生松素减轻大鼠糖尿病肾病

目的研究生松素(PB)对大鼠糖尿病肾病(DN)的治疗作用,并初步探讨其机制。方法将大鼠随机分为对照组(N组,标准饲料)、糖尿病肾病组(M组,高糖高脂饲料+STZ 40 mg/kg)、生松素干预组[高剂量H组:40 mg/(kg·d);低剂量L组:20 mg/(kg·d),灌胃]和缬沙坦干预组[V组,30 mg/(kg·d),灌胃]。造模后4、8和12周末监测血糖、24 h尿蛋白等;用ELISA测定血清AngⅡ水平;光镜观察肾脏病理改变;免疫组化染色检测肾组织NF-κB的表达。结果 1)与M组比较,H、L、V组的尿蛋白定量明显降低(P0. 01); 2) H、L组与M组比较三酰甘油水平明显下降(P0. 01); 3)与M组比较,H、L、V组的肾脏肥大指数明显降低(P0. 05); 4)肾脏组织学:各DN组大鼠肾小球系膜呈不同程度增生,面积增大。H、L和V组系膜增殖系数(MEI)轻于M组(P0. 01); 5) H、L、V与M组比较血清AngⅡ浓度及肾组织NF-κB表达明显降低(P0. 01); AngⅡ浓度和NF-κB表达呈正相关(P0. 001)。结论生松素能减轻大鼠DN,机制可能与抑制AngⅡ/NF-κB信号相关。     

糖尿病大鼠肾小管骨调素和p38MAPK表达的动态研究

目的:动态观察骨调素（OPN）在链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病大鼠肾小管的表达，探讨它与p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、核转录因子-κB（NF-κB）及肾损害之间的关系。方法：雄性SD大鼠，注射STZ诱导糖尿病（DM），随机分成5组，每组分别设鼠龄匹配的正常对照组。免疫组化方法检测肾小管OPN、p38MAPK、NF-κB及纤连蛋白（FN）的表达；Western印迹法检测肾皮质OPN和p38MAPK蛋白质水平；生化方法测定血糖、血肌酐及24 h尿蛋白量；光镜检查肾组织的形态改变。结果： Western印迹和免疫组化检测发现糖尿病3 d大鼠肾组织p38MAPK和DM 7 d OPN的表达增多，并随病程发展而增加，与正常对照组比较有显著差异（P<0.01）。DM 4周，肾小管OPN的表达与p38MAPK、NF-κB、FN表达及蛋白尿呈显著正相关。结论： 糖尿病大鼠肾小管OPN表达增加参与了糖尿病肾小管间质损害的发病机制；肾小管p38MAPK可能介导了DM状态时NF-κB的表达，进而调节OPN的表达增多。     

雷公藤甲素对糖尿病肾病大鼠肾组织PGE2与NF-κB表达的影响

目的观察雷公藤甲素对糖尿病肾病大鼠肾组织前列腺素E2(PGE2)与核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法选取50只雄性SD大鼠,随机分为正常组(n=10)、模型组(n=20)及雷公藤甲素组(n=20)。模型组与雷公藤甲素组大鼠给予高糖高脂饮食,并以链脲佐菌素腹腔注射建立糖尿病肾病大鼠模型。8周后处死大鼠,检测相应生化指标并计算肾脏指数,免疫组织化学方法和Western blot方法检测PGE2与NF-κB的蛋白表达。结果模型组大鼠肾脏指数、血糖、血肌酐和24 h尿蛋白较对照组显著升高,P0.05;与模型组相比,雷公藤甲素组大鼠的各项指数显著降低,P0.05。与对照组比较,模型组大鼠肾脏组织PGE2与NF-κB的蛋白表达显著升高,P0.05;与模型组相比,雷公藤甲素组大鼠肾脏组织PGE2与NF-κB的蛋白表达显著降低,P0.05。结论雷公藤甲素能降低糖尿病肾病大鼠肾组织PGE2与NF-κB的水平,具有一定的肾保护作用。     

