解眠致痫及致痫前后的分别给予地塞米松的大鼠用免疫细胞化学法观察ＩｇＧ免疫反应阳性细胞在大鼠脑组织内分布。结果；致痫前给予地塞米松大鼠脑皮层和海马ＩｇＧ－ＩＲ细胞数比单纯致痫组减少；致痫后给予地塞米松组大鼠，只有海马ＩｇＧ－ＩＲ细胞数比单纯致痫组增多。     

氯喹对戊四氮慢性致痫大鼠脑皮质及海马腺苷激酶表达的影响

目的 观察氯喹对戊四氮致痫大鼠皮质和海马区腺苷激酶(ADK)表达的影响,探讨ADK与癫痫发作的关系及氯喹在癫痫发生过程中的作用. 方法 30只健康雄性SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、戊四氮(PTZ)致痫组和氯喹干预组,每组10只.观察大鼠行为学表现,记录其脑电改变,采用免疫组化法检测3组大鼠皮质和海马区ADK的表达. 结果 对照组大鼠无癫痫发作,PTZ致痫组大鼠出现Racine评分中Ⅳ～Ⅴ级严重发作,氯喹干预组大鼠出现Ⅰ～Ⅲ级发作,差异有统计学意义(P＜0.05).PTZ致痫组大鼠脑电记录呈频发高幅的痫样波,氯喹干预组大鼠脑电记录显示慢波、小棘波.PTZ致痫组大鼠脑内ADK表达明显增强,以海马区最为显著,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).氯喹干预组大鼠脑内ADK表达降低,但距离正常水平仍有较大差距,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 癫痫脑组织中存在ADK的表达异常,氯喹可以抑制这种表达,有效控制癫痫发作.     

白藜芦醇对戊四氮致痫大鼠脑脊液、血清S1OOB蛋白的影响

目的 研究白藜芦醇(Res)对戊四氮致痫大鼠脑脊液、血清S100B蛋白的影响.方法 采用戊四氮(PTZ)腹腔注射建立慢性癫痫模型,造模成功后予以Res(15 mg/kg·d)灌胃干预10 d;采用酶联免疫吸附法测定脑脊液、血清S100B蛋白含量,海马标本行Nissl染色.结果 经28 d连续给药,18只大鼠符合Racine点燃标准,Res干预组大鼠痫性发作潜伏期明显延长,且发作时间明显低于癫痫模型组、二甲基亚砜组(P＜0.05).海马Nissl染色提示Res干预对大鼠海马CA1、CA3区神经元有保护作用(P＜0.05),而对齿状回保护作用不明显(P＞0.05).Res干预组大鼠脑脊液、血清S100B蛋白含量低于癫痫模型组、二甲基亚砜组(P＜0.05).结论 Res降低PTZ致痫大鼠脑脊液、血清S100B蛋白含量,或许减缓癫痫发作脑损伤发挥神经保护作用.     

细胞因子及免疫抑制剂对大鼠脑内神经递质的影响

目的研究白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、戊四氮致痫和免疫抑制剂抗痫效应过程中谷氨酸(glutamate,Glu)和γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)在大脑皮质及海马内表达的变化,探讨IL-1β、IL-6在癫痫发病中的作用机制及免疫抑制剂的抗痫效应。方法将实验大鼠随机分为6组;即:对照组;IL-1β组;IL-6组;戊四氮组;IL-1ra(IL-1受体拮抗剂) 戊四氮组;地塞米松 戊四氮组。行侧脑室注射相应试剂120min后观察大鼠行为变化,并采用免疫组织化学方法检测大脑皮质及海马内Glu及GABA的表达变化。结果动物行为学观察,IL-1β组、IL-6组癫痫发作程度达中度;戊四氮组癫痫发作程度达重度。IL-1ra 戊四氮组癫痫发作较戊四氮组减轻,地塞米松 戊四氮组无明显癫痫发作。免疫组化染色显示,IL-1β组、IL-6组、戊四氮组Glu表达在大脑皮质及海马较对照组明显升高,GABA表达较对照组明显降低,差异具有显著性意义。IL-1ra 戊四氮组及地塞米松 戊四氮组与单独注射戊四氮组比较,Glu免疫染色减弱,GABA免疫染色增强,有显著性差异。结论IL-1β或IL-6可能通过升高Glu含量并降低GABA的含量参与致痫过程,从而使神经元兴奋性升高促进癫痫发作。免疫抑制剂具有抗痫效应。     

