人子宫内膜腺上皮和基质细胞的分离与培养

目的:探索一种简便人子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞的分离培养方法。方法:通过筛网法和差速离心法,分离培养5例子宫内膜腺上皮和基质细胞,利用免疫细胞化学染色及其激光共聚焦显微镜鉴定分离的细胞并进行图像分析。结果:用差速离心法分离子宫内膜腺上皮细胞中CK-19阳性表达积分为4.16±0.22,子宫内膜基质细胞中Vimentin阳性表达积分为4.24±0.22,与筛网法相比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:通过改良差速离心法使腺上皮和基质细胞分离步骤简化,是一种较理想子宫内膜细胞分离培养方法。     

人子宫内膜中存在一群具有克隆增殖能力的细胞

背景：克隆形成能力是干细胞的霓要特性,多项研究证明,子宫内膜在起源上具有单克隆性。目的：通过体外培养,检测人子宫内膜细胞克隆形成能力。方法：采用机械和酶消化相结合的方法分离出入子宫内膜细胞,培养腺上皮细胞利摧质细胞,观察细胞形态及生长特性并检测波形蛋白和角蛋白的表达,采用流式细胞仪对细胞进行CDl33,CD34,CD45,CD90,CD73及CD29表型鉴定;观察细胞克隆生长特点、测蛀细胞克隆大小和计算克隆形成率。同时取人子宫肌细胞培养作为对照。结果与结论：经过12d的原代培养后,腺上皮细胞和綦质细胞均可形成大、小两种克隆。角蛋白表达阳性为腺上皮细胞,波形蛋白表达阳性为基质细胞。流式细胞术检测子宫内膜细胞表达CD90、CD29、CD73等表面标记,不表达CD34、CD45,CDl33。腺上皮细胞、嬉质细胞大克隆和小克隆大小及形成率比较,差异均有显著性意义（P〈0．05）;人子宫肌细胞用有限稀释法原代培养无细胞克隆生长。说明子宫内膜细胞在体外培养中,腺上皮细胞和基质细胞大克隆增殖能力均高于小克隆。这些细胞可能足子宫内膜干细胞。     

51例子宫内膜腺鳞癌临床预后分析

【目的】探讨影响子宫内膜腺鳞癌临床预后的因素。【方法】回顾性研究51例子宫内膜腺鳞癌患者的临床资料。【结果】①腺鳞癌占同期全部宫内膜癌的4．78％（51／1066）,腹膜后淋巴结转移率为14．0％（6／43）。⑦肌层浸润〈1／2与〉1／2的官外转移率分别为26％（6／26）和62．5％（10／16）,两者相比较差异具有显著性（P〈0．05）。③腺癌分化程度与浸润肌层深度有关（P＝0．035）。④Ⅰ和Ⅱ期5年生存率86．7％（26／30）,Ⅲ期5年生存率63．6％（7／11）,而Ⅳ期2年生存率为28．6％（2／7）。【结论】子宫内膜腺鳞癌临床特征与普通子宫内膜样腺癌无明显区别。分化程度和肌层浸润深度是影响其预后的重要因素。     

绝经后子宫出血原因及相关因素分析

【目的】分析引起绝经后子宫内膜出血的原因，探讨多种子宫内膜病理改变与其内膜超声厚度间的关系。【方法】对绝经后子宫出血患者236例行宫颈防癌刮片，B超测量子宫内膜厚度，分段诊刮分别取颈管内膜、宫腔内膜送病理检查。【结果】非器质性疾病144例占61．02％，其中增生期子宫内膜93例，分泌期子宫内11例，萎缩性子宫内膜30例，破碎及血块10例。良性疾病68例占28．81％，其中子宫内膜息肉11例，单纯性增生过长25例，复杂性增生过长22例，不典型增生过长10例。子宫内膜癌24例占10．17％。良性疾病68例占28．81％，子宫内膜癌占24例10．17％。子宫内膜病理检查为：增生期子宫内膜93例，单纯性增生过长25例，复杂型增生过长22例，分泌期子宫内膜11例，萎缩型子宫内膜30例，内膜息肉11例．不典型增生过长10例，破碎及血块10例，子宫内膜癌24例。B超检测子宫内膜增生过长和内膜癌患者内膜厚度≥0．5cm者占85．19％，绝经后单纯型及复杂型增生致不典型增生的发生率分别为13．64％和8．0％。【结论】非器质性因素厦炎症是引起绝经后子宫出血的主要原因，患者绝经年龄越大，出血距绝经时间越长，出血持续时间越长及宫腔越深，恶性肿瘤的发生率就越高。因此，对绝经期妇女应半年至1年做1次B超普查，测量子宫内膜厚度0．5cm以上者行诊刮＋病检，阴道出血者应常规分段诊刮＋活检。     

