决明子水提液对大鼠肝脏CYP450酶的影响

该文研究决明子水提液对大鼠肝脏CYP450酶酶活性、mRNA及蛋白表达水平的影响。取SD大鼠,口服灌胃受试药物后,处死,用冰冷生理盐水灌流肝脏,提取大鼠肝脏微粒体、肝脏总RNA和总蛋白,采用Cocktail体外孵育法结合液质联用(LCMS)技术对大鼠肝脏中CYP1A2,2B1,2C11,2D2,2E1,3A1各亚酶的酶活性进行测定,并应用荧光定量PCR技术和Western blot对上述亚型的mRNA和蛋白表达水平进行检测。结果表明,酶活性方面,决明子水提液组与空白组比较可明显诱导CYP1A2,2B1,2C11,2D2,2E1,3A1的酶活性,其中决明子低剂量组对CYP2D2有明显的抑制作用,中、高剂量组对CYP2D2有明显的诱导作用,且都呈剂量依赖性增加,但对CYP3A1的诱导不呈剂量依赖性;mRNA表达方面,决明子水提液对CYP1A2,2C11,2D2,2E1mRNA的表达具有显著诱导作用,其中对CYP1A2,2D2,2E1诱导作用呈剂量依赖性,与酶活性水平具有一致性,对CYP2B1,3A1没有明显作用;蛋白表达方面,决明子水提液对CYP2C11,2E1的表达也具有诱导作用,但没有统计学差异。决明子水提液对CYP450同工酶不同程度诱导或抑制作用,特别是对于CYP2C11,2E1亚型酶,酶活性与mRNA,蛋白表达水平具有一致性,提示当与这些酶底物合并用药时,尤其是与CYP2C11,2E1代谢有关的药物合用时,应充分考虑到潜在的有益和不利的药物相互作用。     

苍术苷A对小鼠CYP450主要亚型表达的影响

目的研究苍术苷A对细胞色素P450(CYP450)主要亚型mRNA及蛋白表达水平的影响。方法将C57BL/6小鼠随机分为3组,正常对照组按体质量灌胃给予相当量0.9%的生理盐水、苍术苷A组(4 mg/kg)和苯巴比妥组(80 mg/kg)按相应剂量灌胃给药,每24 h 1次,连续2周。提取肝脏总RNA,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测苍术苷A对CYP450主要亚型mRNA表达的影响;制备肝微粒体,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测苍术苷A对C57BL/6小鼠肝脏CYP450主要亚型蛋白表达的影响。结果 RT-PCR结果显示,苍术苷A对小鼠Cyp1a2的mRNA表达有显著上调作用。Western blot结果显示,苍术苷A对CYP1A2、CYP2C和CYP2E1蛋白表达有显著诱导作用。结论苍术苷A能显著诱导小鼠Cyp1a2的mRNA表达,和CYP1A2、CYP2C和CYP2E1蛋白表达。     

三七总皂苷对大鼠肝脏药物代谢酶酶活性、mRNA及蛋白表达的影响

研究三七总皂苷对大鼠肝脏药物代谢酶酶活性、mRNA及蛋白表达的影响。将Wistar雄性大鼠随机分为9组,给予受试药后,提取肝脏微粒体,肝脏总RNA和总蛋白,分别采用底物探针法、荧光定量PCR技术和Western blot,检测三七总皂苷对肝脏药物代谢酶相关亚型酶活性、mRNA和蛋白质表达3个水平的调节作用。实验的结果是三七总皂苷能显著诱导CYP1A2和CYP2E1酶活性和mRNA表达,同时对CYP2E1的蛋白表达水平也有显著诱导作用;三七总皂苷显著诱导CYP3A mRNA表达,但对CYP3A酶活性水平无明显的影响;三七总皂苷对CYP1A1和CYP2B mRNA表达和酶活性均无明显影响。三七总皂苷对不同的P450亚型的调节作用具有选择性,主要的调节亚型是CYP1A2和CYP2E1,临床应用时,尤其是与CYP1A2和CYP2E1代谢有关药物合用时,应充分考虑到可能产生的药物相互作用以避免潜在的不良反应和毒副作用,同时对CYP2E1的诱导作用是否与人参皂苷清除自由基作用有关值得进一步研究。     

