同型半胱氨酸诱导离体培养的血管内皮细胞凋亡

目的 :了解同型半胱氨酸 (HCY)对血管内皮细胞 (VEC)凋亡的形响。方法 :用不同浓度的HCY处理离体培养的大鼠VEC24h ,用末端脱氧核苷酸转移酶 (TdT)介导的荧光素d -uTP缺口末端标记方法 (TUNEL)原位检测细胞凋亡 ,以TUNEL指数 (TUNELI)表示凋亡。结果 :正常对照培养条件下 (2 %FBS)VEC经历低频凋亡 ,其TUNELI为5.8±2.5。培基中加入浓度为0.1mmol/L的HCY ,凋亡细胞数开始增加 (TUNELI为12.6±4.4) ,但差异无显著性 (与对照比P>0.05) ;培基中HCY浓度为0.5mmol/L时 ,凋亡细胞明显增加 (TUNELI为22.4±6.4 ,与对照比 ,P<0.05) ,当培基中HCY浓度增加到1.0mmol/L时 ,将近一半的VEC经历凋亡性细胞死亡 (TUNELI为44.5±11.2 ,与0.1mmol/LHCY组比 ,P<0.05)。结论 :HCY浓度依赖性诱导VEC凋亡 ,VEC凋亡异常可能是动脉粥样硬化 (AS)发生的重要原因之一。     

牛磺酸对同型半胱氨酸诱导血管内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨牛磺酸对同型半胱氨酸引起的血管内皮细胞凋亡的影响。方法体外培养的人脐静脉内皮细胞,分为空白对照组、同型半胱氨酸组（0.5 mmol／L、1.0 mmol／L、1.5 mmol／L ）及牛磺酸＋同型半胱氨酸组（牛磺酸20 mmol／L＋同型半胱氨酸1.0 mmol／L）,48 h后以TUNEL法及流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果同型半胱氨酸明显增加内皮细胞的凋亡率,而牛磺酸能拮抗同型半胱氨酸引起内皮细胞的凋亡作用。结论牛磺酸对同型半胱氨酸引起的血管内皮细胞凋亡有拮抗作用。     

同型半胱氨酸对大鼠脑微血管内皮细胞抑制的实验研究

目的通过培养的大鼠脑微血管内皮细胞(BMVEC),研究不同浓度的同型半胱氨酸(Hcy)对内皮细胞损伤的影响。方法将培养的BMVEC分成两大组,将其与不同浓度的Hcy(50、200μmol/L和1、2 mmol/L)和(或)无CuSO4(4μmol/L)共同培养18 h,分别利用噻唑蓝、细胞苏木精-伊红染色和流式细胞仪技术观察BMVEC细胞的生长及凋亡情况。结果BMVEC在CuSO4的协同下与不同浓度的Hcy培养18 h后,细胞活力A值呈现剂量依赖性的降低,超过1 mmol/L的Hcy对BMVEC已经形成了显著的抑制和毒性效应,滞留于G1期的细胞比例增加。结论高浓度的Hcy具有内皮细胞毒作用,可以抑制细胞的生长。     

同型半胱氨酸诱导血管内皮细胞凋亡及对p53、Fas表达的影响

目的:通过血管内皮细胞的培养,了解同型半胱氨酸(Hcy)对内皮细胞的损伤程度,初步探讨诱导血管内皮细胞凋亡的可能途径.方法:用不同浓度的Hcy处理内皮细胞后,应用透射电子显微镜技术以及Annexin V/PI染色加流式细胞术了解细胞凋亡状态,同时采用流式细胞仪检测细胞Fas以及p53的表达情况.结果:0.5 mmol/L和5 mmol/L的Hcy均能促进细胞凋亡,Hcy能促进细胞p53的表达,而且随着Hcy浓度的升高,其表达也逐步增强,不同浓度Hcy处理后各组细胞Fas蛋白的表达差异无显著性.结论:Hcy能诱导血管内皮细胞凋亡,这种作用可能与其促进p53表达有关.     

