槲皮素对HeLa细胞中HPV18 E7、P16 mRNA表达的影响

目的:探讨不同浓度的槲皮素对HeLa细胞HPV18 E7、P16 mRNA表达的影响及意义。方法:采用不同浓度的槲皮素处理体外培养的HeLa细胞,分别培养24,48,72 h,半定量RT-PCR法检测HeLa细胞中HPV18E7、P16 mRNA表达的变化。结果:槲皮素能显著降低HPV18 E7 mRNA、P16 mRNA在HeLa细胞中的表达。①处理相同时间各浓度槲皮素除10μmol/L处理24 h组E7 mRNA的表达无差异性(P>0.05)外,余浓度与溶剂对照组相比均存在显著性差异(P<0.01);相同浓度的各时间段之间也存在差异性(P<0.05)。②处理相同的时间下各浓度槲皮素组与溶剂对照组相比P16 mRNA的表达均存在显著性差异(P<0.01),各浓度组之间也存在显著的差异性(两两比较,P<0.01);相同浓度的各时间段之间也存在差异性(P<0.05)。结论:槲皮素能下调宫颈癌HeLa细胞HPV18 E7、P16 mRNA表达,并呈时间剂量依赖性,可能是促进HeLa细胞凋亡的机制之一。     

HPV16E6对不同p53基因型宫颈癌细胞凋亡及化疗敏感性的影响

目的：探讨HPV16E6对不同p53基因型的宫颈癌细胞化疗药物敏感性的影响。方法：应用AO/EB染色结合荧光显微镜技术及Annexine V-FITC/PI双标法流式细胞仪检测不同浓度DDP干预前后宫颈癌细胞凋亡情况;Western印迹检测DDP干预后对HPV16E6和p53mt蛋白表达的影响;通过差异RT-PCR检测不同浓度DDP干预C33A,C33A-E6,C33A-P和CaSki4组细胞24和48h后HPV16E6基因mRNA表达的变化。结果：AO/EB染色和流式细胞术检测的C33A,C33A-E6,C33A-P,CaSki细胞随着DDP干预剂量的增大,凋亡率亦明显增加（P〈0.05）。Western印迹结果示C33A-E6和CaSki细胞中HPV16E6蛋白的表达随着DDP干预剂量的增大及作用时间的延长而逐渐降低甚至难以检测到表达（P〈0.01）,而未干预的对照组C33A-E6和CaSki细胞中HPV16E6的表达量稍有增加。C33A-E6,C33A和C33A-P3组细胞中均检测到p53mt的表达,但随着DDP干预剂量的增大及作用时间的延长,3组细胞总蛋白中p53mt的表达量均无明显改变（P〉0.05）。差异RT-PCR结果表明,在未予DDP干预的情况下,C33A-E6与CaSki细胞在24h时HPV16E6 mRNA的表达量无差异,而在48h时则C33A-E6细胞的HPV16E6 mRNA表达量显著高于CaSki细胞（P〈0.05）,且两组细胞48h的HPV16E6 mRNA表达均较24h显著增高（P〈0.05）;在24和48h两时间段内,随着DDP干预浓度的增加,两组细胞的HPV16E6 mRNA表达量均逐渐减少（P〈0.01）;但在同样浓度的DDP干预时,C33A-E6与CaSki的HPV16E6mRNA表达量无统计学差异（P〉0.05）。结论：HPV16E6基因对宫颈癌细胞株化疗敏感性的影响与p53的基因型（p53mt/p53wt）无明显关系,其可能通过其他作用机制对C33A细胞的凋亡和化疗敏感性产生作用。     

槲皮素对人宫颈癌HeLa细胞增殖的影响

目的 研究槲皮素对人宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响,同时探讨槲皮素对抗宫颈癌的可能作用机制.方法 四唑盐比色法（MTT法）检测不同浓度及不同时间槲皮素对HeLa细胞增殖的影响;流式细胞仪分析槲皮素对HeLa细胞凋亡的影响;Western blotting法检测癌细胞caspase-3蛋白水平的变化.结果 槲皮素作用于HeLa细胞后,细胞增殖水平明显下降（P〈0.05）,且在一定浓度范围内呈时间、浓度依赖性（r=0.720,P〈0.01;r=0.385,P〈0.05）;不同浓度槲皮素处理HeLa细胞后能诱导其凋亡,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;随着槲皮素浓度的增加,caspase-3蛋白水平明显上调（P〈0.05）.结论 槲皮素可显著抑制人宫颈癌HeLa 细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能是通过激活caspase-3蛋白表达实现的.     