蛋白酶体抑制剂PSI对大鼠早期糖尿病肾病发病的作用

目的研究泛素蛋白酶体途径(UPP)对大鼠早期糖尿病肾病(DN)发病的可能作用机制及蛋白酶体抑制剂(PSI)对DN的治疗作用。方法用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型后随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病对照组(DC组)和PSI治疗组(DP组)。检查体质童、肾重、肾重指数、24 h尿微量白蛋白(24 h U-mAlb)、尿蛋白/尿肌酐比值(Up/Ucr)、肾纤维化情况、纤维连接蛋白(FN)mRNA表达及NF-κB和IκBα蛋白表达。结果在6、8周时,与NC组比较,DC组的体质童明显降低(P<0.05),肾重、肾肥大指数(肾重/体质童)、24 h尿量、Up/Ucr、24 h U-mAlb、空腹血糖、FN mRNA均显著性增加(P<0.05,P<0.01)。与DC组相比,DP组体质童明显增加(P<0.05);肾重、Up/Ucr和24 h U-mAlb、FN mRNA均显著性降低(P<0.05);肾重/体质童、24 h尿量、空腹血糖均有所降低,差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot结果显示,与NC组比较,DC组胞浆NF-κB P65蛋白表达显著降低(P<0.05),胞核NF-κB P65蛋白表达增高(P<0.05),而DP组经治疗后与DC组呈现相反改变;与NC组比较,DC组IκBα蛋白表达明显降低(P<0.05),而PSI干预的DP组表达明显高于DC组(P<0.05)。光镜下,6周时,各模型组肾小管轻度扩展,间质无明显增生;8周时,DC组肾小球增大,毛细血管充血,肾小管肿胀,未见明显纤维化改变,DP组以上改变较DC组轻。结论 UPP通过对NF-κB信号通路的泛素化调节从而参与早期DN发生;蛋白酶体抑制剂PSI能改善早期DN,理论上可部分治疗DN。     

核因子-κB在糖尿病肾组织中的表达及干预治疗

核因子(NF)-κB是细胞中一种重要的核转录因子，它参与细胞内的信号转导、免疫反应、炎症反应以及细胞生长发育等多种生物过程，在细胞因子诱导的基因表达中起关键性的调控作用。活化的NF-κB可能通过调控许多炎症因子的转录过程在糖尿病肾病（DN）的发生发展过程中起重要作用。抑制NF-κB的激活和IκB的降解等干预治疗可能是防治DN的手段之一。     

小檗碱对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞增殖影响研究

目的:观察小檗碱(Berberine)对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖影响及对核因子-κB(NF-κB)的影响。方法:采用一次性腹腔注射链脲佐菌素55mg.kg-1诱发糖尿病大鼠模型,取建模成功大鼠胸主动脉中膜血管平滑肌细胞进行培养,倒置显微镜下观察细胞形态,SMA免疫组化染色鉴定细胞,计数法观察细胞的生长曲线,CCK-8法测定小檗碱IC50,共聚焦显微镜下观察小檗碱对VSMC中NF-κB核转移的影响。结果:与正常组对比,糖尿病组VSMC生长速度快,小檗碱能明显抑制糖尿病血管平滑肌细胞增殖,IC50为6.001±0.853μmol.L-1,而对正常大鼠VSMC增殖的IC50为18.229±0.434μmol.L-1(P<0.05)有剂量依赖性;小檗碱能抑制糖尿病VSMC中NF-κB从胞浆转移到胞核。结论:小檗碱呈剂量依赖性能抑制糖尿病VSMC增殖与NF-κB的核转移。揭示小檗碱可能有抑制糖尿病大血管病变作用,而此作用可能与抑制NF-κB激活有关。     

积雪草苷通过抑制NF-κB核转移影响糖尿病大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的：观察积雪草苷是否通过抑制核因子-κB（NF-κB）核转移而影响糖尿病大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖。方法：通过连续喂养高脂饮食8w后一次性腹腔注射链脲佐菌素40mg.kg^-1建立2型糖尿病大鼠模型,取模型成功大鼠胸主动脉中膜血管平滑肌细胞进行培养,倒置显微镜下观察细胞形态,SMA免疫组化染色鉴定细胞后给予40、80、160、320μg·ml^-1积雪草苷干预,计数法描绘血管平滑肌细胞生长曲线,共聚焦显微镜下观察积雪草苷对NF-κB核转移影响,CCK-8法测定积雪草苷IC50。结果：与正常组对比,糖尿病组VSMC生长速度快;同模型组比较,积雪草苷40μg.ml-1以上剂量组能明显抑制糖尿病VSMC中NF-κB从胞浆转移到胞核。积雪草苷抑制糖尿病血管平滑肌细胞增殖IC50为209.26μg·ml^-1。结论：积雪草苷抑制糖尿病VSMC增殖可能与NF-κB核转移有关。     

