肝癌患者血清中乙型肝炎病毒前C和BCP区基因变异的临床研究

目的了解常州地区乙型肝炎病毒(HBV)DNA前C区(1896)、BCP区(1762/1764)基因的变异,探讨与肝癌的相关性。方法运用基因芯片和核苷酸序列分析技术,对HBVDNA进行分析。结果前C区1896位、BCP区1762/1764位突变普遍存在。(1)在39例HBeAg( )标本组中1896突变为5例(12.8%),1762/1764突变为15例(38.5%);在75例HBeAg(-)组中1896突变为26例(34.7%),1762/1764突变为55例(73.3%)。(2)在114例标本中,慢性乙型肝炎、慢性重型乙型肝炎、乙肝肝硬化、肝癌组中前C区1896、BCP区1762/1764位的总突变率分别为55.9%、71.4%、75.7%、88.9%。结论前C区1896、BCP区1762/1764位突变与HBeAg(-)显著相关,两者总突变率在肝癌患者中显著升高,尤其前C1896、BCP区1762/1764同时突变与肝硬化和肝癌密切相关。     

自贡地区HBV基因BCP区1762/1764及前C区1896位点突变与HBV相关性肝癌的相关性研究

目的通过分析自贡地区乙肝患者乙型肝炎病毒HBV基因BCP区1762/1764及前C区1896位点的突变情况,探讨其与HBV相关性肝癌的关系。方法收集2015年9月至2018年6月141例经本院确诊的乙肝性相关疾病患者血清标本(HBV DNA≥103IU/mL):慢性乙肝(CHB组)50例、肝硬化(LC组)45例、肝癌(HCC组)46例,并收集临床相关资料。采用荧光定量PCR法检测患者的HBV DNA水平,多通道荧光PCR法检测HBV基因型,然后采用ARMS-PCR法检测HBV基因BCP区1762/1764及前C区1896突变情况。采用SPSS17.0软件对数据进行统计学分析。结果HCC组和CHB组在e抗原阳性率、HBV DNA水平及HBV DNA>105IU/mL方面对比发现差异均具有统计学意义(P<0.05);HCC组和LC组在e抗原阳性率方面比较发现差异无统计学意义(P>0.05),而HBV DNA水平方面差异具有统计学意义(P<0.05)。男性、女性乙肝患者HBV基因BCP区1762/1764位点突变率分别为67.0%、57.1%(P>0.05),前C区1896位点突变率分别为61.6%、66.7%(P>0.05)。HCC组患者、LC组患者、CHB组患者的HBV基因BCP区1762/1764突变率分别为91.3%、84.4%、22%,HCC组与CHB组比较差异具有统计学意义(P<0.05),而HCC组与LC组比较差异无统计学意义(P>0.05);HBV基因前C区1896突变率分别为84.8%、62.2%、42.0%,HCC组与CHB组、LC组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。HCC组患者的HBV基因前C区1896和BCP区1762/1764位点同时突变率为78.3%,要高于LC组和CHB组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。HBV基因型方面比较,无论是基因B型还是C型的乙肝相关患者,疾病进程较重(HCC组、LC组)的受试者携带BCP区1762/1764突变型或前C区1896突变型的比例都要高于慢性乙肝患者(CHB组)。结论自贡地区HBV基因BCP区1762/1764和前C区1896突变率高,无性别和基因型差异,其中HBV基因BCP区1762/1764位点和前C区1896位点联合突变与HBV相关性HCC发生可能存在一定关系。     

慢性乙型肝炎患者HBV前C区A1896变异和BCP T1762／A1764双变异与临床相关性分析

目的 探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)前C区和基本棱心启动子(BCP)突变与HBV-DNA裁量之间的关系,明确检测突变的意义.方法 PCR扩增HBV-DNA前C区序列,进行PCR产物直接测序,测序HBV感染者血清中HBV前C区A1896突变及BCP T1762/A1764双突变例教.结果 31例慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA发生ntl896位核苷酸G-A点突变18例;发生nt1762住A-T 16例;发生nt1764 位G＞A 18例;发生nt1762位A-T与1764位G-A双突变16例;1762位A-T1764住G-A双变异和1896住G-A变异的联合变异频率明显高于单个变异.用SPSS16.0软件分析突变与HBV-DNA载量的关系.前C区A1896变异,BCP T1762/A1764变异均与HBV-DNA戴量差异无统计学意义.结论 HBV-DNA裁量仅能反映实时病毒裁量,HBV前C区A1896变异和BCP T1762/A1764双变异在各种病毒载量感染者中存在,仅依靠血清学指标及HBV-DNA裁量来判断传染性是不够的.检测HBV-DNA前C区A1896变异和BCP T1762/A1764双变异,可辅助判断传染性及制定抗病毒治疗方案.     

