P物质对大鼠三叉神经节神经元H+-门控电流的调制

目的 探讨P物质(SP)对大鼠三叉神经节(TG)神经元膜H+-门控电流的调制作用及其机制.方法 急性分离TG神经元,通过排管快速换液装置行胞外给药,电极内灌药行胞内透析后,采用全细胞膜片钳技术记录神经元膜H+-门控电流.结果 依照我们在背根神经节(DRG)神经元分类的方式,同样可将TG神经元H+-门控电流也分为四型,即T-型、S-型、B-型、O-型;共加SP和H+能浓度依赖性增强S-型H+-门控电流,SP受体拮抗剂GR82334不能阻断此作用;共加SP和H+能增强B-型H+-门控电流,GR82334和胞内透析GDP-β-S能阻断SP对B-型H+-门控电流的这一增强作用,而预加SP则抑制B-型H+-门控电流,并以短暂成分尤为明显,此抑制效应不能被GR82334阻断.结论 SP对H+-门控电流的调制依ASIC亚基组成不同,其作用机制有所不同:S-型H+-门控电流的ASIC分子膜外结构上可能存在SP的别构位点.     

大鼠背根神经节神经元H+-门控离子通道电流分型及其基因型组成

目的根据大鼠背根神经节（DRG）神经元所记录的天然H^＋-门控离子通道电流特征将其进行分型，并探讨各型天然H^＋-门控离子通道与其基因型组成的酸敏感离子通道（ASICs）亚基间的相关性。方法采用全细胞膜片钳技术记录急性分离的大鼠DRG神经元H^＋-门控离子通道电流，结合单细胞免疫组化方法检测其基因型组成的ASICs亚基。结果依据H^＋-门控离子通道电流的激活及失活动力学、电流形状特点、细胞直径大小、pH依赖性等及其它参数可将H^＋-门控离子通道电流分为T-型、S．型、B-型和O-型。测定了四种类型H^＋-门控离子通道电流的激活（10%-90％21升时间）与细胞直径大小的相关性，其中T-型、B-型和O-型三种类型的激活动力学与细胞直径有关（r=0．69，P〈0．01），而S-型电流与细胞直径无关（r=0．12，P〉0．05）。对S-型电流（pH5．0）的浓度一效应关系进行了分析，其阈值在pH6．0左右，最大浓度〉2．0；在pH4．5-2．5之间出现-外向电流，浓度-效应曲线呈钟形。提供了Hi门控离子通道电流表型与其基因型的关系：T-型为ASIC1，ASIC2a，ASIC3；S．型为ASIC2a，ASIC4；B-型为ASIC1，ASIC3；O-型为ASIC1．ASIC3和ASIC4。结论大鼠DRG神经元天然H^＋-门控离子通道随着其亚基组构的改变．其电流特征也发生改变，推测系通道内向移动离子的选择性发生改变所致：其中T-型、B-型和O-型受体的神经元分布与其胞体直径相关。     

快速老化小鼠海马神经元电压门控离子通道特点

目的:观察快速老化小鼠(Senescence-accelerated mouse,SAM)海马神经元的基本离子通道特点,并对抗快速老化亚系(SAM-resistance/1,SAMR1)与快速老化亚系(SAM-prone/8,SAMP8)的基本离子通道特点进行了比较,探讨离子通道变化在衰老中的可能角色.方法:应用全细胞记录方式,观察并比较原代培养SAMR1和SAMP8海马神经元的电压门控离子通道及膜参数.结果:原代培养SAMR1和SAMP8海马神经元电压门控Na+通道电流(INa)和电压门控延迟整流K+通道电流(Ik)的电学特点和幅度基本一致.SAMP8的电压门控Ca2+通道电流(ICa)和瞬时外向K+通道电流(IA)的幅值则大于相同培养天数的SAMR1.经膜电容校正所得的ICa电流密度也表现出增大的变化规律.结论:SAMP8与SAMR1神经元间IA和ICa的差异可能与其神经系统变异而产生的学习记忆功能下降有关.     

