Dicer 和 Drosha 与子宫内膜癌的相关性研究

【目的】探讨Dicer和Drosha在子宫内膜癌的发生发展中的作用及意义。【方法】利用荧光定量PCR和Western‐blot检测正常子宫内膜组织和子宫内膜癌组织中Dicer和Drosha的表达;体外培养正常子宫内膜细胞,采用siRNA干扰Dicer和Drosha ,M T T检测子宫内膜细胞的增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western‐blot检测凋亡抑制蛋白Bcl‐2和促凋亡蛋白Bad的表达。【结果】子宫内膜癌组织中Dicer和Drosha的表达低于正常子宫内膜组织;siRNA干扰Dicer和Drosha后子宫内膜细胞的增殖加快、凋亡减少;Bcl‐2表达增加而Bad的表达减少。【结论】Dicer和Drosha可以影响细胞的增殖和凋亡,其相关机制可能与调控Bcl‐2和Bad的表达有关,Dicer和Drosha在子宫内膜癌的发生发展中起重要作用。     

miR-126对宫颈癌细胞增殖与侵袭的影响

【目的】探讨 miR‐126对宫颈癌细胞增殖与侵袭的影响。【方法】将宫颈癌 HeLa 细胞分为 miR‐126 mimics 组（转染 miR‐126 mimics）、scramble 组（转染 scramble）、Crk‐siRNA 组（转染 Crk‐siRNA）、si‐con‐trol 组（转染 si‐control）,其中 si‐control 组为 Crk‐siRNA 组的阴性对照,scramble 组为 miR‐126 mimics 组的阴性对照。采用 Western blot 法检测外源过表达 miR‐126对宫颈癌 HeLa 细胞 Crk 蛋白表达水平的影响;采用 M TT 和 Transwell 侵袭实验检测外源高表达 miR‐126对宫颈癌 HeLa 细胞增殖与侵袭能力的影响。【结果】Western blot 结果显示,miR‐126 mimics 组和 Crk siRNA 组 Crk 蛋白表达水平较阴性对照组（scram‐ble 组和 si‐control 组）明显降低;M TT 结果显示,转染 miR‐126 mimics 和 Crk‐siRNA 组 HeLa 细胞的增殖速度从48 h 起明显减慢,与各自的阴性对照组比较差异均有统计学意义（ P ＜0．05）;Transwell 结果显示,转染miR‐126 mimics 和 Crk siRNA 组36 h 后 HeLa 细胞穿过基质胶的细胞数量分别为（66±10）和（63±9）,与对照组（157±12）比较,差异具有统计学意义（ P ＜0．01）。【结论】miR‐126可能通过靶向调控 Crk ,从而抑制宫颈癌细胞的增殖与侵袭。     

miRNA-155表达对人肺癌细胞A549增殖的影响

【目的】探讨miRNA-155在正常肺组织和非小细胞肺癌组织中的表达及miRNA-155对人肺癌细胞A549增殖的影响。【方法】采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术检测15例非小细胞肺癌组织及其癌旁组织中miRNA-155的表达;A549细胞分别转染miR-NC和miRNA-155 mimic ,采用Real-time PCR技术检测转染后A549细胞中的miRNA-155表达水平,同时采用MTT 技术和流式细胞技术检测转染后A549细胞增殖情况,Western印迹法检测转染后A549细胞中Akt、p-Akt（Ser473）、p27、bcl-2、bax的表达。【结果】miRNA-155在非小细胞肺癌组织中的表达情况明显高于癌旁组织（ P ＜0．05）;与转染 miR-NC 组相比, A549细胞转染miRNA-155 mimic后miRNA-155表达水平明显增高（ P ＜0．001）,MTT实验和流式细胞技术显示miRNA-155促进A549细胞的增殖;Western印迹法结果显示：转染miRNA-155的A549细胞p-Akt （Ser473）,bcl-2的表达水平增高,p27、bax的表达水平降低。【结论】miRNA-155可能通过促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调p-Akt（Ser473）、bcl-2表达,同时抑制p27、bax的表达来促进非小细胞肺癌的发生发展。     

