胰岛素样生长因子-II对卵巢癌细胞AO、3AO中MMP-2表达的调节

目的:探讨胰岛素样生长因子鄄II(insulin鄄likegrowthfactor鄄II,IGF鄄II)对卵巢癌细胞AO、3AO基质金属蛋白酶鄄2(matrixmetalloproteinase鄄2,MMP鄄2)表达的诱导调节。方法:以IGF鄄II处理卵巢癌细胞AO、3AO,用明胶酶谱法和RT鄄PCR法检测MMP鄄2蛋白的分泌以及基因表达。结果:IGF鄄II能双相调节浆液性囊腺癌细胞AO中MMP鄄2的分泌,低浓度(10ng/ml)时能上调MMP鄄2的分泌,随着IGF鄄II的浓度增加该作用增强;但高浓度时(100ng/ml),诱导作用显著下降;IGF鄄II不增加粘液性囊腺癌细胞3AO培养上清中MMP鄄2蛋白的分泌。此外,IGF鄄II不影响两种卵巢癌细胞中MMP鄄2的基因表达。结论:IGF鄄II在一定程度上能刺激上皮性卵巢癌MMP鄄2蛋白表达,可能在卵巢癌的侵袭转移方面起重要作用。     

血管内皮生长因子促进卵巢癌细胞AO体外侵袭的机制探讨

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)对上皮性卵巢癌细胞株AO体外侵袭能力和对细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2),金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)表达的影响,探讨VEGF在卵巢癌浸润转移中的作用及可能机制。方法以处理卵巢癌细胞株AO,采用Boyden小室侵袭实验检测AO细胞体外侵袭能力,采用RT-PCR和Western免疫印迹检测AO细胞MMP-2的mRNA及蛋白表达情况,采用DQ明胶荧光检测法分析MMP-2酶活性。结果VEGF能双相调节卵巢癌细胞AO的体外侵袭能力及细胞中MMP-2的分泌及活性,低浓度(20￣40ng/mL)时明显增强癌细胞体外侵袭能力,上调MMP-2的分泌及活性,并随着VEGF的浓度增加该作用增强;但高浓度时(80ng/mL),其体外侵袭能力减弱,MMP-2的活性下降。MMP抑制剂BB3103能降低VEGF刺激后卵巢癌细胞AO的体外侵袭能力。此外,VEGF不影响卵巢癌细胞AO中MMP-2,TIMP-2的基因表达。结论VEGF促进卵巢癌侵袭转移,其作用机制的关键环节是促进MMP-2的分泌与活化。     

不同浓度的华蟾素对卵巢癌3AO细胞MMP-2和TIMP-2表达的影响及可行性研究

目的探讨华蟾素对卵巢3AO细胞基质金属蛋白酶（MMP-2）和组织抑制因子（TIMP-2）表达的影响及其,临床意义。方法体外培养卵巢癌3AO细胞,不同浓度的华蟾素干预后,用SABC免疫组化法检测MMP-2和TIMP-2表达。结果卵巢癌3AO细胞可表达MMP-2和TIMP;0．25mg／ml华蟾素对卵巢3AO细胞MMP-2和TIMP-2的表达无显著影响（P〉0．05）;2．5mg／ml华蟾素干预后,卵巢癌3AO细胞MMP-2的表达显著下降,TIMP2的表达显著升高（P〈0．05）;25mg／ml与2．5mg／ml华蟾素对卵巢癌3AO细胞MMP-2和TIMP-2表达影响无统计学差异（P〉0.05）。结论2．5mg／ml华蟾素可显著降调卵巢癌3AO细胞MMP-2的表达,升调TIMP-2的表达,两者的失衡可抑制卵巢癌3AO细胞的侵袭性生长。     

三氧化二砷诱导人卵巢癌耐药细胞系3AO/cDDP细胞凋亡及机制的研究

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）对人卵巢癌耐药细胞系3AO／cDDP细胞生长的影响及其机制。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法,检测不同浓度As2O3作用后,3AO／cDDP细胞的生长抑制率;采用流式细胞技术检测细胞凋亡率,细胞周期变化,以及Fas、FasL基因表达的变化。所有结果均与人卵巢癌细胞系3AO细胞相比较;采用细胞骨架染色法观察3AO／cDDP细胞凋亡细胞形态变化,通过吖啶橙染色,荧光显微镜观察As2O3作用后3AO细胞的形态变化。结果：As2O3能明显抑制3AO／cDDP细胞的增殖,抑制作用呈时间和剂量依赖性（P＜0．05）;在定一浓度范围内,3AO／cDDP细胞凋亡率与As2O3的浓度和作用时间呈依赖关系,诱导凋亡的最适浓度是3μmol/L;As2O3低浓度时,3AO／cDDP细胞周期S期通过受阻,高浓度时诱导S期细胞凋亡;As2O3作用后,两种细胞系Fas基因的表达均呈升调节,FasL基因的表达无变化;与3AO细胞相比,差异无显著意义（P＞0．05）;As2O3作用后3AO及3AO／cDDP形成典型的凋亡小体。结论：As2O3通过Fas/FasL系统,诱导S期细胞凋亡,有效地抑制人卵巢癌耐药细胞系细胞的生长。     