石榴叶鞣质与菠萝叶酚对哺乳期小鼠生长的比较

目的:观察石榴叶鞣质和菠萝叶酚通过母乳对哺乳期小鼠生长的影响。方法:给母鼠灌胃不同剂量的药物,观察新生小鼠的一般状况、体质量、尾长及脏器系数肝脏相关脂代谢调控因子的表达。结果:石榴叶鞣质和菠萝叶酚均可以通过母乳明显影响新生小鼠的生长发育,其中石榴叶鞣质的作用强于菠萝叶酚,同时可以明显下调新生小鼠肝脏的脂代谢相关酶的表达。结论:石榴叶鞣质和菠萝叶酚可以通过母乳影响新生小鼠的生长发育,其作用与影响肝脏脂代谢酶表达有关。哺乳期服用该药需引起注意。其临床意义尚有待于深入研究。     

丹皮酚对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶含量及活性的影响

目的:考察丹皮酚对大鼠肝微粒体的蛋白含量、CYP450酶总量和主要CYP450酶亚型(CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4和CYP2C19)活性的影响。方法:大鼠灌胃给予丹皮酚(100 mg/(kg·d)-1,连续7 d,测定其肝微粒体蛋白含量、CYP450蛋白含量以及CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4及CYP2C19活性。结果与空白对照组相比,丹皮酚给药组大鼠肝微粒体蛋白含量及肝微粒体CYP450含量无明显差异(P>0.05)。丹皮酚给药后,给药组大鼠的平均CYP2D6活性是对照组的2倍;而二两组之间CYP1A2、CYP3A4和CYP2C19的活性相当。结论丹皮酚对大鼠CYP2D6活性有一定诱导作用,对CYP1A2、CYP3A4和CYP2C19的活性没有影响。     

黄药子与甘草配伍对大鼠肝脏CYP_3A_1、CYP_2E_1 mRNA表达的影响

目的：研究单用黄药子和黄药子配伍甘草后对大鼠肝组织CYP3A1、CYP2E1 mRNA表达的影响。方法：采用实时定量反转录-聚合酶链反应（Quantitive realtime RT-PCR）定量分析大鼠给药后CYP450亚型CYP3A1、CYP2E1 mRNA表达水平变化。结果：黄药子可明显诱导CYP3A1、CYP2E1 mRNA表达,黄药子配伍甘草后该表达受到抑制。结论：甘草可抑制黄药子引起的大鼠肝脏组织CYP3A1和CYP2E1表达,有减轻其毒性作用。     

半夏乌头合用对大鼠肝脏CYP450的调节作用

目的：为了阐明基于药物代谢酶的中药产生相互作用的机制,选取乌头、半夏作为研究对象。研究二者合用对主要药物代谢酶CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1/2在酶活性、mRNA水平和蛋白质水平的影响。方法：采用高效液相色谱法测定CYP1A2、CYP2E1活性;采用紫外可见分光光度法测定CYP3A1/2活性;分别采用RT-PCR和WesternBlot方法评价药物对CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1、CYP3A2mRNA及蛋白水平的影响。结果：乌头、半夏合用后CYP1A2、CYP3A1/2的酶活性下降,CYP2E1的酶活性却呈现明显的诱导;WesternBlot检测显示CYP1A2的蛋白质表达水平下降。结论：乌头、半夏合用后抑制CYP1A2、CYP3A1酶活性,酶活性下降可能主要与转录后调节降低其蛋白水平来实现。     