人乳头瘤病毒16型E2蛋白真核载体的构建与表达

目的构建人乳头瘤病毒16型（HPV16）E2蛋白真核载体,为研究其基因疫苗免疫活性奠定实验基础。方法 PCR扩增HPV16 E2基因片段,将其连接到真核表达载体pcDNA3.1（＋）,双酶切及测序鉴定。将质粒pcDNA3.1（＋）与pcDNA3.1（＋）/HPV16 E2分别转染HeLa细胞,RT-PCR鉴定E2基因在HeLa细胞中的表达。结果 HPV16 E2基因片段插入到pcDNA3.1（＋）相同酶切位点,即构建了真核表达载体pcDNA3.1（＋）/HPV16 E2;转染pcDNA3.1（＋）/HPV16 E2的细胞,检测到HPV16 E2 mRNA。结论构建的真核表达载体pcDNA3.1（＋）/HPV16 E2能在HeLa细胞内有效表达。     

Toll样受体4在宫颈细胞系和宫颈上皮病变中的表达及与HPV16感染的关系

目的：检测Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）在宫颈细胞系和宫颈病变组织中的表达,探讨TLR4在宫颈病变进展中的作用及与人乳头状瘤病毒（human papillomavirus 16,HPV16）感染的关系。方法：用RT-PCR检测H8, SiHa,Caski细胞中HPV16 E6基因的mRNA含量;Western免疫印迹测定3种细胞系中TLR4蛋白含量;免疫组织化学检测127例慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变（cervical intra-epithelial neoplasia,CIN）以及宫颈鳞癌病变组织石蜡切片中TLR4蛋白的表达。抽提石蜡组织总DNA,用PCR方法检测组织中HPV16的感染情况。结果：Caski和SiHa细胞中HPV16 E6基因mRNA含量和TLR4蛋白表达明显高于H8正常对照（P〈0.05）,且Caski细胞中HPV16 E6基因mRNA含量和TLR4蛋白表达也显著高于SiHa细胞（P〈0.05）;TLR4在慢性子宫颈炎,CIN和宫颈鳞癌组织的表达分别为32.0%,59.4%和77.8%,随着宫颈上皮病变加重TLR4表达增强（P〈0.01）,并且与宫颈癌分化程度有关（P〈0.01）;HPV16在宫颈病变组织中的表达随着病理分级逐渐增高,在慢性子宫颈炎、CIN和宫颈鳞癌组织中分别为8.0%,48.4%和81.0%（P〈0.01）;在CIN和宫颈癌组织中TLR4与HPV16相关（r=0.303,P〈0.05;r=0.633,P〈0.05）。结论：HPV16感染可以上调TLR4在宫颈上皮病变中的表达,TLR4与HPV16共同作用对宫颈上皮从炎症发展到CIN至宫颈癌过程中发挥重要作用。     

宫颈腺癌细胞中HPV18-E7与上皮间质转化的关系研究

目 的:探究宫颈腺癌细胞中HPV18-E7与上皮间质化(EMT)之间的关系。方法: 针对HPV18-E7的siRNA转染入人宫颈腺癌HeLa细胞,观察细胞形态变化,并运用Realtime PCR技术、免疫印迹实验和细胞免疫荧光染色实验在mRNA水平和蛋白水平检测E7、EMT相关的标记因子的表达及定位变化;应用细胞划痕愈合实验及Transwell细胞体外侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果: 特异性沉默HPV18-E7表达后HeLa-siE7细胞间连接变得疏松,细胞中E7与间质性标记物的mRNA及蛋白表达水平较对照组细胞显著下降,上皮性标记因子较对照组细胞明显增加（P<0.01）;随着HeLa细胞E7表达的下调,E-cadherin在细胞膜上的表达增加,间质性标记因子在细胞质内的表达随之下降。HeLa-siE7细胞迁移及侵袭能力明显低于对照组（P<0.01）;沉默HPV18-E7表达的HeLa细胞其增殖能力也明显减弱。结论:宫颈腺癌细胞中HPV18-E7能够引起EMT发生,促进肿瘤发生侵袭转移。     