慢性乙型肝炎乙型肝炎病毒核心启动子区和前核心区基因变异后的预后分析

目的 为了解慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒(HBV)核心启动子(BCP)区和前核心(前C)区基因变异后的临床转归及其预后。方法 采用DNA序列分析法检测123例HBV DNA阳性的慢性乙型肝炎患者血清HBV BCP区(nt1762、nt1764)和前C区(nt1896)基因序列,并同步进行乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗体(抗-HBe)定量及肝功能检测。结果 123例患者HBV BCP区(A1762T、G1764A)和前C区(G1896A)基因变异检出率为76.42％;其中肝炎肝硬化(HLC)患者双变异(A1762T、G1764A)和联合变异(A1762T、G1764A、G1896A)率最高(52．94％与29．41％);慢性重型肝炎患者终止变异(G1896A)率最高(42．86％);HBeAg／抗HBe转换率分别为：双变异组23.91％,终止变异组75．00％,联合变异组84．00％,无变异组13．79％。结论 HBV BCP双变异、前C终止变异和联合变异均可引起慢性乙型肝炎病情加重及肝硬化的发生,但严重肝损伤与这3种变异之间可能无因果关系,只是HBV减少病毒蛋白的产生,逃避免疫监视的一种方式;推测BCP双变异和联合变异可能是引起HLC的重要病因之一;BCP区变异患者时干扰素治疗敏感。     

乙型肝炎病毒前C区及基本核心启动子变异检测方法的比较研究

目的 建立错配聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（mPCR-RFLP）检测乙型肝炎病毒（HBV）前C区A1896、基本核心启动子（BCP）T1762/A1764双变异的方法,与直接测序法比较,评估其应用价值.方法 利用错配PCR的原理扩增HBV前C区长194 bp、C启动子区长184 bp的基因片段,扩增产物分别经限制性内切酶Bsu36I、BclI酶切,琼脂糖凝胶电泳,根据酶切图谱多态性,建立检测HBV前C A1896、BCP T1762/A1764双变异的方法,对127份HBsAg、HBV DNA阳性的HBV感染者血清进行分析,酶切同时测序.2份标本用克隆测序以验证酶切鉴定变异株、野株混合感染的准确性.结果 127份血清中125（98.42%）份能用酶切、121（95.21%）份能用测序分析HBV前CA1896、BCP T1762/A1764状况.酶切与测序均成功的119份血清中,16份为前C区A1896变异株,34份为BCP T1762/A1764双变异株,21份为前C区A1896、BCP T1762/A1764联合变异株,48份为前C区G1896、BCP A1762/G1764野株,酶切与测序的结果完全一致.1份酶切鉴定为前C区A1896、G1896混合感染标本的5个克隆子中,1个为前C区A1896变异株,另外4个为前C区G1896野株;另1份酶切鉴定为单纯前C区A1896变异标本的5个克隆子均为前C区A1896变异株,酶切分析结果与克隆测序结果完全相符.结论 与测序法相比,本方法较简便、特异性强,能区分野毒株、变异株混合感染,适合较大样本分析,可用于流行病学调查及临床筛查.     