酸枣仁、远志和桔梗水提液对大鼠肝CYP450酶活性 及mRNA表达的调控作用

目的:研究中药酸枣仁、远志和桔梗水提液对P450同工酶在酶活性及mRNA水平的调控作用。方法:大鼠ig给予酸枣仁、远志和桔梗水提液7 d后取肝脏称重并制备肝微粒体,采用紫外分光光度法测定大鼠肝微粒体细胞色素b5(Cytb5),P450的含量及红霉素N-脱甲基酶(ERD)的活性,高效液相色谱法测定非那西汀O-脱乙基酶(PHD)的活性和对硝基苯酚羟化酶(pNPH),采用RT-PCR技术检测大鼠肝中5种P450同工酶CYP1A1,CYP1A2,CYP2E1,CYP3A1及CYP3A2mRNA的表达。结果:与对照组比较,各给药组大鼠肝指数无显著变化;酸枣仁组显著降低Cytb5含量和ERD活性,增加pNPH活性,远志组显著升高pNPH,极显著降低ERD活性,桔梗组显著降低CYP450含量,并明显升高PHD和pNPH活性;在mRNA水平上,各组的CYP1A1基因均未能检出;酸枣仁组诱导CYP2E1,CYP3A1和CYP3A2基因表达,远志组抑制CYP3A1,诱导CYP3A2的mRNA表达,桔梗组诱导CYP1A2,CYP2E1,CYP3A2的mRNA表达;酸枣仁的CYP2E1、桔梗的CYP1A2和CYP2E1mRNA水平基本与酶活性水平相平行。结论:酸枣仁、远志水提液诱导CYP2E1的活性;桔梗水提液诱导CYP1A2,CYP2E1的活性,酶活性变化可能主要通过影响基因转录来实现。提示若酸枣仁和远志与经CYP2E1和CYP3A代谢的药物同用,桔梗若与经CYP1A2,CYP2E1,CYP3A代谢的药物同服,有可能会影响这些药物的临床疗效,临床用药时应慎重考虑。     

黄药子与当归配伍对大鼠肝脏CYP1A2、CYP2E1基因mRNA表达的影响

目的：观察单用黄药子和黄药子配伍当归后对大鼠肝CYP1A2、CYP2E1基因mRNA表达的影响。方法：采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法测定大鼠肝CYP1A2、CYP2E1基因mRNA在给药后的变化。结果：黄药子组明显诱导CYP1A2、CYP2E1基因mRNA表达，黄药子配伍当归后mRNA表达受到抑制。结论：黄药子诱导P450酶系CYP1A2和CYP2E1mRNA的表达，导致肝中毒。当归配伍黄药子后抑制mRNA表达拮抗肝中毒。     

丹参酮ⅡA对大鼠细胞色素P450酶的诱导作用

目的 研究丹参酮ⅡA对大鼠细胞色素P450酶的诱导作用.方法 丹参酮ⅡA 7、20、60、180 mg/(kg·d)4个剂量组,雄性SD大鼠连续ig 7 d,取肝脏组织,应用体外"coclctail"方法 ,反转录-聚合酶链反应,免疫印迹杂交方法 分别检测CYP450酶活性、基因表达和蛋白表达的变化.结果 丹参百同ⅡA能显著诱导CYP1A2及CYP2E1的活性以及基因、蛋白表达,且呈剂量依赖性;高剂量组能增强CYP2C19的活性,但对基因、蛋白表达没有影响;对包括CYP3A1在内的其他亚型没有影响.结论 丹参酮ⅡA对大鼠多种CYP450亚型有诱导作用.     

参芎葡萄糖注射液的丹参组分对小鼠细胞色素P450的影响

目的:考察参芎葡萄糖注射液中的主要组分丹参(Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma,SM)水提取物对小鼠细胞色素P450酶(CYPs)主要亚型(CYP1A2,CYP2D22,CYP3A11和CYP2E1)的影响。方法:昆明种雄性小鼠分为5组,分别为正常组,苯巴比妥组,丹参水提取物组(3.9 mg·kg-1·d-1),丹参低、高剂量组(2.6,5.2 mg·kg-1·d-1),连续ig 7 d给药。取各组小鼠的肝脏组织,提取肝脏中RNA以及制备肝微粒体,检测各组小鼠CYP450酶活性,mRNA和蛋白水平的变化。结果:与正常组比较,丹参高剂量组可以显著降低CYP2E1的酶活性,mRNA和蛋白表达的水平(P0.05),丹参对CYP1A2,CYP3A11,CYP2D22没有显著性影响。结论:参芎葡萄糖注射液中的丹参组分可以影响CYP2E1的酶活性,mRNA以及蛋白的表达。     

