转化生长因子-β_1对人牙周膜成纤维细胞合成胶原和肌动蛋白的影响

牙周膜成纤维细胞是牙周组织再生的重要基础之一,在牙周炎症或创伤时牙周膜细胞数量的减少以及生物学功能的降低阻碍了牙周组织的再生。生长因子可以调节牙周膜成纤维细胞的活性,并刺激其分泌细胞外基质,转化生长因子（TGF）-β1是一种非常重要的细胞因子。有研究表明,TGF-β1参与了牙周组织发育、牙齿移动、牙周炎症、免疫调节及牙周再生等一系列生理病理过程,对牙周膜间隙的维持、牙周膜细胞的趋化和增殖,细胞外基质的合成及降解等起重要的调控作用。本实验通过体外培养人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）,观察TGF-β1对细胞合成胶原和肌动蛋白的影响,为其促进牙周再生提供实验依据。     

碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞合成层黏连蛋白的影响

牙周膜成纤维细胞（PDLF）是一种具有多种生物学功能和分化潜能的细胞群,在牙周组织重建过程中起重要作用,其增殖和优先迁移是牙周再生获得成功的首要条件,目前的研究表明,碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）能促进体外培养的人牙周膜细胞增殖和分化,还能促使PDLF在牙根面上特别是病变牙根的表面附着和增殖。本研究目的是观察在外源性bFGF对体外的PDLF细胞合成层黏连蛋白（LN）的影响。     

黄芪对尾加压素Ⅱ诱导的心脏成纤维细胞胶原合成及分泌转化生长因子-β_1的影响

目的观察黄芪注射液对尾加压素Ⅱ（UⅡ）诱导的心脏成纤维细胞合成胶原及分泌转化生长因子（TGF-β1）的影响。方法体外培养乳鼠心脏成纤维细胞,分成3组：对照组、UⅡ组、UⅡ＋黄芪组。作用一定时间后,Real-time RT-PCR法测定各组细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1基因表达情况,3H-脯氨酸掺入测定胶原合成情况,双抗体夹心ELISA法测定培养上清TGF-β1分泌情况。结果UⅡ可以促进乳鼠心脏成纤维细胞胶原合成,刺激TGF-β1的分泌,黄芪注射液可明显抑制UⅡ的上述作用。结论黄芪可以通过抑制UⅡ诱导的心脏成纤维细胞胶原合成及TGF-β1分泌,延缓心肌纤维化及心脏重构的进展。     

不同灭菌方法对人牙周膜成纤维细胞培养的研究

目的比较2种不同的灭菌方法对人牙周膜成纤维细胞原代培养成活率的影响，寻找较为合适的灭菌方法，旨在提高人牙周膜成纤维细胞原代培养的成活率。方法28例牙齿标本分为5倍抗生素溶液灭菌组15例和次氯酸钠溶液灭菌组13例，2组分别采用5倍抗生素溶液与次氯酸钠溶液对取得的人牙周膜组织进行灭菌后，均采用组织块法培养人牙周膜成纤维细胞，并对细胞进行形态学和免疫组织化学染色鉴定，比较2种不同灭菌方法细胞培养的成活率。结果次氯酸钠溶液灭菌组无1例细胞成功传代，5倍抗生素溶液灭茵组细胞培养成活率为46．7％，且符合人牙周膜成纤维细胞的形态学和免疫学特征。结论利用舍5倍抗生素溶液灭菌效果与次氯酸钠溶液无差别，但相对更利于人牙周膜成纤维细胞的成活。     

