重组L-门冬酰胺酶的聚乙二醇化学修饰及修饰后酶的稳定性研究

目的单甲氧基聚乙二醇 (mPEG)化学修饰大肠杆菌重组L 门冬酰胺酶 (L ASP) ,考察经过修饰的酶的稳定性。方法N 羟基琥珀酰亚胺 (NHS)活化酯法活化mPEG ,生成的单甲氧基聚乙二醇琥珀酰琥珀酸亚胺酯 (SS mPEG)按不同摩尔比例与L ASP偶联 ,确定适合的反应时间和反应pH值。通过聚乙二醇化学修饰后的酶 (L ASP PEG) ,酶活力和纯度通过奈氏法和丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)检测 ,高效液相色谱检测L ASP PEG相对分子质量并考察了L ASP PEG体外稳定性等。结果SDS PAGE显示mPEG已经偶联到L ASP分子上 ,以两者摩尔比 1 0∶1为最佳 ,反应pH条件为 8.5 ,获得的L ASP PEG平均比活单位为 6 4 .8IU/mg ,相对分子质量为 30 1 80 0 ,体外稳定性高于L ASP。结论此实验确定了mPEG化学修饰L ASP最佳反应条件为 2 5℃反应 30min ,两者投料摩尔比为 1 0∶1 ,获得的L ASP PEG比L ASP稳定性高     

川陈皮素对肝癌细胞的抑制作用

目的 研究川陈皮素对肝癌细胞的抑制作用.方法 不同浓度的川陈皮素作用于人肝癌细胞SMMC-7721细胞,用MTF法、细胞生长曲线实验研究其对SMMC-7721细胞的生长抑制作用,Giemsa染色观察细胞形态变化,初步研究其体外抑瘤作用;建立小鼠H22肝癌移植性实体瘤模型,研究川陈皮素对肝癌的体内抑制作用.结果 MTT法提示川陈皮素为2～128mg·L-1时,对SMMC-7721的48 h抑制率为3%～80%,IC50为26.2 mg·L-1;生长曲线提示,川陈皮素对SMMC-7721细胞的抑制作用呈明显时效和量效关系;Giemsa染色后细胞、细胞核出现明显的凋亡形态学变化;体内实验表明,川陈皮素500 mg·kg-1,ig给药10 d,对小鼠移植性肿瘤H22抑制率为48.35%(P＜0.01),并呈剂量依赖性.结论 川陈皮素对人肝癌细胞SMMC-7721具有明显体外抗增殖作用,对小鼠移植性肿瘤H22有一定的抑制作用.     

磷脂型DHA对肿瘤细胞凋亡的影响

目的探讨磷脂型DHA(DHA-PC)的抗肿瘤生长作用。方法应用超临界CO2萃取脱除胆固醇技术从鸢乌贼卵中提取DHA-PC。采用MTT法、AO/EB荧光染色法和流式细胞术研究DHA-PC对人肝癌HepG-2细胞增殖、凋亡的影响,并进一步利用小鼠S180移植性肿瘤模型,验证DHA-PC的体内抑瘤效应。结果 DHA-PC能够抑制HepG-2细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),诱导细胞凋亡,干扰细胞周期,使细胞停滞在G0/G1期;明显抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,其平均抑瘤率达40.94%。结论 DHA-PC在体内和体外都对肿瘤的生长具有抑制作用。     

楤白皮总皂苷体内外的抗肿瘤作用

目的:研究楤白皮总皂苷的体内外抗肿瘤活性。方法:采用MTT体外测定楤白皮总皂苷对小鼠B16黑色素瘤、小鼠H22肝癌细胞和小鼠FBL3红白血病细胞的增殖抑制作用;采用小鼠移植性肿瘤S180和H22观察楤白皮总皂苷的体内抑瘤活性。结果:楤白皮总皂苷体外对B16细胞、FBL3细胞的IC50分别为0.077 4 g.L-1和0.199 g.L-1;在0.02～3.2 g.L-1范围内,对H22细胞体外抑制率均为80%以上。在100、200、300 mg.kg-1剂量下,楤白皮总皂苷对S180小鼠肉瘤的抑瘤分别为16.9%、37.1%和27.0%,对H22小鼠肝癌的抑瘤率分别为23.7%、10%和13.4%。结论:楤白皮总皂苷在体内、外均具有一定的抗肿瘤活性。     

