HLAⅠ类抗原的基因芯片分型技术研究

目的：采用DNA芯片技术进行汉族人群HLAⅠ类抗原A、B位点的DNA分型研究，并实现将A、B位点的DNA分型集中于一张芯片上，同时完成。方法：根据HLAⅠ类抗原A、B位点不同基因亚型的独特序列设计探针，制成分型芯片；待检测样品经PER反应标记上荧光之后，与探针在芯片上进行杂交，通过对杂交产生的荧光信号值进行分析，确定样品的HLA-A、B基因亚型。将这一方法应用于220份样本的HLAⅠ类DNA分型并将部分样品进行基因测序。结果：所有样本的HLAⅠ类基因芯片分型均获得成功，无假阳性和假阴性出现，80份样本的重复率为100％，总耗时2．5h。分型结果经双盲验证完全符合。可准确分辨出A位点等位基因20个，B位点等位基因41个，实际检出汉族人群A抗原特异性13个、B抗原特异性32个。结论：基因芯片用于HLAⅠ类A、B分型技术可行，其分辨率高、特异性强、重复性好、操作简便快速、结果直观，可以在一张芯片上同时检测HLA-A、B位点，并实现一张芯片多人份，适合于临床应用。     

HLA—D位点基因型核酸序列数据库

ＨＬＡ－Ｄ位点基因型核酸序列数据库克丙申齐法莲孙晓明安娟耿寿梅徐军人类白细胞抗原分子是由人类基因组中最具多态性的一段基因编码的细胞表面糖蛋白。它通过对Ｔ细胞的抗原提呈作用在机体的免疫反应中发挥巨大的作用，并且与人类多种疾病的发生相关联，与移植器官、组...     

HLA—DR位点的PCR—SSP基因分型

目的：探讨适用于肾移植供体HLA-DR的快速基因分型方法。方法：自行设计合成引物建立顺序特异性引物聚合酶链反应技术,并对110例肾移植供体作HLA-DR基因分型。结果：DNA提取方法可以满足PCR-SSP分型方法对DNA模板的要求。全部操作耗时120min,110例标本均分型成功。基因频率范畴在0.0045-0.1227之间,以DR4、DR15和DR9占多数。结论：PCR-SSP法作HLA-DR分型具有准确,简便,快速等优点。适合在临床进行推广应用。     

HLA—DPB131个等位基因的PCR—RFLP高分辨分型

本文报道建立了一种基于ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术的ＨＬＡ－ＤＰＲＢ１分型方法。经计算机分析而选出１０个限制性内切酶，在３１个ＤＰＢ１等位基因组成的４９６个ＤＰＢ１基因型中，可唯一性分辨４８４个。用于确定ＤＰＢ１基因型的３３个多态性酶切片段有２９个在８种纯合／杂合子分型细胞ＤＮＡ的ＤＰＢ１分型中得到验证。     

强直性脊椎炎病人HLA—B27等位基因与HLA—A,B抗原 …

调查强直性脊椎炎病人中Ｂ２７等位基因与其它ＨＬＡ－Ａ、Ｂ抗原之间的关系，为ＡＳ与Ｂ２７关联机理提供线索。方法ＨＬＡ－Ａ１Ｂ抗原分型采用ＮＩＨ标准微量淋巴细胞毒方法，Ｂ２７等位基因的检测采用聚合酶链反应／顺序特异的寡核苷酸探针方法。对上海地区６８例ＡＳ病人和３１８例正常对照进行调查。     

可溶性HLA—Ⅰ类抗原及临床意义的研究进展

ＨＬＡ是一类复杂的人类遗传多肽性系统,其研究工作在医学实践中有十分重要的意义,其中,ＨＬＡ－Ｉ类抗原在移植排斥反应中起着重要作用,是组织排斥应答的主要抗原,同时对细胞毒Ｔ细胞起约束作用,ＨＬＡ－Ｉ类抗原除了以膜抗原形式存在于细胞膜表面外,目前也已从人类的血清和淋巴液,尿液及乳汁中检出,称为可溶性ＨＬＡ抗原。本文综述了ｓＨＬＡ－Ｉ分子的分泌、结构、检测,在免疫调节及在自身免疫病、器官移植,感染等生理     

