曲古抑菌素A对SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤的保护作用

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)缺氧/缺糖 (oxygen-glucose deprivation,OGD) 损伤的保护作用及其可能机制.方法 采用化学方法建立SH-SY5Y细胞不同时间(1、2、4、6和8 h)持续性OGD损伤模型,MTT法检测细胞活性,以评估持续性OGD损伤对SH-SY5Y细胞的损伤程度.继而观察TSA(10、20、40、80 nmol·L-1)对OGD诱导的神经元损伤的影响,实验指标如下:倒置显微镜观察细胞形态学变化,MTT检测TSA对细胞活性的影响,Propidium iodide(PI)和Hoechst 33258染色检测细胞凋亡与坏死情况,荧光显微镜检测各组细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量和线粒体膜电位(mitochondrion membrane potential,MMP)的变化.结果 OGD损伤2 h,模型组的细胞活性和MMP水平较对照组明显降低,并随OGD时间的延长而变化越明显.而ROS含量较对照组明显升高,Hoechst 和PI双染检测也发现染色质凝聚,核碎裂,凋亡小体产生,并随OGD时间的延长,凋亡和坏死细胞的数量增加.与模型组相比,40 nmol·L-1 TSA能明显提高OGD诱导的神经元的活性,降低细胞内ROS含量,以及提高MMP水平.结论 TSA对OGD诱导SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤具有明显的保护作用,其保护机制可能与降低细胞内ROS水平及维持MMP的高能状态有关.     

不同来源石斛对SH-SY5Y细胞缺血性损伤保护作用的比较

目的研究市售种植铁皮枫斗和组培铁皮石斛对谷氨酸损伤的SH—SY5Y细胞的保护作用。方法利用血清药理学方法制备含药血清,用SH—SY5Y细胞建立谷氨酸损伤模型,观察72h损伤细胞增殖情况,MTT实验测定细胞活性,乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的测定研究两种来源石斛对神经细胞损伤保护作用。结果种植和组培石斛均可提高SH-SY5Y细胞谷氨酸损伤的存活率,降低培养液中LDH含量和细胞内MDA含量,提高SOD活力,其中铁皮石斛胚芽的抗氧化能力优于市售铁皮枫斗。结论石斛具有对SH—SY5Y细胞谷氨酸损伤的保护作用;组培铁皮石斛较市售铁皮枫斗保护作用更加显著,初步证明经过组培繁殖的铁皮石斛作用效果优于市售石斛属药用植物。     

类叶升麻苷对鱼藤酮致SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的探讨类叶升麻苷对鱼藤酮致多巴胺能神经元SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用及其机制。方法采用MTT法检测细胞存活率,以荧光染料Hoechst33342染色分析细胞核的形态学变化,用流式细胞仪定量分析细胞凋亡峰,以2,′7′-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH-DA)为标记探针检测细胞内活性氧的产生。结果①0.5μmol.L-1的鱼藤酮处理SH-SY5Y细胞48 h能引起细胞存活率的显著下降;诱导细胞发生凋亡,凋亡率达47.39%;大部分细胞胞体皱缩,突起缩短消失或断裂;染色质皱缩、浓缩、断裂及形成凋亡小体;细胞内活性氧水平上升。②预先用盐生肉苁蓉提取物类叶升麻苷(10,20或40 mg.L-1)处理细胞6 h,可提高细胞存活率;明显改善鱼藤酮引起的细胞形态学变化;流式细胞仪检测凋亡率分别降低到25.87%,23.97%,10.45%;以DCFH-DA为标记探针检测到20 mg.L-1类叶升麻苷可明显抑制鱼藤酮引起的细胞内活性氧产生。结论类叶升麻苷能抑制鱼藤酮诱导的多巴胺能神经元SH-SY5Y细胞凋亡,其神经细胞保护作用可能与降低细胞内活性氧水平有关。     

