对乙酰氨基酚联合外照射对脑胶质瘤细胞照射后代增殖的影响

目的 观察对乙酰氨基酚联合外照射对脑胶质瘤SHG-44细胞株照射存活后代增殖的影响,探讨对乙酰氨基酚作为复发性恶性脑胶质瘤放射治疗增敏剂的可能性.方法 培养人脑胶质瘤SHG-44细胞株经6 MV X线DT10 Gy照射后的存活后代细胞(SHG-44-10细胞),测定其群体倍增时间;在培养SHG-44-10细胞中加入对乙酰氨基酚,进行集落形成实验和流式细胞仪检测,分析其放射敏感性和细胞周期的变化.结果 与SHG-44细胞相比较,SHG-44照射后代细胞克隆形成率降低,倍增时间延长,对放射的敏感性明显降低.而加入对乙酰氨基酚培养后,SHG-44照射后代细胞对放射的敏感性可增加.SHG-44照射后代细胞再次照射后12 h,G2/M相细胞比例增高,24 h比例下降,而加入对乙酰氨基酚培养后G2/M相细胞12 h、24 h均维持较高的比例.结论 (1)SHG-44细胞照射后存活后代细胞增殖延缓,放射敏感性下降.(2)小剂量对乙酰氨基酚可提高SHG-44细胞照射后存活后代细胞的放射敏感性,其可能的机制为诱导细胞阻滞在对放射敏感的G2/M期并能诱导它的凋亡.(3)对乙酰氨基酚有可能成为治疗复发性脑胶质瘤的放射增敏剂.     

灵芝多糖对γ射线照射后NIH3T3成纤维细胞细胞周期及细胞增殖的影响

目的探讨γ射线对成纤维细胞细胞周期及增殖的影响,以及从细胞水平探讨灵芝多糖的抗辐射作用。方法加不同剂量灵芝多糖的NIH3T3细胞在60Coγ射线15Gy照射12h后收集,以流式细胞仪检测细胞各周期百分率及凋亡率。结果照射剂量为15Gy阳性对照细胞组G0～G1期细胞数占细胞总数的52.76%,与阴性对照组(90.09%)对比,P＜0.01;加药剂量50mg/L组、100mg/L组、150mg/L组的G0～G1期细胞数分别占细胞总数66.17%、71.73%、76.1%,与阳性对照组对比,50mg/L组为P＜0.05,100mg/L组和150mg/L组P＜0.01有很显著性差异。阴性对照组细胞凋亡率0.4%,照射后各组细胞凋亡率均为0。结论15Gy60Coγ射线照射促进NIH3T3细胞增殖,0～15Gy照射后12h内不能促进细胞凋亡;加不同剂量灵芝多糖后均对细胞增殖有抑制作用,从而使受损细胞不能增殖,实现抗辐射作用。     

电离辐射致小鼠骨髓基质细胞凋亡的研究

目的探讨电离辐射致骨髓基质细胞(BMSC)凋亡的规律。方法采用流式细胞仪、电镜技术观察不同剂量6OCoγ射线照射后BMSC的凋亡变化。结果经50Gy剂量照射后,BMSC木见有明显的形态学改变,而经100和200Gy照射后 BMSC出现了明显的凋亡改变。流式细胞检测显示,经50Gy剂量照射后,BMSC的凋亡率与正常对照相比变化不明显(P＞0.05);100Gy照射后BMSC的凋亡率出砚了明显改变(P＞0.01),而且这种变化始于照射后4h,至照后24h到达高峰,随后凋亡率慢慢下降;200Gy照射组的凋亡率略高于100Gy组,但差异不明显(P＞0.05)。结论体外培养的BMSC受一定剂量的6OCoγ射线照射后可发生凋亡,并且有较强的辐射抗性。     

