蛋白芯片技术检测幽门螺旋杆菌的毒素抗体

目的:利用蛋白芯片技术检测病人血清中幽门螺旋杆菌(Hp)毒素相关蛋白(CagA)、空泡毒素(VacA)及尿素酶抗体(Ure),并与免疫印迹技术进行客观分析评价。方法:对145例临床诊断Hp感染的病人留取血清,深低温冻存同时作蛋白芯片检测和免疫印迹检测。结果:经x~2检验,前述两种方法检测 CagA、VacA、Ure抗体的结果对比均P>0.05。结论:蛋白芯片技术与免疫印迹技术相比,检测结果均差异无显著性。蛋白芯片法操作简单,样品用量少,具有快速、准确、检测指标多等优势,是一种很有发展前途的检验技术。     

幽门螺杆菌空泡毒素活性检测方法的比较

目的　分别采用细胞计数法及中性红摄入法 (NRU)检测幽门螺杆菌 (Hp)空泡毒素活性 ,探讨NRU检测空泡毒素活性的应用价值。方法　采用Hp液体培养上清浓缩液作为粗制VacA毒素 ,经倍比稀释(1∶16 0～ 1∶2 )后与胃癌SGC 790 1细胞共同孵育 2 4h。用细胞计数法及NRU同时评价VacA的空泡毒素活性 ,比较两种方法检测VacA空泡毒素活性的差异。结果　经中性红染色后 ,胃癌细胞吸收大量染料 ,空泡更加明显。NRU对空泡毒素活性的判断结果与细胞计数法基本符合 ,细胞计数法显示 1∶2 0～ 1∶2滴度样本均呈阳性结果 ,NRU于 1∶2 0～ 1∶5滴度亦得到阳性结果 ,1∶2滴度组因细胞大量死亡得到“假阴性”结果 (A550 =0 .0 6±0 .0 4 )。 1∶4 0滴度组细胞计数法判断为阴性 ,但NRU检测阳性 (A550 =0 .12± 0 .0 4 ,P <0 .0 5 )。结论　NRU检测空泡毒素活性具有简便、快速的特点 ,有助于对空泡毒素活性的定量评价 ,敏感性高于细胞计数法 ,可广泛用于空泡毒素活性的体外检测     

人正常上皮细胞的原代培养

传统的人正常上皮细胞原代培养方法存在培养率低、培养出的细胞活性差、操作繁琐等缺点，为了解决 这些问题，近年来国内外的众多研究者对人正常上皮细胞的原代培养过程进行了大量研究和不断改进。笔者主要综 述人正常上皮细胞分离纯化的一些方法(如组织块分离法、酶消化分离法 、机械刷取法、红细胞裂解法、Percoll分层 液密度梯度分离法等)以及培养传代中可应用到的一些方法(如无血清培养基联合低浓度血清培养基培养法、鼠尾胶 原包被法、玻璃培养瓶联合塑料培养皿培养法)；其次阐述了人正常上皮细胞的生物学特性及免疫细胞化学染色法、 台盼蓝拒染法等生物学性状检测的方法，并且对培养中无菌操作、培养时和分离时细胞外环境的条件、差速贴壁的 次数、添加剂的选择与用量等影响因素作了归纳。     

酶联免疫吸附法检测雨生红球藻超临界提取物中微囊藻毒素含量

建立酶联免疫吸附法检测雨生红球藻超临界提取物中微囊藻毒素含量方法,并进行了方法学验证,标准曲线为y=-2．5032x＋2．504,R2=0．9994,检测范围0．1ng／mL～2ng／mL,平均加样回收率为93．3％,结果表明该方法准确可靠。运用该方法对10批20个样品进行了微囊藻毒素含量检测,均未检出囊藻毒素,表明采用超临界方法提取的雨生红球藻产品未受到微囊藻毒素污染,可以安全食用。     

