测定低分子量透明质酸相对分子质量的3种方法比较

目的比较3种测定低分子量透明质酸(LMWHA)相对分子质量(Mr)方法。方法分别采用特性黏度法、高效凝胶渗透色谱(HPGPC)法及多角度激光散射仪结合凝胶渗透色谱(GPC/MALLS)法测定LMWHA的Mr,并对所得结果进行对比分析。结果对于Mr介于10 000~100 000范围内的LMWHA,特性黏度法测得的Mr值与GPC/MALLS法测得的Mr值基本相同,而HPGPC法由于所用标准Mr对照品结构上的差异,测得的Mr与其它两种方法测得的值差异较大。结论在一定Mr范围内,特性黏度法和GPC/MALLS法均可用于测定LMWHA的Mr。     

葛根素对AGEs诱导CAM新生血管生成影响的实验研究

目的　探讨葛根素对糖基化终产物(AGEs)诱导的鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)新生血管生成的影响。方法　制备AGEs复合物,建立CAM模型,随机分为空白组、AGEs组,不同剂量葛根素组和阳性药对照组,采用单位面积血管百分比法,应用OPTIMAS软件,检测葛根素对AGEs诱导的CAM血管生成的影响。结果　不同剂量的AGEs均可明显促进CAM新生血管的形成(P<0 01),而大、中剂量葛根素对此有明显的抑制作用(P<0 05)。结论　葛根素对AGEs诱导的CAM新生血管的生成具有一定的抑制作用。     

益气养阴方对鸡胚尿囊膜移植瘤组织血管内皮生长因子表达的影响

目的：研究益气养阴方抗肿瘤诱导鸡胚尿囊膜（cAM）血管生成及对CAM移植瘤细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的效应。方法：制备接种肿瘤细胞的CAM模型,采用血清药理学方法制备含药血清。观察含药血清对肿瘤细胞诱导CAM血管生成的影响,并与生理盐水血清组对照。另外应用免疫组织化学及其组织形态学定量分析方法对VEGF在CAM移植瘤中的表达进行研究。结果：益气养阴方含药血清可抑制肿瘤细胞诱导CAM血管生成。益气养阴方组VEGF的表达均明显低于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：益气养阴方对肿瘤诱导的CAM血管生成有明显抑制作用,降低VEGF的表达可能是其抑制肿瘤血管生成的主要机制之一。     

5种他汀类药物对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响

目的:观察5种他汀类药物对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生的影响,探讨他汀类药物是否具有独立于血脂调节作用以外的促进血管新生作用。方法:制备CAM模型,将不同浓度他汀类药物、重组牛碱性成纤维细胞生长因子和生理盐水分别通过载体加到CAM上,观察CAM特异性血管生长情况及血管数目变化。结果:不同浓度辛伐他汀(0.02,0.1,0.5,2.5,12.5μmol.L-1)中,当辛伐他汀浓度为0.1μmol.L-1时,CAM血管生成数量明显高于生理盐水对照组(P<0.05),与阳性对照组比较无统计学意义(P>0.05);而不同他汀类药物,即瑞舒伐他汀组(0.025μmol.L-1)、阿托伐他汀组(0.05μmol.L-1)、普伐他汀组(0.2μmol.L-1)、氟伐他汀组(0.4μmol.L-1),CAM血管生成数均明显高于生理盐水组(P<0.05),与阳性对照组比较无统计学意义(P>0.05)。结论:常用5种他汀类药物均有促进CAM血管新生作用;不同浓度辛伐他汀对CAM的作用不同。提示他汀类药物促进血管新生的作用可能与药物剂量有关。     

透明质酸的热降解研究

采用流通蒸汽法对透明质酸进行热降解研究。结果表明，随着热处理时间的延长，透明质酸分子量（Mr）降低，特性黏度和Mr降低速率变小，而葡糖醛酸含量基本不变。回归分析表明，Mr与热处理时间t符合对数方程Mr=-47．18Int＋154．64。说明热降解是制备特定Mr范围透明质酸的简便方法。     

人重组白细胞介素24和表没食子儿茶素没食子酸酯对肿瘤血管生成的影响

目的 观察人重组白细胞介素24(rhIL-24)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对组织新生血管和肿瘤组织血管生成的影响并作比较.方法 在鸡胚模型上比较观察rhIL-24、EGCG对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响,在人肺腺癌裸鼠移植瘤模型上比较观察两者对肿瘤组织生长、组织中CD34和NF-κB(p50)的表达影响.结果 rhIL-24、EGCG均可抑制CAM上Ⅱ、Ⅲ级血管的生成.rhIL-24组瘤体组织中NF-κB(p50)的表达与PBS组比较有显著性差异,而EGCG组则不明显;rhIL-24组和EGCG组瘤体组织中CD34标记的微血管密度,与PBS组比较均有显著性差异.结论 rhIL-24、EGCG都有抑制CAM血管生成和肿瘤组织血管生成的作用,对肿瘤组织中NF-κB表达可能存在不同影响,推测两者或许存在不同的抗肿瘤血管生成机制.     

