SAP基因注射干预小鼠SLE样综合征的发生

目的：研究SAP基因注射对SLE发病的干预作用，并进一步探讨SAP发挥作用的可能机制。方法：通过RT-PCR方法克隆SAP基因，构建其真核表达质粒pcDNA3-SAP，观察SAP基因注射对活化淋巴细胞免疫诱导小鼠产生的SLE样综合征的干预作用，以ELISA方法检测抗dsDNA抗体的产生情况，以免疫荧光法检测肾脏免疫复合物沉积；通过巨噬细胞吞噬实验观察SAP与DNA结合后对DNA清除的影响；用增殖实验检测巨噬细胞吞噬SAP结合的DNA后对预致敏淋巴细胞活化的影响。结果：SAP基因注射可有效干预小鼠SLE样综合征的发生，SAP与活化淋巴细胞DNA结合后可明显促进巨噬细胞对DNA的吞噬，并且巨噬细胞吞噬SAP结合的DNA后不引起预致敏淋巴细胞的增殖。结论：提示SAP通过促进DNA等自身抗原的有效清除干预SLE疾病的发生。     

以减毒沙门菌作为DNA疫苗载体的研究

目的 以真核表达质粒pCMVβ为报告基因，研究用芳香族氨基酸合成缺陷的沙门菌SL7207为载体以提高DNA疫苗免疫应答的可行性。方法 携带质粒pCMVβ的SL7207体外感染小鼠腹腔巨噬细胞后，用X-gal染色方法和RT-PCR方法检测巨噬细胞内β-gal的表达。小鼠口服免疫SL7207(pCMVβ)后，用RT-PCR方法检测β-gaⅠ基因在淋巴组织中的转录产物；用ELISA方法检测体液免疫；用^3H-TdR掺入法检测脾淋巴细胞增殖；用JAM试验检测杀伤性T淋巴细胞反应。结果 SL7207能有效地将质粒DNA传递到体外培养的巨噬细胞中并进行表达；小鼠口服携带有pCMVβ的SL7207后，能在脾脏、派伊尔结、肠系膜淋巴结中检测到目的基因的转录，并可诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫。与肌内注射pCMVβ相比较，口服SL7207(pCMVβ)能更有效地诱导出细胞免疫应答。结论 减毒沙门菌SL7207作为DNA疫苗的载体，可经口服途径进行免疫，并可将质粒直接传递给抗原递呈细胞，诱导出以细胞免疫为主的免疫应答。     

结核杆菌HSP70在耻垢分枝杆菌中的表达及其免疫原性研究

目的在重组分枝杆菌中表达编码人结核杆菌（ＴＢ）热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）的ＤｎａＫ基因，并观察其对小鼠的免疫效应。方法采用基因工程和免疫学技术将ＤｎａＫ基因及其两侧的表达调控区一起从质粒ｐＭＴ－７０中切出，经末端修饰后装入大肠杆菌－分枝杆菌穿梭质粒ｐＢＣＧ－２０００中，构建成新的重组质粒ｐＢＣＧ－ＴＢ７０，并用以转化耻垢分枝杆菌及大肠杆菌，用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表达的ＨＳＰ７０；以重组耻垢分枝杆菌分别经皮下及腹腔免疫小鼠，用淋巴细胞刺激指数（ＳＩ）反映细胞增殖能力，以ＮＯ法检测巨噬细胞吞噬活性，并检测血清中特异性抗ＴＢＨＳＰ７０的抗体。结果ＴＢＨＳＰ７０能在分枝杆菌中表达，表达量占菌体总蛋白量的１０％，不能在大肠杆菌中表达；重组耻垢分枝杆菌以１０６ＣＦＵ的剂量经皮下免疫小鼠后，可使小鼠脾淋巴细胞刺激指数（ＳＩ）和腹腔巨噬细胞吞噬活性增高（Ｐ＜０．０５），并能刺激机体产生特异性抗ＴＢＨＳＰ７０的抗体，腹腔免疫激发的抗体滴度较皮下免疫为低，而ＳＩ无明显改变。结论构建的表达质粒ｐＢＣＧ－ＴＢ７０能在耻垢分枝杆菌中表达ＨＳＰ７０，该重组菌具有较强的免疫原性。     