同型半胱氨酸与血管内皮细胞功能的研究进展

同型半胱氨酸 (Homocysteine,Hcy)已被证实是动脉硬化 (Atherothrombosis,AS)的独立危险因素。目前已知Hcy是通过损害内皮功能 ,促进血小板激活 ,诱导平滑肌细胞增殖 ,促发脂质过氧化及增加肝细胞胆固醇合成等途径诱导AS的发生[1 ] 。通过近年来国内外关于Hcy致动脉硬化的研究提示 :Hcy影响血管内皮细胞损伤和功能失调导致动脉硬化的产生可能通过下列几点 :①Hcy可能通过氧化应激机制导致内皮细胞出现坏死、凋亡等损伤改变 ,影响内皮细胞功能导致AS发生 ;②特异性抑制谷胱甘肽过氧化物酶 ,造成血管内皮损伤 ;③Hcy与金属离子、氧自由…     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞凋亡和核因子-κB活化的影响

目的:观察同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞株ECV-304细胞凋亡及核因子-κB (NF-κB)活化的影响,以探讨Hcy致动脉粥样硬化的可能机制。方法:将不同浓度的Hcy与ECV-304细胞体外共培养不同时间,PI单染法检测细胞凋亡,免疫组织化学染色法检测细胞内Bcl-2的表达及NF-κB的细胞内定位,流式细胞术检测细胞核NF-κB的表达。结果:Hcy可诱导细胞凋亡,凋亡指数随Hcy浓度增大和作用时间的延长而逐渐升高;10.0 mmol/L Hcy作用24 h后Bcl-2表达阳性细胞的均数显著低于1.0、5.0 mmol/L组和对照组(P < 0.01);随Hcy浓度的升高,NF-κB由细胞质转位至细胞核,5 mmol/L Hcy作用0.5、1、2 h,NF-κB的核内表达率分别为(16.76±2.55)%、(12.91±1.38)%、(14.15±1.74)%。结论:Hcy可下调抗凋亡基因Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡,且存在剂量效应关系。Hcy可活化NF-κB,且呈现剂量依赖性。     

同型半胱氨酸对内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的　探讨同型半胱氨酸 (HCY)对内皮细胞中单核细胞趋化蛋白 1 (MCP 1 )表达的影响。方法　使人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)暴露于不同浓度的HCY ,孵育 8h后 ,用免疫细胞化学和细胞ELISA方法检测其单核细胞MCP 1的表达。结果　培养的HUVECs能表达单核细胞MCP 1。免疫细胞化学显示 ,0 .1mmol·L- 1 、0 .5mmol·L- 1 和 1mmol·L- 1 HCY组单核细胞MCP 1表达的平均吸光度值分别为 0 .0 789± 0 .0 0 81、0 .0 948± 0 .0 383和 0 .1 1 0 7±0 .0 1 71 ,均显著高于对照组 (0 .0 4 1 1± 0 .0 0 4 6 ,P <0 .0 1 )。细胞ELISA显示 ,上述各实验组单核细胞MCP 1表达的吸光度值分别为 0 .0 4 4 2± 0 .0 0 31、0 .0 4 94± 0 .0 0 39和 0 .0 51 8± 0 .0 0 2 8,对照组为 0 .0 396± 0 .0 0 53 ,方差分析表明 ,各组间均存在显著性差异 (F =58.38,P <0 .0 1 )。结论　培养的HUVECs能低水平表达单核细胞MCP 1 ,HCY能诱导其表达较高水平的单核细胞MCP 1。     

JNK信号通路在同型半胱氧酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的研究JNK信号通路在同型半胱氨酸（Hcy）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡中的作用。方法在人脐静脉内皮细胞培养基中加入不同浓度Hcy培养24h，以及加入SP600125预处理再加入10．0mmol／L的Hcy作用2h。用TUNEL法检测HUVECs凋亡情况。用Western-Blot法检测不同组HUVECs表达P-JNK的蛋白含量。结果用0．3mmol／L的Hcy干预后，HUVECs凋亡和JNK表达开始高于对照组（均P〈0．01）。100mmol／L最显著（均P〈0．01），呈浓度依赖关系；而SP600125两种浓度对HUVECs凋亡和JNK表达均有抑制作用，其中10．0umol／L更显著（P〈0．01）。结论Hey能够诱导HUVECs凋亡和上调JNK的表达，而SP600125具有明显的抑制作用，这可能是其促进动脉粥样硬化形成的重要机制之一。     