黄芩苷通过硫氧还原蛋白介导对SH-SY5Y细胞保护作用

目的 研究黄芩苷对过氧化氢(H₂O₂)损伤后的成人神经细胞瘤细胞母细胞SH-SY5Y细胞的影响,进一步探讨黄芩苷保护SH-SY5Y细胞的作用机制. 方法 不同浓度黄芩苷预先处理正常培养的SH-SY5Y细胞24 h,200 μmol.L^-1 H₂O₂损伤上述SH-SY5Y细胞24 h,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测各实验组细胞的硫氧还原蛋白(Trx)mRNA的表达;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术检测各实验组细胞的Trx 蛋白的表达. 结果 黄芩苷在50～300 μmol.L^-1浓度范围内对SH-SY5Y细胞无细胞毒作用,0,50,100和200 μmol.L^-1黄芩苷组SH-SY5Y细胞存活率分别为(0.410±0.096),(1.304±0.101),(0.899±0.089)和(0.609±0.023),50,100和200 μmol.L^-1均明显高于H₂O₂ 损伤组(0.339±0.073)的存活率,正常组,H2O2损伤组,50 ,100和200 μmol.L^-1黄芩苷组Trx mRNA的表达水平分别为(1.023±0.014),(0.021±0.004),(0.054±0.005),(0.071±0.013)和(0.042±0.004);正常组Trx蛋白表达水平为(26.230±0.857),H₂O₂损伤组为(19.230±0.982),50,100和200 μmol.L^-1黄芩苷组Trx蛋白表达水平分别为(22.440±0.888),(23.020±1.070),(22.330±1.067). 结论 黄芩苷对H₂O₂损伤后的SH-SY5Y细胞有保护作用,其作用机制可能与黄芩苷抑制H2O2诱导的Trx表达下调作用有关,起到抗氧化应激及抗细胞凋亡的作用.     

西红花苷对缺氧复氧损伤的SH-SY5Y细胞线粒体动力学的影响

目的探讨西红花苷对缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)线粒体的保护作用及可能的机制。方法 SH-SY5Y细胞OGD损伤同时给予药物,4 h后复氧2 h,测定线粒体膜电位、胞内钙离子浓度;免疫荧光、免疫印迹法检测细胞线粒体Drp1、Opa1、Mfn1、Mfn2含量变化。结果 SH-SY5Y细胞缺氧后线粒体膜电位明显降低,胞内钙离子浓度升高;西红花苷明显提高OGD损伤引起的SH-SY5Y细胞线粒体膜电位,降低胞内钙离子浓度,抑制Drp1表达量,上调Opa1表达量。结论西红花苷对OGD损伤的SH-SY5Y细胞具有明显的保护作用,恢复其线粒体功能,起保护作用机制可能与抑制线粒体分裂融合异常有关。     

黄芩苷对H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其对Trx表达的影响

目的探讨黄芩苷对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法采用体外培养细胞的方法,建立SH-SY5Y细胞H2O2损伤模型。分设药物组(50,100,200μmol/L)、H2O2损伤组、阴性对照组。采用MTT法检测细胞活力,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞的Trx表达的变化。结果同H2O2损伤组比较,黄芩苷能明显减轻H2O2引起的SH-SY5Y细胞的损伤,同时Trx表达升高。结论黄芩苷对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能是黄芩苷通过上调Trx表达,起到抗氧化作用,继而起到抗凋亡的作用。     

黄芩苷对SH-SY5Y细胞损伤的Bcl-2和Bcl-xL mRNA基因表达的影响

目的 探讨黄芩苷对过氧化氢(H₂O₂)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的Bcl-2和Bcl-xL mRNA表达的影响. 方法 建立人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的体外H₂O₂损伤模型,采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度黄芩苷对SH-SY5Y细胞存活率的影响,采用Real-time PCR法检测各组细胞的Bcl-2和Bcl-xL表达水平的变化. 结果 50,100,200 μmol.L^-1黄芩苷组细胞存活率分别为130.4%,89.9%和60.9%,H₂O₂损伤组细胞存活率为33.9%,50,100 μmol.L^-1黄芩苷组与H₂O₂损伤组比较,差异有统计学意义(P<0.01). 50,100,200 μmol.L^-1黄芩苷组Bcl-2 mRNA表达量分别为(11.48±0.48),(7.37±1.57),(7.39±2.01),H₂O₂损伤组为(5.84±0.58);50,100,200 μmol.L-1黄芩苷组Bcl-xL mRNA表达量分别为(19.96±2.22),(11.36±3.94),(13.07±2.37),H₂O₂损伤组为(7.95±0.58),50 μmol.L^-1组Bcl-2 和Bcl-xL mRNA与H^₂O^₂损伤组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05). 结论 黄芩苷对H₂O₂诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用,可能与黄芩苷上调Bcl-2和Bcl-xL的表达而起到抗凋亡的作用有关.     