北豆根提取物对小鼠和人淋巴细胞及巨噬细胞作用的体外实验研究

目的：探讨中药北豆根提取物的免疫学调节作用及其作用机制；比较北豆根水提物、醇提物和多糖成分的生物学活性。方法：采用水提取、醇提取及水回流等方法对北豆根进行成分分离。采用MTT法、中性红法检测了北豆根提取物对淋巴细胞增殖的作用以及对小鼠巨噬细胞代谢和吞噬功能的影响。结果：北豆根多糖成分(RMP)具有丝裂原样作用，可刺激小鼠脾细胞及人淋巴细胞增殖，对小鼠巨噬细胞的吞噬功能有一定的促进作用。而北豆根水提物(RMW)和醇提物(RME)对小鼠脾细胞、人淋巴细胞的增殖具有抑制作用，对小鼠巨噬细胞的代谢及吞噬功能也有抑制作用。结论：不同的北豆根成分对免疫细胞有不同的作用，水提物和醇提物对免疫细胞的增殖、代谢和功能具有一定的抑制作用；北豆根多糖成分对淋巴细胞具有丝裂原样作用，能增强小鼠巨噬细胞的吞噬功能，该活性可用于临床辅助治疗肿瘤。     

LPSp辅佐HBsAg诱导机体产生特异性抗体的机制

目的:研究革兰阴性非致病性成团泛菌脂多糖(LPSp)作为佐剂促进乙型肝炎表面抗原蛋白(HBsAg)诱导小鼠产生抗-HBs抗体的作用机制。方法:在体外用LPSp HBsAg、HBsAg、LPSp、生理盐水分别致敏小鼠腹腔巨噬细胞,观察致敏细胞回输体内后诱导HBs抗体产生水平,检测巨噬细胞培养上清中TNF-α活性和NO浓度;观察4组巨噬细胞吞噬功能变化,并检测致敏巨噬细胞诱导局部淋巴结细胞分泌IL-4和IFN-γ的能力。结果:HBsAg LPSp致敏巨噬细胞促进小鼠HBs抗体产生,LPSp致敏的巨噬细胞的吞噬能力显著增强(P<0.05),释放TNF-α和NO水平增加(P<0.05)。LPSp HBsAg致敏巨噬细胞诱导局部淋巴结细胞释放IL-4水平升高(P<0.05),诱导IFN-γ水平与单纯HBsAg致敏组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:LPSp的佐剂机制为参与活化巨噬细胞,增强巨噬细胞对抗原的吞噬、消化和处理能力;同时促进HBsAg致敏的巨噬细胞诱导淋巴结内淋巴细胞释放IL-4,增强HBsAg致敏的巨噬细胞诱导Th2淋巴细胞活化,促进B细胞产生抗体。     

富硒酵母对CCl4肝损伤小鼠免疫功能的影响

目的:研究富硒酵母对CCl4肝损伤小鼠免疫功能的影响.方法:将50只小鼠随机分为空白组、模型组、硒酵母组、维生素E(VE)组和混合绀(混合喂食硒酵母和VE),每组10只.空白组和模型组灌胃蒸馏水,硒酵母组灌胃富硒酵母,VE组灌胃VE,混合组同时灌胃和硒酵母组、VE组等量的酵母和VE,连续30 d.实验结束后一次性给予8 g/LCCl4的香油溶液5 mL/kg,空白组给香油.然后测定小鼠T和B淋巴细胞转化率、NK细胞活性和巨噬细胞的吞噬功能.结果:富硒酵母能够显著提高小鼠T和B淋巴细胞转化率、NK细胞活性和巨噬细胞的吞噬功能,且和VE具有协同作用.结论:富硒酵母能提高CCl4肝损伤小鼠的免疫功能.     

一株植物乳杆菌内化于小鼠回肠派伊尔结及其免疫调节作用的研究

目的 探讨决定Lactobacillus plantarum Lp6 在小鼠小肠派伊尔结 (PP)内化的细菌源因素,并分析该菌株的免疫调节作用.方法 FITC标记不同处理的细菌,分析在含PPs的回肠结扎段内化的情况.给小鼠灌胃活或灭活细菌,研究其对小鼠脾、PP细胞增殖和腹腔巨噬细胞吞噬活性的影响.结果 甘露糖可以强烈的抑制细菌内化,灭活和四甲基脲处理可以较明显的减低细菌内化.活菌和灭活菌可以特异性的调节腹腔巨噬细胞、PP细胞和脾淋巴细胞的活性.结论 细菌表面甘露糖糖凝集素是影响细菌PP内化的最主要因素.细菌活力、表面疏水性也有一定的作用.活菌和灭活可以不同程度的增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性并抑制脾和PP淋巴细胞增殖.     