幽门螺杆菌空泡毒素、毒素相关蛋白的表达及分型

目的：分析分离自我国临床患者的幽门螺杆菌（Hp）毒力因子空泡毒素（VacA)和毒素相关蛋白(CagA)的表达状况及其分型分布。方法：从临床分离培养19株Hp，用细胞测毒法检测VacA，用Western blot法分析CagA，根据毒力因子表达情况进行分型。结果：VacA阳性率为57．9％，CagA表达阳性率为89．48％；I型，Ⅱ型,中间型Hp分别占52．63％，5．27％，42．10％。结论：所研究的临床分离Hp菌株的毒力因子属高表达。     

腹泻患者呕吐物中麦氏弧菌的分离及其生物学性状观察

目的:观察致人腹泻的麦氏弧菌的生物学性状。方法:参照GB15984-1995对1例腹泻患者进行病原学检测。结果:检测出麦氏弧菌1株,显示其不耐低温、耐碱和耐胆盐的特性,对青霉素、头孢拉定、复方磺胺甲口恶唑则有较高的耐药性,对阿米卡星、庆大霉素、氯霉素、呋喃唑酮等敏感,并能产生强烈的肠道毒素。结论:研究麦氏弧菌的生物学特性有助于临床快速检测,从而及时作出诊断,为患者采取有效治疗。     

生物微矩阵(芯片)方法检测100例幽门螺杆菌抗体的临床分析

目的 生物微矩阵芯片技术检测患者血清中幽门螺杆菌(Hp)毒素相关蛋白(CagA)、空泡毒素(VacA)及尿素酶抗体(Ure),快速提供胃十二指肠疾病诊断的依据.方法 对100例胃病患者留取血清,用生物微矩阵芯片方法检测.结果 CagA阳性为55%,VacA阳性为29%,Ure阳性为16%.结论 芯片法在幽门螺杆菌感染的诊断、筛查和防治中具有重要意义.     

基于线粒体功能障碍探讨补肾健脾化湿法对PCOS-IR作用的研究进展

]艰难梭菌是医院感染性腹泻的主要病原菌。艰难梭菌感染严格依赖于艰难梭菌产生的蛋白质毒素。近年来对艰难梭菌毒素的进一步研究有了新的发现,也发展和建立了一些新的艰难梭菌毒素检测方法。本文对艰难梭菌毒素的生物学和艰难梭菌毒素及其基因检测方法的研究进展做一综述,旨在为艰难梭菌感染防治提供参考。     

基于FRET构建A型肉毒毒素活性检测的高通量方法

目的 利用荧光共振能量转移(FRET)构建针对A型肉毒毒素酶活性检测的高通量体外方法。方法 构建只识别A型肉毒毒素的基于双荧光标记底物的重组表达质粒，将其构建的质粒转入大肠杆菌表达系统进行表达，对表达后的荧光标记底物重组蛋白进行纯化和透析并保存备用；利用A型肉毒毒素轻链(ALc)对重组蛋白进行酶切检测活性；对本检测方法的条件进行优化；ALc切割荧光标记底物测定其酶动力学参数K_m与K_cat值。结果 重组表达质粒构建成功，通过大肠杆菌表达系统表达后检测明显出现目的条带，对其纯化后获得的重组蛋白纯度在90%左右，命名重组蛋白为CYA。对CYA通过酶ALc、B型肉毒毒素轻链(BLc)进行酶切鉴定，结果显示CYA只能被ALc酶切产生与预期相符的两个蛋白片段，不能被BLc酶切。对基于FRET底物的条件优化得到：设定滤光片灵敏度在65～110之间；实时动态检测间隔为2 min/次，动态检测时间为30～120 min,底物CYA合适的浓度范围0.5～32μmol/L。CYA在ALc酶作用下随时时间的变化与荧光值528与485的比值作图最小在0.5左右，最大时...     