去甲斑蝥素对卵巢癌3AO和AO细胞的体外抑制作用

目的：观察去甲斑蝥素(NCTD)体外对卵巢癌3AO细胞和AO细胞的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法：利用细胞培养技术,以结晶紫染色法测定NCTD对卵巢癌3AO和AO细胞的抑制作用,并利用流式细胞仪测定分析NCTD作用下两种肿瘤细胞的细胞周期变化。结果：NCTD 1μg/ml即对3AO和AO细胞有轻微抑制作用,其半数抑制剂量(IC50)分别为20μg/ml和10μg/ml。NCTD作用6h,3AO和AO细胞生长即受到抑制,其抑制率随着药物作用时间延长而升高。在NCTD作用下,3AO和AO细胞G2+M期细胞百分比明显升高,而S期细胞百分比相应地明显降低。结论：NCTD体外对卵巢癌3AO和AO细胞有明显抑制作用,其抑制作用呈剂量和时间依赖性。NCTD抗肿瘤细胞增殖的机制可能与其将肿瘤细胞特异阻抑于G2+M期有关。     

肝细胞生长因子对IL-1α刺激肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化的作用

目的研究肝细胞生长因子(HGF)对IL-1α诱导的肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化(TEMT)及细胞分泌功能的影响。方法在体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)中加入IL-1α 20ng／ml诱导．并加入大(1600ng／ml)、中(1200ng／ml)、小(800ng／ml)剂量HGF阻断，流式细胞仪和免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白的表达；倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞形态变化；ELISA法测定培养细胞上清液分泌的粘连蛋白(FN)含量。结果IL-1α刺激后细胞转变为类似成纤维细胞形态；α-SMA阳性细胞百分数及α-SMA表达的平均荧光强度明显增加(P＜0．05)；培养上清液中FN含量增加(P＜0．05)。HGF可剂量依赖性地抑制IL-1α诱导NRK52E细胞形态学改变及α-SMA的表达(P＜0．05)，不同程度地抑制IL-1α的促FN分泌作用(P＜0．05)。单独加入不同剂量HGF对肾小管细胞无影响。结论HGF可抑制IL-1α诱导的TEMT作用，减少FN的分泌，对肾间质纤维化具有负性调节作用。     

卵巢癌3AO细胞株hCG受体特性的研究

目的建立酶受体分析法 (enzymereceptorassay ,ERA) ,并研究卵巢癌 3AO细胞hCG受体的结合特性。方法采用ERA ,通过竞争结合实验、受体结合的特异性实验、饱和结合实验测定 3AO细胞膜上hCG受体的特异性、饱和性 ,计算其最大结合容量 (Bmax)和亲和力 (Kd)。结果ERA测得 3AO细胞LH/hCG受体的Bmax为 14 2 .4ng/mg蛋白 ,亲和力Kd值为 16 .14 2ng/ml,未标记配体hCG抑制hCG受体对HRP—hCG特异结合的IC50 为 3.5 84 μg/ml。 结论hCG可能通过靶细胞膜上的特异性受体影响着卵巢癌的发生发展。     

糖皮质激素对人卵巢癌细胞系3AO细胞周期分布及细胞周期蛋白激酶抑制因子p21/WAF1表达的影响

目的观察糖皮质激素对人卵巢癌细胞系3AO细胞周期分布及细胞周期蛋白激酶抑制因子P21/ WAF1表达的影响。方法采用流式细胞仪技术测定地塞米松(Dex)作用3AO细胞后其细胞周期分布,免疫印迹分析的方法检测Dex对p21／WAF1表达的影响。结果Dex处理后3AO细胞在G_0/G_1期停滞,且这种作用随处理时间延长而更趋明显；同时Dex能够以浓度和时间依赖性方式诱导p21／WAF1表达,这种作用通过GR来介导。结论在GC诱导的抑制细胞增殖的过程中,p21/WAF1的表达增加。     