噻唑蓝比色法用来研究人淋巴细胞和小鼠巨噬细胞的活性

我们采用噻唑蓝(MTT)比色法来研究人淋巴细胞和小鼠巨噬细胞的活性。应用中药多糖、人工合成多糖、细菌多糖、有丝分裂素,升高cAMP浓度的药物直接活化人淋巴细胞;应用中药多糖、人工合成多糖、细菌多糖和升高cAMP浓度的药物,直接活化小鼠巨噬细胞。结果显示黄芪甙和两种升高CAMP浓度的药物对上述两种细胞有直接活化作用,尤其是两种药物相加,呈现明显地协同作用。阐明人淋巴细胞和小鼠巨噬细胞活化与胞内cAMP浓度上升相关。     

含恶性疟原虫Pf70基因片段表达载体DNA的免疫学特性

目的 研究恶性疟原虫Pf70 DNA片段作为DNA疫苗候选抗原基因的可能性。方法 应用PCR方法从含有恶性疟原虫Pf70基因DNA片段的质粒pGEX-Pf70中扩增出包含Pf70 DNA片段的长度为957bP的PCR产物。将其插人带有乙肝表面抗原基因的真核表达载体pCMV-S中，构建出重组质粒pCMV-S-pf70。用提纯的重组质粒pCMV-S-Pf70作为DNA免疫制剂，以质粒pCMV-S DNA和经过谷胱甘肽亲和层析法纯化的融合蛋白GST-Pf70作为对照，免疫昆明种小白鼠。每隔14d加强免疫1次，加强免疫2次后第7天采小鼠全血，用流式细胞仪检测CD8 T淋巴细胞和CD4 T淋巴细胞的水平，以检测体液免疫和细胞免疫状况。结果 接种了重组质粒pCMV-S-Pf70小鼠CD8 T淋巴细胞的绝对量增加，其百分比含量增加了39％；CD4 T淋巴细胞的相对含量保持恒定，绝对量稍有增加。用ELISA法分别检测经重组质粒pCMV-S-Pf70免疫的小鼠和经融合蛋白GST-Pf70免疫的小鼠血清中抗Pt70蛋白质的抗体滴度，发现前者抗体滴度约为1：800，远远低于后者的滴度(1：5000)。研究结果证明，重组质粒pCMV-S-Pf70 DNA可以诱导小鼠产生很强的细胞免疫和相对于蛋白质免疫而言较弱的体液免疫；Pt70蛋白质可以诱导小鼠产生很强的体液免疫。结论 恶性疟原虫红内期Pf70 DNA片段是有前景的红内期DNA疫苗候选抗原基因片段。     

OAZI-1增强小鼠Melan-A疫苗免疫原性

目的探讨鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制剂-1(OAZI-1)能否增强Melan-A疫苗的免疫原性,进而诱导实验动物体内更强的细胞免疫效应。方法构建真核表达质粒pc DNA3.1(-)/OAZI-1、pc DNA3.1(-)/Melan-A及pc DNA3.1(-)/Melan-A-OAZI-1。将真核表达质粒作为基因疫苗免疫BALB/c小鼠,收集小鼠脾脏淋巴细胞及血液,用流式细胞计量术检测淋巴细胞亚群的变化;用乳酸脱氢酶(LDH)释放分析法检测脾淋巴细胞的肿瘤杀伤活性;用ELISA分析法检测血清INF-γ水平。结果成功构建了真核表达质粒pc DNA3.1(-)/OAZI-1、pc DNA3.1(-)/Melan-A及pc DNA3.1(-)/Melan-A-OAZI-1;将真核表达质粒作为基因疫苗免疫小鼠后,小鼠脾脏CD4+T细胞比率显著性升高(P0.05),其中以pc DNA3.1(-)/Melan-A-OAZI-1免疫组和pc DNA3.1(-)/Melan-A免疫组升高更为明显(二者之间无显著性差异);上述3种基因疫苗接种小鼠后,CD8+T细胞比率也显著性升高(p0.05),但以pc DNA3.1(-)/Melan-A-OAZI-1免疫组升高最为显著,与所有其他组相比均有显著性差异(P0.05);用pc DNA3.1(-)/Melan-A-OAZI-1免疫小鼠能显著增加脾淋巴细胞的肿瘤杀伤活性(P0.05);上述3种基因疫苗免疫小鼠后,仅pc DNA3.1(-)/Melan-A-OAZI-1组小鼠血清中INF-γ含量显著性升高(P0.01)。结论 OAZI-1能通过促进肿瘤抗原提呈,增加机体的抗肿瘤免疫能力。