基于TLR4/NF-κB信号通路探讨醒脑静改善反复缺血-再灌注脑损伤小鼠学习记忆能力的作用研究

目的:探讨醒脑静通过TLR4/NF-κB信号通路改善反复缺血-再灌注(I/R)脑损伤小鼠学习记忆能力的作用。方法:将50只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组,醒脑静低、中、高剂量组,制备大鼠脑反复I/R损伤模型。造模成功2 h后,醒脑静低、中、高剂量组分别给予醒脑静注射液1、5、10 mL/kg进行腹腔注射,1次/d,连续给药7 d。假手术组和模型组腹腔给予等容量生理盐水。用Morris水迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力,对脑组织进行TTC染色,检测脑组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、TLR4、NF-κB和IκBα表达。结果:与假手术组相比,模型组小鼠逃避潜伏期的时间和脑梗死体积均显著升高,脑组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、TLR4、NF-κB和IκBα表达均显著升高,穿越平台次数显著降低(P0.05);与模型组相比,各醒脑静治疗组小鼠逃避潜伏期的时间和脑梗死体积均显著降低,脑组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、TLR4、NF-κB和IκBα表达均显著降低,穿越平台次数显著增加(P0.05),且随药物剂量增大而变化(P0.05)。结论:醒脑静能减小脑梗死体积,改善反复脑I/R损伤小鼠学习记忆能力,其机制可能与抑制脑组织中TLR4/NF-κB信号通路,减轻炎症刺激有关。     

天麻醒脑胶囊对学习记忆功能的影响及机理研究

目的评价天麻醒脑胶囊对动物学习记忆功能的影响及其初步作用机理.方法采用东莨菪碱、乙醇及亚硝酸钠复制小鼠和大鼠记忆障碍模型,运用避暗法研究天麻醒脑胶囊对动物学习记忆功能的影响,同时探讨其对脑组织乙酰胆碱酯酶(AChE)活性、丙二醛(MDA)及脂褐质水平的影响.结果高、中剂量(大鼠:高剂量1.2 g/kg,中剂量0.6 g/kg;小鼠:高剂量2.4 g/kg,中剂量1.2 g/kg)的天麻醒脑胶囊能明显减少给药组大鼠及小鼠5 m in内的错误次数,延长触电潜伏期.高、中、低3个剂量的天麻醒脑胶囊均可减少大鼠脑组织MDA水平,降低AChE活性,同时明显抑制脑组织脂褐质含量的升高.结论天麻醒脑胶囊通过多种途径改善记忆损伤模型动物的学习记忆功能,其机制可能与降低脑组织AChE活性,降低脑组织中脂质过氧化物、脂褐质等的含量有关.提示天麻醒脑胶囊具有良好的促智作用.     

醒脑静注射液预处理对七氟烷麻醉小鼠认知功能的影响及其潜在机制研究

目的 探讨醒脑静注射液预处理对七氟烷(sevoflurane)麻醉小鼠认知功能的影响及其潜在机制.方法 用3%七氟烷持续麻醉6 h,模拟七氟烷麻醉的小鼠模型将动物随机分为对照组、模型组、醒脑静组,并于麻醉前2 h分别干预.监测麻醉过程中的血氧饱和度(SPO2)和心率;应用Morris水迷宫实验观察小鼠逃避潜伏期的变化;应用RT-PCR法和免疫印迹法检测大脑海马组织中脑源性神经营养因子(brain derived neurotropic factor,BDNF)的表达水平.结果 监测显示:各组麻醉过程中的SPO2及心率均无统计学差异;Morris水迷宫显示:麻醉后模型组逃避潜伏期显著高于对照组(P<0.01),醒脑静组较模型组显著降低(P<0.05);RT-PCR结果显示:模型组BDNF的mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.01),醒脑静组的表达水平较模型组显著升高(P<0.01);免疫印迹法结果与PT-PCR法一致.结论 醒脑静预处理可改善七氟烷麻醉小鼠导致的认知功能障碍,且通过调节BDNF的表达发挥作用.     