电离辐射致小鼠骨髓基质细胞凋亡的研究

目的：探讨电离辐射致骨基质细胞（BMSC）凋亡的规律，方法：采用流式细胞仪，电镜技术观察不同剂量60Coγ射线照射后BMSC的凋亡变化。结果：经50Gy剂量照射后，BMSC未见有明显的形态学改变，而经100和200Gy照射后BMSC出现了明显的凋亡改变，流式细胞检测显示，经50Gy 剂量照射后，BMSC的凋亡率与正常对照组相比变化不明显（P＞0．05），100Gy照射后BMSC的亡率出现了明显改变（P＜0．01），而且这种变化始于照射后4h，至照后24h到达高峰，随后凋亡率慢慢下降，200Gy照射组的凋亡率高于100Gy组，但差异不明显（P＞0．05），结论；体外培养的BMSC受一定剂量的60Coγ射线照射后可发生凋亡，并具有较强的辐射抗性。     

顺铂对鼠胶质瘤SHG-44细胞的增殖抑制和辐射增敏作用

目的:观察顺铂对鼠胶质瘤SHG-44细胞的抑制及放射增敏作用,并探讨其作用机制。方法:不同浓度紫杉醇(0、0.625μg/ml、1.25μg/ml、2.5μg/ml和5μg/ml)作用于SHG-44细胞,MTT法检测顺铂对SHG-44细胞的增殖抑制作用;克隆形成法检测细胞辐射敏感性变化,流式细胞术检测细胞凋亡百分率变化。结果:顺铂有明显的抑制SHG-44细胞增殖和提高其放射敏感性的作用,顺铂可提高3 Gy、6 Gy照射24 h后SHG-44细胞的凋亡率。结论:顺铂对人胶质瘤SH-44细胞具有杀伤及放射增敏作用。其可能机制是加强射线对肿瘤细胞的诱导凋亡效应,增加其杀伤肿瘤作用。     

脑肿瘤干细胞放射敏感性的实验研究

目的 评价脑肿瘤干细胞(brain tumor stem cell,BTSC)与胶质瘤细胞系SHG-44细胞放射敏感性的差异.方法 SHG-44细胞分别接种于含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基和无血清的DMEM/F12培养基(添加bFGF和EGF)中.CD133免疫细胞化学染色鉴定BTSC.0、0.5、1、2、3、4、6、8、10、20 Gy X线照射SHG-44细胞和BTSC后以流式细胞仪检测两种细胞的细胞周期及细胞凋亡率,绘制SHG-44细胞和BTSC的存活曲线.结果 SHG-44细胞中存在BTSC,后者能在无血清的DMEM/F12培养基中存活并悬浮生长,增殖形成克隆球,具有自我更新和增殖能力,表达特异性标志物CD133.两种细胞在X线照射后细胞周期无明显差异,BTSC的细胞凋亡率低于SHG-44细胞(P<0.05),细胞存活率高于SHG-44细胞(P<0.01).结论 BTSC的放射敏感性较SHG-44细胞明显降低,是胶质瘤放疗抵抗的主要原因.     

γ刀照射后胶质瘤细胞抑癌基因p16表达的变化

目的:观察γ刀对体外培养的胶质瘤C6细胞照射后,凋亡细胞中抑癌基因产物P16蛋白表达水平的变化.方法:体外培养胶质瘤C6细胞,经Leksell γ刀照射,体外培养48 h,应用免疫组化S-P法及计算机图像分析检测γ刀照射前后C6细胞P16蛋白表达水平.结果:5.00、6.22 Gy组γ刀照射后,培养48 h的C6细胞P16蛋白表达水平明显升高(细胞灰度值分别为155.4±2.0、124.9±7.1),与对照组(细胞灰度值为167.1±6.2)比较,差异有显著性(P<0.01).结论:γ刀诱导C6细胞凋亡的机理可能与激活P16蛋白表达水平有关.     