人参茎叶皂甙对5-氟脲嘧啶抗肿瘤的增强作用

目的 :观察人参茎叶皂甙 (GSL)促进氟脲嘧啶 (5 FU)对小鼠S1 80实体瘤的抑瘤作用。方法 :采用昆明种小鼠 ,随机分组进行实验 ,分别给予不同剂量人参茎叶皂甙与氟脲嘧啶配伍使用 ,观察其对小鼠S1 80实体瘤抑瘤率的差别。结果 :低剂量人参茎叶皂甙 (1 5mg·kg-1)与氟脲嘧啶 (1 .5mg·kg-1)组方对小鼠S1 80实体瘤有显著的抑瘤作用 (抑瘤率达2 6.90 % ,P <0 .0 5 ) ,对胸腺无抑制作用 ;阳性对照药5 FU(2 5mg·kg-1)的抑瘤率为 3 6.61 % ,但其对胸腺有显著抑制作用 ;而人参茎叶皂甙 (1 0 0mg·kg-1)单用对小鼠S1 80实体瘤抑瘤率为 2 7.44%。结论 :低剂量人参茎叶皂甙 (1 5mg·kg-1)显著促进 5 FU(1 .5mg·kg-1)对小鼠S1 80实体瘤的抑瘤作用而无胸腺抑制作用 ,可并减少 5 FU的毒副作用     

苏木水提物抗癌作用机制的研究

目的　探讨苏木水提物的抗癌作用机制。方法　分别采用腹腔注射、肌肉注射和灌胃等给药途径观察苏木水提物对小鼠移植性腹水瘤 EAC、白血病 P388、L12 10和肉瘤 S180的抑瘤作用 ,并进行了相应的体外抑瘤实验。结果　腹腔注射给药时高剂量组对各种腹水型移植瘤 (EAC、P388、L 12 10 )均有显著的抑制作用 ,但对实体瘤 S180无效。在相同剂量下肌肉注射及灌胃给药对各种移植瘤均未表现出抑瘤作用。体外抑瘤实验表明药物对各种瘤细胞均有一定的杀伤作用 ,且呈现出明显的量效相关性。结论　苏木水提物对癌细胞的杀伤作用是通过直接接触癌细胞而产生的 ,经机体吸收代谢后其抗癌活性消失     

重组人内抑素的抗肿瘤活性

目的观察重组人内抑素抗肿瘤活性及对血管内皮细胞增殖的抑制作用。方法用人癌裸鼠移植性肿瘤及小鼠移植性肿瘤模型对重组人内抑素进行抗肿瘤药效学观察,用MTT法观察其对血管内皮细胞及肿瘤细胞增殖的抑制作用。结果重组人内抑素,可明显抑制人胃癌BGC803和人乳腺癌B37裸鼠移植性肿瘤的生长,对小鼠肝癌H22实体瘤亦呈一定的抑制作用。MTT试验结果显示重组人内抑素可抑制人胎脐静脉血管内皮细胞ECV304的增殖,对人结肠癌HCT-8等肿瘤细胞的增殖无影响。结论重组人内抑素具有较强的抗肿瘤作用,其作用机理可能与抑制血管内皮细胞增殖、抑制肿瘤新生血管形成有关。     