不同浓度乙醇对大鼠肺组织TGFβ-1和bFGF表达的影响

目的:探讨不同浓度乙醇对大鼠肺组织中转化生长因子(TGF)-β1和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响及其与肺纤维化之间的关系。方法:雄性Wistar大鼠32只随机分成对照(C)组、3%(A3)、10%(A10)和20%乙醇(A20)组,每组8只,A3、A10、A20饮入不同浓度的白酒,C组自由饮水。16周后免疫组化法检测TGF-β1和bFGF在大鼠肺组织中的表达,通过Masson染色观察肺间质中胶原沉积的情况。结果:(1)TGF-β1的阳性细胞数在乙醇组中增高;对照组与A20组、A10组间差别均有统计学意义(P<0.05),但与A3组比较差别无统计学意义(P>0.05)。(2)bFGF的阳性细胞数在乙醇组中增高;随着乙醇浓度增高阳性细胞数增加,A3、A10、A20组间差异均有统计学意义(P>0.05)。Masson结果示乙醇组较对照组在肺泡间隔中胶原纤维沉积增多,以A20组最为明显。结论:肺泡Ⅱ型上皮细胞和巨噬细胞中TGF-β1、bFGF的表达随乙醇浓度的升高而增多,且一定浓度的乙醇会引起肺组织胶原沉积,提示乙醇可能是导致肺纤维化的原因之一。     

人牙周膜成纤维细胞的原代培养及鉴定

目的体外分离培养人牙周膜成纤维细胞,进一步研究细胞因子对牙周膜细胞功能的调控作用。方法利用组织块法原代培养牙周膜成纤维细胞并传代,通过形态学及免疫细胞化学方法对其进行鉴定。结果牙周膜成纤维细胞培养成功传代,5代后细胞生长旺盛,表现为长梭形细胞,免疫细胞化学鉴定细胞抗波形丝蛋白阳性,抗角蛋白阴性,为中胚层来源的成纤维细胞。结论组织块法培养出的细胞符合牙周膜成纤维细胞的形态学及免疫学特征,生长状态良好,可作为体外的细胞模型为研究细胞因子对其功能的调控作用奠定基础。     

茶多酚对内毒素抑制人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的 观察茶多酚对脂多糖(LPS)诱导下人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)增殖的影响.方法 采用组织块培养法培养原代HPDLFs并传代、免疫组化检测,取第5代细胞用于实验.将LPS及茶多酚分组,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法分别于24、48、72 h检测HPDLFs增殖活力.结果 免疫组化染色结果显示,所培养细胞的波形丝蛋白染色呈阳性表现,阳性部位位于胞质,角蛋白染色呈阴性表现.各浓度LPS组在24、48、72 h的光密度(OD)值(4 mg/L LPS组:0.323±0.007、0.345±0.010、0.437±0.007;20 mg/L LPS组:0.270±0.004、0.283±0.009、0.367±0.007; 100 mg/L LPS组:0.175±0.006、0.187±0.006、0.248±0.005;500 mg/L LPS组:0.088±0.004、0.091±0.006、0.153±0.009)与同时段空白对照组(0.306±0.008、0.333±0.007、0.399±0.007)组间比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).100 mg/L LPS组和各浓度茶多酚组在24、48、72 h的OD值(100 mg/L LPS组:0.216±0.010、0.260±0.010、0.352±0.012; 100 mg/L LPS组+0.125 g/L茶多酚组:0.300±0.010、0.408±0.013、0.490±0.014;100 mg/L LPS组+0.25 g/L茶多酚组:0.333±0.012、0.416±0.010、0.532±0.012;100 mg/L LPS组+0.5 g/L茶多酚组:0.390±0.012、0.485±0.011、0.642±0.013;100 mg/L LPS组+1 g/L茶多酚组:0.368±0.010、0.481±0.006、0.621±0.007)与同时段空白对照组(0.450±0.012、0.528±0.011、0.687±0.010)组间比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05);各浓度茶多酚组在24、48、72 h的OD值均低于同时段100 mg/L LPS组(均P＜0.05).结论 LPS抑制HPDLFs的增殖,茶多酚明显促进LPS诱导下HPDLFs的增殖,这提示茶多酚可应用于牙周炎的预防及治疗.     