一种改良的精确分析酸敏感性离子通道特性的优化记录方法

目的 用一种改良的灌流方法研究和再次证实HEK 293细胞内源性酸敏感性离子通道的生物物理和药理学特性.方法 使用全细胞膜片钳技术,将记录细胞与玻片分离,并使细胞位于输液管前,呈漂浮状态,以记录在低pH值外液中,HEK293细胞的酸敏感性1a型离子通道的电流.结果 使用细胞漂浮方法,pH 5.0的细胞外液诱发的酸敏感性1a型离子通道电流足传统细胞附着法诱发的两倍.在两种不同的方法下,通道电流达到峰值的时间分别是(21±5)ms和(270±25)ms,失活的时间常数分别是(496±23)ms和(2284±120)ms.细胞漂流法也明显增强amiloride对酸敏感性1a型离子通道的阻断效能.两种方法具有相似的pH激活的EC50(分别为6.6±0.6,6.6±0.7).结论 酸敏感性1a型离子通道的激活需要细胞外液快速的交换.通过细胞漂浮的方法,我们再次证明了酸敏感性1a型离子通道电流的存在,更精确地分析了HEK 293细胞内源性酸敏感型离子通道的生物物理和药理学特性.这一改良的方法能够用于研究所有的酸敏感型离子通道和需要快速细胞外液交换的配体门控通道.     

硬脑膜传入神经末梢敏化对初级感觉神经元电压门控型钙电流的影响

目的 探讨化学刺激硬脑膜传入神经末梢对大鼠三叉神经节神经元的高电压激活钙电流(HVA-ICa)的调控效应. 方法 雄性SD大鼠16只按随机数字表法分为生理盐水(NS)组和致炎剂(IS)+释放降钙素基因相关肽(CGRP)组(n=8),大鼠上矢状窦处脑膜给药造模1h后急性分离大鼠三叉神经节中小神经元,采用全细胞膜片钳技术记录电压门控钙离子通道(VGCC)电流. 结果 与NS组钙电流峰电流[(-49.5±5.18)pA/pF]比较,IS+CGRP组[(-80.48±4.43) pA/pF]增高,差异有统计学意义(P＜0.05);IS+CGRP组神经元钙电流激活曲线的半数激活电压Val/2为(-20.9±0.4)mV,较NS组[(-16.2±0.5)mV]向超级化方向移动了4.7 mV,差异有统计学意义(P＜0.05); IS+CGRP组神经元钙电流的半数失活电压V1/2为(-12.4±0.2) mV,较NS组[(-22.5±0.3)mY]向去极化方向移动了10.1 mV,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 激活硬脑膜传入神经末梢诱导初级感觉神经元的外周敏化过程,突出表现为钙电流的增高.     

鲫鱼视网膜ON型双极细胞的轴突末梢中不存在ryanodine受体门控的钙库(英文)

以前结果表明 ,ryanodine受体 (ryanodinereceptors ,RyRs)门控的咖啡因敏感的钙库和钙引钙释放(Ca2 inducedCa2 release ,CICR)机制存在于鲫鱼视网膜ON型双极细胞的胞体中[1] 。采用RyRs的免疫细胞化学方法和细胞内钙测量技术 ,我们进一步研究了RyRs门控的钙库是否存在于这些细胞的轴突末梢中。视网膜纵切和分离细胞的免疫细胞化学研究显示 ,RyRs主要位于ON型双极细胞的胞体中。咖啡因浓度升至 4 0mmol/L在轴突末梢不能诱导钙信号。在细胞外K 浓度升至 10mmol/L引起静息 [Ca2 ]i 轻微升高后 ,咖啡因在轴突末梢也不能诱导钙信号。在forskolin或多巴胺引起细胞内cAMP浓度升高 ,进而cAMP依赖的磷酸化增强后 ,咖啡因在轴突末梢仍不能诱导钙信号。此外 ,50 μmol/Lryanodine对 65mmol/LK 作用 1min或 2min诱导的轴突末梢的钙信号没有产生任何效应。这些结果表明 ,在鲫鱼视网膜ON型双极细胞的轴突末梢中不存在RyRs门控的咖啡因敏感的钙库和CICR机制     

