黄体酮对戊四唑致痫大鼠海马内微管相关蛋白2免疫反应的影响

目的：研究黄体酮(P)对戊四唑(PTZ)致痫大鼠的发作情况和对海马结构内的微管相关蛋白2(MAP2)的影响。方法：采用成年去卵巢(OVX)雌性SD大鼠,设立空白对照组,实验对照组,实验给药组,取含背侧海马的脑片,进行免疫组化染色。结果：(1)实验给药组大鼠均未出现癫痫发作,实验对照组大鼠发作均达Ⅳ级以上。(2)实验对照组海马结构内MAP2免疫阳性反应减弱,而实验给药组则增强。结论：P可对抗PTZ致痫的行为发作,并且上调了海马内MAP2的免疫活性,可能参与了P对抗癫痫的机制。     

戊四唑致痫大鼠脑内缝隙连接的作用

目的: 研究缝隙连接(gap junction, GJ)在癫痫发病中的作用及机制。方法: 以戊四唑 (pentylene-tetrazol, PTZ)致痫大鼠模型为研究对象,采用免疫组织化学和实时定量RT-PCR技术,分别检测缝隙连接蛋白Cx32和Cx43在癫痫发作后不同时点皮层和海马神经元的表达。加用卡马西平(carbamazepine, CBZ)和甘珀酸(carbenoxolone, CBX)干预,观察二者对Cx32/43表达以及大鼠癫痫发作的影响。结果: 免疫组织化学染色显示PTZ致痫2 h后大鼠脑内Cx32/43阳性细胞开始增多,8 h后增多更为明显。实时定量RT-PCR示致痫2 h Cx32 mRNA迅速升高,5 h达高峰。Cx43 mRNA表达水平较低,但明显高于对照组。CBX显著抑制了Cx32/43的表达,CBZ对Cx32和Cx43的表达无明显影响。二者均抑制了大鼠的痫样发作。结论: GJ参与癫痫的发病过程,具有促进癫痫发作的作用。CBZ不影响Cx32/43的表达,表明其抗癫痫作用机制与阻断GJ 无关。     

慢性癫痫模型动物海马内GABA能神经元的超微结构改变

用马桑内酯诱发小鼠性性癫痫模型，借助免疫电镜方法对海马的ＧＡＢＡ能神经元的超微结构进行观察，可见小鼠海马内ＧＡＢＡ免疫反应阳性神经元弥散分布于除锥体细胞层和颗粒细胞层外的各部。慢性癫痫上鼠海马内的ＧＡＢＡ免疫反应性神经元胞体和末梢均呈现程度不同的结构损伤，包括线粒体肿胀，细胞器崩解和神经末梢变性，ＧＡＢＡ样轴突末梢可与免疫反应阴性的树突构成传出性轴－树突触，也可接受免疫反应阴性轴末梢的传入性轴－轴     

马桑内酯致痫大鼠海马神经元丢失及化学性质的研究

为观察癫痫发作过程海马神经元丢失细胞的主要死亡方式 ,用马桑内酯建立慢性致痫大鼠模型 ,以 Nissl染色、免疫组化、TUNEL法以及后二者相结合的技术 ,对海马神经元及其中的抑制性神经元的丢失进行了分区观察、统计、分析。结果发现 :致痫组海马各区神经元较对照组明显减少 ,不同区域减少程度不同 ,以齿状回减少最为明显 ;免疫组化结果显示 ,致痫组的抑制性神经元 GABA-IR神经元、PV-IR神经元、CB-IR神经元在海马各区有不同程度的减少 ,其中 GABA-IR神经元减少最明显。在海马各区所有丢失的神经元中 ,三种抑制性神经元所占的比例不同 ;并在海马各区均可见到 TUNEL -GABA、TUNEL-PV、TU NEL-CB双重反应阳性神经元。提示 :马桑内酯所致的癫痫发作 ,可引起海马神经元丢失 ,且不同区域丢失的程度不同 ,丢失的神经元可能以凋亡方式为主 ;海马抑制性神经元 GABA-IR、PV-IR、CB-IR神经元在癫痫发作过程中也有不同程度的丢失 ,丢失很可能也是以凋亡形式为主     

