P21和P53蛋白在人鼻咽癌中的表达

Ｐ２１和Ｐ５３蛋白在人鼻咽癌中的表达郑天荣谢佐福张竞时林贤东蔡晓文一、材料与方法选择我院１９９４年２月～１０月经病理证实的鼻咽活检组织５０例。其中低分化鳞状细胞癌４５例，泡状核癌和低分化腺癌各１例，鼻咽慢性炎症３例。组织经１０％福马林固定，石蜡包埋，...     

NGF诱导PC12细胞分化机制的研究进展

神经生长因子诱导 PC12细胞分化是一个复杂的信号调节过程 ,其中有诸多因子和信号传导途径参与NGF可通过不同信号途径诱导 PC12细胞分化。本文在 Ras/ MAPK途径、PI- 3K信号途径及细胞周期等方面的研究作一综述     

P2X4受体在高糖介导PC12细胞损伤中的作用及其机制研究

目的 探讨P2X4受体在高糖介导PC12细胞损伤中的作用及其可能的作用机制.方法 通过高糖处理PC12细胞建立拟糖尿病细胞损伤模型,应用MTS比色法检测不同糖浓度对细胞的损伤作用并确定最佳建模浓度.对各组细胞进行不同干预后,通过ELISA方法检测各组细胞上清液中TNF-α和IL-1β的含量;通过qPCR和Western Blot方法检测细胞内P2X4 mRNA、受体蛋白和P65蛋白变化.结果 不同糖浓度处理细胞24h后,细胞存活率随糖浓度增大逐渐降低;通过高糖建模并经不同处理发现,与对照组相比,高糖组细胞存活率明显下降,高糖+5-BDBD组与之相比显著上升;通过qPCR和Western Blot检测发现,与对照组相比,高糖组细胞P2X4 mRNA、受体蛋白和NF-κB蛋白的表达均明显上升,高糖+5-BDBD组与之相比有所下降,且与对照组无明显差异.结论 P2X4受体参与高糖介导PC12细胞损伤,高糖能诱导PC12细胞NF-κB转录复合体形成,进而介导P2X4受体表达上调,使细胞过度激活并大量释放TNFα、IL-1β等炎性因子对细胞产生毒副作用.     

P53、P21WAFI、MDM2及BAX在食管鳞癌中的表达和相关性分析

目的：检测P53、MDM2、P21^WAFI、BAX在食管鳞癌中的表达,探讨它们与食管鳞癌临床病理特征之间的关系。方法：采用免疫组化检测食管鳞癌、正常食管粘膜和不典型增生组织中上述基因蛋白的表达。结果：各指标在上述组织中的表达有显著性差异。MDM2在淋巴结转移组中的阳性表达率为80％,未转移组中为35．7％,两者之间有显著性差异。随着食管鳞癌组织学分级的增高,P53、MDM2的表达逐渐增高,P21^WAFI、BAX的表达逐渐降低。结论：P53、P21、MDM2、BAX多个基因的异常在食管癌的发生、发展过程中共同发挥作用;MDM2过表达与肿瘤的侵袭性和转移有关。P53、P21^WAFI、MDM2在食管鳞癌中的表达无相关性,P53与BAX的表达呈负相关。     

P53在细胞缺氧调控中的作用

缺氧损伤是常见而又重要的病理过程,P53蛋白在缺氧调控中发挥的作用也逐渐为人们所认识。P53可在细胞核内富集并协助细胞快速应答缺氧信号,还能根据缺氧程度等因素间接决定缺氧损伤细胞的命运,促使细胞周期停滞、衰老或凋亡等。因此,P53是细胞缺氧损伤与保护过程中的重要影响因素。     