地塞米松对人卵巢癌细胞糖皮质激素受体的调节

目的：观察地塞米松调节人卵巢癌细胞系3AO细胞增殖分化的作用机制及3AO细胞中糖皮质激素受体（GR）的表达。方法：①采用氨基安替比林法测定糖皮质激素受体拮抗剂（RU486）作用3AO细胞后阻断糖皮质激素的效应；②采用放射配体结合分析法检测3AO细胞中GR的表达；③采用定量RT-PCR法检测地塞米松对3AO细胞中GR的调节作用。结果：①RU486可完全阻断地塞米松对3AO细胞活性的诱导作用；②3AO细胞中存在高亲和力、低容量糖皮质激素受体；③地塞米松使GR结合活性明显降低，且具有时间依赖性。结论：3AO细胞中存在GR，地塞米松调节3AO细胞增殖分化的作用由GR介导，地塞米松可向下调节3AO细胞GR的结合活性，且具有时间依赖性。     

hCG对人卵巢癌细胞株3AO体外生长和细胞周期的影响

目的 研究人绒毛膜促性腺激素（hCG）对卵巢癌细胞株3AO体外生长及2细胞周期的影响。方法 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术（FCM），观察卵巢癌细胞株3AO在加入含不同浓度hCG培养液后细胞活性和生长周期的变化。结果 （1）浓度为0．1，1μg/ml的hCG可刺激3AO细胞株的生长，生长率分别增加到109％和121％；hCG浓度为10μg/ml时对细胞的生长几乎滑有影响，浓度为100μg/ml则抑制细胞生长。（2）hCG可使3AO细胞株G0/G1期细胞比例下降，G2／M期细胞比例增加，S期细胞变化不明显。结论 hCG在卵巢癌的发生和发展过程中有潜在的促进作用。     

胰岛素样生长因子1对PC12细胞胱硫醚-β-合成酶和硫化氢的影响及机制

\[摘要\]目的观察胰岛素样生长因子1(IGF-1)对大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12)胱硫醚-β-合成酶(CBS)及硫化氢(H2S)表达的影响以及可能的细胞信号通路机制。方法用不同剂量IGF-1(20、 40、80 ng/ml)作用体外培养的PC12细胞24 h,荧光定量PCR检测CBS基因表达,蛋白质印迹分析检测CBS、细胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶(ERK/MAPK)相关蛋白表达,敏感硫电极法检测H2S气体含量。之后选取最佳剂量的IGF-1(80 ng/ml) 作用于30 min前已加入ERK/MAPK抑制剂PD98059的PC12细胞再次检测CBS、ERK/MAPK相关蛋白及H2S气体表达水平。结果IGF-1增加CBS的表达和H2S的含量,上调pERK1/2的表达;而PD98059能够抑制IGF-1的上述作用。结论IGF-1及其调控的ERK/MAPK信号通路参与调节CBS及H2S的表达。     

用ELISA测定卵巢癌患者血清、腹腔液VEGF水平及其临床意义

目的测定卵巢癌患者血清、腹腔液血管内皮生长因子(VEGF)水平,并探讨其临床意义.方法采用酶链免疫吸附试验(ELISA)检测28例卵巢癌患者血清、腹腔液及卵巢癌细胞株SKOV3、3AO和原代培养卵巢癌细胞上清液中VEGF水平.结果卵巢癌患者血清VEGF中位值为463 2ng/L,腹腔液中位值为2630.5ng/L,腹腔液显著高于血清(U=58,P＜0.001),但两者无相关性(r=0.185,P＞0.05);卵巢癌细胞株SKOV3、3AO和原代培养卵巢癌细胞上清液有较高水平的VEGF蛋白分泌(171.5～16232.9pg/ml/106个细胞).结论卵巢癌患者腹腔局部VEGF水平较高,可能主要来源于癌细胞的分泌;阻断VEGF的作用可能是卵巢癌有效的治疗策略.     

晶状体蛋白αB对卵巢癌细胞恶性行为的影响

目的 研究晶状体蛋白αB(αB-crystallin)在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞SKOV3增殖及迁移侵袭能力的影响.方法 免疫组织化学法检测人正常卵巢组织和上皮性卵巢癌组织中αB-crystallin表达;针对蛋白αB-crystallin的基因(CRYAB基因)设计合成靶向小干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)重组慢病毒,并感染人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株SKOV3;流式细胞仪、平板克隆、MTT检测细胞凋亡和增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达.结果 αB-crystallin在卵巢癌组织中表达高于正常卵巢组织,在Ⅱ型卵巢癌组织中呈明显高表达(P＜0.01),稳转CRYAB siRNA慢病毒后SKOV3细胞内αB-crystallin蛋白表达降低64％,其凋亡和增殖无明显改变,但SKOV3细胞迁移和侵袭能力明显受到抑制(P＜0.01),同时蛋白MMP-2和MMP-9表达下调(P＜0.01).结论 αB-crystallin能够影响卵巢癌SKOV3细胞浸润转移,其在Ⅱ型卵巢癌组织中的高表达可能与其高侵袭潜能相关.     