雷公藤多苷降低糖尿病肾病大鼠炎性细胞因子的表达

目的观察雷公藤多苷(TWP)对糖尿病肾病(DN)大鼠核因子κB(NF-κB)、C-C型趋化因子配体5(CCL5)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)等炎性细胞因子表达的影响。方法链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立DN大鼠模型。动物随机分为正常组、模型组、1.8 g/kg/d TWP治疗组。用药8周末,计算肾脏指数(KI)、全自动生化分析仪检测大鼠血糖(BG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)等生化指标。ELISA检测大鼠血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)和肾匀浆IL-6、TNF-α和CCL5的含量;HE染色观察大鼠肾脏病理学改变;免疫组织化学染色检测大鼠肾组织NF-κB的表达。结果与模型组相比,TWP可改善DN大鼠一般状况;明显降低DN大鼠空腹BG、HbA1c、KI、BUN及Scr水平,增加DN大鼠体质量(P0.01);与模型组比较,TWP明显降低DN大鼠血清hs-CRP水平及肾匀浆中IL-6、TNF-α和CCL5的水平,明显下调DN大鼠肾组织NF-κB的表达(P0.01),经TWP治疗后DN大鼠肾脏病理变化减轻。结论 TWP可降低糖尿病大鼠血清及肾脏炎性细胞因子表达,减轻肾脏病变。     

核因子кB在血管紧张素Ⅱ致动脉粥样硬化中的作用

研 究表明 ,血管紧张素 (ＡｎｇⅡ )在心血管疾病中发挥着重要作用 ,ＡｎｇⅡ参与动脉粥样硬化 (ＡＳ)的发生与发展。核因子κＢ(ｍｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒκＢ ,ＮＦ κＢ)是重要的核转录因子 ,可调节多种参与ＡＳ的基因 ,包括ＡｎｇⅡ基因。本文就ＮＦ κＢ在ＡｎｇⅡ致ＡＳ中的作用作一综述。1　ＡｎｇⅡ在ＡＳ中的作用ＡｎｇⅡ是肾素 血管紧张素系统的主要效应肽[1 ] ,在众多心血管疾病中起重要作用。除其经典作用外 ,ＡｎｇⅡ还通过刺激粘附分子的表达引起血管损伤处炎性细胞的集聚 ,参与许多炎症过程 ,而炎性细胞亦通过产生ＡｎｇⅡ…     

辛伐他汀降低脂质肾损害大鼠肾组织中骨调素表达

目的 观察高脂血症肾损害大鼠肾组织中骨调素（OPN）和单核细胞趋化蛋白1 （MCP-1）表达变化及辛伐他汀对其表达的影响。方法 将雄性wistar大鼠随机分为对照组,高脂组,辛伐他汀治疗组,每组10只。观察12周。实验监测尿蛋白量、血脂、肾功能及肾组织病理学改变;免疫组化技术检测肾组织MCP-1表达,用RT-PCR、免疫印迹检测OPN mRNA和蛋白表达。 结果 实验结束时,高脂模型组及辛伐他汀组血清TC、TG、LDL-C、24h尿蛋白显著高于对照组（P＜0.01）;辛伐他汀组血清TC、TG、LDL-C、24h尿蛋白明显低于高脂组（P＜0.01）,而 HDL-C则明显高于高脂组（P＜0.01）;高脂组大鼠肾小球系膜细胞增生,系膜区增宽,小管间质炎性细胞浸润,而辛伐他汀组病理改变较高脂组有所减轻;高脂组和辛伐他汀组大鼠肾组织中MCP-1、OPN mRNA和蛋白表达显著上调（P＜0.01）;而辛伐他汀组大鼠肾组织中上述指标的表达较高脂组有明显下调（P＜0.05）;肾组织中OPN蛋白表达与其MCP-1表达和尿蛋白量呈高度正相关。结论 辛伐他汀可能通过降低大鼠肾组织中OPN和MCP-1的表达,从而减轻小管间质巨噬细胞浸润,从而降低了高脂血症肾损害。     