Survivin siRNA沉默对非小细胞肺癌细胞生物学的影响

目的探讨凋亡抑制蛋白(Survivin)对非小细胞肺癌(NSCLC)H1299细胞株的生物学影响。方法通过脂质体介导将Survivin基因siRNA瞬时转染H1299细胞。采用RT-PCR及Western blot检测转染后H1299细胞内Survivin基因的表达水平。MTT比色法、流式细胞术(FCM)及Western blot观察细胞增殖、凋亡、周期及Caspase-9蛋白表达变化情况。结果 RT-PCR及Western blot证实,siRNA沉默的H1299细胞中Survivin mRNA、蛋白的表达水平较未转染组明显降低(t=10.970,P=0.000;t=9.192,P=0.003)。MTT、细胞凋亡及周期结果表明,siRNA沉默的H1299细胞其增殖能力明显减弱、细胞凋亡明显升高,G2/M期阻滞,Caspase-9蛋白表达增加(t=8.162,P=0.001;t=10.800,P=0.000;t=9.192,P=0.003)。结论 Survivin参与NSCLC细胞增殖、凋亡、周期这一生物学过程。     

人端粒酶逆转录酶基因沉默对肺腺癌细胞侵袭、增殖、凋亡的影响

目的:探讨靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的小干扰RNA(siRNA)转染对肺腺癌细胞株A549生物学行为的影响。方法:构建靶向hTERT的siRNA表达质粒转染A549细胞,通过Western blot检测蛋白的表达水平,确定有效后,通过Transwell小室检测细胞体外侵袭能力,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术测定转染后肿瘤细胞的细胞周期和凋亡率。结果:成功构建靶向hTERT的siRNA表达质粒。实验组siRNA转染后的细胞侵袭能力较对照组减弱(P<0.01),生长抑制率明显高于阴性对照组(P<0.01),且表现出时间依赖性。流式细胞术测定显示,实验组siRNA转染48h后,肿瘤细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论:靶向hTERT的siRNA转染后可以显著降低A549细胞侵袭能力,抑制增殖,诱导细胞凋亡的发生。     

shRNA沉默EZH2表达对人肺癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨shRNA沉默EZH2表达对人肺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响。方法利用RT-PCR方法检测EZH2在人肺癌细胞株中的表达,特异性shRNA沉默EZH2表达后分析NCI-A549细胞增殖和侵袭能力的变化。结果检测14株非小细胞肺癌细胞中EZH2的mRNA表达,80%的细胞株EZH2较正常肺组织高表达;shRNA阻断EZH2表达可显著降低人肺癌A549细胞的增殖和侵袭能力(P<0.05)。结论 EZH2基因沉默能有效抑制人肺癌细胞的增殖和侵袭能力,为深入研究EZH2在非小细胞肺癌中作用提供了研究基础。     

过表达SOCS5对非小细胞肺癌增殖、迁移和侵袭的作用及机制研究

摘要：目的?分析细胞因子信号传导抑制因子5(SOCS5)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响，并探讨其可能的作用机制。方法?应用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析SOCS5在肺癌组织中的表达情况； western blot检测SOCS5在NSCLC细胞系PC-9、A549和SPC-A-1及正常支气管上皮细胞系16HBE中的表达水平；选择SOCS5表达水平最低的NSCLC细胞系进行SOCS5过表达质粒转染，实验设对照(NC)组和SOCS5过表达质粒转染(oe-SOCS5)组。采用MTS试验检测各组细胞增殖能力；划痕试验检测各组细胞迁移能力；Boyden试验检测各组细胞侵袭能力；western blot检测各组细胞中PI3K/Akt/mTOR信号通路活性。结果?TCGA数据库分析结果显示，SOCS5?mRNA在肺腺癌和肺鳞癌组织中的表达水平显著低于正常肺组织(P<0.05)。western blot结果显示，SOCS5蛋白在PC-9、A549和SPC-A-1细胞中的表达水平均低于其在16HBE细胞中的表达水平(P<0.05)；选择表达水平最低的PC-9细胞进行SOCS5过表达质粒转染，结果发现与NC组相比，oe-SOCS5组PC-9细胞增殖、迁移和侵袭能力均降低(P<0.05)；western blot结果显示，与NC组相比，oe-SOCS5组细胞pPI3K、pAkt和pmTOR蛋白的表达水平均降低(P<0.05)。结论?SOSC5在NSCLC中呈异常低表达，过表达SOCS5可抑制NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力，抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路的激活可能是作用机制之一。     