血清胆红素与动脉粥样硬化的关系初探

目的 针对血清胆红素的强抗氧化性质，研究其与动脉粥样硬化（AS）的关系。方法 采用重氮盐终点法测定血清胆红素，酶法测定总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）及高密度脂蛋白胆固醇（HDLc），低密度脂蛋白胆固醇（LDLc）则通过估计法（公式为LDL＝决胆固醇－甘油三酯／5＋高密度脂蛋白胆固醇）计算获得。结果 冠心病患者的决胆红素、直拉胆红素及间接胆红素均低于对照组（P＜0.05），脑梗塞患者的总胆红素、间接胆红素低于对照组（P＜0.05），其他疾病组这三项指标与对照组比较无显著性差异（P＞0.05）。结论 血清胆红素浓度低下引起体内抗氧化活性不同程度减弱，可能会促使脂质尤其是低密度脂蛋白（LDL）氧化修饰增多，导致动脉粥样硬化的发生和发展。     

糖化低密度脂蛋白与糖尿病合并颈动脉粥样硬化的关系

目的　观察糖化低密度脂蛋白 (Gly -LDL)与糖尿病合并颈动脉粥样硬化 (CAS)的关系。方法通过询问病史、血糖测定和颈动脉复式超声检查确诊 2型糖尿病 (2型DM)合并CAS病人 32例。对照组 30例。采用氨基苯硼酸琼脂糖凝胶亲合层析法测定血浆Gly -LDL含量。结果　 2型DM合并CAS组Gly -LDL水平为(8 89± 2 5 0 ) %。对照组Gly -LDL水平为 (4 0 5± 1 0 8) %。 2型DM合并CAS组Gly -LDL水平显著高于对照组(P <0 0 0 1) ,且氧化修饰低密度脂蛋白 (Ox -LDL)与Gly -LDL含量呈正相关 (P <0 0 0 1) ,颈动脉狭窄率与Gly-LDL含量呈正相关 (P <0 0 0 1)。结论　Gly -LDL水平与 2型DM病人动脉粥样硬化 (AS)形成有密切关系。糖化促进氧化是 2型DM病人发生AS的重要发病机制之一。Gly -LDL水平可反映CAS的程度 ,与AS的发展有关     

氧化修饰低密度脂蛋白与颈动脉粥样硬化程度的关系

目的观察氧化修饰低密度脂蛋白(Ox-LDL)与颈动脉粥样硬化(CAS)程度的关系。方法通过复式超声确诊CAS患者78例,并根据CAS程度将患者分为轻、重两组。对照组32例。采用硫代巴比妥酸反应物法测定Ox-LDL含量。结果CAS组Ox-LDL含量为(1.46±0.46)nmol/ml。CAS轻组Ox-LDL含量为(1.30±0.37)nmol/ml。CAS重组Ox-LDL含量为(1.88±0.60)nmol/ml。对照组Ox-LDL含量为(0.39±0.25)nmol/m1。CAS组Ox-LDL含量显著高于对照组(P＜0.01)。CAS重组Ox-LDL含量显著高于CAS轻组(P＜0.01)。结论Ox-LDL水平可反映CAS的程度。     

大蒜素对高半胱氨酸所致内皮细胞损伤的保护作用

目的：研究大蒜素对高半胱氨酸所致内皮细胞损伤的保护作用。方法：将培养的内皮细胞分成高半胱氨酸组（模型对照组）、大蒜素大剂量组、大蒜素中剂量组、大蒜素小剂量组、空白对照组5组,分别加不同的培养液,并于加药后的12、24、36?h取出上清液测乳酸脱氢酶（LDH）;另外采用MTT比色法观察细胞的存活率。结果：大蒜素小、中剂量组显示出对内皮细胞的保护作用：大蒜素小、中剂量组与模型对照组比较均能明显降低LDH含量（P＜0.05）;大蒜素大剂量组在36?h拮抗Hcy损害作用降低,跟模型对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。这一结果跟MTT测试结果吻合：小、中剂量的大蒜素组光吸收值A较模型对照组明显升高（P＜0.01）,大蒜素大剂量组A值跟模型对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：大蒜素小、中剂量可明显降低高半胱氨酸对内皮细胞的损伤,有效防治高半胱氨酸血症。     

