基于TP0136蛋白异质性建立一种新的苍白密螺旋体分子分型方法

【摘要】 目的 基于苍白密螺旋体属（TP）TP0136蛋白的异质性,建立一种新的TP分子分型方法。方法 从GenBank中查询9株梅毒苍白密螺旋体（TPA）、3株雅司苍白密螺旋体（TPE）、1株未分类的类人猿密螺旋体（FB）和1株地方密螺旋体（TEN）的TP0136开放阅读框（ORF）氨基酸序列并进行多重序列比对,得出TP0136蛋白分子分型结果。利用建立的TP0136蛋白分子分型方法,对2015年 1月至2018年12月南方医科大学皮肤病医院收集的23株TPA临床分离株进行分类,并将分型结果与传统的Arp/ Tpr/ TP0548三基因分型方法进行比较。结果 TP0136蛋白在不同种TP株中具有高度异质性,根据TP0136氨基酸序列,TPE、FB和TEN分为Ⅰ~ Ⅳ 4个亚型,TPA分为Ⅴ~ Ⅹ 6个亚型,TPA临床株分为Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ 4个亚型。通过TPA传统的三基因分型方法可将23株TPA临床株分为13D/d、14D/f、14D/g、15D/f、16A/e 5型。将TP0136分型法与传统分型法相结合,可将上述临床株进一步细分为10型,其中14D/f型应用TP0136分型法可进一步分为3个亚型。结论 TP0136分子分型方法可用于TP种的区分,有助于传统TPA分子分型的进一步完善。     

梅毒螺旋体黏附相关蛋白的研究进展

梅毒螺旋体(TP)为胞外致病菌,具有强大的组织侵袭能力,不仅能在机体内广泛播散,还能穿透人体多种生理屏障,TP在感染过程中与宿主细胞的黏附,有赖于细菌表面黏附蛋白的存在,近年来相继发现了多种具有黏附功能的TP蛋白质,对其功能和结构的研究也取得了一些进展,本文将对其中几种重要的黏附蛋白进行综述。     

梅毒螺旋体Gpd重组蛋白的表达

随着基因工程技术的迅速发展和梅毒螺旋体(Tp)全基因序列的解析^[1],通过重组技术已制备多种重组Tp抗原,并被广泛应用于梅毒血清学检测的研究和试剂盒的开发^[2-5],但对于哪一种Tp蛋白抗原在临床各期梅毒的血清学诊断中具有更高的特异性和敏感性尚无一致观点。我们应用软件筛选分析,选取抗原性较强的Tp外膜蛋白GPd进行克隆表达,并以重组蛋白为包被抗原,建立间接ELISA法,评价其在梅毒血清学诊断中的应用价值。     

用蛋白印迹技术初步评价重组梅毒螺旋体抗原的反应性

目的：初步分析重组梅毒螺旋体抗原对梅毒螺旋体抗体的反应性。方法：用蛋白印迹技术检测与麦芽糖结合蛋白（MBP）融合的2种重组梅毒螺旋体蛋白（rTP47和rTP17)与二期梅毒患者血清的反应性。结果：30份二期梅毒患者血清均与MBP－rTP47和MBP－rTP17反应,反应强度与RPR试验测定的血清滴度无绝对一致性,但MBP－rTP17与二期梅毒患者血清的反应强于MBP－rTP47,30份正常人血清均不与MBP－rTP47和MBP－rTP17反应。结论：MBP－rTP47和MBP－rTP17对二期梅毒患者血清的反应性较强。     

血清梅毒螺旋体IgM在先天梅毒诊断中的意义

目的探讨血清梅毒螺旋体IgM(TP-IgM)检测在先天梅毒诊断中的作用。方法回顾性分析了1215例初诊儿童的梅毒血清学检查结果,并与其临床资料作比较分析。结果梅毒血清学阳性率8.81%(107/1215),其中梅毒螺旋体IgM阳性率6.42%(78/1215)。107例梅毒血清学阳性患儿最后确诊为先天梅毒92例,TP-IgM阳性与先天梅毒确诊符合率为100%。结论血清梅毒螺旋体IgM是诊断婴幼儿先天梅毒有价值的梅毒血清学指标,对鉴别先天梅毒和被动梅毒血症有重要意义。     