三叶苷调控miR-539-5p表达保护缺氧缺糖心肌细胞损伤研究

目的:探讨三叶苷对缺氧缺糖心肌细胞损伤的保护作用及机制.方法:采用不同浓度的三叶苷作用于缺氧缺糖诱导的心肌细胞H9C2,试剂盒检测丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,流式细胞术、蛋白质印记(Western blot)检测细胞凋亡以及B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl相关X蛋白(...     

梓醇对乳胞素诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的探讨梓醇对蛋白酶体抑制剂乳胞素诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法梓醇10μmol·L-1预处理SH-SY5Y细胞1 h后,加入乳胞素10μmol·L-1继续处理24 h。倒置显微镜下观察细胞形态的变化,MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Hoechst33258染色观察细胞核形态的变化,酶联免疫吸附检测细胞内20S蛋白酶体含量。结果与正常对照组相比,梓醇10μmol·L-1对细胞存活率、形态和凋亡及20S蛋白酶体含量无显著差异;乳胞素10μmol·L-1组细胞存活率为(72.0±1.8)%,明显降低(P<0.05),细胞凋亡率为(64.7±2.6)%,明显增高(P<0.05)。Hoechst33258染色发现梓醇细胞核形态改变,出现凋亡小体;细胞内20S蛋白酶体含量降低60%,差异具有统计学意义(P<0.05)。与乳胞素10μmol·L-1组相比,梓醇10μmol·L-1预处理组细胞存活率(87.9±2.2)%明显增高(P<0.05),细胞凋亡率为(51.4±1.5)%,明显降低(P<0.05)。Hoechst33258染色发现,梓醇细胞核形态明显改善;细胞内20S蛋白酶体含量升高了1.9倍,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论梓醇对乳胞素诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有保护作用,其机制可能与梓醇提高SH-SY5Y细胞内20S蛋白酶体含量有关。     

银杏二萜内酯葡胺注射液对缺糖缺氧损伤的SH-SY5Y细胞保护作用

目的探讨银杏二萜内酯葡胺注射液(YXETNZ)对缺糖缺氧(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的保护作用及可能的机制。方法 SHSY5Y细胞OGD损伤4 h后,与药物一起复氧1 h,然后测定细胞存活率(CCK-8法)、caspase-3/7酶活力、细胞质中核小体含量;蛋白质免疫印迹检测细胞中p-Akt、p-PKA、p-Bad蛋白量的变化。结果 OGD明显提高SH-SY5Y细胞caspase-3/7酶活力和细胞质中核小体含量,明显降低细胞的存活率。YXETNZ能明显提高OGD损伤的SH-SY5Y细胞的存活率,抑制caspase-3/7酶活性,减少细胞核核小体的释放量,上调p-Akt、p-PKA和p-Bad激酶蛋白量,提高Akt和PKA活性,保护神经细胞。结论 YXETNZ对OGD损伤的SHSY5Y细胞具有明显的保护作用,其保护机制可能与细胞内PI3K/Akt/Bad/caspase-3/7、c AMP/PKA/Bad/caspase-3/7细胞通路的激活有关。     

Apoptosis induced by acrylamide in SH-SY5Y cells

Acrylamide (1–5 mM) dose-dependently decreased cell viability in human neuroblastoma cells (SH-SY5Y). The caspase-3 activity and cell population in sub-G₁ phase were elevated and peaked on exposure to 3 mM acrylamide, while both were less so at higher dose (4 and 5 mM). Z-VAD-fmk, a pan-caspase inhibitor, lowered the apparent cytotoxicity of acrylamide. U0126, a specific inhibitor of extracellular signal-regulated protein kinase (ERK) kinase, suppressed the elevation of caspase-3 activities as well as that of sub-G₁ population. Thus, although mechanisms other than caspase-dependent apoptosis may be involved, apoptotic process seems to take place in the genesis of toxicity of acrylamide in SH-SY5Y cells through ERK pathway and activation of caspase-3.     

