小檗碱增强阿霉素诱导的膀胱癌T24细胞凋亡

 目的:研究小檗碱对阿霉素诱导的膀胱癌T24细胞凋亡的影响及机制。方法:将膀胱癌T24细胞分为对照组、阿霉素组、阿霉素+小檗碱组和小檗碱组。采用CCK-8试剂盒测定膀胱癌T24细胞的增殖抑制率。采用Hoechst 33258染色剂检测细胞凋亡,同时测定caspase-3和caspase-9活性以及Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:小檗碱呈剂量和时间依赖性地促进阿霉素诱导的T24细胞凋亡。与阿霉素组比较,小檗碱+阿霉素组caspase-3、caspase-9活性和Bax蛋白的表达水平明显增加,而Bcl-2蛋白表达水平降低。结论:小檗碱可进一步增强阿霉素对T24细胞增殖的抑制作用,其机制与小檗碱增强阿霉素诱导的T24细胞凋亡有关。     

青蒿琥酯对膀胱癌T-24细胞生长的影响

目的：探讨青蒿琥酯(artesunate,Art)对人膀胱癌T-24细胞的抑制作用及机制。方法用不同浓度的Art干预人膀胱癌T-24细胞,采用MTT法检测用药后细胞增殖的改变;划痕实验检测鱼藤素对细胞迁移能力的影响;流式细胞术(FCM)检测细胞周期的改变和凋亡率。结果与对照组比较,Art可显著抑制人膀胱癌T-24细胞株增殖(<0.01);划痕实验结果显示,鱼藤素可降低T-24细胞的迁移能力;FCM结果显示Art可使人膀胱癌T-24细胞周期阻滞在G0/G1期,并可诱导T-24细胞的凋亡(<0.01)。结论 Art可显著抑制T-24细胞的增殖以及降低其迁移能力,其机制可能与Art使T-24细胞生长周期阻滞在G0/G1期并诱导其凋亡相关。     

卡介苗素膀胱灌注预防膀胱癌术后复发的临床研究

目的探讨卡介苗素膀胱内灌注预防膀胱癌术后复发的疗效、安全性．方法47例膀胱癌术后患者分2组。分别应用卡介苗素和卡介苗定期行膀胱内灌注，随访10～32个月，了解灌注后肿瘤复发情况及并发症。并于灌注前、后检测2组尿液中IL－2、IL－6、IL－8的变化情况．结果卡介苗膀胱灌注组肿瘤复发4例（17．4％）。副反应发生18例（78．3％），卡介苗素膀胱灌注组肿瘤复发5例（20．8％）。副反应发生率11例（45．8％），2组尿液中IL－2、IL－6、IL－8值灌注后高于灌注前（P〈0．05）．两组肿瘤复发率、IL-2、IL-6、IL-8值灌注前后比较无显著差异，副反应卡介苗组明显高于卡介苗素组（P〈0．05）．结论卡介苗素膀胱灌注预防膀胱癌术后复发的有效率与卡介苗相同，但不良反应明显减少。患者耐受性好，因此卡介苗素可成为膀胱浅表移行上皮细胞癌临床治疗和预防复发的一种有效药物．     

卡介苗素膀胱灌注预防膀胱癌术后复发的临床研究

目的探讨卡介苗素膀胱内灌注预防膀胱癌术后复发的疗效、安全性.方法 47例膀胱癌术后患者分2组,分别应用卡介苗素和卡介苗定期行膀胱内灌注,随访10～32个月,了解灌注后肿瘤复发情况及并发症,并于灌注前、后检测2组尿液中IL-2、IL-6、IL-8的变化情况.结果卡介苗膀胱灌注组肿瘤复发4例(17.4%),副反应发生18例(78.3%),卡介苗素膀胱灌注组肿瘤复发5例(20.8%),副反应发生率11例(45.8%),2组尿液中IL-2、IL-6、IL-8值灌注后高于灌注前(p<0.05).两组肿瘤复发率、IL-2、IL-6、IL-8值灌注前后比较无显著差异,副反应卡介苗组明显高于卡介苗素组(p<0.05).结论卡介苗素膀胱灌注预防膀胱癌术后复发的有效率与卡介苗相同,但不良反应明显减少,患者耐受性好,因此卡介苗素可成为膀胱浅表移行上皮细胞癌临床治疗和预防复发的一种有效药物.     