奥氮平对鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡的保护作用

探讨非典型抗精神病药物奥氮平对鱼藤酮诱导神经元凋亡的可能保护作用及其机制。以NGF诱导后的PC12细胞作为细胞模型,采用鱼藤酮诱导细胞凋亡。用不同浓度奥氮平、氟哌啶醇预处理后,观察鱼藤酮对PC12细胞的作用,分别用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性、流式细胞仪检测细胞凋亡率、Hoechst33342染色观察细胞形态学改变,并对二者的结果进行比较。鱼藤酮以剂量依赖的方式杀死PC12细胞。鱼藤酮(6μmol/L)作用后,奥氮平(50μmol/L)组预处理48h的细胞活力显著高于对照组(无药物预处理)(P<0.05);鱼藤酮(4、6、8μmol/L)作用后,氟哌啶醇组(20、40、60μmol/L)的细胞活力均低于对照组。流式细胞仪检测结果显示,对照组、氟哌啶醇(20μmol/L)组、奥氮平(50μmol/L)组、空白对照组(无药物预处理以及鱼藤酮处理)的细胞凋亡率依次为(32.2±1.3)%、(42.1±1.0)%、(14.0±1.0)%和(1.3±0.3)%。Hoechst33342染色结果显示,对照组每个视野多见凋亡细胞,细胞核裂解为碎块,氟哌啶醇组更明显;奥氮平组凋亡细胞数量较氟哌啶醇组及对照组为少。结果提示奥氮平对鱼藤酮诱导PC12细胞的凋亡具有保护作用,这可能是奥氮平和氟哌啶醇在精神分裂症病人应用中有不同的治疗效果和副作用的部分机制。     

红景天苷对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的:探讨红景天苷对MPP+诱导的PC12细胞凋亡是否具有保护作用.方法:采用MPP+诱导的具有多巴胺能神经元特性的PC12细胞凋亡作为PD的体外模型.实验分对照组、 500 μmoL/L MPP+诱导组、红景天苷(10、 50、 100 μmol/L)3个浓度预处理组.用MTT法测定细胞活性, 流式细胞术检测细胞凋亡, TUNEL法检测细胞凋亡断裂的DNA片段.结果:10、 50、 100 μmoL/L红景天苷对MPP+诱导的PC12细胞具有一定的保护作用.与MPP+组(50.2±1.8)%相比, 10、 50、 100 μmoL/L红景天苷预处理细胞活力分别上升为(65.1±1.0)%、 (69.5±2.3)%、 (80.9±2.0)%(P<0.05).流式细胞术检测提示正常组、 MPP+组、红景天苷预处理组(10、 50、 100 μmoL/L)凋亡百分率分别为0.9%、 34.5%、 26.9%、 20.1%、 14.2%.经红景天苷预处理后, 与MPP+组相比较细胞断裂的DNA片段明显减少.结论:红景天苷对MPP+诱导的细胞凋亡具有浓度依赖性的保护作用.     

肌肽对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

本研究采用过氧化氢和谷氨酸纳作用于PC12细胞,成功的制作了氧化应激损伤的细胞模型。将培养的细胞进行分组：正常对照组;损伤组;分别给予过氧化氢和谷氨酸钠;肌肽保护组,同损伤组的制备,但予先加入肌肽。用MTT法检测了各组细胞的生长状态并测定了LDH活性,观察了细胞形态和蛋白电泳等。结果表明：在保护组,MTT的测定结果高于损伤组,LDH低于损伤组,其细胞生长状态和蛋白质电泳结果也与损伤组有显著差异,证明了肌肽对PC12细胞的氧化应激损伤有明显保护作用。     

细胞核和线粒体的P53凋亡途径

与P53介导的细胞周期抑制相比，由DNA损伤、氧化作用以及致癌物引起的P53诱导的细胞凋亡机制还知之甚少，阐明P53肿癌抑制基因诱导凋亡是当务之急，P53作为抗癌靶分子主要在于它的凋亡作用，揭开P53诱导凋亡途径之谜，可以证明P53具有生化多样性，其功能远远超出一个单纯转录因子的功能。线粒体内P53蛋白诱导凋亡的证据表明，协同P53转录活性功能，将使P53诱导的调亡路径变得更加复杂。     