HLA—DR抗原在肝细胞癌中的表达及意义

HL A- DR通过 MHC 类分子限制的 T细胞对外来抗原的识别 ,在机体免疫应答和免疫调节过程中发挥重要的作用。许多肿瘤细胞表面常出现 HL A - DR的异常表达 [1 ,2 ] ,这种现象在肿瘤发生、发展及自身免疫调节过程中具有一定的生物学意义 ,而成为肿瘤免疫学研究的热点之一。本研究采用免疫组化技术对 HCC肝组织中 HL A- DR抗原的表达进行了检测 ,并探讨其意义。1　材料与方法2 0例正常肝组织取自肝部分切除术患者 ,男 13例 ,女7例 ,平均年龄 (41.8± 6 .2 )岁。 44例 HCC和癌旁组织取自1997～ 1999年本院肝胆外科手术切除标本 ,全部…     

一种新的HLA—II类基因分型方法——PCR／SSP技术的建立

ＰＣＲ／ＳＳＰ是一种新的基因多态性分析技术，可用于ＨＬＡ复合体及其他具有多态性特点２的基因分型。我室于１９９３年建立这种方法，并对正常人、重症肌无力患者、全身性红斑狼疮患者、骨髓移植供／受者进行了ＨＬＡ－ＤＲＢ１、－ＤＱＢ１基因型别分析。与其它ＨＬＡ基因分型方法相比，ＰＣＲ／ＳＳＰ具有简便、快速、准确及重量性好等特点。本文介绍ＰＣＲ／ＳＳＰ技术的原理、方法、特点以及常见问题的处理。     

人白细胞抗原—DPB1基因直接测序分型技术

研究建立准确的基于人白细胞怕－ＤＰＢ１（ＨＬＡ－ＤＰＢ１）核酸序列的基因分型技术,为疾病与ＨＬＡ基因相关性研究及器官、组织移植提供准确的ＨＬＡ基因分型方法,使用第十一届国际组织相容性会计提供的引物经ＰＣＲ技术扩增、分离相应的片段,纯化后用ＰＥ公司四色荧光染料终止剂标记循环测序技术直接测定核酸序列,获得个体基因型序资料,通过与基因型资料数据库比较确定基因型别。这一技术可以准确地确定个体的ＨＬＡ－ＤＰ     

慢性乙型和肝癌患者HLA—DR抗原在外周血淋巴细胞亚群中的表达分析

乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ )慢性感染状态使患肝细胞癌的危险增加 10 0倍 ,ＨＢＶ感染是肝癌发生的重要危险因素[1] 。该研究通过分析ＨＬＡ ＤＲ抗原在外周血淋巴细胞亚群中的表达状况 ,阐述细胞免疫功能紊乱在ＨＢＶ感染慢性持续及向肝癌恶性转化中的作用。1　资料与方法1 1　研究对象　慢性乙型肝炎 36例 ,年龄 17～ 5 5岁 ,平均 31 2岁 ;肝炎后肝癌 15例 ,年龄 34～ 6 8岁 ,平均 4 7 6岁。诊断依据 1995年 5月北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议 病毒性肝炎防治方案 (试行 ) [2 ] 。健康查体者 2 0例作为正常对照 ,年龄 2 1～ 5 0岁 ,平…     

HLA—B27和强直性脊椎炎

HLA－B27与强直性脊椎炎呈强关联,但它在强直性脊椎炎中作用仍不祥,对HLA－B27分子的结构特征、抗原肽与B27亚型以及CTL细胞对抗原肽－B27复合体表位识别进行深入的研究,有助于了解其在强直性脊椎炎发病中的确切作用,本文拟就有关方面的研究进展作一综述。     

雌二醇、睾酮对健康男性外周血单核细胞HLA－DR、HLA－DQ抗原表达的影响

将分离的人单核细胞（Ｍ）在体外分别与雌二醇（Ｅ＿２）、睾酮（Ｔｅ）以及Ｅ＿２＋Ｔｅ共同温育２４小时后，观察Ｍ表面ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＬＡ－ＤＱ抗原的表达。结果表明，Ｅ＿２（７．３４×１０￣（－１２）ｍｏｌ／Ｌ）能显著抑制Ｍ表面ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＱ抗原的表达，Ｔｅ（３．４７×１０￣（－１１）ｍｏｌ／Ｌ）则能促进Ｍ表面ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＱ抗原的表达。Ｅ＿２、Ｔｅ一起作用（浓度分别同上）于Ｍ时，Ｍ表面ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＱ抗原表达无明显变化。     