睡眠剥夺后神经元型一氧化氮合酶表达的变化及醒脑静对其影响

目的 观察睡眠剥夺(SD)后神经元型一氧化氮合酶(nNOS)在脑内表达的变化及醒脑静对其表达的影响. 方法 采用改良多平台SD法建立快速眼动(REM) SD模型(SD组,n=40),进一步分药物干预组(n=20)及非药物干预组(n=20).SD 1、3、5、7 d时利用免疫组化法观察脑组织中nNOS的表达.以未予睡眠剥夺大鼠分别作为空白对照组(n=10)和环境对照组(n=10). 结果 睡眠剥夺时间越长,脑组织中nNOS 阳性细胞表达数目越多;醒脑静可以相对减少nNOS 阳性细胞数目.SD组的阳性反应细胞的面积密度显著高于空白对照组和环境对照组(P<0.01);药物干预组的阳性反应细胞的面积密度较非药物干预组低(P<0.01). 结论 REM SD能够导致脑组织中nNOS表达增加,进而其分解产生的一氧化氮增多,对脑神经产生毒性作用.醒脑静可以减少nNOS的表达而表现出一定的神经保护作用.     

睡眠剥夺后神经元型一氧化氮合酶表达的变化及醒脑静对其影响

目的观察睡眠剥夺(SD)后神经元型一氧化氮合酶(nNOS)在脑内表达的变化及醒脑静对其表达的影响。方法采用改良多平台SD法建立快速眼动(REM)SD模型(SD组,n=40),进一步分药物干预组(n=20)及非药物干预组(n=20)。SD 1、3、5、7d时利用免疫组化法观察脑组织中nNOS的表达。以未予睡眠剥夺大鼠分别作为空白对照组(n=10)和环境对照组(n=10)。结果睡眠剥夺时间越长,脑组织中nNOS阳性细胞表达数目越多;醒脑静可以相对减少nNOS阳性细胞数目。SD组的阳性反应细胞的面积密度显著高于空白对照组和环境对照组(P<0.01);药物干预组的阳性反应细胞的面积密度较非药物干预组低(P<0.01)。结论REM SD能够导致脑组织中nNOS表达增加,进而其分解产生的一氧化氮增多,对脑神经产生毒性作用。醒脑静可以减少nNOS的表达而表现出一定的神经保护作用。     

滋阴清热方对狼疮鼠早期脑组织IL-1β和C5a的影响

目的:观察滋阴清热方对狼疮鼠脑组织细胞因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和补体裂解产物C5a表达的影响。方法:SPF级B6.MRL-Faslpr/Jnju 6周龄雌性小鼠20只随机平均分为模型组和中药组;SPF级C57BL/6JN 6周龄雌性小鼠10只为正常组。中药组按滋阴清热方20 g·(kg·d)~(-1)剂量灌胃(人等效剂量的2倍);模型组给予等容积蒸馏水灌胃;正常组给予等容积蒸馏水灌胃。干预疗程6周。6周后取脑组织,应用免疫组织化学、荧光定量PCR检测IL-1β、C5a在脑膜的表达。结果:滋阴清热方干预后,中药组IL-1β和C5a免疫组织化学染色较模型组变浅,阳性位点减少。荧光定量PCR结果显示:①IL-1β在脑膜的表达量:模型组表达量高于中药组,但差异无统计学意义(P=0.535);模型组和中药组均高于正常组,差异均有统计学意义(P=0.00,P=0.01)。②C5a在脑膜的表达量:模型组高于中药组和正常组,差异均有统计学意义(P=0.00,P=0.00);中药组高于正常组,差异有统计学意义(P=0.001)。结论:滋阴清热方可降低IL-1β和C5a在狼疮鼠脑膜的表达,可改善狼疮鼠脑组织免疫性血管炎,保护血脑屏障的完整性,进而缓解狼疮脑病的进程。     

醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠脑组织海马细胞Bcl-2和Bax蛋白的影响

目的 探讨中药醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠脑组织海马细胞Bcl-2和Bax蛋白的影响.方法 将120只昆明种小鼠随机分为假手术组、模型组、醒脑液高剂量组、醒脑液低剂量组、银杏叶液对照组、尼莫地平液对照组,每组20只,采用双侧颈总动脉结扎反复脑缺血再灌注的方法制备血管性痴呆小鼠模型.术后15 d进行行为学实验和脑组织的病理形态学观察,并用流式细胞术检测各组海马细胞Bcl-2和Bax蛋白的含量.结果 （1）行为学实验显示,模型组小鼠学习成绩与记忆成绩下降,各治疗组小鼠的学习成绩与记忆成绩均有提高（P＜0.05）.（2）光镜下病理形态学显示,术后模型组小鼠脑组织海马区呈缺血性病理改变,各治疗组小鼠病变轻于模型组.（3）流式细胞术检测显示：模型组小鼠脑组织海马细胞Bcl-2和Bax蛋白含量高于假手术组（P＜0.01）,但二者的比值低于假手术组（P＜0.01）;各用药组与模型组比较,Bax蛋白降低（P＜0.01）,Bcl-2蛋白与Bcl-2/Bax的比值升高（P＜0.05）.结论 醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠有明显治疗作用,其作用机制之一是调节海马细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达.     