子宫内膜细胞培养方法的研究

正常的子宫内膜由单层柱状上皮和固有层组成。柱状上皮主要由具有分泌功能的子宫内膜腺上皮细胞构成;固有层的结缔组织细胞称为子宫内膜基质细胞,与网状纤维和基质等成分构成间质[1]。子宫内膜上皮细胞(Endometrial epi-thelial cell,EEC)和子宫内膜基质细胞(Endometrial strom     

VEGF在子宫腺肌病子宫内膜-肌层界面的表达及意义

【目的】探讨子宫腺肌病患者子宫内膜-肌层界面（endometrial-myometrial interface ,EM I）血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor ;VEGF）的表达及意义。【方法】采用免疫组化 ElivisiongTM Super法对40例子宫腺肌病患者（观察组）子宫内膜（含部分肌层）和40例子宫肌瘤患者（对照组）子宫内膜（含部分肌层）的组织进行标记、检测并比较。【结果】观察组增生期及分泌期EMI处VEGF的表达均显著高于远肌层（ P ＜0．05）,观察组增生期、分泌期EMI处VEGF表达均显著高于对照组（ P ＜0．05）。【结论】子宫腺肌病患者EMI处VEGF的高表达,可促使异位内膜及其周围肌层血管生成,其可能在子宫腺肌病的发生发展中起重要作用。     

小鼠子宫内膜基质细胞分离培养、鉴定及体外蜕膜化的诱导

背景:国内已建立许多有关人的子宫内膜基质细胞分离培养及蜕膜化的诱导方法,但人的子宫标本存在取材困难等问题。目的:建立小鼠子宫内膜基质细胞的分离培养及体外蜕膜化的诱导方法,为进一步研究子宫内膜蜕膜化的机制提供一种简单、有效的模型。方法:通过胰酶与胶原酶Ⅱ消化及差时贴壁等方法,分离和纯化小鼠妊娠第4天的子宫内膜基质细胞;用细胞免疫化学方法鉴定基质细胞;通过孕酮和雌二醇联合处理诱导子宫内膜基质细胞的蜕膜化,然后用苏木精染核、实时定量PCR和免疫印迹方法检测蜕膜化标志分子的变化。结果与结论:①分离培养的子宫内膜基质细胞的存活率为(90.1±2.3)%。②细胞免疫化学方法染色显示,分离纯化的子宫基质细胞Vimentin染色呈阳性,而Cytokeratin染色呈阴性,细胞纯度可达(92.3±2.4)%。③孕酮和雌二醇处理48,72h后,苏木精染色显示细胞呈现多核化,蜕膜化标志分子dPRP、周期蛋白D3、孕酮受体mRNA随着培养时间延长均明显增加(P<0.05)。结果可见采用酶消化和差时贴壁方法,可获得高纯度的子宫内膜基质细胞;子宫内膜基质细胞在体外通过孕酮和雌二醇联合诱导可产生蜕膜化。     

B7-H4在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义

【目的】探讨B7-H4在子宫内膜癌组织中的表达水平及与子宫内膜癌临床病理特征之间的关系。【方法】利用S-P免疫组化法检测48例子宫内膜腺癌、10例非典型增生子宫内膜以及32例正常子宫内膜组织中B7-H4的表达,采用SPSS16．0软件进行统计学处理。【结果]B7-H4主要在细胞浆内表达,显微镜下阳性细胞可见胞浆呈棕黄色,细胞核有极少量表达。正常、非典型增生及子宫内膜癌组织中B7-H4蛋白阳性表达率分别为31．25％（10／32）、40％（4／10）和62．5％（30／48）;B7-H4在正常子宫内膜组织中呈阴性或低表达,而在子宫内膜非典型增生及子宫内膜癌组织中表达明显增高,三者比较差异有显著性（P〈0．01）;在子宫内膜癌的不同组织病理分级（高、中、低分化）标本中,B7-H4表达水平差异有显著性（P〈0．05）,且与肌层浸润有关系（P〈0．05）;但B7-H4在不同手术病理分期（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期）标本中的表达差异无显著性。【结论】B7-H4蛋白表达与子宫内膜癌的发生、分化程度和肌层浸润相关,B7-H4蛋白可能会成为肿瘤治疗中的-个新靶点,-种针对于B7-H4的治疗性抗体可能将为抑制人子宫内膜恶性肿瘤的生长和进展提供有效的检测指标和治疗手段。     