大鼠海马内谷氨酸神经元与GABA神经元之间突触联系的免疫电镜双标研究

为了探讨神经递质在癫痫发病机理中的作用，用包埋前免疫电镜双标法研究了正常太鼠海马ＣＡ１区谷氨酸（Ｇｌｕ）神经元与ＧＡＢＡ神经元之间的突触联系，先用ＤＡＢ为呈色剂显示ＧＡ－ＢＡ免疫反应，然后以钼酸铵－ＴＭＢ法显示Ｇｌｕ免疫反应，再进行免疫电镜包埋。观察发现，在海马ＣＡ１区锥体细胞层有许多Ｇｌｕ免疫反应性神经元；在锥体细胞层，多形层和辐状层可见一些ＧＡＢＡ免疫反应性神经元，胞体为锥体或多角形。在多形层     

粉防己碱对戊四唑致大鼠皮层电图和海马超微结构的影响

目的:探讨钙拮抗剂粉防己碱(tetradrine,Tet)对戊四唑(Pentylentetrazol,PTZ)诱导的大鼠癫(癎)模型的作用.方法:健康SD大鼠24只,随机分为4组,对照组和Tet 3个剂量组(15 mg/kg,30 mg/kg,60 mg/kg)各6只.观察大鼠腹腔注射PTZ前后癫(癎)发作的情况,按Racine分级标准分级,同时记录皮层电图(ECoG),观察PTZ注射后到出现(癎)样放电的潜伏期及1 h内(癎)样放电累加的持续时间.电镜观察海马神经元超微结构的改变.结果:对照组给PTZ后均出现癫(癎)发作,程度均为5级,Tet组发作程度明显减轻.ECoG上出现(癎)样放电的潜伏期延长,(癎)样放电在1 h中的持续时间缩短.同时,Tet也能明显减轻PTZ致(癎)大鼠海马CA1区锥体细胞线粒体的损伤程度.结论:Tet对PTZ诱导的癫(癎)大鼠的发作有明显的对抗作用,对海马锥体神经元的拟伤具有保护作用.     

急性弥散性不完全性脑缺血时大鼠海马及运动皮质脑电图和GABA能神经元的变化

用电生理及免疫细胞化学方法观察急性脑缺血大鼠海马及运动皮质的脑电图和其内ＧＡＢＡ能神经元的变化。结果表明：夹闭双侧颈总动脉１５ｍｉｎ后，海马及运动皮质的脑电波波幅变低、频率变慢、高幅θ波增多，有时呈短程阵发性出现。这些变化随着缺血的发展而更加明显，有时出现癫痫样棘波或棘慢波或阵发性尖波。缺血１ｈ后，脑电波有所恢复，但没有恢复到正常水平。免疫细胞化学染色结果：缺血３０ｍｉｎ后，海马及运动皮质内ＧＡＢＡ能神经元开始减少，２ｈ后明显减少。此时海马内约为对照组的６０％左右，表现最明显的部位为齿状回和ＣＡ１及ＣＡ３区。运动皮质内比对照组减少５０％左右。结果提示：急性弥散性不完全性脑缺血时，由于脑血供减少，导致抑制性ＧＡＢＡ能神经元数量减少，出现海马及运动皮质脑电图和行为明显改变，这些变化可能与脑缺血所致的机能障碍和临床表现有关。     