艾迪注射液对DEN诱导型肝癌大鼠体内细胞色素P450酶表达的影响

目的:观察艾迪注射液(AD)对二乙基亚硝胺(DEN)化学诱导的原发性肝癌(HCC)大鼠体内细胞色素P450(CYP450)4种亚型酶CYP1A2,CYP2E1,CYP3A2,CYP2C11 mRNA和蛋白表达的影响.方法:健康SD雄大鼠随机选取3只作为空白组,余下大鼠采用DEN间断性诱导原发性肝癌大鼠模型,模型成功后随...     

Effects of unprocessed versus vinegar-processed Schisandra chinensis on the activity and mRNA expression of CYP1A2, CYP2E1 and CYP3A4 enzymes in rats

Ethnopharmacological relevance

Schisandra chinensis (SC) is a well-known traditional Chinese herbal medicine that has been used in clinical practices for thousands of years. However, the differences between the effects of unprocessed and vinegar-processed Schisandra chinensis (VSC) on cytochrome P450 (CYP450) activities are poorly understood.

Aim of the study

To evaluate the differences between processed and unprocessed SC on the metabolism of CYP1A2, CYP2E1 and CYP3A4 substrates in rats using a cocktail method based on a developed and validated HPLC method. We also investigate the influence of processing on the levels of CYP mRNA.

Materials and methods

Three probe substrates (theophylline, dapsone and chlorzoxazone) were delivered simultaneously into rats treated with single or multiple doses of processed or unprocessed SC extract. The plasma concentrations of the three probes were profiled by HPLC, and their corresponding pharmacokinetic parameters were calculated. Real-time RT-PCR was performed to determine the effects of processed and unprocessed SC on the mRNA expression of CYP1A2, CYP2E1 and CYP3A4 in the liver.

Results

Treatment with single or multiple doses of either extract of SC induced CYP3A4 enzyme activity and inhibited CYP1A2 enzyme activity in rats. Furthermore, the inhibitory effect of SC was more potent after vinegar processing than without vinegar processing. CYP2E1 enzyme activity was induced after treatment with a single dose but was inhibited after multiple doses. The mRNA expression results were in accordance with the pharmacokinetic results.

Conclusions

These results provide useful scientific data for the safe clinical application of either extract of SC in combination with other drugs, which should lack the side effects induced by other herb–drug interactions.     

Drug interaction potential of the seed extract of Urtica urens L. (dwarf Nettle)

Dwarf nettle (Urtica urens) seed extract was examined in vivo in the rat for its potential to modulate drug metabolizing enzymes including aminopyrine N‐demethylase (APND; CYP2C6), aniline 4‐hydroxylase (A4H; CYP2E1), nitrosodimethylamine N‐demethylase (NDMA‐ND; CYP2E1) erythromycin N‐demethylase (ERND; CYP3A1) CYP2D1/2 and glutathione S‐transferase (GST). RT‐PCR data and western blotting studies clearly demonstrated that CYP2C6 and CYP2E1 mRNA levels were substantially increased after Urtica treatment, while the level of CYP3A1 mRNA decreased and that of CYP2D1/2 remained unchanged. Urtica treatment significantly induced GST activity in the liver, lung and kidney (66‐, 46‐ and 31‐fold, respectively) while decreasing that of APND (35‐, 61‐ and 94‐fold) and NDMA‐ND (23, 28 and 54‐fold). ERND activity in liver was reduced 45‐fold, but increased in the lung and kidney (78‐ and 144‐fold) after Urtica treatment. These results indicate that Urtica seed extract may have the potential to inhibit and/or induce the metabolism of certain co‐administered drugs. Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd.     