RhoE小干扰RNA对乳腺癌细胞恶性表型的影响

目的　观察下调 Ras 同源类似物 E (RhoE) 表达对人乳腺癌细胞 231 生物学行为的影响。 方法　Western blot 技术检测小干扰 RNA（siRNA）转染前后 RhoE 在乳腺癌细胞 231 中的表达;RhoE siRNA 的细胞转染用 lipofectamine 2000 脂质体法;Cell Counting Kit-8 检测转染细胞及对照细胞的增殖变化;损伤刮擦试验和体外侵袭实验（Transwell 小室）分别检测转染细胞及对照细胞的迁移与侵袭能力。 结果　RhoE 在乳腺癌细胞 231 中的表达较高;成功转染 RhoE siRNA 的乳腺癌细胞,Western blot 显示 RhoE 的表达被明显的抑制;RhoE 的表达被抑制后对乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭有着明显的促进作用。 结论　下调 RhoE 表达能够明显促进乳腺癌细胞的增殖﹑迁移和侵袭,提示 RhoE 可能在乳腺癌的发生发展中起着重要作用。     

阻断STAT3信号转导通路抑制人非小细胞肺癌细胞侵袭转移的体外研究

【目的】观察JAK2激酶特异性抑制剂AG490对非小细胞肺癌A549细胞侵袭的影响,探讨通过药物阻断STAT3信号转导通路在治疗非小细胞肺癌中的作用。【方法】应用AG490处理非小细胞肺癌A549细胞。噻唑蓝法检测各组细胞的增殖情况;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成率;利用B0yden小室体外侵袭模型检测A549细胞体外粘附和侵袭力;Westernblot检测STAT3信号转导通路成员的表达。【结果】AG490明显抑制非小细胞肺癌细胞增殖和细胞克隆形成（P〈0．05）,降低细胞粘附力和体外侵袭力（P〈0．05）,并可抑制JAK2／STAT3信号转导通路活化,使STAT3、CyclinE1蛋白的表达水平明显下降（P〈0．05）。[结论]STAT3信号转导通路参与癌细胞侵袭调控,阻断STAT3通路活化可以抑制非小细胞肺癌细胞侵袭。     

RNA干扰HIF-2α基因对人肺腺癌A549细胞株侵袭转移的影响

目的:探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制缺氧诱导因子(hyposia-inducible factor 2α,HIF-2α)基因表达对人肺腺癌A549细胞株侵袭转移的影响。方法:构建针对HIF-2α-siRNA并转染A549细胞株,采用实时荧光定量多聚酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和Western blot方法检测HIF-2α表达水平,通过Tran-swell试验及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白检测,探讨HIF-2α-siRNA对A549细胞侵袭力的影响。结果:将HIF-2α-siRNA转染A549细胞后,HIF-2α的mRNA和蛋白表达水平均下调。qRT-PCR检测显示,第4号siRNA表达载体抑制作用最强,转染后24 h和48h对HIF-2α基因mRNA表达水平抑制率分别为(60.63±5.10)%和(80.00±3.55)%。Western blot检测同样证实,第4号siRNA表达载体对于HIF-2α蛋白表达抑制作用最强,转染后24 h和48 h抑制率分别为(31.69±11.56)%和(82.87±4.09)%。Transwell试验发现,转染HIF-2α-siRNA后,穿膜细胞数显著减少(P<0.05),表明细胞侵袭力下降。转染HIF-2α-siRNA后,VEGF表达水平显著下调(P<0.01)。结论:转染HIF-2α-siRNA可有效降低A549细胞的侵袭转移力。     

利用生物信息学分析CALHM2在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

[目的]基于TCGA及GEO等数据库收录肿瘤高通量数据,分析钙稳态调节家族蛋白2(CAL-HM2)等CALHMs家族基因在非小细胞肺癌癌(NSCLC)中的表达及临床价值.[方法]利用Oncomine,GEPIA及UALCAN等在线工具分析和验证CALHMs(CALHM1-6)家族基因在NSCLC的表达水平;利用Huma...     