HPV16、HPV16 E7蛋白与Rb蛋白在喉癌发生中的作用

目的观察HPV16及其早期区基因E7表达蛋白与Rb蛋白在喉癌发生中的相关性,为探索喉癌的病因学提供依据。方法用免疫组织化学方法检测82例喉鳞癌、39例非癌组织标本中HPV16、HPV16 E7以及Rb的蛋白表达。结果HPV16 E7和Rb蛋白表达的阳性率在非癌及癌组织中有非常显著的差异（P〈0.01）,HPV16的阳性率在非癌及癌组织中有显著性差异（P〈0.05）。喉癌组织中,Rb蛋白在HPV16和HPV16 E7阳性及阴性组中的阳性率显著不同（P〈0.01）,而在非癌组织中则无此现象（P〉0.05）。结论喉癌组织中HPV16 E7的高表达导致的pRb功能失活是引起喉癌的主要原因之一。     

外源性HPV16 E7癌基因表达对宫颈癌HeLa细胞Cyclin E表达的影响

目的研究重组腺病毒介导人乳头状瘤病毒（HPV）16型E7病毒癌基因感染对人宫颈癌HeLa细胞周期蛋白E（Cyclin E）表达的影响,探讨HPV16 E7癌基因以及Cyclin E在宫颈癌发生发展中的作用。方法用含有HPV16 E7病毒癌基因的重组腺病毒载体感染体外培养的人宫颈癌HeLa细胞。免疫荧光染色后激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）检测感染前后Cyclin E表达的差异。结果HPV16 E7感染后Cyclin E表达较感染前明显增加。结论HPV16 E7基因的表达促进Cyclin E的表达,对宫颈肿瘤细胞有增殖促进的作用。     

HPV16E6对不同p53基因型宫颈癌细胞 凋亡及化疗敏感性的影响

目的：探讨HPV16E6对不同p53基因型的宫颈癌细胞化疗药物敏感性的影响。方法：应用AO/EB染色结合荧光显微镜技术及Annexine V-FITC/PI双标法流式细胞仪检测不同浓度DDP干预前后宫颈癌细胞凋亡情况;Western印迹检测DDP干预后对HPV16E6和p53mt蛋白表达的影响;通过差异RT-PCR检测不同浓度DDP干预C33A,C33A-E6,C33A-P和CaSki 4组细胞24和48 h后HPV16E6基因mRNA表达的变化。结果：AO/EB染色和流式细胞术检测的C33A,C33A-E6,C33A-P,CaSki细胞随着DDP干预剂量的增大,凋亡率亦明显增加(P＜0.05)。Western印迹结果示C33A-E6和CaSki细胞中HPV16E6蛋白的表达随着DDP干预剂量的增大及作用时间的延长而逐渐降低甚至难以检测到表达(P＜0.01),而未干预的对照组C33A-E6和CaSki细胞中HPV16E6的表达量稍有增加。C33A-E6,C33A和C33A-P 3组细胞中均检测到p53mt的表达,但随着DDP干预剂量的增大及作用时间的延长,3组细胞总蛋白中p53mt的表达量均无明显改变(P＞0.05)。差异RT-PCR结果表明,在未予DDP干预的情况下,C33A-E6与CaSki细胞在24 h时HPV16E6 mRNA的表达量无差异,而在48 h时则C33A-E6细胞的HPV16E6 mRNA表达量显著高于CaSki细胞(P＜0.05),且两组细胞48 h的HPV16E6 mRNA表达均较24 h显著增高(P＜0.05);在24和48 h两时间段内,随着DDP干预浓度的增加,两组细胞的HPV16E6 mRNA表达量均逐渐减少(P＜0.01);但在同样浓度的DDP干预时,C33A-E6与CaSki的HPV16E6 mRNA表达量无统计学差异(P＞0.05)。结论：HPV16E6基因对宫颈癌细胞株化疗敏感性的影响与p53的基因型(p53mt/p53wt )无明显关系,其可能通过其他作用机制对C33A细胞的凋亡和化疗敏感性产生作用。     