Dicer 和 Drosha 与子宫内膜癌的相关性研究

【目的】探讨Dicer和Drosha在子宫内膜癌的发生发展中的作用及意义。【方法】利用荧光定量PCR和Western‐blot检测正常子宫内膜组织和子宫内膜癌组织中Dicer和Drosha的表达;体外培养正常子宫内膜细胞,采用siRNA干扰Dicer和Drosha ,M T T检测子宫内膜细胞的增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western‐blot检测凋亡抑制蛋白Bcl‐2和促凋亡蛋白Bad的表达。【结果】子宫内膜癌组织中Dicer和Drosha的表达低于正常子宫内膜组织;siRNA干扰Dicer和Drosha后子宫内膜细胞的增殖加快、凋亡减少;Bcl‐2表达增加而Bad的表达减少。【结论】Dicer和Drosha可以影响细胞的增殖和凋亡,其相关机制可能与调控Bcl‐2和Bad的表达有关,Dicer和Drosha在子宫内膜癌的发生发展中起重要作用。     

kiss-1在子宫内膜异位症及子宫腺肌症异位组织中的表达及意义

目的探讨kiss-1在子宫内膜异位症及子宫腺肌症异位组织中的表达及其意义。方法采用免疫组化方法检测正常子宫内膜、子宫内膜异位症及子宫腺肌症异位组织中kiss-1表达差异。结果正常子宫内膜、子宫内膜异位症及子宫腺肌症异位组织中kiss—1的阳性表达率分别75％、35％、52．5％,kiss-1蛋白在异位症及腺肌症表达缺失率明显高于正常内膜（P〈0．01）。结论kiss-1蛋白在子宫内膜异位症及子宫腺肌症的低表达可能与侵袭、转移相关,检测kiss-1蛋白有助于治疗和预后判断。     

干细胞相关因子在大鼠卵巢颗粒细胞中的表达

背景：现有研究表明,人与大鼠卵巢优势卵泡中的颗粒细胞具有表达干细胞特性的现象。目的：探讨干细胞相关因子在大鼠卵巢颗粒细胞中的表达。方法：将大鼠卵巢组织制作石蜡切片后,使用免疫组化法检测CD34,CD133,ABCG2/Bcrp1,Pou5f1/Oct-4的表达。卵泡穿刺法获取颗粒细胞,并使用免疫组化法检测FSHR受体的表达以鉴定颗粒细胞的纯度。免疫组化法检测颗粒细胞 CD44, C-Kit 的表达情况, RT-PCR 检测卵巢组织与颗粒细胞 ABCG2/Bcrp1、Pou5f1/Oct-4、Nanog基因的表达情况。结果与结论：免疫组化法石蜡切片显示部分卵巢颗粒细胞CD34,CD133,ABCG2/Bcrp1,Pou5f1/Oct-4阳性表达,而Pou5f1/Oct-4蛋白的表达在卵泡发育的周期中逐步增多,并在黄体化的时候显著增强,形成白体后则消失,因而具有周期性表达的特点。卵泡穿刺法提取的原代颗粒细胞FSHR受体鉴定阳性率在95%以上。体外培养的颗粒细胞以长梭形或菱形为主,部分细胞有聚集生长现象,且 CD44,C-Kit 阳性表达。RT-PCR检测结果显示,卵巢组织与体外培养的颗粒细胞均不表达 Nanog,卵巢低表达 Pou5f1/Oct-4,强烈表达ABCG2/Bcrp1,颗粒细胞微弱表达Pou5f1/Oct-4,而ABCG2/Bcrp1表达较强。以上结果显示大鼠卵巢中的部分颗粒细胞具有干细胞的特性。     