脑缺血／再灌注后大鼠海马GABA、AchE水平和迟发性神经元损害关系的研究

为探讨海马ＧＡＢＡ、ＡｃｈＥ和迟发性神经元损害（ｄｅｌａｙｅｄｎｅｕｒｏｎａｌｄａｍａｇｅ，ＤＮＤ）的关系，观察了脑缺血／再灌注后大鼠海马亚区ＧＡＢＡ含量、ＡｃｈＥ活性和海马组织病理改变。发现再灌注５ｍｉｎ，海马亚区ＧＡＢＡ含量显著升高，再灌注１ｈ和６～１２ｈ，ＧＡＢＡ含量明显降低，ＣＡ＿１区更明显。再灌注５ｍｉｎ至１ｈ，海马亚区ＡｃｈＥ活性明显升高。再灌注４８ｈ后，光镜下见海马ＣＡ＿１区神经元出现缺血性改变，提示：（１）再灌注后，ＧＡＢＡ含量减少、海马内源性抑制降低可能是ＣＡ＿１区ＤＮＤ的因素之一。（２）再灌注早期ＡｃｈＥ活性升高，提示Ａｃｈ代谢变化可能和ＤＮＤ有关。（３）再灌注后ＧＡＢＡ和ＡｃｈＥ在海马各亚区的明显改变，提示ＣＡ＿１区选择性易损和递质代谢变化密切相关，而ＣＡ＿１区神经元本身的生理生化特性也起着重要的作用。     

粉防己碱对戊四唑致(癎)大鼠皮层电图和海马超微结构的影响

目的:探讨钙拮抗剂粉防己碱(tetradrine,Tet)对戊四唑(Pentylentetrazol,PTZ)诱导的大鼠癫(癎)模型的作用.方法:健康SD大鼠24只,随机分为4组,对照组和Tet 3个剂量组(15 mg/kg,30 mg/kg,60 mg/kg)各6只.观察大鼠腹腔注射PTZ前后癫(癎)发作的情况,按Racine分级标准分级,同时记录皮层电图(ECoG),观察PTZ注射后到出现(癎)样放电的潜伏期及1 h内(癎)样放电累加的持续时间.电镜观察海马神经元超微结构的改变.结果:对照组给PTZ后均出现癫(癎)发作,程度均为5级,Tet组发作程度明显减轻.ECoG上出现(癎)样放电的潜伏期延长,(癎)样放电在1 h中的持续时间缩短.同时,Tet也能明显减轻PTZ致(癎)大鼠海马CA1区锥体细胞线粒体的损伤程度.结论:Tet对PTZ诱导的癫(癎)大鼠的发作有明显的对抗作用,对海马锥体神经元的拟伤具有保护作用.     

咖啡因对大鼠海马神经元形态学的影响

目的观察不同剂量咖啡因对大鼠海马神经元形态结构的影响。方法 30只雌性SD大鼠随机分成对照组、低剂量组和高剂量组,每天分别给予生理盐水、20mg/kg和60mg/kg咖啡因灌胃处理,连续18d。运用HE染色、尼氏染色和电镜进行观察。结果HE染色未见明显异常;尼氏染色显示,实验组尼氏体较对照组显著增多(P0.05),高剂量组尼氏体较低剂量组有所减少;电镜观察发现,实验组海马神经元内游离核糖体密度较对照组明显增高,高剂量组海马部分神经元局部内质网轻度扩张、线粒体肿胀、神经髓鞘松懈受损。结论咖啡因能够使大鼠尼氏体数量增加,但过高剂量会造成海马神经元超微结构损坏。     

睫状神经营养因子对严重烫伤大鼠纹状体及海马 NOS 阳性神经元的影响

目的：观察大鼠严重烫伤后纹状体和海马ＮＯＳ阳性神经元数目和阳性反应面积的变化及睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）对其的影响。方法：应用ＮＡＤＰＨ－ｄ酶组织化学的方法。结果：大鼠体表烫伤后３天,纹状体ＮＯＳ阳性神经元数目明显增加,梁色呈强阳性,阳性反应面积增加。海马ＮＯＳ阳性神经元数变化不明显,仅见阳性反应面积增加,睫状神经营养因子可降低纹状体的ＮＯＳ阳性神经元数目、阳性反应面积,ＮＯＳ阳性神经元着色较淡     

谷氨酸对大鼠海马兴奋毒性作用的形态学研究

目的：为明确谷氨酸对神经细胞有兴奋性和毒性作用。方法：选用具有较多N－甲基D－天门冬氨酸（NMDA）受体的海马作为研究对象,选用SD大鼠,给予L－谷氨酸钠盐（MSG）皮下注射,在不同的时间内观察大鼠的表现和其海马神经细胞受损的形态学的改变。结果：发现大鼠的早期行为表现较为兴奋,而后随时间的延长表现为迟钝。在光镜和电镜下,神经细胞早期为水肿,后期为水肿明显和细胞器的破坏直至细胞的因缩,损伤主要表现在CA1区。结论：提示边缘系统的海马结构易受谷氨酸的影响,同时也表明了谷氨酸对神经细胞的兴奋毒性作用,可为临床药物和食物添加剂的运用提供一定的依据。     