circAFF2通过调节PI3K/AKT通路对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的：探讨circ＿AFF2通过调节磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸/蛋白激酶B(AKT)通路对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)滑膜成纤维细胞的增殖、迁移、侵袭的作用机制。方法：采用qRT-PCR检测健康对照滑膜组织和RA滑膜组织中circ＿AFF2相对表达量。通过体外培养RA滑膜成纤维MH7A细胞，将细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-circ＿AFF2组(转染si-circ＿AFF2)和si-circ＿AFF2+IGF-1组(转染si-circ＿AFF2后，采用50 ng/mL的PI3K/AKT通路激活剂IGF-1处理)。然后通过qRT-PCR检测各组细胞circ＿AFF2相对表达量；MTT检测各组细胞活力；Western blotting检测各组细胞Ki-67、PCNA、MMP-2、E-cadherin、N-cadherin和PI3K/AKT通路相关蛋白的表达；Transwell检测各组细胞迁移和侵袭能力。结果：与健康对照滑膜组织相比，circ＿AFF2相对表达量在RA滑膜组织中明显增加(P<0.05)。与si-NC组相比，si...     

庆大霉素诱导肾小管上皮细胞凋亡及细胞周期调节蛋白表达

目的：观察庆大霉素对体外培养的肾小管上支细胞凋亡的诱导作用；研究在细胞凋亡过程中细胞周期调节蛋白cyclinE、CDK2和p27^kipl蛋白表达的改变，并探讨细胞凋亡与细胞周期调节蛋白表达之间的关系。方法：0．2～3．2mg／ml的庆大霉素作用于体外培养的猪肾近端小管上皮细胞株(LLC-PK1细胞)24～96h,MTT法测定庆大霉素对细胞增殖的抑制率,琼脂糖凝胶电泳法观察凋亡细胞DNA条带，流式细胞术测定细胞凋亡率(AI)和细胞增殖动力学,Western印迹分析检测培养96h时细胞内cyclinE、CDK2和p27^Kipl的蛋白表达。结果：庆大霉素对LLC-PK1细胞增殖有抑制作用，庆大霉素具诱导细胞凋亡的作用,AI呈药物浓度和作用时间依赖性：庆大霉素致细胞周期停滞于G1期。随着庆大霉素浓度的增加，细胞内cyclinE和CDK2蛋白表达逐渐下调．而p27^Kipl蛋白表达则逐渐上调。结论：厌大霉素诱导的LLC—PK1细胞凋亡与细胞周期调节蛋白cyclinE和CDK2表达下调以及p27^Kipl表达上调有关。     

白介素-1和血小板源性生长因子对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的：观察白介素-1和血小板源性生长因子对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响及其作用机制。方法：用酶谱分析法检测MMP-9蛋白水平，采用电泳迁移率变动分析法测转录因子AP-1结合活性，用RT-PCR法检测MMP-9的mRNA水平。结果：白介素-1(20ng／ml)和血小板源性生长因子(20ng／ml)联合使用显著增加MMP-9蛋白表达，提高AP-1结合活性，使MMP-9的mRNA水平明显增高。结论：白介素-1和血小板源性生长因子联合使用可刺激MMP-9生成。     

褐藻多糖硫酸酯对TGF-β1孵育的人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2表达的影响

目的观察褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan FPS)对TGF-β1下刺激人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2分泌的影响,探讨其在慢性肾衰竭(Chronic Renal Failure CRF)防治中的意义。方法用TGF-β1作为刺激因子,孵育体外培养的人肾小球系膜细胞(Human Mesangial cell HMC),并分别用不同浓度的FPS干预,具体分组如下:模型组(TGF-β14 ng/ml)、FPS高剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS 100 ug/ml)、FPS中剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS 50 ug/ml)、FPS低剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS25 ug/ml)、FPS对照组(FPS 100ug/ml)、正常对照组。ELISA技术检测HMC培养上清液中MMP-2、TIMP-2蛋白表达水平,Re-altime PCR技术检测HMC的MMP-2、TIMP-2 mRNA表达水平。结果与正常对照组相比,TGF-β1能减少HMC的MMP-2蛋白及mRNA表达(P0.01),增加HMC的TIMP-2蛋白及mRNA表达(P0.01);FPS能阻断TGF-β1刺激下HMC的MMP-2蛋白及mRNA表达减少、TIMP-2蛋白及mRNA表达增加(P0.01,P0.05);FPS对照组与正常对照相比MMP-2、TIMP-2蛋白及mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。结论褐藻多糖硫酸酯能阻断TGF-β1刺激下人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2表达的比例失衡,阻断了由MMP-2、TIMP-2比例失衡导致的ECM积聚,从而延缓了慢性肾衰竭的进展。     