饮食脂肪对低密度脂蛋白氧化修饰的影响

研究不同饮食脂肪对人体低密度脂蛋白（ＬＤＬ）氧化修饰的影响，结果表明：食用富含亚油酸的饮食后，ＬＤＬ氧化修饰过程较食用富含油酸的饮食加快，氧化速率分别为１６．４０±０．８５和１３．１６±０．６８ｎｍｏｌ·ｍｇ－１蛋白．ｍｉｎ－１（Ｐ＜０．０２），共轭烯键浓度分别为４１６．２４±１２．６０和３７９．２９±１１．０６ｎｍｏｌ·ｍｇ－１（Ｐ＜０．０５）；氧化率和共轭烯键浓度与ＬＤＬ亚油酸含量呈显著正相关．结果提示食用含亚油酸丰富的油脂同时，补充足量抗氧化剂对抑制ＬＤＬ氧化、防治动脉粥样硬化具有重要意义．     

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞表达ICAM-2及与树突状细胞粘附的影响

目的 探讨同型半胱氨酸（Hcy）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分泌和表达细胞间粘附分子-2（1-CAM-2）以及内皮细胞与树突状细胞（DC）粘附的影响。方法 在人脐静脉内皮细胞培养基中加入浓度为0．5mmol／L的Hey作用不同时间，以及加入不同浓度的Hey作用24h。用ELISA法检测内皮细胞培养基中HU-VECs分泌ICAM-2的蛋白含量，用Western blot法检测HUVECs表达ICAM-2的蛋白含量，用分子探针标记的DC与HUVECs共孵育，共聚焦显微镜下计数粘附于HUVECs的DC数量，以检测Hey对HUVECs与DC粘附的影响。结果用0．5mmol／L Hey干预后，HUVECs分泌ICAM-2蛋白在12h开始高于空白组（P〈0．05），24h和48h均增加显著（均P〈0．01）；而ICAM-2蛋白的表达在6h开始高于空白组（P〈0．05），24h达峰值（P〈0．01），48h下降显著，且与空白组相比无统计学差异。用不同浓度的Hey干预24h后，ICAM-2蛋白的分泌和表达及HUVECs与Dc粘附均呈剂量依赖性增加，当Hey浓度高于0．5mmol／L时增加更显著。结论 Hey能刺激HUVECs分泌和表达ICAM-2蛋白，从而促进HUVECs与DC的粘附，这可能是其诱导动脉粥样硬化早期形成的重要机制之一。     

金属硫蛋白、同型半胱氨酸对血管内皮细胞的作用

目的:观察金属硫蛋白(metallothionein MT)对同型半胱氨酸(homocysteine Hcy)损伤血管内皮细胞的保护作用及机制。方法:培养血管内皮细胞,培养液中分别加入Hcy及Hcy+MT孵育血管内皮细胞,自动生化分析仪测培养液乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,硫代巴比妥酸法测细胞丙二醛(MDA)含量,化学比色方法测超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果:与对照组相比,Hcy组细胞LDH及蛋白漏出增加,细胞MDA含量明显升高(P<0.01);外源性给予MT(10-9mol/L,5×10-9mol/L,10-8mol/L)呈浓度依赖性地抑制Hcy引起的血管内皮细胞损伤,与Hcy组比,LDH漏出分别降低16.3%(P<0.05)、23.5%(P<0.01)和37.2%(P<0.01)。MDA含量分别减少15.8%(P<0.05)、21.1%(P<0.01)和36.8%(P<0.01)。结论:MT拮抗Hcy对血管内皮细胞的脂质过氧化损伤。     

高脂对家兔免疫功能的影响

目的探讨高脂喂养对家兔血脂水平及动脉粥样硬化的影响。方法将23只家兔随机分为二组:A组为高脂喂养组(n=20),B组为正常饲料喂养组(n=3);为对照组。分别于高脂喂养前、喂养后2w、4w、8w和12w取家兔耳缘静脉取血各1次,行血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白测定。结果A组高脂喂养2w后血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平较高脂喂养前及对照组均明显升高(P0.01)。而4w后高密度脂蛋白也明显升高(P0.01)。结论家兔血脂水平在高脂喂养2-4w即达峰值,并开始下降,而其促动脉粥样硬化作用将延续。