灵龙颗粒剂的抗肿瘤作用及对免疫功能的影响

目的观察灵龙颗粒剂(简称LLE)抗动物移植性肿瘤和裸鼠人肺癌与体外抑瘤作用及其对荷瘤小鼠免疫功能的影响.方法体内抗肿瘤实验采用腋下接种肿瘤细胞及实体瘤称重的方法;腹腔接种瘤液观察荷瘤动物存活率;裸鼠腋下接种人肺腺癌及实体瘤称重;体外抗肿瘤实验采用直接观察肿瘤细胞增殖的MTT法;2,4-二硝基氟苯诱发的DTH反应采用小鼠耳片差重法;淋巴细胞转化实验采用MTT法检测;TNF-α活性检测采用L929细胞杀伤实验.结果LLE(13.1,17.5,35.0g生药*kg-1)对移植性动物肿瘤S180及H22的抑瘤率分别为47.7%,66.1%,82.0%及67.0%,73.3%,76.4%;使荷EAC肿瘤小鼠的生存期延长; LLE(17.5,35.0g生药*kg-1)对裸鼠人肺腺癌有较强的抑制作用,抑瘤率为60.5%和77.8%;该药还显示一定的体外抑瘤作用;LLE对荷S180及H22小鼠的DTH反应有增强作用;对淋巴细胞转化有明显促进作用;LLE可有效增加荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α的产生.结论ig LLE对荷瘤小鼠具有显著的抗肿瘤作用,且能拮抗荷瘤所致的免疫功能的抑制.     

4-甲基哌嗪-1-二硫代甲酸-(3-氰基-3,3-二苯基)丙酯盐酸盐在小鼠的抗肿瘤作用

目的 :观察 4 甲基哌嗪 1 二硫代甲酸 (3 氰基 3,3 二苯基 )丙酯盐酸盐 (Hyd)对小鼠移植性肿瘤的抑制作用 ,以确定该化合物的应用前景。方法 :采用小鼠肉瘤 180和肝癌 2 2及人胃癌异种移植裸鼠肿瘤模型 ,观察Hyd对小鼠移植性肿瘤生长的影响。结果 :通过口服灌胃给药 ,不同浓度Hyd对小鼠移植性肉瘤S180 抑制率可达到 4 6 .4 %～ 5 9.6 % (P <0 .0 1～ 0 .0 0 1) ;对小鼠移植性肝癌H2 2 抑制率可达到39 .3%～ 5 1.6 % (P <0 .0 5～ 0 .0 0 1) ;对裸鼠人胃癌异种移植瘤的抑制率可达到 18.1%～ 5 9.0 %。结论 :Hyd对小鼠移植性肝癌H2 2 和小鼠移植性肉瘤S180 有明显抑制作用 ,对人胃癌裸小鼠异种移植性肿瘤也有明显抑制作用     

23-羟基桦木酸对B_(16)细胞系的诱导分化作用

目的评价 2 3 羟基桦木酸对黑色素瘤B16细胞的抑瘤作用。方法以MTT法测定细胞增殖的抑瘤率 ,并以B16细胞形态、黑色素含量、细胞周期变化及体内致瘤能力的测定作为观察指标。结果用 10～ 2 0 μg/ml的2 3 羟基桦木酸作用肿瘤细胞 ,见有不同程度的抑瘤作用 (P <0 .0 0 1)。表现为黑色素生成能力增加 ,细胞生长缓慢。可使B16细胞阻断在G1期 ,肿瘤体积明显缩小。结论 2 3 羟基桦木酸低剂量 (10～ 2 0 μg/ml)对B16细胞有明显的分化诱导作用 ,而对体内外黑色素瘤增殖有明显的抑制作用     

乙酰吉他霉素临床前药理学研究

乙酰吉他霉素对临床分离的革兰氏阳性球菌有较好的抑菌活力，其对金葡球菌、β－溶血性链球菌、表葡球菌的ＭＩＣ_（５０）分别为１、０．２２和４ｍｇ／Ｌ，对耐红霉素、青霉素的金葡球菌、表葡球菌半数以上较敏感，与吉他霉素相似，但其对革兰氏阴性菌无明显作用。乙酰吉他霉素对小鼠实验性细菌感染有明显保护作用。对金葡球菌、肺炎双球菌感染小鼠口服用药的ＥＤ_（５０）分别为７９．６和２５．１ｍｇ／ｋｇ。其疗效与吉他霉素、麦白霉素、乙酰螺旋霉素相似。乙酰吉他霉素小鼠１次口服的ＬＤ_（５０）＞１５ｇ／ｋｇ，与吉他霉素相比毒性无差异。     