作用钠离子通道海洋生物毒素的研究及检测进展

离子通道类毒素是一类特异性作用于离子通道的神经毒素,而海洋生物毒素中有许多毒素都是通过作用于Na＋通道蛋白来影响与受体有关的一系列细胞调控活动,它们以其独特的化学结构和毒理特性,将成为21世纪研究与开发海洋资源的重要组成部分。本文就海洋生物中几种主要的Na＋通道受体神经毒素及其检测技术做一概述,为其研究提供科学参考。     

分泌型单链双功能抗体分子间接头的设计及软件分析

目的:利用生物信息学软件分析分泌型抗骨肉瘤单链双功能抗体融合蛋白的二级结构及其理化性质.方法:构建融合蛋白时,先进行连接肽的设计,选用通用酶切位点序列,运用DNA分析软件(DNAssist)和蛋白质分析软件(ANTHEPROT V5)分析预测融合蛋白的氨基酸序列、二级结构及其理化性质.结果:在编码ScFv与TNF的碱基之间引入连接肽,通过酶切位点获得的DNA序列,运用DNAssist核酸序列软件获得了融合蛋白的二级结构,并运用蛋白质分析软件(ANTHEPROT V5)预测了融合蛋白的理化性质.结论:应该充分利用生物信息学软件分析生物学信息,并不断对软件本身进行改进,生物信息学软件可提高药物开发进程,可利用生物信息学和遗传学信息来寻找和开发以基因为基础的药物.     

论中药质量评价模式的创新

目前主要依据现代分析手段诸如IR、LC-MS、NMR等对单一指标成分含量测定或建立指纹图谱以及对化学成分进行定性定量分析的化学表征,以及对药物体内代谢成分谱进行表征评价中药质量。本文从质量的本质内涵入手,认为中药质量应该从化学属性和生物属性两个层次评价。提出了以中医药理论为依据,中药的化学表征和药理效应的生物表征相结合的中药质量评价模式     

富锗金针菇多糖空间结构和与生物活性关系的研究

目的:研究从富锗金针菇菌丝体中提取、分离得到富锗真菌多糖FVP的空间结构以及空间结构与生物活性之间的关系.方法:用刚果红反应测定FVP的空间构象,用不同浓度的氢氧化钠处理多糖,观察多糖处理前后比旋度的变化以及空间结构的变化,并进一步对处理前后的多糖在保肝及治疗肝癌方面的生物活性进行比较.结果:FVP为3股螺旋构象,不同浓度的氢氧化钠对该多糖空间构象产生不同程度的影响,低浓度的NaOH处理的多糖在除去NaOH后其空间结构可完全恢复或部分恢复并伴随着生物活性的部分恢复,高浓度NaOH处理后其空间结构发生变化并伴随生物活性几乎完全丧失.结论:多糖的空间结构与生物活性密切相关.     

正交实验结合指纹图谱筛选白鲜皮提取工艺

目的:筛选白鲜皮中化学成分提取的最佳工艺条件。方法:采用HPLC/UV法,以多成分相对含量为评判指标,通过正交实验设计,考察乙醇浓度、乙醇用量、回流时间和回流次数等因素对白鲜皮化学特征的影响。结果:最佳工艺条件为加乙醇12倍量,体积分数75%,提取1次,每次1.5 h。结论:该研究方法综合中药化学整体特征,为提取工艺评价方法提供借鉴。     

Corydalis Rhizoma as a model for herb-derived trace metabolites exploration: A cross-mapping strategy involving multiple doses and samples

Deciphering the metabolites of multiple components in herbal medicine has far-reaching significance for revealing pharmacodynamic ingredients. However, most chemical components of herbal medicine are secondary metabolites with low content whose in vivo metabolites are close to trace amounts, making it difficult to achieve comprehensive detection and identification. In this paper, an efficient strategy was proposed: herb-derived metabolites were predicted according to the structural characteristics and metabolic reactions of chemical constituents in Corydalis Rhizoma and chemical structure screening tables for metabolites were conducted. The fragmentation patterns were summarized from representative standards combining with specific cleavage behaviors to deduce structures of metabolites. Ion abundance plays an important role in compound identification, and high ion abundance can improve identification accuracy. The types of metabolites in different biological samples were very similar, but their ion abundance might be different. Therefore, for trace metabolites in biological samples, we used the following two methods to process: metabolites of high dose herbal extract were analyzed to characterize those of clinical dose herbal extracts in the same biological samples; cross-mapping of different biological samples was applied to identify trace metabolites based on the fact that a metabolite has different ion abundance in different biological samples. Compared with not using this strategy, 44 more metabolites of clinical dose herbal extract were detected. This study improved the depth, breadth, and accuracy of current methods for herb-derived metabolites characterization.     