人乳头瘤病毒16型E5蛋白真核载体的构建及表达

目的构建人乳头瘤病毒115型（HPV16）E5蛋白真核表达载体pcDNA3．1（＋）／HPV16E5,分析E5在HeLa细胞及BALB／c小鼠肌肉组织中的表达。方法设计HPV16E5基因引物,PCR扩增E5基因。经Bam-HI、EcoR1酶切后将其连接入pcDNA3．1（＋）,PCR及双酶切筛选阳性克隆并测序。将构建的pcDNA3．1（＋）／HPV16E5转染HeLa细胞,利用RT—PCR测定HPV16E5mRNA表达。将6只BALB／c小鼠分为3组,分别取100mgpcDNA3．1（＋）／HPV16E5、100mgpcDNA3．1（＋）、100mLPBS经肌肉注射小鼠,2周1次,共4次;末次接种后第14天取小鼠股四头肌制成石蜡切片,免疫组织化学法检测E5蛋白在小鼠肌肉组织中的表达。结果PCR扩增得到252bpHPV16E5基因片段,DNA测序结果显示E5基因片段正确地连入pcDNA3．1（＋）。构建的pcDNA3．1（＋）／HPV16E5在HeLa细胞表达大小为252bp的HPV16E5mRNA。小鼠股四头肌细胞膜被染成棕黄色。结论构建的真核表达载体pcDNA3．1（＋）／HPV16E5能在HeLa细胞及小鼠肌肉组织中表达HPV16E5蛋白。     

HPV（16／18）E6、PKR、p-PKR、p-EIF2α在宫颈病变组织表达的意义

目的：探讨HPv（16／18）E6、蛋白激酶R（PKR）、磷酸化型PKR（p—PKR）、磷酸化型真核细胞翻译起始因子2α（p—EIF2α）在各级别宫颈病变组织的表达差异与宫颈病变级别的相关性及对宫颈癌患者预后的影响。方法：采用免疫组化法检测HPv（16／18）E6、PKR、p-PKR、p-EIF2a在63例宫颈癌、114例宫颈上皮内瘤样病变（CINI、CINⅡ、CINⅢ）、15例正常宫颈组织中的表达。结朵：HPV（16／18）E6在各组的阳性表达率为6．7％、15-4％、22．9％、27．5％、39．7％,宫颈癌组明显高于正常组及CINI组（P〈0.01,P〈0.05）;PKR在各组的阳性表达率为6．7％、17．9％、25．7％、30．0％、46．O％,宫颈癌组明显高于正常及CINI-Ⅱ组（P〈0.01,P〈0.01,P〈0.05）;p-PKR在各组的阳性表达率（6．7％、15．4％、20．0％、15．0％、15。9％）无统计学差异（P〉0．05）;p—EIP2α在各组的阳性表达率为6．7％、23．1％、31．4％、40．O％、30．2％,CINⅢ组高于正常宫颈组（P〈0.05）;HPV（16／18）E6、PKR在各组的阳性表达率与宫颈病变级别成正相关（P〈0．05．P〈0.05）;在宫颈癌组,PKR的阳性表达率明显高于p-PKR（P〈0．01）;宫颈癌患者临床分期晚者病情进展快（P〈0．01）,p-PKR、P—EIF2a阴性表达者病情进展快（P〈0.05,P〈0.05）。结论：HPV（16／18）E6使p-PKR、P—EIF2a失活,促进宫颈病变进展,导致宫颈癌患者预后不良;p-PKR、p-EIF2a能抑制病情进展,改善其预后。     