13-甲基十四烷酸对H2O2诱导SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用

目的：探讨13-甲基十四烷酸（13-MTD）对过氧化氢（H2O2）诱导SH-SY5Y神经细胞损伤的影响。方法：采用体外细胞培养的方法,建立SH-SY5Y神经细胞H2O2损伤模型。光镜观察细胞形态,SRB法检测细胞存活率,AO/EB双重染色法检测细胞凋亡,MTT法检测线粒体活性。结果：与正常对照组相比,H2O2损伤模型组细胞出现明显病理改变,细胞存活率、线粒体活性均显著下降（P〈0.01）,细胞凋亡率显著升高（P〈0.01）;13-MTD10、20、40μg/mL可显著提高细胞存活率（P〈0.01）;13-MTD5、10、20μg/mL可显著下调细胞凋亡率（P〈0.01）;13-MTD5、10、20、40μg/mL可显著提高细胞MTT代谢率（P〈0.01）;且存在一定量效差异（P〈0.05,P〈0.01）。结论：不同剂量的13-MTD对H2O2诱导的SH-SY5Y神经细胞氧化损伤具有保护作用。     

Biflavanone-kolaviron protects human dopaminergic SH-SY5Y cells against atrazine induced toxic insult

Atrazine (ATR) is a widespread agrochemical contaminant frequently detected in water systems and kolaviron (KV) is a seed-derived biflavonoid which is reported to modulate the effects of many mutagens and carcinogens. We investigated the protective effects of KV on ATR-induced cell death in the human neuroblastoma cell line (SHY-SY5Y). KV prevents ATR-induced generation of reactive oxygen species (ROS), cell death and inhibited cell proliferation by reduction of cell proliferation. Further, ATR-induced levels malondialdehyde (MDA), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GSH-Px), glutathione reductase (GR) activities, increased leakage of lactate dehydrogenase (LDH), inhibited cellular LDH activity and depleted glutathione (GSH) levels in SHY-SY5Y cells were blocked by KV. Comparable to the control, KV increased GR but not GSH-Px activities. ATR mediated nuclear changes associated with apoptosis; including nuclear fragmentation, condensation, DNA laddering, and increased caspase-3 activity were blocked on addition of KV. ATR-induced changes in the expressions of p53, Bax, Bcl-2, p21, and mRNA levels of caspase-3 and caspase-9 were prevented by KV. Based on these results, we propose a model for the protective effect of KV on ATR-induced cell injury in neuronal cell.     

PDGF-mediated protection of SH-SY5Y cells against Tat toxin involves regulation of extracellular glutamate and intracellular calcium

The human immunodeficiency virus (HIV-1) protein Tat has been implicated in mediating neuronal apoptosis, one of the hallmark features of HIV-associated dementia (HAD). Mitigation of the toxic effects of Tat could thus be a potential mechanism for reducing HIV toxicity in the brain. In this study we demonstrated that Tat-induced neurotoxicity was abolished by NMDA antagonist-MK801, suggesting the role of glutamate in this process. Furthermore, we also found that pretreatment of SH-SY5Y cells with PDGF exerted protection against Tat toxicity by decreasing extracellular glutamate levels. We also demonstrated that extracellular calcium chelator EGTA was able to abolish PDGF-mediated neuroprotection, thereby underscoring the role of calcium signaling in PDGF-mediated neuroprotection. We also showed that Erk signaling pathway was critical for PDGF-mediated protection of cells. Additionally, blocking calcium entry with EGTA resulted in suppression of PDGF-induced Erk activation. These findings thus underscore the role of PDGF-mediated calcium signaling and Erk phosphorylation in the protection of cells against HIV Tat toxicity.     