正常大鼠脑动脉平滑肌细胞电压依赖性钙通道电流特征

目的 研究正常大鼠脑动脉平滑肌细胞电压依赖性钙通道(VDCCs)电流的电生理和药理学特征,为相关的生理或疾病研究提供理论依据.方法 酶促消化法急性分离大鼠脑动脉平滑肌细胞,运用膜片钳电流钳技术研究其静息电位,膜片钳电压钳技术研究其电压依赖性钙通道电流以及二价阳离子载荷离子浓度和Nifedipine对其的影响.结果 静息电位为(50.42±0.26) mV,阶跃电压10 mV和斜坡电压(9.80±0.92) mV时最大VDCCs电流密度分别为(-5.22 ±0.51)pA/pF和(-4.89 ±0.65)pA/pF(10 mmol/L BaCl2).VDCCs峰电流完全由高电压激活(HVA-VDCCs)电流构成(P=0.17),无低电压激活(LVA)-VDCCs电流.VDCCs电流密度与细胞外液Ba2+浓度正相关(P＜0.05),Nifedipine对VDCCs电流的最大抑制作用为(86.13±0.76)％,IC50为6.02 nmol/L.结论 本研究证实脑动脉平滑肌细胞的VDCCs电流来源于HVA-VDCCs,以及脑动脉平滑肌细胞存在Nifedipine不敏感电流(NICCs),NICCs所依赖的离子通道以及在脑血管张力和脑血流自身调节中的作用需要进一步的研究.     

GABA_A受体激动剂对AD模型配体门控氯通道的作用

目的观察并分析GABA_A受体激动剂蝇蕈醇对GABA激活的配体门控氯通道的作用,为寻找新的抗阿尔茨海默病(AD)药物提供实验依据。方法 Aβ_(1-42)诱导海马神经细胞作为AD细胞模型;通过膜片钳(Patch clamp)技术在大鼠海马神经元上记录配体门控氯通道瞬时外向电流,采用非特异性氯通道阻断剂(NFA)和无GABA的细胞外液确定该电流成份为瞬时外向氯电流;通过膜片钳技术观察GABA_A受体激动剂蝇蕈醇对于在大鼠海马神经元上记录瞬时外向电流的作用;向AD细胞模型中加入GABA_A受体激动剂,采用MTT观察各组细胞活力。结果加入GABA_A受体激动剂蝇蕈醇后GABA激活氯电流强度增加;加入浓度为1 mmol/L蝇蕈醇的AD模型细胞组存活率为(91.32±3.73)%,略高于未加入蝇蕈醇的模型细胞组,两组对比P0.05。结论 GABA_A受体激动剂蝇蕈醇对于AD细胞模型具有保护作用。     

硫酸镁防治蛛网膜下腔出血时脑血管痉挛的研究

蛛网膜下腔出血(SAH)死亡率极高,SAH时脑血管痉挛(CVS)是致残、死亡的重要原因,因此积极防治CVS,可大大降低SAH的伤残率,提高生存质量.而硫酸镁竞争性抑制钙离子(Ca2+),防止钙超载;镁离子(Mg2+)可阻断与N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA)偶联的离子通道,减少Ca2+内流和钾离子(K+)外流,从而抑制血管收缩,防治血管痉挛[1-3].因此,本研究采用硫酸镁静滴防治SAH时CVS,观察其效果.     

β-淀粉样蛋白对海马神经元钙离子浓度的影响及其机制研究

目的　观察β-淀粉样蛋白 (Aβ1 -40 )对海马神经元内钙离子浓度的影响及尼莫地平的拮抗作用。方法　采用大鼠海马神经元的原代培养技术 ,分别用 MTT法和激光扫描共聚焦显微镜结合 Fluo-3 /AM标记观察神经元存活率和细胞内游离钙离子浓度变化。结果　 Aβ1 -40在较高浓度 (1μmol/L和 1 0μmol/L )下 ,对神经元存活率和 [Ca2 + ]i 的影响与对照组相比 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1 ) ;5 μmol/L尼莫地平可部分降低Aβ1 -40引起的 [Ca2 + ]i 升高。结论　 Aβ1 -40可引起培养海马神经元存活率下降及胞内钙离子浓度升高 ,尼莫地平有部分拮抗作用。