miRNA与肝细胞癌的研究进展

近年来的研究提示,miRNA在肝细胞癌(HCC)发生、发展中起重要作用。miRNA通过参与各种肝炎病毒感染,影响各种癌基因与原癌基因的表达,影响细胞间的相互作用,作用于各种细胞周期蛋白及相关激酶,调节各种凋亡因子和转录因子,生长因子及生长因子受体的表达,在HCC的发生中起重要的作用。一些特异性表达的miRNA可以作为诊断HCC的标准,同时也是预后和治疗的靶点。     

外泌体miRNA在肝细胞癌中的研究进展

外泌体是一种由不同细胞分泌的囊泡小体,它通过多种机制促进肝癌的发生发展,目前对于外泌体miRNA在肝癌中作用的研究引起了广泛关注;并根据外泌体miRNA的特性,从而更好地了解肝癌的发生机制,这对肝癌的诊断、治疗有重要意义。对外泌体miRNA在肝细胞癌发展过程中的相关研究进展作一综述。     

miRNA与肝癌的关系

对微小RNA （miRNA）的形成、生物学特征、作用机制及其与肿瘤发生和肝癌的关系进行了综述。有关miRNA的研究作为目前国际研究热点之一,多门学科已涉足此领域。现代医学及分子生物学研究表明miRNA可参与调节肿瘤细胞的增殖、分化、休眠、凋亡等多项生物学过程,在肿瘤的发生发展过程中发挥了重要生理作用。 miRNA的突变、缺失以及表达水平的异常均与肿瘤的发生发展有密切的关系。以确定的且与肝癌密切相关的miRNA作为靶点,进行中医药治疗以及中药有效成分的筛选和新药研发,这对于提高肝癌的临床综合疗效具有一定意义。     

miRNA在肿瘤微环境中调控胃癌转移机制的研究进展

<正>胃癌是癌症相关死亡的主要疾病之一,发生转移往往提示预后差。肿瘤微环境(tumor microenvironment, TME)是肿瘤细胞生存的复杂环境,TME的存在是肿瘤进展和转移的重要生物学特征和重要决定因素;miRNA是一种强大的基因调节器,可以通过与一系列靶基因相互作用来调控细胞过程,参与TME中肿瘤转移的相关过程,如细胞上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transitions, EMT)、     

基于转录组测序分析并验证与肝癌预后相关的miRNA

目的：利用转录组RNA测序分析筛选与肝癌（HCC）预后相关的miRNA。方法：对正常肝细胞HL7702和HCC细胞Huh7、HepG2和Hep3B进行转录本RNA测序,筛选出HCC细胞与正常肝细胞之间的差异表达miRNAs,对差异表达miRNAs进行生物信息学分析,RT-qPCR验证miR-429表达水平,文献分析miR-429与HCC关系。结果：筛选出在Huh7、HepG2和Hep3B中差异表达的miRNAs共100个,其中上调39个,下调61个;KEGG通路分析表明,差异表达miRNAs主要富集于在多糖降解、癌症中的蛋白聚糖、ErbB等信号通路,其中miR-429在4条信号通路中被富集到。转录组RNA测序和RT-qPCR实验显示miR-429在HCC细胞中高表达,利用Kaplan-Meier plotter数据库对其进行生存分析发现,miR-429高表达的HCC患者总体生存期短（HR=1.63,95%CI:1.14～2.31,P<0.05）,文献分析发现miR-429在HCC组织和细胞中高表达,且miR-429高表达是HCC患者生存时间的危险因素。结论：miRNA在HCC细胞...     

基于TCGA数据库的肾透明细胞癌miRNA预后模型的构建及蛋白互作网络分析

目的：通过微小RNA(microRNA,miRNA)预后模型筛选肾癌高危人群并进行早期干预治疗,以提高患者的生存率。方法：基于癌症基因图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库,通过风险生存曲线、受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线及生存状态图对模型进行评价并对风险评分进行独立预后分析,筛选肾透明细胞癌预后相关的miRNA,建立预后风险模型。结果：(1)从TCGA数据库初步筛选3 613个差异性表达的m RNA和49个差异表达的miRNA。(2)通过单、多因素Cox回归分析筛选出3个与预后相关的miRNA构建风险预后模型,并且Train组、Test组和所有样品的高低风险组存在明显生存差异;3组样本1、3、5年生存分析的ROC曲线下面积均接近或大于0.70,风险评分可以作为独立预后因子。(3)在GO富集分析中,主要富集在肾单位的发育、突触后密度及离子跨膜转运蛋白活性等;而在KEGG富集分析中,主要参与其他类型的O-聚糖生物合成、N-聚糖生物合成等通路。结论：基于TCGA数据库构建的3个miRNA风险预...     