From stem cells to tissue-specific differentiation

Stem cells have been isolated from embryonic, foetal and adult sources. Embryonic stem cells, derived from the pre-implantation embryo, can be expanded indefinitely in vitro. When reintroduced into the blastocyst they contribute to all lineages in vivo. In vitro, differentiated derivatives of embryonic stem cells are obtained by manipulating culture conditions. Embryonic germ cells, derived from the primordial germ cells, display the same degree of pluripotential differentiation. Adult stem cells that repopulate the tissue of origin throughout life possess the ability to differentiate into phenotypes not restricted to the tissue and, in some cases, to the germ layer from which they derive. Although the pluripotential differentiation capability of these stem-cell populations is supported by an increasing amount of evidence, a better understanding of the mechanisms that control differentiation is required for their exploitation in the treatment of human diseases.     

白术对胃粘膜上皮细胞功能作用的实验研究

目的：研究白术治疗慢性胃病的机理。方法：用白术提取液与胃粘膜细胞共同培养；^3H-胸腺嘧啶核苷掺入法观察胃粘膜细胞增殖状况；改良李氏法测定胃蛋白酶含量，pH仪测定胃酸分泌量。结果：0.5%和1％白术浓度组cpm值显著高于对照组和0.25%浓度组（P＜0．05－0．01），但0.5和1％浓度组之间无显著性差异（P＞0．05）。0．5％和1％白术浓度组胃蛋白酶分泌量与对照组和0．25％浓度组比较差异显著（P＜0．01）。实验组中各组pH值低于对照组，但无统计学意义（P＞0．05）。结论：白求能促进胃粘膜细胞的增殖，刺激胃蛋白酶的分泌。     

三维培养诱导人脂肪间充质干细胞微球的成软骨分化能力

背景：关节软骨损伤后修复结果不满意,需要新的手段,而脂肪间充质干细胞较适宜做种子细胞诱导软骨,然而怎么能够使诱导的软骨具有功能需要研究。目的：采用三维培养体系诱导人脂肪间充质干细胞微球向软骨分化。方法：无菌切取吸脂术后脂肪组织,分离培养人脂肪间充质干细胞,传至第3代进行流式细胞术分析,成骨成脂肪诱导等鉴定,同时也给予合适的培养条件用三维培养的方式向软骨细胞诱导,并行阿利辛蓝染色鉴定糖胺多糖的合成,苏木精-伊红染色进行组织学分析,免疫荧光检测Ⅱ型胶原表达,称质量测量软骨硬度。结果与结论：分离的人脂肪间充质干细胞CD105,CD44,CD29均高表达,而 CD45,CD34低表达,并且成骨成脂诱导后细胞茜素红染色和油红O染色均为阳性。三维培养法诱导的软骨细胞可表达大量糖胺多糖及Ⅱ型胶原。结果证实,三维培养法诱导人脂肪间充质细胞向软骨分化后,具有软骨细胞的特性。     

骨髓间充质干细胞复合多肽凝胶及成软骨生成因子修复兔关节软骨缺损

背景：多肽水凝胶因为其具有良好的可塑型性,能够与损伤部位很好的无缝隙结合,所以采用该材料作为支架是骨、软骨组织工程中一种可行的探索。目的：骨髓间充质干细胞联合新型可注射多肽凝胶及成软骨生成因子修复兔关节软骨缺损,观察其修复效果。方法：首先分离培养兔骨髓间充质干细胞,兔左侧膝关节处制备直径5 mm,深3 mm的全层骨-软骨缺损模型;右侧造模后空置作为对照。实验分为3组,单纯自组装多肽凝胶移植组,自组装多肽凝胶+成软骨因子组和自组装多肽凝胶+成软骨因子+骨髓间充质干细胞组。采用的成软骨因子包括转化生长因子β1,地塞米松和胰岛素样生长因子1,三者混合后加入到自组装多肽凝胶或骨髓间充质干细胞中。于处理后12周时处死动物行大体及组织学观察、X射线摄片、免疫组织化学法进行组织学评分评估修复情况。结果与结论：单纯自组装多肽凝胶移植在12周后显示出非常好的修复效果,可见番红O染色,Ⅱ型胶原蛋白免疫组织化学染色强度以及组织学评分明显高于其他组(P <0.05)。自组装多肽凝胶+成软骨因子组修复效果较好,与自组装多肽凝胶组相似,但其修复区域蛋白聚糖表达比对照组明显升高(P <0.01)。自组装多肽凝胶+成软骨因子+骨髓间充质干细胞组修复效果不佳,12周未能完全修复缺损区域,与单纯自组装多肽凝胶组比较骨赘的形成有所增加。结果表明,单纯自组装多肽凝胶能够在原位修复骨软骨缺损并促进软骨修复,提示以自组装多肽凝胶支架移植有望提高目前修复软骨缺损的效果。     