电离辐射对Jurkat T细胞凋亡与坏死的影响

目的：研究电离辐射诱导Jurkat T细胞凋亡与细胞坏死的变化规律,探讨电离辐射作用后细胞的死亡模式与机理。方法：采用Annexin V-EGFP和PI 双染、流式细胞术(FCM)检测不同剂量（0.075、0.500、1.000、2.000、4.000和6.000 Gy）X射线照射后Jurkat T细胞凋亡与细胞坏死的时间-效应关系和剂量-效应关系。结果：时间-效应关系,2.000 Gy X射线照射后,与假照组比较,Jurkat细胞凋亡百分率在照射后18 h显著增加,至24 h始终维持在较高水平（P＜0.001）;细胞坏死百分率于照射后4 h显著增加,12 h 达峰值,至48 h始终维持在较高水平（P＜0.001）。剂量-效应关系,0.075Gy X射线照射后18 h,Jurkat T细胞凋亡百分率和细胞坏死百分率与假照组相比较未见明显变化（P＞0.05）。2.000~6.000 Gy较大剂量X射线照射后18 h,细胞凋亡百分率和细胞坏死百分率与假照组比较均呈剂量依赖性增加（P＜0.001）。结论：2.000 Gy以上剂量X射线可以诱导Jurkat T细胞发生凋亡和坏死,细胞坏死比细胞凋亡出现时间更早,持续时间更长。     

电离辐射诱导pEgr-hPTEN 表达增强其体外抗肿瘤作用

目的：研究辐射诱导表达载体pEgr-hPTEN体外稳定转染联合X射线照射对恶性胶质瘤细胞SHG-44增殖和诱导细胞凋亡的作用。 方法：以脂质体介导携有外源野生型PTEN基因的表达载体pEgr-hPTEN转染人胶质瘤SHG-44细胞,筛选稳定转染细胞克隆并扩增培养,以Western blotting法检测PTEN基因的辐射诱导表达情况,应用流式细胞仪及生长曲线测定稳定转染联合0~10 Gy X射线照射对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响。 结果：SHG-44-hPTEN稳定转染细胞PTEN蛋白的相对表达量可被辐射诱导增强,5 Gy以内呈剂量依赖性增加。稳定转染联合辐射可明显抑制肿瘤细胞的恶性增殖并诱导肿瘤细胞凋亡,照射后第8天稳定转染不同剂量组细胞数仅为稳定转染0 Gy假照组的30.0%~50.0%和未转染0 Gy假照组的7.7%~13.0%;稳定转染不同剂量照射组早期凋亡细胞百分数分别为稳定转染0 Gy假照组的1.5~2.3倍、未转染照射组的1.9~4.4倍及未转染0 Gy假照组的3.4~5.1倍。 结论：体外基因-放射联合作用可诱导肿瘤细胞凋亡明显增多,具有显著的肿瘤抑制作用。     

X射线对人三阴性乳腺癌细胞E-钙黏蛋白基因表达的影响

目的 研究不同剂量X射线照射人三阴性乳腺癌细胞,照射后不同时间点对人三阴性乳腺癌细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)基因表达的影响。方法 用X射线分2.5、5和10Gy 3个吸收剂量组照射体外培养的人三阴性乳腺癌HCC1937细胞和MDA-MB-231细胞,采用荧光实时定量PCR技术检测HCC1937细胞和MDA-MB-231细胞经照射后6、12、24和48h的E-cadherin mRNA表达水平,以未照射组(0h组)为对照。结果 HCC1937细胞和MDA-MB-231细胞E-cadherin mRNA的表达在2.5、5、10Gy X射线照射后,随着时间点的后移呈升高趋势。与未照射组相比,除了HCC1937细胞10Gy照射后6h、2.5Gy和5Gy照射后24h及MDA-MB-231细胞5Gy照射后12h外,各时间点差异均有统计学意义(P＜0.05)。HCC1937细胞在2.5Gy和10Gy照射后48h,E-cadherin mRNA的表达呈下降趋势,与未照射组相比,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 较大剂量的X射线整体可上调HCC1937细胞和MDA-MB-231细胞E-cadherin mRNA的表达,可能诱导了肿瘤细胞凋亡;晚期HCC1937细胞E-cadherin mRNA的表达下降,可能与辐射所致HCC1937细胞的放射生物学效应有关。     