糖尿病大鼠肾小管PKCα和CTGF表达的动态变化

 目的：观察糖尿病大鼠肾小管蛋白激酶Cα（PKCα）、结缔组织生长因子(CTGF)和纤维连接蛋白（FN）表达的动态变化，探讨相互间的关系及其在糖尿病肾病发病中的作用。方法：随机将SD大鼠分为正常对照组(A组)、糖尿病2周组（B组）、糖尿病4周组（C组）、糖尿病8周组（D组）、糖尿病12周组（E组）。用免疫组织化学方法检测CTGF、PKCα、FN的表达；用Western印迹法检测CTGF蛋白表达水平； PAS染色，光镜观察肾组织的形态改变；生化方法测定血糖、血肌酐、甘油三酯、总胆固醇及24 h尿蛋白。 结果：随着糖尿病病程的进展，出现肾小管和间质病变，肾小管表达PKCα和CTGF增多，表达部位一致，与此同步，小管间质FN表达也增加，三者之间呈显著正相关。 12周组大鼠血糖高于其余糖尿病组，血脂和血肌酐明显高于正常对照组；蛋白尿十分显著，并且与CTGF和PKCα呈显著正相关。结论：糖尿病状态促进CTGF分泌增多从而使肾小管间质FN等细胞外基质沉积增多，使肾脏肥大和纤维化，而PKCα参与该过程的信号转导。     

果糖二磷酸钠对2型糖尿病大鼠近端肾小管功能蛋白的影响

目的:研究果糖二磷酸钠(FDP)对2型糖尿病(T2DM)大鼠近端肾小管功能蛋白的影响。方法:建立T2DM大鼠模型,给予FDP治疗12 w(5 ml.kg-1.d-1,i.p.),测定大鼠空腹血糖(FBG)、血清超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)和肾脏肥大指数(KW/BW);显微微分离单根肾小管,液闪法测定近端小管(PT)钠泵活性。结果:与正常对照组比较,T2DM模型组大鼠FBG和KW/BW显著升高,SOD、NOS和PT管周膜上钠泵活性显著降低(P<0.01);与T2DM模型组比较,FDP治疗组大鼠FBG和KW/BW显著降低,SOD、NOS和PT管周膜上钠泵活性显著升高(P<0.01)。结论:FDP能够保护T2DM大鼠近端肾小管功能蛋白的活性,其机制可能与FDP降低动物体内血糖水平和提高机体抗氧化能力有关。     

Snaill在糖尿病大鼠肾组织中表达增加

目的 观察Snaill在糖尿病大鼠肾组织中的表达.并初步探讨其在糖尿病肾病(DN)发生、发展中的作用.方法 大鼠随机分为对照组(C)、糖尿病组(DM)、胰岛素治疗组(A).检测Snaill、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素及纤连蛋白(FN)的蛋白和(或)mRNA表达.结果 Snaill阳性染色见于各组DM大鼠肾小管.从16周开始在DM大鼠肾小管上皮细胞可见α-SMA蛋白阳性表达.肾皮质Snaill与FN蛋白和mRNA的表达水平均显著增加(P＜0.05),而治疗组上述指标显著降低(P＜0.05).E-cadherin蛋白及mRNA表达与Snaill呈负相关.结论 Snaill基因和蛋白在DM大鼠肾小管高表达,并可能通过介导FN生成和抑制E-cadherin转录触发肾小管上皮细胞EMT参与了DN的发生和发展.     

Upregulation of osteopontin in Schwann cells of the sciatic nerves of Lewis rats with experimental autoimmune neuritis

We examined the expression of osteopontin (OPN) in the sciatic nerves of rats with experimental autoimmune neuritis (EAN), using immunohistochemistry and immunoblotting, to study its involvement in the pathogenesis of autoimmune peripheral nervous system diseases. Constitutive OPN expression was detected in some Schwann cells; expression was increased after immunization with adjuvant alone. At day 14 after induction of EAN, many Schwann cells had a granular pattern of immunoreactivity, whereas very few inflammatory cells were OPN-positive. Even after recovery from hindlimb paralysis, at 24 days post-immunization, OPN expression remained elevated in the Schwann cells. The results suggest that OPN expression in Schwann cells is easily induced by immunostimulation, and further enhanced by the inflammatory reaction in EAN. Continued elevation of OPN after recovery may represent a functional recovery after a transient inflammatory insult.     