当归注射液促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的实验研究

目的:探讨当归注射液对鸡胚绒毛尿囊膜(chorioallantoicmembrane,CAM)血管生成的影响。方法:种蛋随机分为5组,孵育7d后,将高、中、低剂量当归注射液(Angelicasinensisinjection,ASI)及生理盐水(NS)、成纤维细胞生长因子(EGF)对照品分别加于CAM表面的载体上,作用后制备CAM标本,解剖显微镜下计数新生血管数目。结果:当归注射液具有明显的促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的作用,与NS对照组相比有显著性差异(P<0.05),但药效低于EGF对照组(P<0.05)。结论:当归注射液可促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成。     

黄芪注射液促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的实验研究

目的:探讨黄芪注射液对鸡胚绒毛尿囊膜(chorioallantoicmembrane,CAM)血管生成的影响。方法:种蛋随机分为5组,孵育7d后,将高、中、低剂量黄芪注射液穴Astragalusmembranaceusinjec鄄tion,AMI雪及生理盐水(NS)、成纤维细胞生长因子(EGF)对照品分别加于CAM表面的载体上,作用后制备CAM标本,解剖显微镜下计数新生血管数目。结果:黄芪注射液具有明显的促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的作用,与NS阴性对照组相比有显著性差异(P﹤0.05),但药效低于EGF阳性对照组(P﹤0.05)。结论:黄芪注射液可促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成。     

从赤魟组织中分离到的福安肽的抗血管生成作用

目的研究从赤魟组织中分离到的福安肽(FAT)对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成、人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)诱导的CAM血管生成和小鼠肝癌组织血管生成的影响。方法用CAM法检测FAT对CAM血管生成和CNE-2Z细胞诱导的CAM血管生成的影响;用免疫组化法检查FAT对小鼠肝癌组织内微血管密度(MVD)的影响。结果FAT显著抑制CAM血管生成,当其用量为30,60,120μg/(胚.d)×3时,其抑制率分别为30.8%,50.1%,64.0%;CNE-2Z细胞明显诱导CAM血管生成,当CNE-2Z细胞的接种量为1.9×106细胞/胚时,其血管生成诱导率为30.1%;FAT明显抑制CNE-2Z细胞诱导的CAM血管生成,当其用量为30,60,120μg/(胚.d)×4时,其抑制率分别为35.8%,43.1%,51.3%。FAT明显降低小鼠肝癌组织的MVD,FAT平均微血管数为(8.2±1.3)与对照组的(21.3±2.8)相比,差异显著(P<0.05)。结论FAT有显著的抗血管生成作用,这可能是其抑制小鼠肿瘤生长的重要原因。     

透明质酸酶的比色分析

英国药典规定透明质酸酶的分析是利用酶法降解透明质酸样品,而未被降解的透明质酸与血清可生成凝块,然后进行浊度测量。Whiteman(1973)用染料Alcian Blue 8GX加到透明质酸中生成沉淀,该沉淀洗涤后再溶解在40%双-异丁基-磺基琥珀酸酯溶液中(pH5.8)然后于603nm处测其吸收值。本文将上法加以改进,试验在带盖的塑料离心管(1.9ml)中进行。全部溶液都用含有0.05M氯化镁的0.05M醋酸钠缓冲溶液(pH5.0)制备。将含2～20酶     

透明质酸酶催化透明质酸水解的最适反应条件

目的确定透明质酸酶(HAase)催化透明质酸(HA)水解的最适条件。方法HAase不同条件下催化HA水解,反应结束后利用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)法测量反应产物的相对分子质量及其分布系数。结果HAase催化HA水解受温度、pH值、酶浓度、底物浓度、反应时间等因素的影响。结论HAase催化HA水解的最适反应条件是底物浓度为10 g/L,酶浓度为150 000 U/L,pH为5.0,反应温度为50℃。     

1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮新衍生物对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的抑制作用研究

目的　研究 1H 异吲哚 1,3(2H) 二酮新衍生物对血管新生的抑制作用。方法　应用鸡胚绒毛尿囊膜血管生成模型 ,通过计数、比较载体周围 0 5cm内血管的分支点数 ,观察不同化合物对于在体血管新生的抑制作用。结果　通过对 18种 1H 异吲哚 1,3(2H) 二酮新衍生物的研究 ,发现化合物 1,2 ,3,4 ,11和 13对鸡胚绒毛尿囊膜的血管新生有明显的抑制作用。结论　筛选出来的化合物 1,2 ,3,4 ,11和13有望成为新的抑制血管新生的药物。     