白藜芦醇对戊四氮致痫大鼠的学习记忆能力的影响

目的 研究白藜芦醇对戊四氮致痫大鼠的空间学习记忆能力的影响.方法 采用戊四氮亚惊厥剂量腹腔注射建立慢性癫痫模型,造模成功后予以白藜芦醇15 mg/kg灌胃干预10 d,行Morris 水迷宫实验测试大鼠的空间学习和记忆能力.结果 经28 d连续给药,18只大鼠符合Racine点燃标准,Res干预组大鼠痫性发作潜伏期明显延长,且其发作时间明显低于癫痫模型组、二甲基亚砜组,差异有统计学意义(P＜0.05).定位航行试验:实验第1、2d,各组大鼠逃避潜伏期差异没有统计学意义,而第3、4、5d癫痫模型组、二甲基亚砜组大鼠逃避潜伏期比正常对照组明显延长,Res干预组大鼠逃避潜伏期明显低于癫痫模型组、二甲基亚砜组,差异有统计学意义(P＜0.05).空间探索试验:将原站台撤去后,癫痫模型组、二甲基亚砜组穿越原站台次数和象限逗留时间,比正常对照组明显减少;同Res干预组相比减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 白藜芦醇对戊四氮致痫大鼠具有抗癫痫和改善其空间学习记忆能力.     

外源性GM1对癫痫大鼠脑损伤的保护作用

目的　探讨外源性神经节苷脂GM1对癫痫大鼠脑损伤有无保护作用。方法　采用硫代氨基脲 (7.5mg/kg)诱导大鼠癫痫发作模型 ,用免疫组化方法动态观察致痫组大鼠和GM 1干预组大鼠在癫痫发作 2 4小时、4 8小时、72小时及 7天时 ,以及正常对照组、生理盐水组大鼠 72小时时神经生长因子 (NGF)在实验大鼠海马及额叶神经细胞表达情况。同时应用电镜技术观察受损海马神经细胞形态及结构变化。结果　正常对照组和生理盐水组大鼠无癫痫发作 ,致痫组和GM1干预组大鼠有Ⅰ Ⅴ级癫痫发作。免疫组化结果显示 ,癫痫鼠在其海马、额叶有较多的NGF阳性神经细胞表达 ,而未致痫鼠偶有NGF阳性细胞表达 (P <0 .0 5 )。在致痫鼠中 ,GM1干预后NGF表达明显高于未干预组 (P <0 .0 5 ) ,且以 72小时NGF表达为最高(P <0 .0 5 )。电镜显示癫痫鼠神经细胞损伤 ,但GM1干预后损伤减轻 ,而正常对照组和生理盐水组神经细胞形态和结构正常。结论　癫痫发作可引起脑细胞损伤 ;GM1对癫痫大鼠脑损伤具有一定保护作用 ,其保护作用可能通过诱导NGF表达增多来实现。     

致痫大鼠海马神经元氨基酸类物质含量变化的研究

目的 研究癫痫发病中海马神经元氨基酸类物质的合成，分泌情况，探索癫痫发病的可能机制。方法 用马桑内酯致痫培养大鼠海马神经元细胞，用高效液相色谱法测定培养神经元细胞内外谷氨酸（Glu) ,天门冬氨酸（Asp)，γ-氨基丁酸（GABA），甘氨酸（Gly）的含量。结果 致痫海马神经元细胞Glu合成相对增加，分泌显著性增加（P＜0．01）；Asp合成没有明显增加（P＞0．05），或相对养活，分泌显著性增加（P＜0．01）；GABA分泌显著性减少（P＜0．01），合成相对地减少；Gly合成分泌有显著性减少（P＜0．01）。结论 癫痫发病中，痫性神经元细胞合成和／或分泌异常是癫痫发病中氨基酸类神经递质平衡紊乱的基础。