Effects of Fucoidan on the expression of MMP2 and TIMP-2 in human mesangial cells cultured with growth factor β1

目的 观察褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan FPS)对TGF-β1下刺激人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2分泌的影响,探讨其在慢性肾衰竭(Chronic Renal Failure CRF)防治中的意义.方法 用TGF-β1作为刺激因子,孵育体外培养的人肾小球系膜细胞(Human Mesangial cell HMC),并分别用不同浓度的FPS干预,具体分组如下:模型组(TGF-β14 ng/ml)、FPS高剂量组(TGF-β14 ng/ml +FPS 100 ug/ml)、FPS中剂量组(TGF-β14 ng/ml + FPS 50 ug/ml)、FPS低剂量组(TGF-β14 ng/ml + FPS 25 ug/ml)、FPS对照组(FPS 100ug/ml)、正常对照组.ELISA技术检测HMC培养上清液中MMP-2、TIMP-2蛋白表达水平,Realtime PCR技术检测HMC 的MMP-2、TIMP-2 mRNA表达水平.结果 与正常对照组相比,TGF-β1能减少HMC的MMP-2蛋白及mRNA表达 (P＜0.01),增加HMC的TIMP-2蛋白及mRNA表达 (P＜0.01);FPS能阻断TGF-β1刺激下HMC的MMP-2蛋白及mRNA表达减少、TIMP-2蛋白及mRNA表达增加(P＜0.01,P＜0.05);FPS对照组与正常对照相比MMP-2、TIMP-2蛋白及mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 褐藻多糖硫酸酯能阻断TGF-β1刺激下人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2表达的比例失衡,阻断了由MMP-2、TIMP-2比例失衡导致的ECM积聚,从而延缓了慢性肾衰竭的进展.     

TF-1细胞增殖特性与信号蛋白JAK2/STAT3表达研究

目的 探索JAK／STAT途径活化与细胞增殖和凋亡之间的关系。方法 通过表达内源性GM-CSF、受体的TF-1细胞，观察细胞增殖与凋亡；建立免疫沉淀和Western blot印迹方法，检测经GM-CSF100 ng／ml瞬时诱导的TF-1细胞信号蛋白JAK2和STAT3酪氨酸磷酸化情况。结果 经过GM-CSF刺激，细胞不但免于凋亡，TF-1细胞还呈现剂量与时间信赖性的增殖反应。当耗竭细胞因子6～12h后，倒置显微镜下TF-1细胞呈现折光性改变，细胞开始凋亡，呈现凋亡特征性形态改变和出现DNA梯形条带，而加入0．1ng／ml的GM-CSF，TF-1细胞即开始进入增殖状态，提示GM-CSF对细胞具有凋亡保护作用。经过100ng／ml GM-CSF的瞬时诱导，在分子量130kd区域见到JAK2蛋白条带，显示GM-CSF可诱导TF-1细胞磷酸化JAK2表达；而在分子量90kd区域未见到STAT3蛋白条带，显示无磷酸化STAT3表达；而未经GM-CSF诱导的TF-1细胞，既无磷酸化JAK2也无磷酸化STAT3表达。结论 GM-CSF、为TF-1细胞增殖诱导和凋亡保护所必需；GM-CSF诱导的TF-1细胞生物学效应涉及到胞浆信号分子JAK2磷酸化而非STAT3磷酸化。     

EGF对人舌鳞癌细胞株MMP-3表达的影响

目的：探讨EGF对人舌鳞癌细胞株MMP-3表达的影响及其机制。方法：对体外培养的人舌鳞癌细胞株用重组人表皮生长因子（rhECF）作为刺激因子,采用半定量RT-PCR和Western Blot方法测定癌细胞中MMP-3mRNA和蛋白含量变化。结果：与未处理组相比,用不同浓度（0．1,1,10ng／m1）EGF处理舌鳞癌细胞后MMP-3表达随浓度的增加而增加,酪氨酸激酶抑制剂Genistein（10μg／ml）能够抑制EGF对癌细胞MMP-3表达的诱导作用。结论：EGF通过酪氨酸激酶通路诱导口腔癌细胞MMP-3的表达。