宫颈癌组织中P16和HPV16/18 E7的表达及意义

①目的研究宫颈癌组织中抑癌基因p16 mRNA和蛋白质的表达,以及与HPV16/18 E7表达的关系.②方法采用聚合酶链反应(PCR)技术检测45例宫颈浸润癌组织、12例宫颈原位癌组织和20例正常宫颈组织中HPV16/18的感染情况;采用RT-PCR技术检测上述标本中HPV16/18阳性者E7 mRNA的表达水平及所有标本中p16 mRNA表达水平;采用免疫组化技术进一步检测HPV16/18 E7、P16蛋白的表达情况.③结果宫颈原位癌和浸润癌HPV16/18的感染率、HPV16/18 E7 mRNA和蛋白表达阳性率明显高于正常宫颈组织,差异有显著性(χ2=5.12～15.78,P<0.05、0.01),原位癌和浸润癌组之间比较差异无显著性(χ2=0.119、0.000,P>0.05);原位癌和浸润癌p16 mRNA的相对表达量明显高于正常宫颈,差异有显著性(F=5.412,q=4.125、5.519,P<0.05);HPV16/18 E7阳性组p16 mRNA的表达阳性率明显高于阴性组,差异有显著性(t=4.127,P<0.01);P16蛋白在宫颈原位癌和浸润癌组织中呈现过表达,在正常组织中为阴性表达或弱表达;p16 mRNA的相对表达量与HPV16/18 E7 mRNA的相对表达量呈显著正相关(r=0.813,P<0.05);P16蛋白的过表达与HPV16/18 E7蛋白表达有相关关系(χ2=8.959,P<0.01);HPV16/18 E7 mRNA和蛋白及p16 mRNA和蛋白的表达与肿瘤的组织学分级、淋巴结转移、肿瘤的大小和病人的年龄无关(P均>0.05).④结论抑癌基因p16的过表达发生在宫颈癌的早期和癌前病变阶段,可用于临床筛查和早期诊断宫颈癌.     

cyclin E、p16ink4、ki67在宫颈脱落细胞中的表达及其与HPV16/18感染的相关性分析

目的：研究cyclin E、p16ink4、ki67在宫颈脱落细胞中的表达水平及其与HPV16/18感染的相关性,探讨其对宫颈癌高危人群筛查的意义.方法：采用免疫组织化学方法对78例宫颈脱落细胞标本进行cyclin E、p16ink4、ki67检测,同时应用多重引物PCR技术检测HPV16/18.结果：cyclin E、p16ink4、ki67在宫颈癌细胞中的表达水平较ASCUS差异均有统计学意义（P＜0.005）;各级宫颈癌细胞中HPV16的阳性率较ASCUS差异均有统计学意义（x2=25.27,P＜0.005）,随着宫颈上皮细胞的损伤程度加重而阳性率升高,差异也有统计学意义（P＜0.01）.p16ink4和ki67在宫颈癌细胞中的表达水平与HPV16高度相关（rs=1.0,P＜0.05）;而cyclin E的表达与HPV16相关性较小（rs=0.4,P＜0.05）.HPV18的阳性例数较少,在各项分析中差异均无统计学意义（x2=3.68,P＞0.05）.结论：cyclin E、p16ink4及ki67在宫颈癌细胞中的高度表达与HPV16感染有关,它们均可能作为有价值的诊断指标应用于宫颈癌高危人群筛查,且cyclin E对宫颈癌的早期诊断意义更大.     