电离辐射对人HepG2肝癌细胞caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察电离辐射对人HepG2肝癌细胞Caspase-3蛋白表达的影响.方法:采用6MV-X射线照射人HepG2肝癌细胞,Western blotting蛋白印迹法检测细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达.结果:6MV-X照射后48小时,2Gy、4Gy、6Gy剂量组HepG2细胞Caspase-3蛋白的表达明显高于假照射对照组(0Gy)(P＜0.05,P＜0.01).结论:电离辐射可诱导HepG2细胞Caspase-3蛋白表达增高.     

PNKP沉默对骨肉瘤放疗的增敏作用

目的 研究多聚核苷酸激酶/磷酸酶(polynucleotide kinase/phosphatase,PNKP)在放疗诱导的细胞DNA损伤、细胞凋亡、细胞增殖和细胞周期中的调节作用.方法 将U2OS细胞系分为3组:骨肉瘤细胞对照组、阴性siRNA转染组(siC)和PNKP siRNA转染组(siPNKP).Western blot检测0、1、2、4、6、8 Gy6个剂量水平γ-射线照射后U2OS细胞中PNKP的变化,CCK-8分析不同剂量γ-射线照射后细胞的存活率,彗星实验检测辐射后骨肉瘤细胞DNA的损伤,MTT法检测辐射后细胞增殖情况,流式细胞仪分析辐射后细胞凋亡、线粒体膜电位和细胞周期的变化.结果 4 Gy剂量的γ-射线可以显著降低骨肉瘤细胞U2OS中PNKP的表达(55.17％,P＜0.01)和细胞的存活能力(与对照组相比下降50.16％,P＜0.01).与单独辐射组(siC+ IR)对比,PNKP沉默可以抑制辐照后细胞的生长(抑制率增加到129.61％,P＜0.01),增加DNA的损伤(DNA迁移量增加58.94％,P＜0.01),使细胞周期停滞在S期,促进细胞凋亡以及降低线粒体膜电位水平.结论 PNKP沉默可以增加骨肉瘤细胞放射治疗的敏感性.     

PTEN基因转染的胶质瘤细胞对γ刀照射敏感性的变化

目的:观察转入正常PTEN基因的胶质瘤细胞经γ刀照射后生长能力及黏附力的改变,探索PTEN基因对胶质瘤细胞放射敏感性的影响.方法:以RT-PCR方法体外扩增PTEN全长基因,与质粒pcDNA3.1连接,构建重组真核载体pcD-NA3.1-PTEN,并用之转染PTEN失活的U251细胞(人胶质母细胞瘤细胞系),用48 h的半数致死剂量(中心剂量和周边剂量分别为9.00和4.50 Gy)进行γ刀等中心照射,并采用MTT法和纤维粘连蛋白黏附实验观察照射前后细胞的生长及黏附力改变.结果:空载体转染组与未转染组照射前后细胞存活率和黏附率均无显著性差异,而PTEN基因转染的细胞存活率及黏附率在照射前后均显著低于空载体转染组及未转染组(P＜0.01),且照射后下降程度更加明显.结论:PTEN基因转染的胶质瘤细胞对于γ刀照射的敏感性提高.     