阿德福韦酯与乙型肝炎病毒P区、前C/BCP区变异相关性研究

目的 探讨阿德福韦酯治疗后乙型肝炎病毒(HBV)P区、前C/BCP区的变异情况,为合理进行抗病毒治疗提供理论基础.方法 采用套式聚合酶链反应及核苷酸序列分析技术,将2010年3-8月天津市第三中心医院收治的共计61例临床乙型肝炎患者,根据是否使用过阿德福韦酯分为试验组(33例)和对照组(28例),并进行HBV DNA P区、前C/BCP区的突变点检测,对2组的数据进行统计学比较.结果 HBV DNA前C/BCP区G1896A和A1762T/G1764A突变率最高,尤其以乙型肝炎后肝癌患者表现最高[50.0%(8/16)、25.0%(4/16)],且试验组A1762T/G1764A双突变及G1896A突变率明显高于对照组[39.4%(13/33)比17.9%(5/28),27.3%(9/33)比10.7%(3/28),P<0.05].与核苷酸药物阿德福韦酯密切相关的P区突变点以A18lV和N236T突变率最高.结论 前C/BCP区G1896A突变、A1762T/G1764A双突变以及A181V和N236T的突变与核苷酸药物阿德福韦酯治疗密切相关,对于合理指导抗病毒治疗具有重要参考价值.     

乙型肝炎病毒基本核心启动子区A1762T/G1764A突变检测的意义

目的探讨乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)基本核心启动子区(BCP)A1762T/G1764A联合突变在不同疾病中发生的差异及其与乙肝相关肝癌预后的关系。方法选择慢性乙肝(CHB)患者38例、乙肝肝硬化(LC)患者36例、乙肝相关肝细胞肝癌(HCC)患者74例,用巢式PCR扩增患者血清中HBV BCP区,直接测序法检测HBV BCP区变异,分析A1762T/G1764A突变与HBV复制、HBeAg表达和HBV感染不同阶段的关系,以及与HCC患者预后的关系。结果在148例患者中,A1762T/G1764A突变总体发生率为54.7%,乙肝相关HCC组中A1762T/G1764A突变发生率为79.7%,而CHB、LC患者分别为31.6%、27.8%,HCC组变异的发生率明显高于CHB组(P0.05)和LC组(P0.05);A1762T/G1764A突变组HBV-DNA载量与非突变组比较差异无统计学意义(P0.05);HBeAg阳性组A1762T/G1764A突变发生率为41.4%,HBeAg阴性组为73.5%,HBeAg阴性组变异发生率明显高于HBeAg阳性组(P0.05);HCC患者A1762T/G1764A变异组与非变异组之间无病生存期及总体生存期差异无统计学意义(P0.05)。结论 HBV核心启动子区A1762T/G1764A联合突变与HCC发生具有显著关系,该变异与血清HBV-DNA的复制水平无关,但与血清HBeAg表达水平有关,与乙肝相关HCC预后无显著关系。     

乙型肝炎病毒前C区1896、基本C区启动子区1762／1764变异对拉米夫定抗病毒疗效的影响及其临床意义

目的研究乙型肝炎病毒（HBV）前C区G1896A变异和基本C区启动子（BCP）区A1762T／G1764A双变异对拉米夫定（LAM）抗病毒疗效的影响及其临床意义。方法收集上海及其周边地区34例慢性乙型肝炎患者,单用LAM或LAM＋聚乙二醇干扰素α-2a进行抗病毒治疗共48周,应用TrugeneHBVgenotyping试剂盒测定分析治疗前（0周）、治疗过程中（24周）、治疗结束时（48周）及随访结束时（72周）RT区YMDD变异;采用HBV基因多态性检测芯片试剂盒测定前C区1896、BCP区1762／1764位点的变异情况。结果在治疗前有9例患者检测出前C区G1896A变异,均为HBVe抗原（HBeAg）阴性慢性乙型肝炎患者;9例前C区G1896A变异患者中7例治疗应答（77．8％,7／9）,BCP区A1762T／G1764A变异在治疗应答者与无应答者中差异无统计学意义;3例患者分别在治疗24和48周时检测到YMDD变异,对治疗均无应答。结论慢性乙型肝炎患者治疗前血清HBVDNA变异状态可能影响LAM抗病毒治疗应答及YMDD耐药变异株的复制能力。     