肝细胞癌组织中调控CDK2基因的靶miRNA的表达

目的通过筛选肝细胞癌及癌旁组织中microRNA差异表达谱探讨肝细胞癌组织中调控CDK2基因的靶miRNA。方法通过芯片分析临床收集的3例肝细胞癌与癌旁组织样本的miRNA差异表达谱,与miRNA生物信息数据库反向预测的miRNA进行比对,通过实时荧光定量PCR初步确定调控肝癌细胞CDK2基因表达的靶miRNA。利用FUNRICH软件对差异表达的miRNA进行GO富集分析和转录因子分析。结果通过比对芯片结果和反向预测结果筛选出9个miRNA与芯片结果一致,经qRT-PCR验证确定miR-18a-5p、miR-222-3p、miR-200a-3p、miR-375与临床样本的miRNA差异表达谱上/下调一致,其中miR-18a-5p、miR-222-3p表达上调,miR-200a-3p、miR-375表达下调。GO富集分析显示转录因子活性、细胞黏附分子活性、细胞核与胞质、转移酶活性富集程度高;筛选到5个与miRNA结合能力强的转录因子EGR1、SP1、POU2F1、SP4、FOXA1。结论初步确定miR-200a-3p、miR-375为肝细胞癌组织中调控CDK2基因的靶miRNA,与CDK...     

基于数据分析探索APL中内含子microRNA与PML-RARα组成的调控环路

目的:探索急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)中microRNA、PML-RARα与下游靶基因组成的调控模式。方法:应用基于染色质的免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation on chip,ChIP-on-chip)技术并结合数据分析方法对miRNA和PML-RARα与下游靶基因形成的调控环路进行研究。结果:在PML-RARα所调节的基因中,相当一部分同时也在转录后被PML-RARα潜在调节的miRNAs所调节,从而组成特定的调控环路。对于不同的内含子miRNAs,类型I的调控环路模式在白血病细胞分化过程中更为普遍存在。结论:APL中microRNA与PML-RARα通过特定的调控环路调控下游靶基因的表达。     

基于miRNA调控网络探究miR-653在肺癌干细胞干性维持中的作用

目的:基于miRNA调控网络探究miR-653在肺癌干细胞干性维持中的作用及其相关机制。方法:miRNA-seq检测肺癌患者肿瘤组织和癌旁组织,根据差异miRNA绘制调控网络,并对靶基因进行KEGG分析。通过脂质体转染法将miR-NC、miR-653、oe-NC、oe-MYC转染至H460肺癌细胞系,分组为：miR-NC组、miR-653组、miR-653+oe-NC组、miR-653+oe-MYC组。qRT-PCR检测各组miR-653、MYC表达;流式细胞术检测CD133、CD24蛋白表达;CCK8检测细胞增殖水平;有限稀释法检测细胞成球比例;通过荧光素酶报告基因检测试剂盒检测miR-653和MYC靶向性。结果:与癌旁组织比较,肿瘤组织中有326个miRNA表达升高,363个miRNA表达降低,其中miR-653表达显著降低(P<0.05)。调控网络预测miR-653靶向22个mRNA,参与细胞干性维持等信号通路。在野生型MYC中,miR-653组荧光强度低于miR-NC组(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-653组miR-653表达升高,MYC表达降低;C...     

肝细胞癌患者外周血单个核细胞诊断候选基因的筛选及其调控网络分析

目的: 通过筛选肝细胞癌（HCC）患者外周血单个核细胞（PBMC）诊断候选基因并分析其上游互作微小RNA（miRNA）、长链非编码RNA（lncRNA）、环状（circRNA）和参与的通路,探讨HCC发生、发展过程中的调控机制并寻找可用于临床诊疗的分子靶点。方法: 利用GEO数据库筛选HCC患者PBMC中的差异表达基因集,分别进行功能富集及互作分析,继而利用网络模块划分方法寻找差异表达基因中的诊断候选基因,再利用mirDIP、starBase在线工具对诊断候选基因的上游miRNA、lncRNA、circRNA进行预测。结果: 获得高可信度的差异表达基因265个,差异表达基因主要富集于增殖调控、代谢调节、细胞通信、炎症疾病等功能,基因本体及KEGG通路富集结果相互关联。筛选获得4个诊断候选基因,包括RNA结合蛋白FUS、C-X-C基序趋化因子配体8、卡林蛋白和RNA聚合酶Ⅱ亚单位H。预测到10个miRNA、1个lncRNA和38个circRNA符合筛选标准,最后构建出一个lncRNA/circRNA-miRNA-mRNA-通路调控网络。结论: 本研究基于数据挖掘方法筛选获得HCC患者PBMC中的诊断候选基因及其调控网络,为HCC的早期诊断和合理治疗提供了理论依据,有助于寻找新的肿瘤标志物。     