LncRNA AC007009.1与非小细胞肺癌临床分期相关性研究

【目的】研究lncRNA AC007009.1与非小细胞肺癌(NSCLC)临床分期的相关性。【方法】选取本院2015年10月至2019年4月收治的150例NSCLC患者为研究对象。收集患者手术后标本癌组织,对其lncRNA AC007009.1进行检测,以lncRNA AC007009.1水平中位数(5.24±2.05)取临界值(5.23),将其分为lncRNA AC007009.1高表达组(n=93)与lncRNA AC007009.1低表达组(n=57),对两组患者临床病理学特征(年龄、性别、临床分期、是否存在远处转移、吸烟史、酗酒史、肿瘤大小)进行分析,并将有差异的信息纳入Logistic回归性分析,分析lncRNA AC007009.1高表达的危险因素,明确NACLC病理特征与lncRNA AC007009.1的关系。【结果】高表达组年龄>60岁、远处无转移、临床分期Ul或W期、吸烟的患者显著多于低表达组患者,差异有统计学意义(P<0.05);两组性别、酗酒史、肿瘤大小对比差异无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归性分析结果表明,年龄>60岁、远处无转移、临床分期I或W期、有吸烟史是lncRNA AC007009.1高表达的的危险因素。【结论】LncRNA AC007009.1与NSCLC的年龄、临床分期、远处转移、吸烟史密切相关,可作为NSCLC早期评估的重要指标,具有较高的临床应用价值。     

晚期非小细胞肺癌组织与血浆EGFR基因表达差异及临床意义

[目的]探讨DNA表皮因子生长受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因在晚期非小细胞肺癌(no-small cell lung cancer,NSCLC)患者组织和血浆中的表达差异及临床意义.[方法]选取2015年3～6月在本院初诊的NSCLC患者65例,提取血浆及组织标本DNA,检测DNA EGFR基因突变情况并比较.[结果]65例患者组织EGFR基因突变检出23例,突变率为35.4％,循环DNA中检出1 2例,突变率为18.5％.以组织标本检测为准,血浆DNA中EGFR基因突变检测的特异性为93.8％;灵敏度为43.5％.在组织标本检测中,44例男性EGFR基因突变率为22.7％;21例女性患者EGFR基因突变率为61.9％,两者比较有统计学差异(P＜0.05).41例吸烟患者EGFR基因突变率为17.1％(7/41);24例不吸烟患者EGFR突变率为66.7％(16/24),两者比较有统计学差异(P＜0.05).41例腺癌患者EGFR突变率为46.3％;24例非腺癌患者EGFR突变率为16.7％,两者比较有统计学差异(P＜0.05).血浆中EGFR基因突变的分布与肿瘤组织检测结果相符,在不同性别、不同吸烟情况及不同病理类型中差异有统计学意义(P＜0.05),在肿瘤分期方面无显著性差异(P＞0.05).[结论]对于晚期NSCLC患者,血浆循环DNA EGFR基因突变检测特异性高、敏感性低,可用于其补充诊断.     