HLA—Ⅱ类抗原的表达调控及其在肿瘤组织中的表达

HLA－Ⅱ类抗原在免疫应答和免疫调节中具有重要作用,其表达调节主要发生在转录水平上。在它的启动子区内存在W盒、Y盒、X盒等顺式作用元件,调节HLA－Ⅱ类抗原的表达。HLA－Ⅱ类抗原启动子区具有的高度多态性,也可通过多种途径影响HLA－Ⅱ基因的表达。肿瘤细胞可异常表达HLA－Ⅱ类抗原,干扰素、启动子多态性、CⅡTA、RB蛋白等多种因素影响其表达。     

造血干细胞移植中HLA—Ⅱ类基因分型影响因素的探讨

目的：为了准确地进行造血干细胞移植供－受体的ＨＬＡ－Ⅱ类配型，对ＨＬＡ－Ⅱ类基因分型实验的影响因素进行了探讨。方法：采用美国莱姆达公司提供的微量ＳＳＰ＾ＴＭＨＬＡ－Ⅱ类ＰＣＲ－ＳＳＰ分型试剂盒对４００例造血干细胞移植供－受体进行基因分型。结果：采用０．５％ＥＤＴＡ抗凝的血标本与肝素抗凝的血标本相比，前者的护增效果好。ＤＮＡ终浓度为２５～２００ｎｇ／ｕｌ，最佳浓度为１００ｎｇ／ｕｌ，Ａ２６０／Ａ２８     

HLA分型方法进展

传统的 HL A分型方法主要是血清学和细胞学方法 ,分型准确性较差 ,且不能进行亚型分析。随着 PCR技术及基因芯片技术等分子生物学技术的出现、发展 ,HL A基因分型得到了迅速的发展 ,各具特点的 HL A分型技术不断出现 ,使 HL A的分型更加准确、精细、简便、实用 ,为临床推广应用打下了基础     

HLA—A1相关肝癌抗原肽的初步研究

目的 寻找肝癌细胞表达的肿瘤抗原肽。方法 应用0．2mol/Lph3.0柠檬酸缓酰洗肝癌细胞系HHCC,经SephadexG-25过渡及反向高效液相色谱分离纯化,获得可与HLA－I类分子结合的不同组分短肽。将其与抗原加工缺陷的HLA－A2T2细胞反应,进行肿瘤细胞特异性表位测定,同时进行CTL杀伤鉴定。结果 获得4个可与HLA－A2结合的组分,其中2个可以激发较强的CTL杀作畈应。结论 肝癌细胞系HHCC中存在能够激发CTL特异性反应的肿瘤抗原肽,并证实上述寻找肿瘤抗原肽的技术路线具有可行性。     

HLA—A,B血清学分型与DNA分型的比较

目的：比较１３６例样本ＨＬＡ－Ａ,Ｂ血清学分型与ＤＮＡ分型结果。方法：应用聚合酶链反应－序列特异性引物（ＰＣＲＳＳＰ）技术,设计３８对引物,检测常见的ＨＬＡ－Ａ,Ｂ基因。结果：１３６例样本中有６０例血清学分型与ＤＮＡ分型结构不符合（４４．１％）;ＨＬＡ－Ａ特异性血清学分型错误率在纯合子中分别占２３．３％与９．４％（共１１．２％）,在ＨＬＡ－Ｂ中分别占４７．４％与１８．４％（共２０．６％）;ＨＬＡ－Ａ特异性血清学分型假阴性６．６％,假阳性２．５％,错误指认特异性２．１％,ＨＬＡ－Ｂ错异性则分别为６．７％,３．６％,１０．３％。结论：ＩＬＡ－Ａ纯合子血清学分型错误率明显高于杂合子（Ｐ〈０．０５）;ＨＬＡ－Ｂ纯合子血清学分型错误率也明显高于杂合子（Ｐ〈０．００５）;ＨＬＡ－Ｂ特异性血清学分型错误率显著高于ＨＬＡ－Ａ特