乙肝病毒变异检测中基因芯片技术的临床应用价值分析

目的探讨乙肝病毒变异检测中基因芯片技术的临床应用价值,为临床乙肝疾病诊治提供参考依据。方法选择2014年确诊为慢性乙肝疾病的患者200例作为研究对象,使用基因芯片技术测定研究对象的血清中乙肝病毒前C区A1896、A1814以及BCP区nt1762、nt1764的变异情况,对比患者临床诊断分型、乙肝病毒DNA复制程度和血清e系统进行综合分析。结果 200例研究对象中,乙肝病毒前C区A1896、A1814、BCP区nt1762和BCP区nt1764变异阳性率分别为58.5%、13.0%、55.0%、53.0%,且随着患者病情加重,乙肝病毒的变异情况发生情况逐步增多;HBeAg(-)HBeAb(+)患者或乙肝病毒DNA定量在104-106copy/ml之间时乙肝病毒变异发生率最高.结论使用基因芯片技术检测乙肝病毒多位点变异情况对临床疾病的诊治具有一定的应用价值,值得推广。     

HBV前C区及基因启动子区基因变异与乙肝肝硬化相关性初步研究

目的探讨HBV前C(PC)区和基本核心启动子(BCP)区与乙型肝炎患者病情进展的关系。方法选择37例慢性乙型肝炎患者(慢乙肝组)及27例乙型肝炎肝硬化患者(肝硬化组),分析2组患者的一般资料和临床特征,对2组患者血清样本进行A1762T/G1764A、G1896A基因突变检测,比较组间差异。结果肝硬化组患者的年龄大于慢乙肝组,ALT、HBV DNA水平低于慢乙肝组,层粘连蛋白水平高于慢乙肝组(P均<0.05)。肝硬化组患者A1762T/G1764A双位点突变发生率为78%,高于慢乙肝组的49%(P <0.05);肝硬化组G1896A突变发生率为48%,慢乙肝组为60%,2组比较差异无统计学意义(P> 0.05)。结论乙肝肝硬化患者HBV PC/BCP区A1762T/G1764A突变率高于慢乙肝患者,A1762T/G1764A突变可能参与慢乙肝发展至肝硬化的过程。     

湘潭地区乙型肝炎病毒基因型与YMDD基因区序列突变及BCP区突变关系探讨

【目的】对湘潭地区HBV感染者的基因型、YMDD基因区序列突变及BCP区突变情况及关系进行探讨。【方法】对952例不同类型的HBV感染者的样本同时进行基因型、YMDD基因区序列突变及BCP区突变检测和分析。【结果】湘潭地区HBV各种基因型分布比例为：B型占73．32％,C型占12．08％,B、C型混合感染14．60％。YMDD基因区序列突变结果显示：YMDD野生型,占88．66％,其余为YMDD突变型。BCP区突变结果显示：1762A／1764G（野生型）占70．59％,1762T／1764A（突变型）占19．75％,其余为混合型。基因型、相关性分析显示：HBVB型和C型YMDD基因区序列突变率无显著性差异（P〉0．05）,序列突变类别存在显著性差异（P〈0．05）,HBVC型YVDD突变率要高于B型。C型BCP区突变率要高于B型（P〈0．01）。HBV YMDD野生型和突变型的BCP区突变率存在显著性差异（P〈0．01）,HBV YMDD突变型标本BCP区突变率与YMDD野生型相比无差异,但YVDDBCP区突变率要高于其他类别。【结论】①湘潭地区流行的HBV基因型主要为B型和C型,其中B型为优势基因型,具有南方地区的特点。②拉米夫定治疗前通过HBV基因型检测来预测抗病毒应答可能并无实际意义。③HBV基因分型、YMDD基因区序列突变、BCP区突变检测的应用,将有助于临床上对乙肝患者的预后和转归进行正确评价。     

阿德福韦酯治疗与乙型肝炎病毒P区、C区及BCP区变异相关性研究

[目的]探究阿德福韦酯治疗前后乙型肝炎病毒P区、c区及BCP区的变异情况，为合理进行抗病毒治疗提供理论基础；[方法]采用套式PCR及核苷酸序列分析技术，对天津市第三中心医院共计61份临床HBV血液标本进行了HBVDNAP区、c区及BCP区的突变点检测。[结果]HBVDNA前c区G1896A和A1762T／G1764A突变比率最高，尤其以肝癌组中表现最高，且实验组A1762T／G1764A双突变及G1896A突变的比率明显高于对照组，与核苷酸药物阿德福韦密切相关的突变点以A181V和N236T突变最高。[结论]前c区G1896A变异联合BCPT1762／A1764双变异以及A181V和N236T的检测与核苷酸药物治疗的过程密切相关，对于合理指导抗病毒治疗具有重要参考价值。     