顺铂注射液膀胱灌注预防膀胱癌术后复发

目的：探讨顺铂(PDD)注射液在预防膀胱癌术后复发中的作用。方法：对行保留膀胱手术治疗的28例膀胱癌患，术后采用PDD注射液60mg／次定期膀胱灌注，总疗程2a。结果：28例均获随访，随访时间20月～37月，平均20．4月。复发2例，复发率为7．1％(2／28)；并发尿道狭窄3例。结论：PDD注射液膀胱灌注预防膀胱癌术后复发具有较好的临床效果及较少的毒副作用，值得临床推广使用。     

顺铂和阿霉素联合抑制舌鳞癌Tca8113细胞增殖

目的 观察顺铂和阿霉素联合作用对人舌鳞癌Tca8113细胞生长的抑制作用,以及对细胞周期和凋亡的影响.方法 不同浓度顺铂、阿霉素及两者联合作用于人舌鳞癌Tca8113细胞,用MTT法观察细胞增殖情况以及药物对细胞生长的抑制效应.用流式细胞仪观察细胞凋亡和细胞周期.结果 顺铂(r=0.538,P<0.01)和阿霉素(r=0.642,P<0.01)呈剂量和时间依赖性抑制Tca8113细胞生长.单独用1.25 μmol/L阿霉素作用24 h,对Tca8113细胞的生长无显著影响.不同浓度顺铂(2～10mg/L)单独作用24 h,仅10 mg/L浓度可显著抑制Tca8113细胞的生长(P<0.01).1.25 μmol/L阿霉素与顺铂联合应用24h后,4、6、8、10mg/L顺铂均可显著抑制Tca8113细胞生长,且与相应浓度的单独用药组比,差异均有统计学意义(均为P<0.001).1.25 μmol/L阿霉素、6 mg/L顺铂以及阿霉素1.25 μmol/L+顺铂6 mg/L均显著改变G_0～G_1期(50.00±0.32%,43.53±2.026%.50.77±3.83%)和s期(36.5±1.05%.40.8±2.52%,30.87±2.65%)细胞百分比(均为P<0.01),联合用药的作用较单一用药组更显著(P<0.05).上述药物对细胞凋亡的作用均不明显,联合用药后坏死细胞比例明显增加.结论 顺铂和阿霉素联合作用,可显著地抑制人舌鳞癌细胞分化增殖,并增强药物的细胞毒性作用.     

苹果酸舒尼替尼抑制膀胱癌T24细胞系的体外增殖

 摘要：目的：探讨苹果酸舒尼替尼对人膀胱癌T24细胞系体外增殖的影响。方法：取人膀胱癌T24细胞系悬液, 分别加入浓度为0.625、1.25、2.5、5、10 和 20μmol/L的苹果酸舒尼替尼,分别于24、48、72 h进行处理,用细胞毒抑制实验（MTT法）检测药物对其生长的影响。结果：苹果酸舒尼替尼可浓度依赖性抑制人膀胱癌细胞系T24细胞增殖,当药物浓度>5μmol/L时,苹果酸舒尼替尼与顺铂比较,对T24细胞系具有更强的抑制作用（P<0.05）。这种抑制作用随着药物培育时间延长（24、48、72ｈ）而增强,表现为IC50值显著降低, 但其抑制能力与顺铂比较无显著差别（P>0.05）。结论：苹果酸舒尼替尼可呈浓度和时间依赖地抑制膀胱癌T24细胞系增殖。     