RNA干扰HPV16 E6基因表达对宫颈癌SiHa细胞增殖的影响

目的：探讨HPV16 E6小干扰RNA（siRNA）对宫颈癌SiHa细胞增殖的影响。方法：利用化学合成的方法,合成针对HPV16 E6的siRNA,借脂质体转染SiHa细胞。应用荧光定量RT—PCR和Western—blot检测HPV16 E6mRNA及其蛋白水平的表达。MTT法绘制细胞生长曲线。流式细胞术评价HPV16 E6siRNA对细胞周期的影响。结果：HPV16 E6siRNA转染细胞48h及72h后,细胞内HPV16 E6mRNA及蛋白表达量明显下调,与HPV16 E6阴性对照组及空白组比较[48h（1．85±0．15）vs（2．14±0．13）,（2．29±0．11）;72h（1．82±0．06）vs（2．32±0．14）,（2．35±0．23）],差异有显著性意义（P〈0．01）;MTT显示细胞生长明显受到抑制;流式细胞术‘检测显示,E6siRNA可将细胞阻滞在G1期。结论：HPV16 E6siRNA能抑制SiHa细胞增殖。     

食管癌EC109细胞属人类乳头状瘤病毒18型阳性细胞株

目的：探究食管癌细胞系EC109是否为人类乳头状瘤病毒（HPV）感染。方法：以HeLa细胞为阳性对照，以细胞DNA为模板，聚合酶链反应（PCR）扩增HPV基因保守序列GPf／GP6基因片段；PCR扩增I-IPV18 E6和HPV18 E6／E7基因片段：对HPV18 E6／E7PCR扩增产物片段进行测序；采用逆转录（RT）．PCR扩增HPV18E6和研基因片段；利用HPV基因分型芯片对EC109和HeLa细胞进行HPV分型。结果：PCR、RT-PCR和测序结果证明EC109细胞为HPV18阳性细胞；HPV分型芯片结果显示EC109也为HPV18阳性细胞。结论：EC109细胞是属于HPV18亚型感染型细胞。     

利用反义技术抑制人乳头瘤病毒18 E6/E7的表达及其对宫颈癌HeLa细胞增殖凋亡的影响

目的 构建人乳头瘤病毒（HPV）18型E6／E7反义荧光真核表达载体,研究其对宫颈癌HeLa细胞增殖凋亡的影响。方法 以PCR法扩增HPV18型E6／E7区716bp片段并反向克隆到荧光真核表达载体pEGFP-C1,构建重组体pEGFP-HPV18E6E7as（EGFP-18AS）并转染人宫颈癌HeLa细胞。利用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和Western印迹技术检测转染后E6、E7基因在mRNA和蛋白水平的变化;用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测转染后细胞的的增殖活性;用流式细胞仪检测转染后细胞的凋亡率;荧光显微镜下观察凋亡细胞的形态学改变。结果 转染EGFP-18AS重组体后,HeLa细胞中E6、E7基因的mRNA表达和蛋白合成均明显下调;细胞增殖受到抑制;流式显示细胞G1期明显阻滞;同时在荧光显微镜下经Hoechst染色凋亡细胞出现染色质凝集、边集、碎裂等形态学改变。结论 重组质粒pEGFP—HPV18E6E7as能有效地抑制人宫颈癌HeLa细胞的生长和增殖,诱导其凋亡,证明了反义RNA技术的有效性,为宫颈癌的基因治疗提供了一种新的可能的途径。     

西多福韦抑制宫颈癌Siha细胞增殖作用的研究

目的探讨西多福韦（cidofovir,CDV）对人乳头瘤病毒（HPV）感染的宫颈癌Siha细胞增殖生长的抑制作用。方法（1）采用集落形成实验测定西多福韦作用前后Siha细胞的活性;（2）应用实时定量PCR法,观察西多福韦对Siha细胞中HPV16亚型E6、E7 mRNA表达的影响;（3）应用流式细胞仪,检测西多福韦对Siha细胞凋亡的影响。结果（1）集落形成实验结果显示,西多福韦能明显抑制Siha细胞的增殖活性,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;（2）实时定量PCR结果证实,西多福韦能明显降低Siha细胞中HPV16E6、E7 mRNA的表达;（3）西多福韦能诱导Siha细胞凋亡,抑制细胞增殖生长。结论西多福韦对HPV16感染的宫颈癌Siha细胞的增殖具有明显的抑制作用,并能诱导细胞凋亡。     