铜锌超氧化物歧化酶基因对HepG2肝癌细胞增殖的抑制作用

目的：探讨超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）对肝癌细胞增殖的抑制作用。方法：利用逆转录病毒载体介导的基因转移技术，将人铜锌ＳＯＤ基因导入人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２细胞内，获得高表达。检测其对ＨｅｐＧ２细胞生物学特性的影响。结果：与对照相比ＳＯＤ基因转染后的肝癌细胞生长受到抑制，细胞体积变大，分裂象减少，Ｓ期细胞比率减少，软琼脂集落形成率低，裸鼠成瘤瘤体小。结论：铜锌ＳＯＤ基因具有抑制ＨｅｐＧ２肝癌细胞增殖的作用。     

系统化学生物学在中药谱效关系研究中的应用展望

中药谱效关系是当前中药研究的前沿课题,其在中药质量控制和疗效评价中起着重要作用。谱效关系研究方法中,药效评价方法及其与化学指纹图谱的联系是必须解决的关键问题之一。现行药理学评价指标多是总体宏观指标,与化学指纹图谱数学关联度不高。系统化学生物学研究对象及内容和中药谱效关系结合紧密,而系统化学生物学中的小分子化合物对生物大分子的调控作用即体现为药效,化学信息学和化学计量学的发展为精确表述它们的关系拓宽了思路。通过对中药谱效关系研究的分析,指出将系统化学生物学方法运用到中药谱效关系研究中,旨在为谱效关系研究开辟更加广阔的道路。     

人类N-乙酰化酶2蛋白质分子的计算机三维模拟

目的：对人类N-乙酰化酶2（NAT2）蛋白质分子进行计算机三维模拟。方法：将下载的蛋白质序列结合计算机三维模拟技术对NAT2进行三维模拟，并对其进行物理、化学、生物学等特征分析，初步判断蛋白质分子的部分化学和物理学性质，对其某些功能作出预测。结果：利用蛋白质序列分析软件包ANTHEPORT 5．0模拟出NAT2可能的结构；预测到NAT2的蛋白等电点（pHi）=5．495，相对分子质量=33544以及NAT2的滴定曲线和物理化学特征性曲线；对NAT2第282个氨基酸位点附近的片段绘制出Helical Wheel图。结论：能利用计算机模拟出NAT2的可能结构，并可作出一定的分析和预测，此种方法可用于NAT2基因多态性的分析。     

松果腺褪黑素及其受体对下丘脑-垂体-性腺轴作用的研究进展

褪黑素是松果体分泌的一种神经内分泌激素,在生物钟、生殖、免疫、抗氧化等方面有重要作用。褪黑素及其受体通过其主要的理化性质和生物学功能,对下丘脑-垂体-性腺轴发挥全线抑制作用。在不同年龄段抑制程度可能有所差别,其可能机制是下丘脑-垂体-性腺轴功能随年龄改变,对褪黑素的反应亦发生变化。研究褪黑素及其受体对下丘脑-垂体-性腺轴的作用,有利于发挥其在生物、医学、社会不同领域的优势。     

结核分枝杆菌higA基因的扩增及生物信息学分析

目的 对结核分枝杆菌的higA基因进行扩增,同时利用生物信息学方法分析其编码蛋白的结构和功能.方法 从结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组DNA中扩增higA基因,对扩增产物进行测序.利用生物信息学网站和软件分析higA蛋白的理化性质、信号肽、空间结构、抗原表位等.结果 higA基因扩增产物与预期一致,大小为450 bp.higA蛋白共149个氨基酸,理论等电点7.93,脂溶性系数94.30,不稳定系数36.57,预测该蛋白为稳定蛋白.higA蛋白无信号肽,含10个磷酸化位点和多个潜在的抗原表位.结论 成功扩增出结核分枝杆菌higA基因.