老年学习记忆减退大鼠海马GABA能神经元树突内线粒体的变化

为进一步探讨ＧＡＢＡ 能神经元与老年学习记忆减退的关系，本研究以老年学习记忆减退大鼠为模型，用免疫电镜结合体视学方法观察了老年学习记忆减退大鼠海马ＣＡ１ 区放射 分子层的ＧＡＢＡ 能神经元树突内线粒体的改变。结果显示，线粒体的面数密度在老年学习记忆损害组明显小于青年组和老年正常组（Ｐ＜ ０．０１）；体密度的绝对值有所减少，但无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。此外，衰老时较小的树突内线粒体的密度增大，老年学习记忆正常组小直径树突内线粒体面数密度的增加较老年学习记忆损害组更明显。结果提示，衰老过程中，ＧＡＢＡ 阳性树突内线粒体的数目减少，单个线粒体的体积代偿性增大。老年学习记忆减退时，树突结构和功能的内源性代偿能力下降，可能处于一种失代偿状态。     

慢性给予应激水平的糖皮质激素对海马神经元和突触的影响

为探讨慢性给予应激水平糖皮质激素对大鼠海马的影响,在实验组大鼠饮用水中加入皮质醇,使动物皮质醇吸收量达每日10mg/kg,从而引起与应激动物相同的皮质醇水平,共21d,然后用免疫组织化学和免疫印迹法观察海马内caspase-3、synap-tophysin(Syn)和neurogranin(Ng)表达的变化。结果显示:(1)实验组大鼠海马结构中可见较多细胞出现核固缩的病理改变,但未见或偶见极个别caspase-3免疫反应阳性细胞;(2)与正常组Syn表达水平(1.2197±0.3443)和Ng表达水平(1.9330±0.3450)相比,实验组大鼠海马结构中Syn和Ng的表达明显减少(P<0.05),其表达水平分别为0.5512±0.0540和1.3375±0.3317。上述结果表明慢性给予应激水平的糖皮质激素可损伤海马功能,引起不依赖caspase-3的海马神经细胞退变、使海马突触数量减少以及改变海马突触效能可能是其作用的部分机制。     

海马CA1和CA3区锥体细胞胞体上GABA能突触数量的差异(英文)

脑缺血再灌流导致海马CA1锥体细胞溃变而CA3神经元依然存活，这种选择性损伤的机制尚不清楚。两区间抑制性神经成分的差异可能是原因之一。本文用免疫细胞化学方法研究了上述假设的形态基础。在光镜下，CA1和CA3区每个锥体细胞环胞体的GABA阳性终末数分别是7.02±2.06和10.10±3.02（P＜0.001），每单位膜长度上的阳性终末数CA1也较CA3有意义的少。电镜下，GABA能终末与锥体细胞胞体形成对称性突触，CA1和CA3区锥体细胞的环胞体GABA阳性突触数分别是6.36±1.59和10.68±2.28（P＜0.01）。胞体膜被GABA能突触所覆盖的面分比也有显著差异（CA3=13.9±3.36％，CA1=10.9±5.06％，P＜0.001）。结果表明CA1神经元胞体较CA3神经元受到较少的GABA能支配。此点可能在脑缺血后CA1细胞较CA3细胞易损害机制中发挥作用。     

脑缺血后大鼠海马及纹状体一氧化氮合酶阳性神经元的变化

夹闭大鼠双侧颈总动脉２ｈ后，用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶反应观察了大鼠海马及纹状体一氧化氮合酶阳性神经元的变化及神经损伤。结果显示：在缺血损伤严重的ＣＡ１区及齿状回一氧化氮合酶阳性神经元较正常动物明显增多并深染，而在同样严重受损的纹状体一氧化氮合酶阳性神经元较正常者明显减少。结合文献及本结果提示：一氧化氮在脑缺血所致的神经损伤中起着重要作用，而海马、纹状体的一氧化氮合酶阳性神经元本身可能具有不同的抗伤害机制．     