洛美沙星体内外抗菌活性研究

洛美沙星对革兰氏阴性菌具有强的抑菌活力。对克氏肺炎杆菌的抗菌活性最强,MIC_(50)为0.12mg/L;对痢疾杆菌、产气杆菌、粘质沙雷氏菌、不动杆菌和枸椽酸杆菌的MIC_(50)分别为1和4mg/L。洛美沙星对肠细菌科细菌的活力比诺氟沙星和依诺沙星强2～16倍,明显地比丁胺卡那霉素、庆大霉素强。对金葡球菌MIC_(50)为1mg/L, MRSA对洛美沙星同样敏感。洛美沙星对表葡球菌、链球菌、粪链球菌及肺炎双球菌等的抗菌活性与地氟沙星相似,比诺氟沙星、依诺沙星、丁胺卡那霉素、庆大霉素和头孢三嗪分别强2～4倍。 洛美沙星对小鼠全身感染的疗效优于诺氟沙星。对大肠杆菌、克氏肺炎杆菌和绿脓杆菌感染小鼠iv的ED_(50)分别是0.74、0.13和3.45mg/kg, po的ED_(50)分别是0.94、1.46和6.20mg/kg。     

国产盐酸洛美沙星体内外抗菌作用实验研究

盐酸洛美沙星对革兰阴性菌具有强的抗菌活性，其ＭＩＣ５０多数为０．２５ｍｇ·Ｌ－１；对金葡球菌ＭＩＣ５０为０．５ｍｇ·Ｌ－１；对绿脓假单胞菌ＭＩＣ５０为１ｍｇ·Ｌ－１。盐酸洛美沙星体外抗菌活性与诺氟沙星、氧氟沙星相近而略逊于环丙沙星。盐酸洛美沙星对金葡球菌、大肠杆菌和绿脓假单胞菌感染小鼠ｉｖ的ＥＤ５０分别是４．４７、１．６２和１７．１３ｍｇ·ｋｇ－１，体内抗菌作用较环丙沙星弱但强于诺氟沙星和／或氧氟沙星。     

前列腺肿瘤患者血清CA50和PSA联合检测的临床意义

目的　探讨血清 CA5 0和 PSA的联合检测对诊断前列腺肿瘤的临床意义。方法　分别应用放免法和酶免法对 31例前列腺癌、35例良性前列腺增生和 38例细菌性前列腺炎进行了血清 CA5 0和 PSA测定 ,并与 35名正常健康人作比较。结果　前列腺癌患者血清 CA5 0和 PSA水平高于正常人组 (P<0 .0 1 ) ,良性前列腺增生和细菌性前列腺炎患者与正常人比较差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论　血清 CA5 0和 PSA的联合检测对早期前列腺肿瘤的筛选有一定的临床实用价值     

细辛挥发油的毒性及对家兔脑电活动的影响

本文证明细辛的毒性来源于所含挥发油。挥发油和去油水煎液在等剂量用于小鼠时,挥发油组有70％死亡,去油水煎液无一死亡。通过细辛挥发油对兔脑皮层、海马、中脑网状结构和心电的同步记录,证明其对中枢的作用与巴比妥类相似,都有去同步化低幅快波→高幅慢波→低幅慢波→间断性脑电消失→脑电持续消失的发展过程。心电消失出现在皮层、海马和中脑网状结构脑电消失之后。求得细辛挥发油的LD_(50)和ED_(50)分别为27.0±0.4ml/kg和18.3±0.8ml/kg,安全指数=1.47,显著小于对照药物异戊巴比妥钠。     

MALOTILATE(CL-1500)实验药理研究

CL-1500能使 CCl_4对小鼠的 LD_(50)增大。大鼠静注 CL-1500 100mg/kg,可使胆汁流量增加50%;大鼠灌胃100mg/kg 能明显抑制 CCl_4所致的谷—丙转氨酶的升高。CL-1500小鼠静注 LD_(50)为729.5±2.9mg/kg,皮下注射为1732±176mg/kg。     