肝细胞生长因子对辐射后心肌细胞蛋白合成的保护作用

目的 研究肝细胞生长因子(HGF)对60Coγ射线照射体外培养的大鼠心肌细胞蛋白表达的影响.方法 体外培养新生大鼠心肌细胞,分为未照射组、单纯照射组、HGF处理照射组,照射组细胞分别用60Coγ射线20Gy单剂量照射心肌细胞,HGF处理的照射组在照射前3 h用终浓度为40ng/ml的HGF孵育.在照射后48 h:(1)用蛋白检测试剂盒检测各组心肌细胞中的总蛋白含量;(2)流式细胞仪检测各组的细胞周期变化;(3)带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(AdGFP)感染各组心肌细胞,感染后48 h用流式细胞仪检测各组心肌细胞中所含的绿色荧光蛋白的荧光强度,间接比较各组心肌细胞中绿色荧光蛋白的生成量.结果 照射后48h,照射组心肌细胞中总蛋白含量较未照射组减低(P＜0.01),HGF处理的照射组心肌细胞中总蛋白含量较单纯照射组增高(P＜0.05).照射后96 h、感染AdGFP后48 h,照射组心肌细胞的绿色荧光强度明显弱于未照射组(P＜0.01),HGF处理的照射组心肌细胞的绿色荧光强度较单纯照射组增强(P＜0.01).结论 60Coγ射线单剂量照射抑制体外培养的心肌细胞蛋白合成,HGF可部分逆转60Coγ射线对心肌细胞蛋白生成的抑制作用.     

不同剂量电离辐射对小鼠睾丸的损伤效应

目的 探讨不同剂量电离辐射对小鼠睾丸的损伤效应.方法 120只雄性昆明小鼠,随机分为对照组,2.5 Gy、3.5 Gy、4.5 Gy和5.5 Gy 60Coγ射线照射组,每组24只.60Coγ照射后3d、7d和14 d测定睾丸指数、附睾指数、精子数和精子畸形率,苏木精-伊红染色法观察小鼠睾丸组织病理学变化.结果 辐照后3d,照射组小鼠附睾指数上升,随后下降,其中辐照后14d,4.5 Gy和5.5 Gy组与对照组或同组3d时比较均差异明显(P＜0.01或P＜0.05);各照射组睾丸指数在辐照后7d和14d均明显下降(P＜0.01或P＜0.05),与辐照后3d比较5.5 Gy组下降明显(P＜0.01).各照射组的精子畸形率在3d、7d和14 d时均明显上升(P＜0.01或P＜0.05),其中5.5 Gy组上升较快,精子数也下降明显(P＜0.01),5.5 Gy组生精小管肌样细胞及基膜均模糊不清.2.5 Gy组辐照后与对照组比较无明显差异.结论 辐照对小鼠睾丸造成的损伤程度与辐照剂量呈正相关,其中3.5 Gy和4.5 Gy是较适合制作小鼠睾丸辐射损伤模型的剂量.     

X射-线对肺癌细胞DNA修复基因XRCC1表达水平的影响

目的:研究X-射线对肺癌细胞X线修复交叉互补基因1(X-ray repair cross complementing gene 1,XRCC1)表达的影响,探讨DNA碱基切除修复机制在肺癌细胞对放疗耐受中的可能作用.方法:以噻唑蓝还原法(MTT)检测X-射线对肺癌细胞(人肺腺癌细胞株 A549)抑制率的影响,实时荧光定量PCR技术检测X-射线处理后肺癌细胞XRCC1 mRNA的表达水平.结果:肺癌细胞抑制率多数情况下随X-射线照射时间的延长及照射剂量的增大而增加,呈照射时间依赖性(P＜0.05)和剂量依赖性(P＜0.05);X-射线照射后肺癌细胞XRCC1 mRNA的表达水平均先增高后降低,4 Gy组和8 Gy组在72 h表达水平最高(P＜0.05),16 Gy组和32 Gy组在48 h表达水平最高(P＜0.05).结论:X-射线照射可引起肺癌细胞XRCC1 mRNA表达水平的明显改变,提示DNA碱基切除修复机制可能在肺癌细胞对放疗的耐受中起了重要的作用.     