小檗碱增强丝裂霉素C诱导的膀胱癌T24细胞周期阻滞及凋亡

目的:研究小檗碱(berberine,Ber)增强丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)诱导的人类膀胱癌T24细胞周期阻滞和细胞凋亡的作用及其相关机制。方法:将T24细胞分为4组:对照组、MMC组、MMC+Ber组和Ber组;采用CCK-8法检测不同药物处理后T24细胞的活力;采用流式细胞术分析不同药物处理后T24细胞周期的情况;Western blot检测细胞周期调控相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达;Annexin V-FITC/PI双染后用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果:CCK-8实验表明Ber能增强MMC抑制T24细胞活力的作用;流式细胞术检测细胞周期结果显示,MMC+Ber组T24细胞滞于G_0/G_1期(P0.05);与MMC组相比,MMC+Ber组p21和p27的蛋白表达上调(P0.05),cyclin D1、CDK2和CDK4的蛋白表达下调(P0.05),同时Ber促进MMC下调survivin的蛋白表达(P0.05);Annexin V-FITC/PI双染结果显示,Ber能促进MMC诱导的T24细胞凋亡(P0.05)。结论:Ber能显著增强MMC抑制T24细胞活力的作用,其机制可能是通过上调p21和p27,进而抑制cyclin D1、CDK2和CDK4表达;同时通过抑制survivin蛋白的表达,最终导致细胞被阻滞在G_0/G_1期,并促进细胞凋亡。     

膀胱癌T24中肿瘤干细胞样细胞的分离与鉴定

目的观察使用无血清培养基悬浮培养能否从膀胱癌T24中分离出微球体,并证实其是否有肿瘤干细胞的特点。方法使用无血清培养基DMEM/F12添加生长因子EGF、bFGF、胰岛素、B27对膀胱癌T24进行悬浮培养,并从长期增殖能力、克隆形成能力、自我更新能力、对放化疗的抵抗能力、迁移和侵袭能力等方面证实这些微球体是否有肿瘤干细胞的特点。结果从培养的第4天开始长出微球体,微球体细胞比普通贴壁T24细胞有更强的增殖能力和克隆形成能力,对放化疗的抵抗能力更强,有更强的迁移和侵袭能力,微球体有自我更新能力,具有肿瘤干细胞的特点。结论使用无血清悬浮培养可以从T24中分离出微球体,而且这些微球体细胞有肿瘤干细胞的特点。     

表阿霉素联合索拉非尼增强乳腺癌MCF-7细胞凋亡体外研究

目的探讨表阿霉素(Epirubicin)联合分子靶向药索拉非尼(Sorafenib)对乳腺癌MCF-7细胞凋亡作用。方法采用人乳腺癌(MCF-7)细胞株。实验分为4组,即对照组、表阿霉素单药组、索拉非尼单药组、索拉非尼+表阿霉素联合组。对各组细胞给予相应药物处理,72h后经流式细胞仪检测各组药物对MCF-7细胞凋亡的作用。结果索拉非尼或表阿霉素单药作用后经流式细胞仪检测,细胞凋亡率均较对照组升高(P0.05),索拉非尼组诱导的细胞凋亡率为6.34%,表阿霉素组为13.35%。与单药组比,索拉非尼+表阿霉素联合组凋亡率升高更为明显,达23.47%(P0.05)。结论索拉非尼和表阿霉素的联合应用使抗肿瘤活性显著增强。     

siRNA下调SNCG基因表达抑制膀胱癌细胞系5637的增殖和侵袭

目的探讨突触核蛋白γ(SNCG)基因对膀胱癌细胞5637增殖和侵袭能力的影响。方法设计并合成3对SNCG-siRNA序列,转染5637细胞后,用RT-q PCR和Western blot检测SNCG的表达。分别通过CCK-8增殖实验和侵袭实验评估5637细胞增殖和侵袭能力。结果与膀胱癌细胞系T24、EJ和UMUC-3相比,5637细胞中SNCG表达水平最高(P0.05);与空白和阴性对照组相比,3对SNCG-siRNA序列转染5637后均可抑制SNCG mRNA和SNCG蛋白的表达(P0.05),但SNCG-siRNA-244组抑制效果最明显;实验组5637细胞的增殖受到明显抑制(P0.05),且细胞的侵袭能力显著下降(P0.05)。结论通过特异性干扰SNCG基因的表达可抑制膀胱癌细胞5637的增殖和侵袭,SNCG的siRNA序列可能成为膀胱癌治疗的新靶点。     