精蛋白重组人胰岛素注射液(预混50/50)与50/50混合重组人胰岛素注射液在Beagle犬体内的生物等效性研究

目的研究精蛋白重组人胰岛素注射液(预混50/50)与已上市的50/50混合重组人胰岛素注射液在Beagle犬体内的药动学和生物等效性。方法采用单剂量试验制剂和参比制剂自身双交叉给药方案,12只健康Beagle犬分别皮下注射同剂量精蛋白重组人胰岛素注射液(预混50/50)和50/50混合重组人胰岛素注射液,给药后不同时间经静脉采集血浆标本,同时采用罗氏血糖仪同步测定动物血糖水平;放射免疫分析(RIA)法检测血药浓度;血药浓度数据用DAS 2.0药动学软件拟合计算参数,并进行生物等效性分析。结果 Beagle犬交叉sc 5 U/只试验制剂与参比制剂后,主要药动学参数分别为:平均t1/2为(2.62±2.14)、(1.99±1.37)h;平均Cmax为(108.30±26.90)、(104.60±18.45)μU/m L;平均tmax为(0.94±0.43)、(0.90±0.39)h;平均AUC(0-t)为(362.3±73.6)、(351.7±53.9)μU/(m L·h)。血浆最低葡萄糖浓度(Cmin)分别为(1.74±0.25)、(1.80±0.33)mmol/L,达到最低浓度所需时间(tmin)分别为(1.58±0.97)、(2.02±0.96)h。结论精蛋白重组人胰岛素注射液(预混50/50)与50/50混合重组人胰岛素注射液在Beagle犬体内具有生物等效性。     

糖原磷酸化酶抑制剂高通量筛选模型的建立*

目的:建立糖原磷酸化酶(GPa)抑制剂的体外高通量筛选模型。方法:用梯度离心方法提取大鼠肝脏GPa,以葡萄糖-1-磷酸作为底物,通过测定反应中磷酸根的释放量,间接反映肝脏GPa的活性。通过对反应体系的优化,调整反应条件,建立96孔微孔板的高通量筛选模型,用咖啡因对此模型进行验证,并评价高通量技术参数[Z′-因子(Z-′factor),信号本底比(signal to background,S/B),信噪比(signal to noise,S/N)]。用此模型对5 000个样品(包括合成化合物、天然提取物)组成的随机库进行体外筛选,考察这些样品对GPa的抑制作用。结果:确定反应体系条件是:反应温度25℃,反应时间30 m in,底物浓度0.5 mmol.L-1,大鼠肝脏GPa的用量为250 ng。用此条件测定咖啡因对GPa的抑制曲线,计算其半数抑制浓度(IC50)为(285.3±39.6)μmol.L-1,与文献报道(IC50=240μmol.L-1)基本一致;本模型技术参数Z′-因子=0.79,S/B=0.45,S/N=11.32,表明此模型可以用于高通量筛选。应用此模型筛选得到有活性的化合物9个,其IC50在3.56~45.75μmol.L-1。结论:建立的体外GPa抑制剂高通量筛选模型具有快速、微量、准确的特点,可以作为研究降糖药的工具。     

精制蛇毒酶对小鼠急性毒性研究

目的:观察精制蛇毒酶的急性毒性。方法:采用简化机率法对小鼠尾静脉注射和腹腔注射进行急毒实验,计算半数致死量(LD50)。结果:精制蛇毒酶尾静脉给药的半数致死量(ivLD50)为6.695u﹒kg-1,95%的可信限为6.695±1.498u﹒kg-1;腹腔给药的半数致死量(ipLD50)为4.677u﹒kg-1,95%可信限为4.677±0.793u﹒kg-1。结论:在实验剂量下,精制蛇毒酶低毒、安全。     

愈麻沙芬各组份的药理作用分析

目的：观察愈麻沙芬及其组份的毒理和药理作用。方法：进行ＬＤ５０测定、小鼠酚红法、青蛙纤毛运动法、小鼠氨之引咳法、组织对豚鼠鼻粘膜过敏反应等毒理学与药效学试验,对各组份进行配方分析。结果：愈麻沙芬的三个主要成分组方时在相互作用上未见明显的拮抗和协同现象,各药药效和毒性均未见明显的增强和下降。结果：愈麻沙芬复方制剂中各配方药物表现独特的作用,相互间无明显的影响;复方制剂可使其应用范围更广泛,有利于治疗