超前镇痛管理对非小细胞肺癌患者围手术期免疫功能、预后的影响分析

[目的]探讨超前镇痛管理对非小细胞肺癌(NSCLC)患者围手术期免疫功能、预后的影响.[方法]将本院在2015年1月至2016年7月收治的NSCLC患者115例,按照随机、双盲的分配原则分为观察组58例和对照组57例.观察组采用超前镇痛管理,对照组采用常规镇痛模式.观察两组不同镇痛管理对围手术期免疫功能、预后的影响.[结果]观察组术后6 h、1 d、3 d的视觉模拟评分法(VAS)均明显低于对照组,其差异均有统计学意义(P<0.05);两组患者术前CD4+与CD8+水平比较差异无统计学意义(P>0.05),而术后均有不同程度下降,且明显低于术前,但观察组仍高于对照组,其差异均有统计学意义(P<0.05).观察组首次下床时间为(2.72±0.92)d,发生肺部感染、肺不张、胸腔积液分别为3.45%、0.00%、0.00%,均明显少于对照组,其差异有统计学意义(P<0.05).[结论]超前镇痛管理可更有效的减轻NSCLC患者围手术期的疼痛,并保护免疫功能,改善其预后,值得临床推广应用.     

同期放化疗与序贯放化疗治疗诱导化疗无效局限期NSCLC患者的疗效比较

[目的]探讨同期放化疗与序贯放化疗对诱导化疗无效的局限期非小细胞肺癌(NSCLC)患者无进展生存期的影响.[方法]本院收治的108例诱导化疗无效的局限期NSCLC患者随机分为两组,每组54例.A组给予同期放化疗,B组给予序贯放化疗,比较两组患者的不良反应发生率、近期治疗效果、中位生存期以及治疗三个周期后的生活质量评分等参数指标.[结果]①A组疗效远远高于B组(P＜0.05);②A组患者中位无进展生存时间显著高于B组(P＜0.05);③A组不良反应发生率显著低于B组(P＜0.05);④治疗前,两组患者的生活质量评分比较差异无显著性(P＞0.05);治疗三个周期后,A组患者的生活质量评分显著高于B组(P＜0.05).[结论]同期放化疗能够显著延长诱导化疗无效的局限期NSCLC患者的生存时间,不良反应较少且显著提高患者生活质量.     

S100A4和uPA在非小细胞性肺癌中的表达及临床意义

[目的]探讨 S100A4和尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）在非小细胞性肺癌（NSCLC）组织中的表达及临床意义。[方法]采用免疫组化二步法（PV法）检测89例手术切除的 NSCLC组织中 S100A4和 uPA蛋白的表达探讨其与临床病理因素及预后的关系。[结果]89例标本中S100A4和uPA阳性率分别为84．3％（75/89）、78．6％（70/89）,两者表达显著相关（P＜0．01）;S100A4表达与肿瘤的 TNM分期、淋巴结转移及远处转移显著相关,uPA表达与肿瘤的TNM分期、淋巴结转移及分化程度显著相关。S100A4蛋白、uPA蛋白阴性组患者中位生存时间均明显大于阳性组;Cox比例风险模型（χ2＝64．297,P ＝0．000）多因素分析表明,分化程度（P ＝0．005）、淋巴结转移（P ＝0．023）、S100A4过表达（P ＝0．000）及 uPA 过表达（P ＝0．003）为影响 NSCLC预后的独立因素。[结论]NSCLC组织中存在 S100A4、uPA的高表达,且两者之间的表达强度具有等级相关性,其高表达提示患者预后不良;联合检测二者表达可预测 NSCLC发生转移的危险性及患者预后情况。     