人脐带Wharton′s jelly源性干细胞的分离、培养和表型鉴定

目的：探讨人类脐带Wharton′s jelly来源干细胞的分离、培养和表型鉴定。方法：剔除人类脐带动静脉,获得脐带Wharton′s jelly组织,应用组织块贴壁法进行培养,以流式细胞法行细胞表型鉴定。结果：分离出的人类脐带Wharton′s jelly组织,在培养后3-7 d可见细胞从组织块爬出,主要表现长梭形的成纤维样细胞,2周左右可达80%汇合,这些细胞表达间充质干细胞的标记物CD105、CD73、CD90、CD54、CD44,而不表达造血和内皮标记物CD34、CD45、CD106和CD133。结论：应用组织块贴壁法可以从人脐带Wharton′s jelly中分离、培养出干细胞,它们表达间充质干细胞的标记物。     

缺血性脑血管病患者骨髓间充质干细胞的实验研究

目的：观察缺血性脑血管病患者骨髓间充质干细胞形态学特征。方法：将缺血性脑血管病患者自体骨髓中的阃充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BM—MSCs）经密度梯度离心法分离、纯化和培养，观察原代和传代细胞的形态。结果：原代培养的BM—MSCs最佳贴壁时间为3d，生长性状不一，呈散在圆形细胞群、散在梭形细胞群、克隆圆形细胞群、花带状细胞群、漩涡状细胞群，而传代培养的细胞，增殖速度较快，性状一致，排列规则，呈饱满的梭行。结论：通过体外非诱导培养获得的自体BM—MSCs，有较强的增殖能力和多向分化潜能，为缺血性脑血管病的临床治疗提供了实验依据。     

精液脱落细胞的研究与临床应用

精液脱落细胞检查包括对精液中精原细胞，初级精母细胞，次级精母细胞，精子细胞，支持细胞，生殖道上皮细胞，中性粒细胞等其他有形成分的鉴别分析，是对传统精液检查的改良和补充，是一项无创伤的睾丸生殖功能检查方法。     

血细胞计数仪阈值确定

介绍一种带有阈值调节功能的血细胞计数仪阈值确定的方法，该方法是将阈值调节与血细胞体积联系起来，以血细胞体积确定测定阈值，经使用认为简便易行准确可靠。     

Prostanoids and cell injury

Cells respond to injury with a variety of mechanisms, one of which is the synthesis and release of various vasoactive factors. These factors can influence the intra- and extracellular environments of the cell and thus affect the overall rate of cellular survival. Products of arachidonic acid metabolism represent one such system. Studies have demonstrated the synthesis and release of various prostanoids during global injuries such as circulatory shock, burn injury, myocardial infarction, and severe trauma. We have carried out studies in an isolated, perfused rabbit liver preparation to investigate the cellular stimuli and cellular mechanisms by which the archidonic acid cascade is stimulated under these conditions. Both hypoxia and metabolic poisoning with dinitrophenol are stimuli for enhanced prostanoid production in vitro. This eicosanoid production is associated with evidence of severe cellular injury. In contrast, when endogenous prostanoid production is stimulated in a noninjured liver with phospholipase A2, the production is transient and is not associated with cellular injury. Another stimulus, bacterial endotoxin, has no effect on prostanoid biosynthesis in vitro even though endotoxin is a very potent stimulus in vivo. Activated complement has been shown to be a potent stimulus for arachidonic acid metabolism both in vivo and in vitro. It thus becomes apparent that arachidonic acid metabolism can be influenced by both receptor and nonreceptor related mechanisms in the injured cell. In addition, the eicosanoids released by the injured cell are apparently able to participate in the homeostatic response of the cell to the injury.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)