枳椇子醋酸乙酯提取物对大鼠肝P450同工酶的影响

目的：观察枳椇子醋酸乙酯提取物对大鼠肝P450同工酶的影响。方法：大鼠分别灌胃给予枳椇子醋酸乙酯提取物相当于生药量0.14,0.17,0.2 g·kg^-1,连续10 d,采用紫外分光光度法测定细胞色素P450与NADPH-细胞色素C(P-450)还原酶含量及苯胺羟化酶(ANH)、氨基比林N-脱甲基酶(ADM)、红霉素N-脱甲基酶(ERD)的活性。采用RT-PCR技术检测大鼠肝脏CYP1A1,CYP2C11,CYP2E1,CYP3A1基因的水平。结果：枳椇子醋酸乙酯提取物对细胞色素P450及NADPH-细胞色素C(P-450)还原酶含量无显著影响；可抑制苯胺羟化酶(ANH)活性,抑制率可达31.5%；可增加氨基比林N-脱甲基酶(ADM)活性,可达42.4%；而对红霉素N-脱甲基酶(ERD)的活性没有明显变化。在mRNA水平上,CYP2E1基因的表达水平没有变化；CYP1A1,CYP2C11和CYP3A1基因表达水平则明显增加。结论：枳椇子醋酸乙酯提取物对大鼠肝P450同工酶的影响表现出特异性,对不同的P450同工酶作用不同。     

乌头、白及配伍存在基于CYP3A1/2的相互作用

目的：阐明基于药物代谢酶的乌头、白及配伍产生相互作用的机制。研究二者合用对主要药物代谢酶CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1/2在酶活性、mRNA水平和蛋白质水平的影响。方法：采用高效液相色谱法测定CYP1A2、CYP2E1活性;采用紫外-可见分光光度法测定CYP3A1/2活性;分别采用RT-PCR和Western Blot方法评价药物对CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1、CYP3A2 mRNA及蛋白水平的影响。结果：乌头、白及合用后CYP3A1/2的酶活性明显下降;Western Blot检测显示CYP1A2、CYP3A1、CYP3A2的蛋白质表达水平下降;RT-PCR检测显示CYP1A2、CYP3A1、CYP3A2的mRNA水平均上升。结论：乌头、白及合用后抑制CYP3A1/2的酶活性,乌头、白及配伍存在基于CYP3A1/2的药物相互作用。     

参芎葡萄糖注射液对小鼠肝细胞色素P450酶活性及表达的影响

目的:研究参芎葡萄糖注射液(Shenxiong glucose injection,SGI)对小鼠肝脏细胞色素P450 2_(E1)(CYP2_(E1)),2_(A11)(CYP2_(A11)),1_(A2)(CYP1_(A2))和2_(D22)(CYP2_(D22))酶活性以及mRNA表达水平的影响。方法:将昆明小鼠随机分为正常组,苯巴比妥组(0.70 g·kg~(-1)),以及SGI低、中、高剂量组(13.0,19.5,26.0 g·kg~(-1))。各组小鼠每天尾静脉注射药物1次,连续注射7 d后处死。取其肝脏制备肝微粒体进行体外代谢实验,测定CYP2_(E1),CYP2_(D22),CYP1_(A2)和CYP3A的酶活性。并用实时荧光定量聚合酶链式反应q PCR技术定量分析小鼠肝组织中CYP2_(E1),CYP2_(D22),CYP1_(A2)和CYP2_(A11)的mRNA表达水平。结果:与正常组比较,各给药组小鼠肝指数没有显著差异。体外代谢实验表明,相较正常组,高剂量SGI能下调CYP2_(E1)酶活性0.45倍(P0.05);中剂量和高剂量的SGI可上调CYP1_(A2)酶活性1.2~1.23倍(P0.05);而SGI对CYP3A和CYP2_(D22)的活性无显著影响。q PCR分析发现,相较正常组,高剂量SGI组CYP2_(E1)mRNA的表达下调了0.6倍(P0.01);SGI中剂量和高剂量组的CYP1_(A2)mRNA的表达分别上调了1.7倍和2.6倍(P0.05)。SGI组和正常组之间的CYP2_(A11)和CYP2_(D22)mRNA表达量无显著性差异。结论:中高剂量的SGI能上调小鼠肝CYP1_(A2)的表达,并诱导小鼠肝CYP1_(A2)的酶活性。而高剂量的SGI能下调小鼠肝CYP2_(E1)的表达,并抑制小鼠肝CYP2_(E1)的酶活性。