调节性T 细胞与肝癌的研究进展

调节性T细胞(regulatory T lymphocytes,Treg)是一类具有独特免疫调节功能的T细胞亚群,可通过多种方式 抑制肿瘤免疫,在肿瘤的发生、发展过程中发挥着极为重要的作用,越来越多的证据表明Treg通过多种机制参与了肝 癌特别是肝细胞肝癌的形成和发展,对Treg参与肝癌进展机制的研究从免疫学角度为肝癌治疗提供了新的思路。     

MGMT在原发性肝癌中的表达及其临床意义

目的研究M G M T在原发性肝癌组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法应用SABC免疫组化法,检测M G M T在37例原发性肝癌组织中的表达。结果M G M T在原发性肝癌组织中的阳性率及其评分为18/37(48.7%)、(2.24±1.77),明显低于癌旁组织31/37(83.8%)、(3.38±1.32)及正常肝组织15/17(88.2%)、(3.94±1.66)(P<0.01);M G M T的表达与原发性肝癌组织分化程度有关,与其它临床病理特征无关。结论M G M T在原发性肝癌组织的发生发展中起重要抑制作用。M G M T的表达可能与原发性肝癌的预后有关,但需进一步研究。     

基于miRNA-mRNA调控网络对草酸钙肾结石形成关键分子的筛选和分析

目的 应用生物信息学技术构建草酸钙肾结石大鼠miRNA-mRNA调控网络并筛选出调控草酸钙肾结石形成的关键分子。方法 从GEO数据库中筛选出乙二醇喂养14天诱导的草酸钙肾结石大鼠肾组织的miRNA和mRNA数据集,应用GEO2R在线工具分析得到显著差异表达的miRNA(DEMs)和mRNA(DEGs),并应用热力图进行展示。利用miRWalker预测DEMs的靶基因,根据miRNA负向调控mRNA原理应用R语言“venn.diagram”包与DEGs分别取交集,得到参与调控草酸钙肾结石形成的基因,然后应用 “clusterprofile”包对调控基因进行GO和KEGG富集分析、应用string数据库进行蛋白质互作分析(PPI),利用Cytoscape软件实现对PPI和miRNA-mRNA调控网络可视化和关键基因的筛查。结果 共分析得到38个DEMs和349个DEGs。将预测得到的DEMs靶基因与DEGs取交集后得到116个调控基因,这些基因富集到24个GO条目和22个KEGG信号通路。成功构建miRNA-mRNA调控网络,处于核心调控位置的miRNA为miR-6215、miR-758-5p和miR-214-3p。PPI网络分析筛选出5个关键基因,分别为：Foxm1、Ndc80、Cdkn2b、Cdt1和Ikbkg。结论 通过构建miRNA-mRNA调控网络,我们筛选出在草酸钙肾结石形成过程中起关键调控作用的miRNA和基因,为草酸钙结石的防治提供了新的研究思路和理论支撑。     

肝细胞肝癌（HCC）的CT及MR影像学分析

目的：探讨研究CT及MR影像学在肝细胞肝癌诊断中的应用价值,为以后的临床研究提供可靠性参考。方法通过研究对比分析来我院就诊的30位非酒精性脂肪肝背景下的肝细胞癌的扫描图,对比二者的相关性以及准确性。结果CT与MR扫描图对肿瘤的诊断性均良好,二者具有良好的相关性,对肿瘤的敏感性、特异性、准确性无显著差异（P ﹥0.05）,且两种影像学方法有很好的互补性。结论CT与MR结合扫描诊断的方法在肿瘤的诊断中有很好的临床价值,通过CT与MR的互补诊断,可以为今后的临床研究提供可靠性参考。     

肝细胞癌中BLU基因甲基化状态

目的了解肝细胞癌（HCC）中BLU基因的甲基化状态及临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）技术，检测50例HCC癌组织及相应的癌旁组织，4个HCC细胞系，8例肝血管瘤旁和4例供肝组织，了解BLU基因在上述组织中的甲基化状态，并分析其与临床资料间的相关性。结果4例供肝组织均未发生甲基化，8例肝血管瘤旁组织有1例发生甲基化，4个HCC细胞系有3个出现甲基化。50例HCC癌组织及其相应的癌旁组织中，分别检测到33例（66％）、18例（36％）发生甲基化；癌组织与癌旁组织甲基化率比较，差异有显著性（P=0．003）；肝功能Child B级患者甲基化率高于Child A级患者（P=0．041）；甲基化阳性患者的肿瘤直径大于阴性患者（P=0．004）；甲基化阳性患者的半年无瘤生存率低于阴性患者，但差异无显著性（P=0．058）。结论BLU基因甲基化是HCC中的频发事件，可能参与HCC的发展。     