牙周膜成纤维细胞多种培养法的研究

目的：提高人牙周膜成纤维细胞原代培养的成功率,提高组织块贴壁率,缩短培养时间,加快细胞增殖。方法以高血清结合改良组织块培养法培养原代 HPDLCs 与传统组织块法及改良组织块培养法作比较。通过免疫组化方法鉴定细胞的来源,绘制细胞的生长曲线,对三种方式的培养成功率、组织块贴壁率及细胞增殖速度进行比较。结果三种方法所培养的原代细胞生长均趋于正常,细胞呈长梭形或多角形,波形蛋白鉴定呈阳性,角蛋白鉴定呈阴性,符合正常 HPDLCs 的正常形态及生物学特点。高血清结合改良组织块培养法的成功率为86．67％,明显高于其他两种方法（P ＜0．01）。结论高血清结合改良组织块培养法明显提高了 HPDLCs 原代培养的成功率,适合在临床上运用。     

参麦开肺散对NIH/3 T3成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的：探讨参麦开肺散对NIH/3T3成纤维细胞(FB)增殖及体外纤维化细胞模型胶原合成的影响。方法 NIH/3T3 FB常规培养后分为正常对照组、模型组和处理组,正常对照组加入含1%胎牛血清(FBS)的细胞培养液500μl,模型组加入使用含1% FBS细胞培养液配制的5 ng/mlβ型转化生长因子( TGF-β)溶液500μl,处理组加入含5 ng/ml的TGF-β+1 mg/ml的参麦开肺散混合溶液500μl,培养24 h。分别采用实时定量聚合酶链反应( PCR)、蛋白免疫印迹( Western blot)和Sircol assay检测细胞内胶原及细胞外基质( ECM)相关基因表达水平、Ⅰ型胶原表达情况以及分泌到细胞上清中胶原蛋白的含量。结果参麦开肺散显著降低胶原及其相关基因、Ⅰ型胶原蛋白的表达以及分泌到细胞上清中胶原蛋白的含量(P<0．05,P<0．01)。结论参麦开肺散可明显抑制TGF-β诱导的NIH/3T3 FB胶原的合成,其发挥抗纤维化作用可能与其抑制FB增殖及胶原合成相关。     

粉防己碱和氯丙嗪对人胚肺成纤维细胞胶原和透明质酸合成的影响

研究粉防己碱和氯丙嗪胚肺成纤维细胞胶原与透明质酸合成的影响，为应用钙拮抗剂治器官纤维化提供依据。采用［＾３Ｈ］脯氨酸掺入和放射免疫法分别测定胶原与ＨＡ合成。结果：Ｔｅｔ５－８０μｍｏｌＬ＾－１和Ｃｈｌ１０－４０μｍｏｌＬ＾－１均以浓度依赖方式抑制胶原与ＨＡ合成。Ｔｅｔ５－２０μｍｏｌＬ＾－１对细胞无明显毒性却显著抑制胶厚与ＨＡ合成。     

丹参萃取液对肌成纤维细胞表达TGF-β1、α-SMA蛋白的影响

目的 进一步探讨丹参萃取液在预防良性胆管狭窄中的作用.方法 制作犬胆管损伤修复模型,采用免疫组化SP法对在胆道愈合过程不同时期组织中的转化生长因子-β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)、α平滑肌肌动蛋白(αsmooth muscle actin,α-SMA)表达和分布进行研究;通过原代肌成纤维细胞(MFB)的分离及培养,丹参萃取液干预MFB 24 h后,Western blot检测TGF-β1、α-SMA在纤维细胞中的表达变化.结果 犬胆管损伤修复模型高表达TGF-β1、α-SMA;丹参萃取液作用于MFB后,TGF-β1、α-SMA表达下降.结论 丹参萃取液作用于MFB后,TGF-β1、α-SMA等炎症因子分泌减少,胆道瘢痕形成减少,其对预防良性胆管狭窄有一定作用.     