人乳头瘤病毒16型E5对人宫颈癌SiHa细胞恶性潜能的影响及其机制探讨

通过构建和筛选持续表达HPV16E5的细胞SiHa／16E5,探讨HPV16E5对宫颈癌SiHa细胞的作用及机制。利用pEG—FP—C1构建HPV16型E5的正义全长真核表达载体并稳定转染SiHa细胞;利用RT-PCR和Western印迹技术检测转染前后E5和P21基因的mRNA和GFP＋E5和P21蛋白的变化;利用MTT法检测SiHa细胞稳定转染后的增殖活性;利用软琼脂克隆形成和裸鼠成瘤实验分别在体内外验证了SiHa／16E5细胞的致瘤情况。结果显示：稳定转染携带HPV16全长E5基因的质粒后,SiHa细胞中E5基因的mRNA和相应蛋白表达明显升高,而P21的表达则明显下调;MTT结果显示,稳定转染后细胞的增殖活性与转染空载体细胞和未转染细胞比较明显增高（P〈0．05）;软琼脂克隆形成结果显示：SiHa／16ES细胞组的可隆形成数为（33．4&#177;1．6）,与空质粒对照组细胞（15．1&#177;3．1）及未转染组细胞（16．3&#177;2．5）比较差异有统计学意义（P〈0．05）;裸鼠成瘤实验结果显示,4个实验组在共20d的观察中,siHa／16E5组裸鼠成瘤明显快于其它3个对照组（P〈0．05）。结果提示：HPV16E5可降低宫颈癌SiHa细胞中P21的表达,加强宫颈癌SiHa细胞增殖和成瘤效应。     

特异性siRNA抑制HPV16 E7基因表达的实验研究

目的筛选针对HPV16 E7基因有效的siRNA,探讨其对HaCaT E7 细胞中HPV16 E7 mRNA及细胞表面HLA Ⅰ类分子表达的影响。方法采用化学法合成3条HPV16 E7特异性siRNA,应用转染试剂Lipofectamine2000将其转染入HaCaT E7细胞,采用实时荧光定量PCR（RT PCR）检测HPV16 E7 mRNA的表达,采用流式细胞术（FCM）检测细胞表面HLA Ⅰ类分子的表达。结果3条siRNA均能有效抑制HaCaT E7细胞中HPV16 E7的转录表达,以siRNA2作用效果最明显,抑制率达75%,细胞膜表面HLA Ⅰ类分子的表达明显上调,平均荧光强度(MFI)为130.18±1.07,高于空转染对照组（100.32±3.01）和非特异性siRNA对照组（100.82±2.87）。 结论化学合成的HPV16 E7特异性siRNA能有效抑制HaCaT E7细胞中E7 mRNA的表达,同时使细胞表面HLA Ⅰ类分子表达上调。     

苯并[a]芘对宫颈癌HeLa细胞细胞色素P450 1A1的诱导作用

目的探讨苯并[a]芘（BaP）对宫颈癌HeLa细胞增殖及细胞色素P450 1A1（CYP1A1）表达的影响。方法不同浓度（0、1.0、2.5、5.0、7.5和10.0μmol/L）的BaP处理宫颈癌HeLa细胞,MTT法检测BaP对HeLa细胞增殖的影响,W estern b lotting和RT-PCR分别检测CYP1A1的蛋白表达和mRNA表达,荧光素标记检测CYP1A1活性。结果 MTT法检测显示,各浓度BaP组光密度（D553 nm）均较对照组（0μmol/L BaP）升高,其中7.5μmol/L BaP组最高（P〈0.05）。W estern b lotting和RT-PCR检测结果显示,各浓度BaP组CYP1A1 mRNA及蛋白的表达水平均高于对照组,其中7.5μmol/L BaP组最高（P〈0.05）。CYP1A1活性检测结果显示,各浓度BaP组HeLa细胞CYP1A1酶活力均高于对照组,以5.0μmol/L BaP组活力最高（P〈0.05）。结论 BaP可诱导HeLa细胞增殖,诱导HeLa细胞表达CYP1A1,并增加酶活性。 更多还原