狼疮肾炎小鼠肾组织高迁移率族蛋白B1、Toll样受体、水通道蛋白的表达以及三七注射液的干预机制

目的探讨狼疮肾炎小鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、Toll样受体(TLR)、水通道蛋白(AQP)的表达情况,并分析三七注射液干预狼疮肾炎小鼠的可能机制。方法将15只狼疮肾炎小鼠随机分为模型组、三七组、HMGB1抗体组,各5只,分别给予腹腔注射生理盐水、三七注射液、HMG1/HMGB1单克隆抗体;另设置5只正常小鼠为正常对照组,给予腹腔注射生理盐水。给药6周后处死小鼠,检测小鼠肾组织HMGB1、TLR4、TLR7、TLR9、AQP1、AQP2、AQP3蛋白及mRNA的表达。结果与正常对照组比较,模型组HMGB1、TLR4、TLR7、TLR9、AQP1、AQP2、AQP3蛋白及mRNA表达水平均升高(均P<0.05)。与模型组比较,三七组与HMGB1抗体组的HMGB1、TLR4、TLR7、TLR9、AQP1、AQP2、AQP3蛋白和mRNA表达水平均降低(均P<0.05)。结论 HMGB1/TLR信号调控AQP表达可能是狼疮肾炎的发生机制之一;三七注射液可能通过干预HMGB1/TLR信号调控AQP表达发挥治疗狼疮肾炎的作用。     

醒脑静对麻醉后老年认知功能障碍大鼠学习记忆及海马区nNOS、血清β-淀粉样蛋白的影响

目的:探讨中成药醒脑静注射液对老年麻醉后认知功能障碍大鼠学习记忆功能及海马区一氧化氮合酶(n NOS)、血清β-淀粉样蛋白的影响,研究其改善老年认知障碍大鼠学习记忆功能的可能机制。方法:将40只老年大鼠随机分为空白对照组10只,余30只制备老年认知障碍大鼠模型后随机分为模型对照组10只、醒脑静低剂量组10只、醒脑静高剂量组10只,共4组。采用Morris水迷宫观察并评价其对空间学习记忆的改善。免疫组化法观察海马组织一氧化氮合酶(n NOS)表达,采用酶联免疫吸附(ELISA)法对各组大鼠血清中β-淀粉样蛋白含量进行检测。结果:与空白对照组比较,模型对照组、醒脑静低剂量组、醒脑静高剂量组逃避潜伏期显著延长、穿越平台次数显著减少(P0.01),给药6 d后实验组与模型对照组比较,醒脑静低剂量组、醒脑静高剂量组避潜伏期显著缩短,穿越平台次数显著增加(P0.05,P0.01)。与空白对照组比较,模型对照组、醒脑静低剂量组、醒脑静高剂量组海马组织一氧化氮合酶(n NOS)表达显著减少、血清β-淀粉样蛋白含量增多(P0.01)。经治疗后,与模型组比较,醒脑静低剂量组、醒脑静高剂量组海马组织一氧化氮合酶(n NOS)表达显著增多,血清β-淀粉样蛋白含量显著减少(P0.05,P0.01)。结论:醒脑静注射液可增加海马区n NOS表达、降低血清β-淀粉样蛋白含量,从而保护海马组织形态的完整性,改善老年认知功能障碍大鼠的空间学习记忆能力。     

脑心通胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠脑水肿作用及机制研究

目的观察脑心通胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤所致脑水肿、脑组织内组织髓过氧化物酶(MPO)活性以及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)和E-选择素(E-selectin)表达的影响。方法线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型,观测脑心通胶囊对脑含水量、MPO活性以及ICAM-1、VCAM-1、E-selectin表达的影响。结果脑心通胶囊0.24、0.48 g/kg能减轻模型大鼠脑水肿,降低脑组织MPO活性,减少模型大鼠脑组织ICAM-1、VCAM-1、E-selectin的表达。结论脑心通胶囊对大鼠脑缺血再灌注损伤引起的脑水肿有保护作用,其作用机制与降低脑组织MPO活性、减少模型大鼠脑组织ICAM-1、VCAM-1、E-selectin的表达有关。