乙型肝炎病毒基因型与YMDD基因区序列突变及BCP突变关系探讨

目的 对湘潭地区HBV感染者的基因型、YMDD基因区序列突变及BCP区突变情况进行研究,并对三者之间的关系进行探讨.方法 针对湘潭地区952例不同类型的HBV感染者的样本同时进行基因型、YMDD基因区序列突变及BCP区突变检测,并对检测结果进行统计分析.结果 湘潭地区HBV各种基因型分布比例为:B型698例、占73.32%,C型115例、占12.08%,B、C型混合感染139例、占14.60%.YMDD基因区序列突变结果显示:YMDD野生型844例、占88.66%,其余为YMDD突变型,其中YVDD 54例、占5.67%,YIDD 53例、占5.57%,1例为YMDD与YVDD混合感染.BCP区突变结果显示:1762A/1764G(野生型)672例、占70.59%,1762T/1764A(突变型)188例、占19.75%,其余92例为1762T/1764A和1762A/1764G混合型、占9.66%.基因型、YMDD基因区序列突变及BCP区突变三者相关性分析显示:HBV B型和C型YMDD基因区序列突变率分别为10.04%、10.43%,差异无统计学意义(χ2=0.017,P＞0.05),HBV B型和C型YMDD基因区序列突变类别差异有统计学意义(χ2=4.836,P＜0.05),HBV C型YVDD突变率(9.57%)要高于B型(5.88%).HBV B型和C型BCP区突变率分别为27.36%、46.09%,差异有统计学意义(χ2=16.478,P＜0.01),C型BCP区突变率要高于B型.HBV YMDD野生型和突变型的BCP区突变率分别为2 8.67%、35.51%,差异无统计学意义(χ2=2.139,P＞0.05),但YVDD BCP区突变率(61.11%)要高于其他类别.结论 (1)湘潭地区流行的HBV基因型主要为B型和C型,其中B型为优势基因型,具有南方地区的特点.(2)拉米夫定治疗前通过HBV基因型检测来预测抗病毒应答可能并无实际意义.(3)HBV基因分型、YMDD基因区序列突变、BCP区突变检测的应用,将有助于临床上对乙肝患者的预后和转归进行正确评价,为及时合理的实施干预措施提供了重要依据.

Abstract：

Objective To investigate the relationship between HBV genotypes and YMDD motif mutations or BCP mutations in Xiangtan of Hunan Province. Methods HBV genotypes, YMDD motif mutations and BCP mutations were analyzed in 952 HBV infected patients. Results HBV genotyping showed that 698 HBV type B patients and 115 HBV type C patients accounted for 73.32% and 12.08% respectively of all the participants. The rest 139( 14.60% )were genotype B and C mixed infection( B + C ). The analysis of YMDD motif mutations showed that 844 YMDD wild-type which accounted for 88.66% of all the subjects and the remainder were YMDD mutation types, of which 54( 5.67% ) carried YVDD, 53( 5.57% ) YIDD,and 1 YVDD and YIDD mixed infection. Basic Core Promoter mutations showed that 1762A/1764G ( wild type )accounted for 70.59% and 1762T/1764A( mutant ) accounted for 19.75%. The rest 92 patients were 1762T/1764A and 1762A/1764G mixed infection. This study showed no significant difference in the rate of YMDD mutation( 10.04% vs 10.43% ,χ2 =0.017,P＞0.05 ) ,but a significant difference in the types of YMDD mutation(χ2 = 4.836, P ＜ 0.05 )between HBV types B and C. The YVDD mutation was more commonly seen in genotype C( 9.57% ) than in genotype B( 5.88% ). The BCP mutation rate showed a significant difference( 27.36% vs 46.09%, χ2 = 16.478, P ＜ 0.01 ). Genotype C was more frequent than genotype B. The BCP mutation rate showed no significant difference between YMDD Wild-type and YMDD mutation types( 28.67% vs 35.51%, χ2 = 2.139, P ＞ 0.05 ), but most of BCP mutations happened in YVDD mutant type( 61.11% ). Conclusions ( 1 ) The predominant HBV genotypes in Xiangtan were genotype B and genotype C, the major genotype was type B, which display the characteristics of epidemiology in Southern China. ( 2 ) Determination of HBV genotypes before lamivudine therapy was probably not an important pretreatment investigation to predict antiviral responses. ( 3 ) Detection of HBV genotypes, YMDD motif mutations and BCP mutations will contribute to the correct evaluation of prognosis and timely proper management of HBV patients.     