瑞芬太尼复合丙泊酚麻醉对非小细胞肺癌根治术患者免疫功能及术后瞻妄的影响

【目的】探讨瑞芬太尼复合丙泊酚麻醉对非小细胞肺癌(NSCLC)根治术患者外周血T淋巴细胞、皮质醇(Cor)、血糖及术后瞻妄的影响。【方法】本院拟实施肺癌根治术的90例NSCLC患者,随机分为两组,各45例;观察组采取瑞芬太尼复合丙泊酚麻醉、对照组采取芬太尼复合丙泊酚麻醉。比较两组患者术前、术后2h患者外周血中T淋巴细胞亚群、血清Cor、血糖水平及术后瞻妄的发生率。【结果】两组患者的手术时间相比较差异无显著性(P>0.05);观察组的丙泊酚用量显著低于对照组(P<0.05)。术前观察组和对照组的外周血T淋巴细胞、血清Cor、血糖水平相比较差异无显著性(P>0.05);术后2h观察组的外周血中CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺高于对照组(P<0.05),CD8⁺测定值低于对照组(P<0.05);术后2h,观察组的血清Cor、血糖水平低于对照组(P<0.05)。观察组术后48h内的瞻妄发生率为6.67%(3/45),明显低于对照组的22.22%(10/45)(P<0.05)。【结论】瑞芬太尼复合丙泊酚麻醉对NSCLC根治术患者T淋巴细胞亚群、Cor、血糖水平的影响更小,患者术后发生瞻妄的情况更少。     

分次立体定向放疗治疗非小细胞肺癌脑转移瘤的疗效分析

【目的】探讨分次立体定向放疗（Fractionated stereotactic radiotherapy,FSRT）治疗非小细胞肺癌（NSCLC）脑转移瘤疗效及不良反应。【方法】对卡氏评分（Karnofsky,KPS）＞60分的32例 NSCLC脑转移患者先行全脑放疗（WBRT）30～40 Gy后,给予 FSRT治疗,单次靶区周边剂量为3～5 Gy,总剂量为15～20 Gy,分3～5次完成,50％等剂量曲线包绕计划靶体积（planning target volume ,PTV）,分析疗效及不良反应。【结果】全部患者均完成整个放疗过程,未出现任何明显的不良反应与并发症,全组中位生存期为11．6个月（95％CI为8．6～13．2）,1年及2年生存率分别为30．4％和11．2％。全组临床症状缓解率为82．1％,肿瘤局部控制率为91．7％。治疗后1个月后,KPS评分较治疗前明显改善,差异有统计学意义（P＜0．05）。【结论】FSRT用于全脑放疗后疾病进展的肺癌脑转移患者,可提高生存质量、延长患者生存期,安全性较好。     

胎盘多肽注射液辅助治疗老年晚期非小细胞肺癌的临床研究

[目的]研究采用胎盘多肽注射液辅助治疗老年晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的临床效果.[方法]临床纳入84例本院收治的晚期NSCLC老年患者,按随机数字表法分为两组,每组42例.采用单药化疗方案进行治疗者作为对照组,另42患者在上述基础上加用胎盘多肽注射液治疗作为观察组,比较两组疗效.[结果]对照组总有效率、临床受益率分别为14.29％、69.05％与观察组16.67％、73.81％相比较差异无显著性(P＞0.05).治疗前两组患者免疫功能差异无显著性(P＞0.05);治疗后,观察组患者CD3、CD4、CD4/CD8以及NK细胞活性均优于对照组(P＜0.05).治疗前两组患者生活质量差异无显著性(P＞0.05);治疗后,观察组KPS、QOL评分明显高于对照组(P＜0.05).观察组不良反应发生率为14.29％,明显低于对照组28.57％(P＜0.05).[结论]采用胎盘多肽注射液辅助治疗老年晚期NSCLC效果显著,不良反应低,患者免疫功能明显提高,值得临床应用及推广.     

长春瑞滨联合奥沙利铂对中老年晚期非小细胞肺癌患者的临床疗效分析

[目的]探讨长春瑞滨联合奥沙利铂（NL方案）治疗中老年患者晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的临床疗效及相关不良反应.[方法]收集本院2007～2013年收治的56例中老年晚期非小细胞肺癌患者临床资料.化疗方案为长春瑞滨25 mg/m2静脉推注,d1,d8;奥沙利铂130mg/m2静脉滴注,d2;21 d为1个周期,治疗最少2周期.观察患者的临床疗效及不良反应.[结果]联合用药化疗的总有效率为32.1％,患者的1年存活率为35.7％.药物的主要不良反应为乏力、白细胞减少、神经毒性、恶心呕吐等,但患者均可耐受.[结论]长春瑞滨联合奥沙利铂对中老年晚期NSCLC疗效确切,且患者的耐受性较好,值得临床推广.