红花甙对过氧化氢诱导SH-SY5Y细胞凋亡保护作用的实验研究

目的研究红花甙(carthamin)对过氧化氢(H2O2)诱导神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞(SH-SY5Y cells)凋亡的影响,并探讨其机制。方法实验分为空白对照组、H2O2损伤组及红花甙高、中、低剂量组。用H2O2作用于SH-SY5Y细胞,使其发生凋亡。MTT法检测SH-SY5Y细胞活性,比色法测丙二醛(MDA)的含量,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与损伤组比较,随着红花甙剂量的增加,SH-SY5Y细胞存活率提高(P<0.01),MDA生成量减少(P<0.01),凋亡率下降(P<0.05)。结论红花甙对H2O2诱导SH-SY5Y细胞凋亡有保护作用,与红花甙能抗氧化、降低细胞凋亡有关。     

Adiponectin protects human neuroblastoma SH-SY5Y cells against acetaldehyde-induced cytotoxicity

Acetaldehyde, an inhibitor of mitochondrial function, has been widely used as a neurotoxin because it elicits a severe Parkinson's disease-like syndrome with elevation of the intracellular reactive oxygen species (ROS) level and apoptosis. Adiponectin, secreted from adipose tissue, mediates systemic insulin sensitivity with liver and muscle as target organs. In this study, we investigated the protective effects of adiponectin on acetaldehyde-induced apoptosis in human neuroblastoma SH-SY5Y cells and attempted to examine its mechanism. Acetaldehyde-induced apoptosis was moderately reversed by adiponectin treatment. Our results suggest that the protective effects of adiponectin on acetaldehyde-induced apoptosis may be ascribed to ability to induce the expression of anti-oxidant enzymes and to regulate Bcl-2 and Bax expression. These data indicate that adiponectin may provide a useful therapeutic strategy for the prevention of progressive neurodegenerative disease such as Parkinson's disease.     

人参水提物对MPP^＋诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的研究人参水提物（WEG）对四氢吡啶离子（MPP^＋）诱导SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法体外培养SH-SY5Y细胞,建立MPP＋致SH-SY5Y细胞凋亡的模型,同时给予WEG干预。应用MTT比色法检测细胞活力;Hoechst33258染色观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果0.5mmol·L^-1MPP^＋作用于SH-SY5Y细胞60h,MTT值降低到（51.97%±2.46%）（P〈0.01）,Hoechst 33258染色可见明显的颗粒状和固缩状荧光,凋亡率增加到（40.52%±1.68%）（P〈0.01）,而WEG则能明显改善SH-SY5Y细胞的凋亡特性,显著升高其MTT值,降低凋亡率（P〈0.05）。结论人参水提物对MPP＋诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有显著的保护作用。     

氧化应激在鱼藤素致SH-SY5Y细胞神经毒性中的作用

目的研究氧化应激与鱼藤素致神经毒性的相关性,为后续鱼藤素的结构改造和联合用药提供机制基础。方法将鱼藤素(1.56~100μmol·L-1)与SH-SY5Y细胞共孵育培养24~72 h,采用CCK-8法测定细胞存活率;比色法测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出量、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活力;流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;免疫印迹法检测细胞中MEK、EGF、RAS、CREB蛋白的表达情况。结果鱼藤素对SH-SY5Y细胞增殖有抑制作用,且呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。鱼藤素损伤细胞后,LDH漏出量、MDA和ROS含量明显增加,GPx和SOD的活力下降(P<0.05)。同时MAPK/ERK信号通路中MEK、EGF、RAS、CREB蛋白水平出现不同程度的下调。结论鱼藤素致SH-SY5Y神经细胞的损伤与氧化应激密切相关,MAPK/ERK信号通路可能在其中起介导作用。     

梓醇对缺糖缺氧诱导PC12细胞损伤的保护作用研究

目的探讨梓醇对抗缺糖缺氧诱导的PCI2细胞损伤作用。方法梓醇预处理PCI2细胞,加入含连二亚硫酸钠的无糖Earle’s液制备损伤模型,检测细胞存活率,乳酸脱氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、丙二醛水平,检测细胞内游离Ca2＋浓度。结果与模型组比较,梓醇可剂量依赖性的提高细胞存活率（P〈0．01）,减少乳酸脱氢酶漏出率（P〈0．05或〈0．01）,提高超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性,拮抗丙二醛水平升高,降低细胞内游离Ca2＋浓度（P〈0．05或〈0．01）。结论梓醇对缺糖缺氧诱导的PCI2细胞损伤具有保护作用,作用机制可能与其清除自由基和抑制钙超载有关。