吡格列酮对2型糖尿病大鼠肾脏及单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的：观察吡格列酮对2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠血、尿单核细胞趋化蛋白 1（monocyte chemoattractant protein 1,MCP 1）表达及肾脏组织结构和功能的影响。方法：正常对照组(NC组)喂以常规饲料;采用高糖高脂膳食、小剂量链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）注射的方法建立2型糖尿病大鼠模型,将成模的大鼠随机分为糖尿病（DM组）和吡格列酮（PIO组）,后用吡格列酮对PIO组大鼠进行干预治疗。8周后检测血糖水平、尿生化结果、肾脏组织病理的改变情况,同时检测尿MCP 1指标的变化。结果：与NC组比较,DM组和PIO组第8周空腹血糖及糖化血红蛋白水平均明显升高,但DM组、PIO组间差异无统计学意义（P＜0.05）;第8周DM组、PIO组尿白蛋白/尿肌酐(urinary albumin／creatinine ratio,ACR)、尿视黄醇结合蛋白(urinary retinol binding protein,URBP)、尿MCP 1(urinary monocyte chemoattractant protein 1,UMCP 1)和肾脏肥大指数均高于NC组,PIO组4项指标较DM组明显降低,且UMCP 1与ACR,URBP及肾脏肥大指数呈正相关;病理显示PIO组大鼠肾小球病变程度均较DM组明显减轻,MCP 1表达减少。结论：吡格列酮对2型糖尿病大鼠肾脏有明显的保护作用,这种保护作用是独立于降糖作用之外的。其机制可能与其抑制肾组织MCP 1表达及其排泄有关。     

黏着斑激酶在2型糖尿病大鼠肾组织中的表达变化及意义

 目的：观察黏着斑激酶（FAK）在2型糖尿病（T2DM）大鼠肾组织中的动态变化,探讨其在糖尿病肾病（DN）发病机制中的作用。方法：复制T2DM模型,随机分为糖尿病8、12和16周(DM8、DM12和DM16)组,另设正常对照(NC)组和高脂高糖对照(HC)组。免疫组织化学检测肾组织中FAK、转化生长因子β1(TGF-β1)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p-ERK1/2和纤维连接蛋白(FN)的表达;Western blotting检测FAK和p-FAK(Tyr397)蛋白水平;RT-PCR法检测肾皮质FAK mRNA的水平。结果：DM各组TGF-β1、p-ERK1/2和FN蛋白表达显著高于NC组及HC组(P<0.05);DM12和DM16组肾皮质FAK和p-FAK (Tyr397)表达均较NC组、HC组及DM8组显著增多(P< 0.05),且p-FAK(Tyr397)与总FAK蛋白表达趋势一致;FAK与TGF-β1、p-ERK1/2、FN呈显著正相关（P<0.01）。DM12和DM16组FAK mRNA比NC组、HC组及DM8周组表达明显增加(P< 0.05)。结论: 在2型糖尿病中,FAK可能作为TGF-β1的下游分子被活化,并通过活化ERK1/2使FN表达增多,从而参与了糖尿病肾病的发生发展。     

反义RNA对培养的肾小管上皮

目的:探讨骨调素(OPN)反义RNA对培养的肾小管上皮细胞骨调素表达的影响。方法:脂质体介导将表达OPN反义RNA的逆转录病毒重组载体转染大鼠肾小管上皮细胞系NRK52E细胞,建立稳定表达OPN反义RNA的肾小管上皮细胞克隆,以转染了表达OPN顺义RNA和空白逆转录病毒载体的肾小管上皮细胞克隆为对照,以表皮生长因子(EGF)为刺激剂,通过核酸酶保护分析(RPA),WesternBlot,ELISA和OPN生物活性分析检测上述克隆细胞的OPN表达。结果:OPN反义RNA仅被反义克隆细胞表达,反义克隆、顺义克隆和空白克隆细胞均有OPNmRNA的表达,EGF能增加它们OPNmRNA的表达水平,但不增加反义RNA或顺义RNA的表达水平;加或不加EGF的反义克隆细胞和不加EGF的空白克隆细胞无OPN蛋白的表达,加或不加EGF的顺义克隆细胞和加EGF的空白克隆细胞有OPN蛋白的表达。结论:OPN反义RNA能抑制肾小管上皮细胞OPNmRNA的翻译而抑制OPN蛋白的表达,但不抑制OPNmRNA的转录。