Precore wild-type hepatitis B virus with G1896 in the resolution of persistent hepatitis B virus infection

OBJECTIVE: Factors influencing the resolution of persistent hepatitis B virus (HBV) infection were sought for. METHODS: The loss of hepatitis B surface antigen (HBsAg) from serum was correlated with mutations in HBV DNA for a hepatitis B e antigen (HBeAg)-minus phenotype in patients infected with HBV genotype C and positive for HBeAg at presentation. RESULTS: HBeAg turned negative in all the 22 patients in whom HBV infection resolved, but only in 11 of the 25 patients with severe liver diseases (100 vs. 44%, p = 0.0001). The precore wild type (G1896) persisted significantly more frequently in the 22 patients in whom HBV infection resolved than in the 11 patients who developed decompensated liver cirrhosis or hepatocellular carcinoma (15/22 or 68% vs. 1/11 or 9%, p = 0.005). The double mutation in the core promoter (T1762/A1764) was comparably frequent in the two groups of patients at presentation (14/22 or 64% vs. 7/11 or 64%) and >15 years thereafter (18/22 or 82% vs. 10/11 or 91%). CONCLUSION: The precore wild type (G1896) would seem to facilitate the resolution of HBV infection, while the precore mutant (A1896) may induce severe liver diseases in patients with HBeAg-positive chronic hepatitis who have lost HBeAg from serum.     

乙肝病毒E抗原和抗体双阳性者中病毒X及前C基因变异热点研究

目的：了解乙型肝炎患者HBeAg和HBeAb双阳性状态下X区及前C区基因热点变异情况，探讨T1762与T1764及A1896热点变异与HBe转换时相的关系。方法：采用时间分辨荧光免疫分析方法定量检测乙肝5项标志物，对HBeAg/HBeAb双阳性标本采用巢式聚合酶链反应扩增，其包括X区及前C区在内的DNA片段，并对阳性的PCR产物直接标记测序，测序结果和Genbank中登录的标准序列相比较。结果：对15例HBeAg和HBeAb双阳性患者血清中HBV DNA进行了检测，阳性11例，测序结果显示，11例HBV DNA阳性者均存在T1762和A1764的突变，但仅有4例患者出现了A1896的突变。结论：在乙型肝炎HBe转换过程中均伴有BCP区T1762和A1764的突变，部分存在A1896位点的突变，T1762和A1764的突变要早于A1896的突变，而A1896的突变主要在E抗体产生过程中或产生以后。     

乙型肝炎病毒基因型与基本核心启动子及前C区变异对疾病进展的影响

目的 应用测序列的方法，探讨乙型肝炎病毒（HBV）基因型在南京地区的流行病学状况和HBV基因型与基本核心启动子（BCP）及前C区变异对疾病进展的影响。方法 选用南京地区94例HBV感染患者血清，其中慢性乙型肝炎（CHB）44例、慢性重型乙型肝炎（CSH）、肝硬化（LC）和肝细胞癌（HCC）50例，应用测序列的方法测定HBV的S基因序列以确定其基因型，测定C基因序列以确定其变异状况。结果 南京地区94例HBV感染患者的HBV基因型以B型和C型为主，分别为40例（42．6％）和54例（57．4％），未发现其他型和混合型，CHB组与HCC、CSH和LC组病毒基因型分布差异有统计学意义（P〈0．01），对于不同病情的HBV感染患者，基本核心启动子变异区（T1762／A1764双变异）变异差异有统计学意义（P〈0．05）；而不同基因型的患者基本核心启动子变异差异有统计学意义（P〈0．05）。前C区变异（A1896变异）在不同病情和不同基因型的患者中，差异均无统计学意义。结论 南京地区流行的HBV主要基因型是B和C，C型感染可以引起较重的肝病，尤其是BCP发生双变异者；HBV基因型是影响临床表现的重要因素之一。