参麦开肺散对NIH/3T3成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的探讨参麦开肺散对NIH/3T3成纤维细胞(FB)增殖及体外纤维化细胞模型胶原合成的影响。方法NIH/3T3 FB常规培养后分为正常对照组、模型组和处理组,正常对照组加入含1%胎牛血清(FBS)的细胞培养液500μl,模型组加入使用含1%FBS细胞培养液配制的5 ng/mlβ型转化生长因子(TGF-β)溶液500μl,处理组加入含5 ng/ml的TGF-β+1 mg/ml的参麦开肺散混合溶液500μl,培养24 h。分别采用实时定量聚合酶链反应(PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)和Sircol assay检测细胞内胶原及细胞外基质(ECM)相关基因表达水平、Ⅰ型胶原表达情况以及分泌到细胞上清中胶原蛋白的含量。结果参麦开肺散显著降低胶原及其相关基因、Ⅰ型胶原蛋白的表达以及分泌到细胞上清中胶原蛋白的含量(P<0.05,P<0.01)。结论参麦开肺散可明显抑制TGF-β诱导的NIH/3T3 FB胶原的合成,其发挥抗纤维化作用可能与其抑制FB增殖及胶原合成相关。     

碱性成纤维细胞生长因子与转化生长因子β1在类风湿关节炎滑膜组织中的表达

目的了解类风湿关节炎(RA)滑膜组织中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与转化生长因子β1(TGF-β1)的表达分布情况,探讨其与RA发病机制的关系.方法应用免疫组织化学SABC法对24例RA及4例正常滑膜组织中bFGF、TGF-β1的表达分布情况进行观察分析.结果 21/24例RA滑膜组织衬里层的巨噬细胞样细胞、成纤维细胞、浸润的炎症细胞与血管内皮细胞、细胞间质可见bFGF的表达分布,并且巨噬细胞样细胞、成纤维细胞、浸润的炎症细胞的阳性程度强于血管内皮细胞、细胞间质.22/24例RA滑膜组织衬里层与衬里下层的成纤维细胞、巨噬细胞样细胞、血管内皮细胞均见TGF-β1的阳性表达分布.两者比较,阳性细胞的染色程度、染色细胞数与分布范围大致相等.4例正常滑膜组织中bFGF、TGF-β1的表达分布均为阴性.结论 RA滑膜组织中bFGF、TGF-β1的表达分布均较正常增多且表达程度大致相等,两者协同作用,参与了RA病理过程的滑膜衬里层增生、炎症细胞浸润、血管增殖与滑膜血管翳的形成及对骨与软骨的破坏.     

转化生长因子β1及成纤维细胞生长因子基因敲除对尘肺小鼠肺纤维化的影响

目的 探讨转化生长因子β1(TGF-ββ1)、成纤维细胞生长因子(FGF)基因敲除对尘肺小鼠肺纤维化的影响.方法 将160只雄性BALB/c白色纯合子小鼠随机分为空白对照组、尘肺模型组、TGF-β1及FGF基因敲除组,每组40只.TGF-ββ1及FGF基因敲除组分别敲除TGF-β1及FGF基因.除空白对照组气道内灌入生理盐水外,其他3组于气道内灌入煤粉尘生理盐水混悬液,继续饲养,第16周测定TGF-β1、FGF水平并取肺组织行HE染色观察,分析血清及肺组织匀浆TGF-β1与FGF水平的相关性.结果 与空白对照组比较,尘肺模型组、TGF-β1及FGF基因敲除组第16周肺系数、血清及肺组织匀浆TGF-ββ1、FGF水平增高(P＜0.05);与尘肺模型组比较,TGF-β1及FGF基因敲除组第16周上述指标均降低(P＜0.05).尘肺模型组血清及肺组织匀浆TGF-β1与FGF呈正相关(r=0.420、0.512,P ＜0.05).结论 TGF-β1及FGF参与尘肺小鼠肺纤维化过程,TGF-β1及FGF基因敲除能抑制肺纤维化.     

丹参对培养的人瘢痕成纤维细胞生长和胶原形成的影响

目的 :探讨丹参对增生性瘢痕成纤维细胞 (FB)及胶原形成的影响。方法 :通过体外培养正常皮肤和瘢痕组织的FB ,以丹参 1 5mg·mL-1和 3 0mg·mL-1培养液培养后 ,检测FB的生长情况及其羟脯氨酸含量。结果 :与空白对照组比较 ,丹参 2个剂量组对正常皮肤FB生长及其羟脯氨酸含量无显著影响 (P均 >0 0 5 ) ;而对增生性瘢痕组织FB生长具有显著抑制作用 ,并使其羟脯氨酸含量降低 ,对于前者 ,丹参 2个剂量组比较无显著差别 ,对于后者含量 ,丹参 2个剂量组之间有极显著差别 (P<0 0 1)。结论 :丹参能抑制瘢痕的增生     