原发性肝细胞癌患者血清N-糖组的表达分析

目的:通过对原发性肝细胞癌(HCC)与正常人血清N-糖组图谱比较分析,寻找异常峰,为寻求新的HCC肿瘤标志物奠定基础.方法:收集乙型肝炎病毒(HBV)感染的HCC患者(n=100)及健康献血员(n=130)血清,采用基于DNA测序仪的毛细管电泳技术,检测每份标本中荧光标记的N-糖组分.结果:每份血清均得到具有11个峰的图谱,峰值经校正后量化,HCC组较对照组峰1、2、9、11升高,峰6、8、10降低(P＜0.05);且部分峰值变化与肿瘤标志物甲胎蛋白、HBV DNA载量、临床肝功能指标存在相关性.结论:HCC组血清N-糖组图谱较正常对照存在明显的差异,这种变化有望为临床疾病诊断提供依据.     

29例肝癌的超声检查与增强CT的对比分析

目的用增强CT作为相对金指标,对29例肝癌的超声检查进行一一对比分析总结,从而提高超声的检查质量和水平。方法收集29例肝癌患者均做超声和增强CT检查,先对增强CT重新进行了观察,排除假阳性征象的可能,再以其作为相对金指标,对比分析和总结。结果超声3例漏诊;病变的部位、形态、大小显示符合率分别为71%（25/29）、76.%（22/29）和72%（21/29）;病变显示超声以弱回声、CT以低密度为主;超声检出门静脉癌栓形成14例,腹水征17例;CT检出门静脉癌栓15例,下腔静脉癌栓2例,腹腔大血管旁淋巴结显示、肿大3例,腹水征16例。本组患者均为男性,且有慢性肝病史,其中肝硬化22例。结论利用增强CT的相对优势,对肝癌的超声诊断进行一一对比分析和总结,有利于提高超声诊断水平。     

运用激光捕获显微切割对肝细胞癌与肝内胆管癌蛋白质组的分析

目的:分析肝细胞癌和肝内胆管癌蛋白质的表达差异,获取鉴别两者的分子标志物.方法:通过激光捕获显微切割技术分离肝细胞癌和肝内胆管癌的纯细胞,通过双向电泳和质谱的方法检测两者表达的差异蛋白,再通过免疫组化染色的方法证实差异蛋白表达的情况.结果:肝细胞癌和肝内胆管癌图谱分别检测到(1 124±110)、(938±90)个蛋白点.分析发现78个差异蛋白点,通过质谱鉴定出28个有意义的蛋白,20个蛋白仅在肝细胞癌表达或表达明显增高,8个蛋白仅在肝内胆管癌中表达或者高表达.同时免疫组化证实BK125H2.1在肝细胞癌中表达强阳性,而肝内胆管癌中缺失表达.结论:激光捕获显微切割是蛋白质组研究中的一个突破性的技术,可以有效地解决组织异质性的问题;本实验检测到的差异蛋白例如BK125H2.1可能成为鉴别肝细胞癌与肝内胆管癌特异性的分子标记物.     

肝癌相关成纤维细胞的培养和鉴定及其对肝癌细胞增殖的影响

目的：分离、培养及鉴定原代肝癌相关成纤维细胞(hCAF),阐明其在肝癌发生发展中的作用。方法：采用酶消化法分离、纯化人hCAF, Western blotting法鉴定其相关蛋白标记物的表达,流式细胞术检测肝癌细胞Hep3B经hCAF上清处理后的增殖速度及细胞周期的变化,建立裸鼠移植瘤模型,观察hCAF对肝癌细胞生长的影响。结果：在肝癌组织标本中成功分离出hCAF,Western blotting结果显示hCAF特异性地高表达α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）。CCK8细胞增殖检测试剂盒检测证实,经hCAF上清处理后的Hep3B细胞增殖量为完全培养基处理48 h细胞增殖量的126.0%、125.0%及120.5%,细胞增殖量差异有统计学意义（P<0.05）。流式细胞术结果显示,经hCAF上清处理后的Hep3B细胞增殖速度及细胞周期中处于S期的细胞数目均高于完全培养基处理的Hep3B细胞（P<0.05）。hCAF与Hep3B共同接种至裸鼠皮下的成瘤体积［（1.34±0.52） cm3］明显大于单独接种Hep3B组［(0.51±0.09)　cm3］,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：hCAF可以明显促进肝癌细胞系Hep3B的生长,其可能在肝癌生长过程中发挥重要作用。