过氧化氢氧化降解法制备低分子玻璃酸

目的制备低分子玻璃酸 (HA)。方法过氧化氢氧化降解法。结果随着过氧化氢浓度增加 ,反应温度的升高 ,降解速率加快。中性条件下HA的氧化降解速率较快 ,而酸性或碱性时却较慢。为了方便降解过程的可控性 ,过氧化氢浓度选 0 .0 5 % ,反应温度定为 5 0℃ ,反应pH为中性。随着HA相对分子质量的降低 ,运动黏度迅速下降 ,而糖醛酸含量基本不变。不同过氧化氢浓度降解时 ,低分子HA收率基本相同。结论过氧化氢氧化降解法可用于制备低分子HA。     

A novel model of image acquisition and processing for holistic quantification of angiogenesis disrupted by application of mainstream and sidestream cigarette smoke solutions

Angiogenesis is a vital process in the growth of new blood vessels from pre-existing vasculature. Among several approaches being used for studies related to angiogenesis, chicken chorioallantoic membrane assay (CAM) is an excellent model system. However, its utility has been limited due to difficulty in quantifying putative angiogenic and anti-angiogenic response to an experimental compound in an objective and quantifiable manner. Herein, we report a novel approach of image acquisition and processing for better evaluation of neovascularization. The effects of mainstream cigarette smoke solutions (MSCSS) and sidestream cigarette smoke solutions (SSCSS) from different commercially available cigarettes on angiogenesis were quantified, using CAM assay. Different gross and nanometer scale topographies of CAMs were quantified, which are vital for 3D image scrutiny and can precisely enumerate angiogenesis. Pattern formation of blood vessels, diameter, area and 3D surface roughness of CAMs were substantially disrupted by application of cigarette-smoke extracts. An important point revealed in our study that SSCSS appeared to be significantly more toxic than MSCSS with respect to their effects on angiogenesis. This new imaging technique combined with other modalities, will provide a robust platform to optimize trial design and more patent studies in angiogenesis.     

不同相对分子质量壳聚糖的制备和部分性质研究

目的制备不同相对分子质量 (Mr)壳聚糖并研究其部分性质。方法在中性条件下 ,用过氧化氢氧化法制备不同Mr 的壳聚糖 ,并进行红外表征、热分析和稳定性等研究。结果探索到制备不同Mr 壳聚糖的最适宜条件。结论壳聚糖经过氧化氢降解后 ,结构没有明显变化 ,且随壳聚糖Mr 的降低 ,其稳定性增强     

The chick embryo chorioallantoic membrane as a model system for the study of tumor angiogenesis, invasion and development of anti-angiogenic agents

Angiogenesis, the formation of new blood vessels, is essential for tumor growth, progression and metastasis. The development of agents that target tumor vasculature is ultimately dependent on the availability of appropriate preclinical screening assays. The chorioallantoic membrane (CAM) assay is well established and widely used as a model to examine angiogenesis, and anti-angiogenesis. This review 1) summarizes the currently used angiogenesis assays and the importance of CAM model among them; 2) summarizes the current knowledge about the development and structure of the CAM's capillary bed; 3) reports findings regarding the role played by molecular signaling pathways in angiogenesis process; 4) discusses the use, advantages and limitations of the CAM as a model for studying tumor angiogenesis and invasiveness, as well as development of angiogenic and/or anti-angiogenic agents; 5) discusses the importance of standardization of the major methodologies for all aspects of the use of the CAM in angiogenesis-related studies; 6) and finally, summarizes major findings regarding the agents developed by the use of CAM model in the study of tumor angiogenesis, invasion and development of anti-angiogenic agents.     

不同降解方法对6A型肺炎球菌多糖结构和抗原性影响的研究

目的  研究采用过氧化氢法和高压均质法降解对6A型肺炎球菌多糖（type 6A pneumococcal polysaccharide,PnPS6A）结构和抗原性的影响。方法  分别采用过氧化氢法〔将过氧化氢加入多糖（polysaccharide,PS）溶液中,50 ℃反应3 h〕和高压均质法（用高压均质机在5×107 Pa压力下处理PS溶液）降解PnPS6A,降解物经超滤浓缩和冻干后,获得降解的PnPS6A。分别用核磁共振氢谱（nuclear magnetic resonance hydrogen spectrum,¹H-NMR）和双向免疫扩散法检测PnPS6A降解物的结构和抗原性,用抑制ELISA检测降解和未降解的PnPS6A的抗原一致性。结果  2种降解方法均能降低PnPS6A的相对分子质量。2种降解的PnPS6A对PnPS6A抗血清抑制的半数有效浓度与未处理的PnPS6A为同一个数量级,表明降解的PnPS6A的抗原性没有改变。¹H-NMR分析显示,2种降解的PnPS6A的结构与未处理的PnPS6A一致。结论  2种降解方法都能降低PnPS6A的相对分子质量,而且对PnPS6A的结构和抗原性不会产生影响。