人牙龈成纤维细胞和牙周膜韧带细胞多向分化潜能的比较

目的 体外培养人牙周膜韧带细胞 （HPDLCs） 和人牙龈成纤维细胞 （HGFs）, 对比两者成骨、 成软骨以及成脂的多向分化潜能的差异。方法 运用酶消化结合组织块法体外培养 HPDLCs 和 HGFs, 选择生长状态良好的 3~4 代 HPDLCs 和 HGFs, 进行成骨、 成软骨、 成脂诱导, 未分化诱导的细胞作为对照组。分别用茜素红染色、 油红 O 染色以及阿利新蓝染色分别检测两种细胞的成骨、 成软骨及成脂分化能力。半定量逆转录聚合酶链反应 （RT-PCR） 检测 HPDLCs 和 HGFs 中相关标志基因骨钙素(OCN)、 Ⅰ型胶原蛋白 （Col 1）、 runt 相关转录因子 2 （RUNX2）、 过氧化物酶体增殖物激活受体γ2 （PPARγ2）、 X 型胶原蛋白 （Col 10） mRNA 的表达。结果 成骨诱导两种细胞培养至 28 d 时, 细胞周围均有红染钙结节形成, HPDLCs 形成的钙结节明显多于 HGFs; 成软骨诱导两种细胞 14 d 时均可见胞质蓝染的细胞, HGFs 较 HPDLCs 明显; 成脂诱导两种细胞 21 d 时, 可见红色脂肪滴形成, HPDLCs 形成的脂肪颗粒明显少于 HGFs。HGFs 和 HPDLCs 分化培养 7 d 和 14 d 后, 均有 OCN、 Col 1、 RUNX2、 PPARγ2 和 Col 10 的表达, 在 14 d 时的表达均高于 7 d; HPDLCs 中 OCN、 Col 1、 RUNX2 的表达高于 HGFs, PPARγ2、 Col 10 的表达低于 HGFs（均 P＜ 0.05）。结论 HPDLCs 的成骨能力较 HGFs 强, 成软骨和成脂能力较 HGFs 弱。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对早期糖尿病肾病患者血清TGF—β1、Ⅳ型胶原水平的影响

目的探讨丹参酮ⅡA磺酸钠对早期糖尿病肾病（DN）患者血清转化生长因子β1（TGF—β1）和Ⅳ型胶原（CⅣ）水平的影响。方法64例早期DN患者随机分为两组,对照组（32例）采用糖尿病常规治疗,治疗组（32例）在常规治疗基础上加用丹参酮ⅡA磺酸钠,疗程均为1个月。采用ELISA法测定两组患者治疗前后血清TGF—β1、CⅣ水平,同时观察尿白蛋白排泄率（UAER）的变化。结果治疗组患者治疗后血清TGF—β1、CⅣ水平明显下降（P〈0．01）;对照组血清TGF-β1、CⅣ水平治疗前后比较无明显变化（P〉0．05）。两组治疗后UAER均较治疗前降低,治疗组降低更明显（P〈0．01）。结论丹参酮ⅡA磺酸钠可降低早期DN患者的血清TGF-β1、CⅣ水平,延缓DN的发展。     

苦参素对成纤维细胞增殖、形态学及转化生长因子β_1的影响

目的 :研究苦参素对成纤维细胞增殖、形态学及转化生长因子β1(TGF β1)表达的影响 ,阐明其抗肝纤维化的作用机制。方法 :用甲基噻唑基四唑MTT(methylthiazolyltetrazolium)比色法、HE染色及免疫细胞化学技术分别检测小鼠皮肤成纤维细胞(NIH3T3)增殖、形态学及TGF β1的表达。结果 :苦参素能明显抑制成纤维细胞增殖及TGF β1的表达 ,并呈剂量依赖性。结论 :苦参素可通过抑制成纤维细胞增殖及TGF β1的表达而起到抗肝纤维化作用。