伽玛刀照射对胰腺癌细胞凋亡的影响

[目的] 探讨伽玛刀照射对胰腺癌Panc-1细胞凋亡的诱导作用. [方法] 利用直接免疫荧光法流式细胞术检测伽玛刀照射不同时间后培养Panc-1细胞的凋亡率,同时透射电镜观察凋亡细胞的超微结构变化.[结果] 2、10、15、20、30、50 Gy剂量照射停止后24 h,细胞凋亡率分别为2.75%、11.5%、27.1%、18.2%、13.7%、3%; 在15 Gy以内细胞凋亡率随着照射剂量增加而增加,15 Gy以上随着照射剂量增大而减少.用15 Gy 照射后12、24、36、48 h细胞凋亡率分别为14.7%、27.1%、11%、5.2%;24 h前随时间延长,细胞凋亡率增加,24 h后随时间延长而减少.[结论] 伽玛刀对胰腺癌细胞具有剂量依赖诱导凋亡作用,其凋亡出现高峰为照射后24 h,15 Gy.     

X射线对小鼠脾细胞内P16、cyclin D1和CDK4表达的影响

目的:探讨X射线对小鼠脾细胞内P16、cyclin D1和CDK4表达的影响.方法:采用细胞间接荧光标记法、FACScan流式细胞仪检测不同剂量X射线全身照射后小鼠脾细胞内P16、cyclin D1和CDK4三种蛋白表达的时程变化和量效关系.结果:2.0 Gy X射线照后24 h小鼠脾细胞P16表达明显高于假照组;CDK4表达水平在照后8 h明显降低,持续至照后72 h仍低于正常水平.周期蛋白cyclin D1表达轻度下调.不同剂量照射后P16蛋白表达呈剂量依赖性增加,1.0～4.0 Gy组与假照射组相比显著增多(P＜0.05,P＜0.01);cyclin D1蛋白表达随剂量升高有降低趋势;CDK4亦呈剂量依赖性降低,0.5～6.0 Gy组与假照组比较差异具有显著性(P＜0.05,P＜0.01).结论:P16/cyclin D1/CDK4/pRb通路在电离辐射诱导脾细胞G1期阻滞中可能起十分重要作用.     

~(60)Coγ射线对HeLa细胞端粒酶活性的影响

目的　探讨γ射线对人宫颈癌细胞系HeLa端粒酶活性的影响。方法　不同剂量的γ射线照射HeLa细胞后 2 4、72、12 0h ,用TRAP ELISA法检测端粒酶的活性。结果　γ射线照射后细胞能增加端粒酶的活性。较低剂量(0 .5～ 1.5Gy)γ射线照射后 2 4h ,端粒酶的活性呈剂量依赖式增加 ;2～ 3Gy时增加的幅度减低 ;而较高剂量 (4 12Gy)γ射线照射时 ,又呈剂量依赖式增加。与照射后 2 4h相比 ,在较高剂量 (4 12Gy)照射后 72及 12 0h ,酶的活性呈剂量依赖式减少。结论　HeLa细胞受γ射线照射后 ,端粒酶活性增加 ;不同剂量范围 ,增加幅度不同。     

正常猕猴与人视网膜血管的比较

目的 探讨小鼠肺、胸腺、小肠、脾不同组织受到辐射损伤后血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA 的表达及意义.方法 使用不同剂量(0、4、8 Gy)的 X 射线照射小鼠,然后取其肺、胸腺、小肠、脾组织.用逆转录多聚酶链反鹰(RT-PcR)法研究照射后24h不同组织中的VEGF mRNA表达水平.结果 经 4、8 Gy 射线照射后 24h,肠、肺组织 VEGFmRNA 表达水平与正常对照组相比,无显著差异(P＞0.05).脾、胸腺组织 VEGF mRNA 表达水平与正常对照组相比,均升高.4 Gy 射线照射后 VEGF mRNA 表达水平与其它剂量射线照射组相比显著升高(P＜0.01).结论 不同剂量辐射损伤后脾、胸腺组织 VEGF mRNA 表达增强,肠、肺组织 VEGF mRNA 表达变化差异不大,VEGF 可能对免疫系统比对其他组织的辐射防护作用大,这为放射性损伤的治疗提供了理论依据.