梅毒螺旋体IgM抗体对于神经梅毒的诊断意义

目的　探讨检测脑脊液中梅毒螺旋体IgM抗体对于神经梅毒的诊断意义。 方法　神经梅毒组 2 1例 ,以无神经系统被累的各期梅毒组 2 8例、非梅毒组 2 8例为对照。对三组患者腰穿取脑脊液 ,采用抗体捕获酶联免疫吸附分析技术 ,进行梅毒螺旋体IgM抗体检测。 结果　神经梅毒组脑脊液Tp IgM检测的阳性率为 71.4% ,两对照组则均为 0 ,差异有高度显著性 (u =5 .3 7,P <0 .0 1)。脑脊液Tp IgM试验、VDRL/RPR试验在神经梅毒组的阳性率分别为 71.4%、3 3 .3 % ,差异有显著性 (χ2 =4.90 ,P <0 .0 5 )。结论　脑脊液Tp IgM检测有助于神经梅毒的诊断 ,无症状神经梅毒的脑脊液Tp IgM检测也可以呈阳性结果。     

梅毒螺旋体分子流行病学及亲神经亚型菌株研究进展

1998年建立基于梅毒螺旋体tpr和arp基因分子分型系统,世界各国均有梅毒螺旋体亚型菌株流行特征的报道并结合tp0548或rpsA基因以加强分型,发现了各地的优势亚型菌株及亚型菌株存在多样性,其中14d和14f是出现频率较高的亚型.另外,某些特定亚型与临床表现之间存在相关性.有研究发现,某些特定亚型菌株可能有亲神经现象,其中14a、14d/f、19d/c与神经梅毒相关.确定特定亚型菌株与神经梅毒的相关性对临床诊治和判断梅毒患者预后意义重大.     

梅毒螺旋体TP0993重组蛋白的表达、纯化及免疫活性分析

目的 探讨梅毒螺旋体重组蛋白TP0993在梅毒血清学诊断中的应用价值.方法 通过生物信息学分析,获取TP0993基因序列,构建原核载体进行诱导表达;Ni-NTA亲合层析柱纯化重组蛋白,Western印迹检测其免疫抗原性,用重组蛋白直接注射免疫新西兰家兔,评价其免疫原性.用纯化的TP0993重组蛋白包被微孔板,建立间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测临床梅毒患者血清和健康体检者正常血清,同时与梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)进行比较,根据重组蛋白与梅毒阴阳性血清的反应情况,评价重组抗原在梅毒血清学诊断中的应用价值.结果 成功构建PET-28a(+)-0993原核表达载体,经表达、纯化后获得相对分子质量约为34 000的重组蛋白;Western印迹检测显示该重组蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应;利用纯化的TP0993重组蛋白免疫新西兰兔,能诱导新西兰兔产生特异性免疫应答.以重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA法,对TPPA法检测的480份临床血清进行检测,与TPPA法比较ELISA法的灵敏度为88.3％,特异度为85.8％,ELISA法与TPPA法符合率为86.5％.结论 重组表达的TP0993蛋白具有较好的免疫活性,可作为梅毒血清学诊断的候选抗原之一.     