GABA样神经元和GABA能三叉一丘脑投射神经元在三叉神经感觉核簇的分布及形态学特征

用直接抗GABA免疫组化方法和与HRP逆行追踪相结合的双标记法在光镜下观察了GABA样神经元和GABA能丘脑投射神经元在大鼠三又神经惑觉核簇的分布和形态特征。结果显示:GABA样神经元广泛存在于三叉神经感觉核簇的各亚核中,但在每一亚核和尾侧亚核的各层,其分布状况和细胞形态特征各异。在尾侧亚孩,GABA样神经元的分布密度为Ⅰ、Ⅱ层>Ⅳ、Ⅴ层>Ⅲ层;在极间亚核,GABA样细胞分为背、腹二群,以腹侧群为主;在吻侧亚核,分为背内侧群、内侧带群和腹外侧群三群;在感觉主核分为背内侧群和腹外侧群;在三叉上核分为吻内侧群和尾外侧群。同样,本文首次发现,GABA能丘脑投射神经元也广泛存在于三叉神经感觉核簇各核中,而且在各亚核及各层中其分布密度及细胞形态也不相同。在尾侧亚核,双标细胞占38.6%,主要分布在Ⅰ、Ⅱ层,具有较长附突;在极间亚核,双标细胞占40%,主要分布在腹侧群;在吻侧亚核中仅在腹侧群有少量小的双标细胞;在感觉主核,双标细胞占20-30%,主要集中在背内侧群,腹外侧群仅有少量;在三叉上核,双标细胞仅出现在尾外侧群。结果提示:GABA对三叉神经感觉核簇中的各种深浅感觉功能的传导和整合可产生广泛的抑制影响,但其影响形式、程度和机制可能各不相同。     

大鼠海马CA1区酶组织化学研究

本文用组织化学方法,选择能反映神经组织糖代谢三个途径的关键酸及碱性磷酸酶,对正常SD系大鼠海马酶活性进行半定量研究.结果CA1区锥体层琥珀酸脱氢酶(SDH)及细胞色素氧化酶(CCO)呈轻度反应,葡萄糖-6一磷酸脱氢酶(G—6—PD)及乳酸脱氢酶(LDH)呈强阳性.腔隙分子层LDH、G—6—PD呈轻度活性,CCO、SDH呈强阳性.CA1区锥体层碱性磷酸酶(AKP)活性最弱.讨论了酶活性不同与记忆的关系及临床意义.     

毁损Meynert基底核造成皮层及海马的乙酰胆硷酯酶减少行为学和形态学研究(英文)

本研究通过毁损Ｍ ｅｙｎｅｒｔ基底核（ｎｂＭ ）建立Ａｌｚｈｅｉｍ ｅｒ氏病（ＡＤ）动物模型。用乙酰胆硷酯酶（ＡＣｈＥ）细胞化学方法对模型动物大脑皮层及海马进行反应，评价ＡＣｈＥ 与ＡＤ 之间可能存在的关系。将４８ 只大鼠分成对照组及实验组，用Ｍｏｒｒｉｓ 水迷宫（ＭＷ Ｍ ）测定行为学变化。在实验组，以局部注射海人藻酸的方法毁损ｎｂＭ 。术后７ ｄ，再次检测其行为学变化。存活不同时间后，用ＡＣｈＥ 酶细胞化学技术染色脑切片，用图象分析系统测算海马层ＡＣｈＥ阳性神经元及纤维的体积密度。结果显示，毁损ｎｂＭ 鼠皮质及海马的ＡＣｈＥ阳性神经元纤维明显减少，其特征为片层结构缺失。这些变化在毁损ｎｂＭ 鼠３～４ 个月及９～１０ 个月组间无显著差异。本研究证明，毁损ｎｂＭ 出现的ＡＣｈＥ减少与ＡＤ 的发生关系密切，且与同一动物模型β 淀粉样蛋白及τ蛋白过度表达在时间上一致，后者是ＡＤ 病人的特征。