RON基因在膀胱癌组织中的表达及对T24细胞增殖的影响

目的探讨RON基因对T24细胞增殖与迁移的影响。方法收集膀胱癌组织标本,通过RT-q PCR检测RON在膀胱癌组织中的表达,其次用siRNA技术干扰T24细胞RON,用RT-q PCR、Western blot检测干扰效果,CCK-8、Transwell实验及流式细胞术分别检测细胞的增殖、迁移及细胞凋亡。结果膀胱癌组织中RON表达与TNM分期呈正相关(P0.05)。在T24细胞的RON-siRNA组,细胞增殖能力减弱(P0.05),迁移与侵袭能力降低(P0.05),凋亡细胞数增加(P0.05),同时P-ERK蛋白表达减少,但Total-ERK表达不变。结论 RON基因促进膀胱癌细胞的增殖与迁移,有望成为膀胱癌治疗的新靶点。     

Inhibition of urinary bladder cancer cell proliferation by silibinin

Silibinin, a natural compound extracted from milk thistle, has demonstrated antitumor properties in urinary bladder cancer cells; however, the role of TP53 gene in these effects is unclear. In order to better understand the molecular and antiproliferative mechanisms of this compound, urinary bladder cancer cells with different TP53 gene status, RT4 (low-grade tumor, wild TP53 gene), 5637 (high-grade tumor, Grade 2, mutated TP53 gene), and T24 (high-grade tumor, Grade 3, mutated TP53 gene) were treated with several concentrations of silibinin (1, 5, 10, 50, 100, and 150 μM). Cytotoxicity, prooxidant effect, morphological changes, cell migration, cell cycle progression, global methylation profile, and relative expression of HOXB3, c-MYC, PLK1, SMAD4, SRC, HAT, HDAC, and RASSF1A genes were evaluated. The silibinin presented cytotoxic and prooxidant effects in the three cell lines. In mutated TP53 cells, significant interference in cell migration and cell cycle arrest at the G2/M phase was observed. Additionally, silibinin induced global DNA hypomethylation in the highest grade tumor cells. For wild-type TP53 cells, a sub-G1 apoptotic population was present. Furthermore, there was modulation of gene expression responsible for cell growth (SMAD and c-MYC), migration (SRC), cell cycle kinetics (PLK1), angiogenesis (HOXB3), and of genes associated with epigenetic events such as DNA acetylation (HAT) and deacetylation (HDAC). In conclusion, the silibinin inhibited the urinary bladder tumor cell proliferation independently of TP53 status; however, cell cycle effects, gene expression changes, and alteration of cell migration are dependent on TP53 status. © 2020 Wiley Periodicals, Inc.     

猪苓多糖对重组卡介苗在膀胱癌细胞株T24作用部位的影响

目的：探讨猪苓多糖（PPS）对重组绿色荧光蛋白的卡介苗（rBCG）在人膀胱癌细胞株T24作用部位的影响。方法：将rBCG表达的绿色荧光蛋白作为报告基因，用激光共聚焦显微镜和流式细胞术分析rBCG以及其与PPS协同rBCG刺激培养的T24细胞的变化。结果：T24细胞与rBCG相互作用24h以后，T24细胞质中发现明显的绿色荧光（86．335±5．856）。流式细胞术检测显示rBCG组24、48h细胞，SS＆FS为参数的散点光信号强于对照组，T24细胞群向右上方偏移；FLl通道检测到GFP＋T24细胞[（8．7±1．572）％、（13．8±2．31）％，P〈0．01]。rBCG联合PPS用药组T24细胞细胞核内绿色荧光（72．603±1．165）增强，细胞质荧光（93．06±0．958）减弱，核／质荧光强度比（0．78±0．005）增大，与rBCG组（62．832±2．909，105．306±6．393，0．597±0．012）相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：rBCG能够直接进入T24细胞细胞质中。     

GSTT1 as a prognosticator for recurrence and progression in patients with non-muscle-invasive bladder cancer