梅毒螺旋体Tp0453重组蛋白的表达纯化及免疫活性研究

目的表达梅毒螺旋体膜蛋白Tp0453(28-288 aa),纯化表达产物并进行免疫活性分析,为探索Tp0453重组蛋白在梅毒血清学诊断中的应用提供实验依据。方法通过生物信息学分析,挑选Tp0453抗原的优势表位,进行诱导表达;以W estern-b lot和间接ELISA法检测重组蛋白的免疫反应性;用重组蛋白免疫新西兰家兔,评价其免疫原性。结果纯化后获得了相对分子量约为32×103的融合蛋白。W estern-b lot检测其能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应;同时以重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA法,检测梅毒诊断试剂参考血清,其阴阳性符合率均为100%。用纯化的Tp0453重组蛋白免疫新西兰家兔,能诱导其产生特异性免疫应答,ELISA法测定免疫血清中特异性抗体滴度在1∶1280以上。结论基因重组表达的Tp0453重组蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,为进一步研究其在梅毒血清学诊断中的应用和其生物学功能奠定了基础。     

4种以重组梅毒螺旋体抗原为基础的梅毒快速诊断试验的临床评价

目的：评估4种以重组梅毒螺旋体抗原为基础的梅毒快速诊断试剂盒的敏感性和特异性,及其在临床应用中的可操作性。方法：选择860例性传播疾病（STD）门诊患者,签署知情同意书并采集其静脉血。分别取全血和血清进行梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）及4种试剂盒的检测。检测方法分别按照说明书进行。结果：以TPHA为标准,结果分别为：①Abbott Determine Syphilis TP test：血清敏感性为100％,特异性为98、9％;全血敏感性为81．9％,特异性为99．4％。②SDBIOLINE Syphilis 3．0 test：血清敏感性为95．5％,特异性为97．9％;全血敏感性为87．6％,特异性为99．4％。③VISITECT-SYPHILIS test：血清敏感性为94．0％,特异性为98．1％;全血敏感性为73．5％,特异性为99．7％。④Syphicheck-WB test：血清敏感性为67．4％,特异性为98．8％：全血敏感性为64．0％,特异性为99．7％。结论：4种试剂盒均具有优良的临床操作性能,适用于STD门诊的梅毒快速检测。而且这4种快速诊断试剂盒在血清中的检测比全血具有更高的敏感性。     

梅毒螺旋体重组蛋白Tp0136的表达、纯化及免疫活性分析

【摘要】 目的 克隆并表达梅毒螺旋体Tp0136基因,对其表达产物进行纯化以及免疫活性分析。方法 全基因合成Tp0136基因,构建E.coli表达载体;诱导表达并纯化重组蛋白,用SDS-PAGE和Western印迹鉴定。用纯化的重组蛋白Tp0136免疫新西兰兔,并以重组Tp0136作为包被抗原建立间接酶联免疫吸附试验（ELISA）以鉴定其免疫原性,Western印迹检测梅毒阳性血清鉴定其免疫反应性。结果 成功构建E.coli表达载体pET28a-Tp0136,并表达和纯化出膜蛋白Tp0136,相对分子质量为50 000,纯度 > 95%。用重组蛋白Tp0136免疫新西兰兔,能刺激其产生高滴度抗体,具有较强的免疫原性。Western印迹显示其能与梅毒阳性血清发生特异性反应,具有较好的免疫反应性。结论 成功表达具有Tp0136全基因和较强免疫活性的膜蛋白,Ｔp０１３６可能在梅毒螺旋体的免疫致病机制中起到重要作用。     

梅毒螺旋体部分膜蛋白研究进展

梅毒是由梅毒苍白螺旋体引起的一种可侵犯多器官的慢性性传播疾病.目前梅毒螺旋体尚不能在体外长期培养,获取较困难,从而阻碍了对梅毒致病机制的研究、诊疗方案的优化和疫苗的研制.梅毒螺旋体全基因序列的揭示,TprK蛋白、Tp0483蛋白、Tp0155蛋白等一些重要膜蛋白成功表达及对其结构特点、抗原性和免疫保护作用的深入研究,为梅毒发病机制的研究、诊疗方案的优化和疫苗的研制提供了基础和可能.概述近年来新发现的对梅毒螺旋体具有诊断意义和免疫保护作用的几种主要膜蛋白的研究状况.     

三种常用的不同血清学诊断方法对梅毒螺旋抗体的检测效果分析

目的:探讨梅毒螺旋抗体采用三种血清学方式即化学发光免疫法(CLIA)、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)及梅毒螺旋体抗体胶体金试验检测的临床效果。方法:随机选取我院门诊2014年12月至2015年12月收治的梅毒患者120例,设为阳性组,另选取同期健康人群120例设为阴性组,两组研究对象均实施CLIA、TPPA及梅毒螺旋体抗体胶体金试验三种血清学检测方法进行重复检测,对比分析三种检测方法在阳性组中的阳性率、特异性率、灵敏度和阴性组中的假阳性率情况。结果:本次研究中,CLIA法具有较高的阳性率95.8%,明显优于其他两种检测方法(P0.05),但其假阳性率也较高,为7.5%,TPPA法的假阳性率最低为1.7%,明显优于其他两种检测方法(P0.05);胶体金法的灵敏度(71.8%)和特异性(88.3%)较低,明显低于其他两种检测方法(P0.05)。结论:三种检测方法中,TPPA法检测梅毒螺旋抗体的阳性率高、假阳性率低、特异性和灵敏度均较高,综合效果最好;而CLIA阳性率最高,但其容易出现假阳性;胶体金试验的假阴性和假阳性均较多,临床可作为辅助检查应用。     

广西早期梅毒患者梅毒螺旋体基因分型研究

目的 了解广西部分市梅毒螺旋体(Tp)的基因分型状况.方法 从2012年1月至2016年7月在广西性病门诊收集疑似早期梅毒患者300例,采集皮损处组织液,用镀银染色法检测梅毒螺旋体,同时采用PCR扩增Tp polA基因,进行早期梅毒的诊断.对早期梅毒确诊病例进行Tp的arp基因60个碱基对重复序列的数目、tprⅡ基因MseⅠ酶切后限制性片段长度多态性的型别和tp0548基因序列的型别进行鉴别,依据结果进行综合分析以判断梅毒基因型.结果 共确诊早期梅毒患者215例,其中梅毒PCR检测出210例阳性,检出率97.7%,镀银染色法检测出105例阳性,检出率48.8%,PCR法阳性率显著高于镀银染色法(χ2=103.01,P<0.05).在PCR阳性标本中,共190例可进行三基因完全分型,总计分出17个基因型别,14d/f有86例(45.3%),具有绝对的流行优势,其他亚型依次为15d/f(13.7%、26/190)、16d/f(11.6%、22/190)、17d/f(7.4%、14/190)、13d/f(6.8%、13/190)、10d/f(4.2%、8/190)、18d/f(1.6%、3/190)、16a/f(1.6%、3/190)、5d/f(1.1%、2/190)、7d/f(1.1%、2/190)、12d/f(1.1%、2/190)、16d/e(1.1%、2/190)、14a/f(1.1%、2/190)、9h/c(1.1%、2/190)、15l/f(0.5%、1/190)、25a/e(0.5%、1/190)、15i/f(0.5%、1/190).结论 广西早期梅毒患者的梅毒螺旋体基因型别具有多样性,其中以14d/f型为优势型.     

梅毒螺旋体抗体在诊断新生儿梅毒中的应用和讨论

目的:探讨梅毒螺旋体(treponema pallidum,TP)抗体在诊断新生儿梅毒中的应用。方法:分别用甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、TP-ELISA和密螺旋体颗粒凝集实验(TPPA)法对84例确诊新生儿梅毒患者与100例健康新生儿血清进行检测。结果:三种检测梅毒螺旋体抗体方法的灵敏度分别为51.2%、98.8%和100%,相对而言,TRUST法不适合作为诊断新生儿梅毒的初筛试验。结论:TP-ELISA法灵敏度与特异性相对较高,操作简便易行,建议作为诊断新生儿梅毒的初筛试验;TPPA法由于操作繁琐复杂,可结合临床作为新生儿梅毒的确诊试验。