Although polymorphisms in glutathione S-transferase (GST) have been associated with the risk of bladder cancer (BC), few reports provide information about the development of BC. The aim of the present study was to investigate the effect of homozygous glutathione S-transferase-μ (GSTM1) and glutathione S-transferase-&phis; (GSTT1) deletions as prognostic markers in non-muscle-invasive bladder cancer (NMIBC). A total of 241 patients with primary NMIBC were enrolled in this study. GSTM1 and GSTT1 polymorphisms were analyzed by multiplex polymerase chain reaction (PCR) using blood genomic DNA. The results were compared with clinicopathological parameters. The prognostic significance of the GSTs was evaluated by Kaplan-Meier and multivariate Cox regression model. A statistically significant association between genotype and histopathological parameter was not observed. The patients with the GSTT1-positive genotype had significantly reduced recurrence- and progression-free survival than those with the GSTT1-null genotype (log-rank test, p < 0.05, respectively). Recurrenceand progressionfree survival were not related to the GSTM1 genotypes. In multivariate regression analysis, the GSTT1positive genotype was the independent predictor for recurrence [hazard ratio (HR), 1.631; p = 0.043] and progression (HR, 3.418; p = 0.006). These results suggested that the GSTT1 genotype could be a useful prognostic marker for recurrence and progression in NMIBC.     

猪苓多糖联合卡介苗诱导的细胞外热休克蛋白对巨噬细胞功能的影响

目的 研究猪苓多糖联合卡介苗刺激T24膀胱癌细胞株后,细胞外HSP的表达及其对J774A.1巨噬细胞TLR2、TLR4,胞内钙离子(Ca2+)、一氧化氮(NO)和活性氧(ROS)表达的影响,探讨膀胱内灌注卡介苗治疗浅表性膀胱癌的免疫启动和免疫调节机制.方法 用ELISA的方法检测猪苓多糖和卡介苗联合刺激T24膀胱癌细胞后胞外HSP90、HSP70、HSP60、HSP27的表达,胞外HSP作用于J774A.1巨噬细胞后,用流式细胞术检测J774A.1巨噬细胞表面TLR4和TLR2的表达,应用激光共聚焦扫描技术,检测J774A.1细胞内Ca2+、NO和ROS的动态变化.结果 猪苓多糖和卡介苗联合作用组胞外HSP的表达明显高于猪苓多糖和BCG单独使用组(P＜0.05),48h时胞外HSP的表达至峰值,且胞外HSP70呈优势表达;胞外HSP可上调J774A.1巨噬细胞TLR4的表达(P＜0.05),对J774A.1细胞内Ca2+、NO和ROS有明显的调节作用(P＜0.05).结论卡介苗体外直接刺激人T24膀胱癌细胞后,可表达细胞外HSP90、HSP70、HSP60、HSP27,猪苓多糖和卡介苗联合使用可增加其表达.细胞外HSP对J774巨噬细胞有一定的免疫调节作用.     

刚地弓形虫培养上清抑制肺癌A549细胞系增殖

目的研究刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)培养上清对体外培养的肺癌细胞A549增殖及细胞周期的影响。方法取对数生长期的A549细胞(浓度为5×104mL-1)分别接种于不同细胞培养板,对照组加入RPMI-1640孵育,试验组加入相同体积不同数量(4×107mL-1、8×107mL-1、16×107mL-1)弓形虫速殖子培养上清孵育不同时间后,四甲基氮噻唑蓝(MTT)法检测吸光度(A490值);PI染色后检测细胞周期;以Western blot检测细胞周期蛋白cyclinB1、cdc2表达或活性。结果弓形虫培养上清呈时间剂量依赖性抑制A549细胞系增殖,处理组细胞周期在G2/M期产生阻滞;A549细胞系的cyclinB1、cdc2蛋白表达量下降。结论刚地弓形虫培养上清能够抑制肺癌A549细胞系增殖,并通过调节cyclinB1、cdc2等蛋白表达或活性改变引起肺癌A549细胞系G2/M期阻滞。     

西格列汀抑制膀胱癌细胞增殖和诱导细胞凋亡

目的观察西格列汀对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响。方法西格列汀处理膀胱癌细胞T24及5637后,MTS检测细胞的增殖活性;Western blot检测细胞内组织蛋白酶B以及凋亡相关蛋白的表达变化。结果西格列汀显著抑制了膀胱癌细胞的增殖,经西格列汀处理后,T24及5637细胞内组织蛋白酶B的蛋白表达水平明显下降,凋亡相关蛋白PARP的剪切体表达水平升高。结论西格列汀抑制膀胱癌细胞增殖和诱导癌细胞凋亡,同时降低细胞内组织蛋白酶B的蛋白表达。