MGMT及P53在脑胶质瘤组织中的表达及其生物学意义

目的探讨MGMT及P53蛋白在人脑胶质瘤中的表达及其与肿瘤发生和恶性度的关系.方法对39例人脑胶质瘤标本用免疫组化法检测MGMT和P53蛋白的表达,观察两者的相互关系及其和肿瘤恶性度间的关系.结果不同恶性程度胶质瘤间MGMT的阳性表达率无明显区别(p=0.496745),但表达强度却明显不同(p=0.018781), 两者呈明显的负相关(r=-0.629,p<0.05).P53蛋白的阳性表达率(p=0.027648)和表达强度(p=3.5×10-118)在不同恶性程度肿瘤间都有明显差异,与肿瘤的恶性程度呈正相关(r=0.575,p<0.05).MGMT的阳性表达强度和P53蛋白的阳性表达强度呈明显的负相关(r=-0.750,p<0.05).结论MGMT表达减弱和P53表达增强与脑胶质瘤的发生及其恶性程度有一定关系.     

再生障碍性贫血患者骨髓单个核细胞端粒长度及P53、P21的表达

目的:研究再生障碍性贫血(AA)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)的端粒长度以及P53和P21表达水平,探讨它们与AA发病的关系。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测60例AA患者[其中非重型再障(NSAA)38例,重型再障(SAA)22例]和25例对照者BMMNC中端粒长度以及P53和P21的mRNA表达情况;采用Western blot法检测P53和P21蛋白表达情况;并进行相关性比较。骨髓活检术检测骨髓造血细胞成分分布情况;流式细胞术检测CD34~+细胞占有核细胞百分比情况。结果:AA患者端粒长度较对照组明显缩短骨髓造血细胞成分及CD34~+细胞占有核细胞百分比较对照组明显减少(P0.05);NSAA、SAA患者与对照组相比端粒长度均明显缩短,骨髓造血细胞成分及CD34~+细胞占有核细胞百分比均明显减少(P0.05);SAA与NSAA比较,端粒长度明显缩短,骨髓造血细胞成分及CD34~+细胞占有核细胞百分比明显减少(P0.05)。AA患者P53和P21的mRNA及蛋白表达水平均较对照组明显升高(P0.05);NSAA和SAA患者P53和P21的mRNA及蛋白表达水平与对照组相比均明显升高(P0.05);SAA患者P53和P21的mRNA及蛋白表达水平较NSAA明显升高(P0.05)。端粒长度与P53表达水平或P21表达水平之间没有相关性(P0.05);P53表达水平与P21表达水平之间呈正相关(P0.05)。结论:端粒长度的改变以及P53和P21可能参与了再障的发病经过,推测可能是通过抑制造血干细胞的增殖和分化,从而引发造血细胞凋亡。     

miRNA-21减轻氧糖剥夺对PC12细胞的损伤

目的:探讨微小RNA(miRNA)-21对低氧缺血损伤PC12细胞的影响。方法:体外培养PC12细胞,建立氧糖剥夺(OGD)损伤模型。细胞随机分为对照组、OGD组、阴性对照序列+OGD组、miRNA-21 inhibitor+OGD组和miRNA-21 mimic+OGD组。通过采用CCK-8、real-time PCR、Western blot等技术探讨miRNA-21对OGD损伤PC12细胞的影响和机制。结果:降低miRNA-21的表达,受OGD损伤的PC12细胞活力明显下降;增加miRNA-21的表达,受OGD损伤的PC12细胞活力明显增加。进一步发现miRNA-21促进OGD损伤PC12细胞的AKT磷酸化。结论:miRNA-21明显增加OGD损伤PC12细胞的活力,其机制可能与激活PI3K/AKT信号通路有关。     

Mage-H1在PC12细胞分化前后的表达变化及其对细胞周期的影响

目的: 探讨黑色素瘤相关抗原H1(Mage-H1)在细胞增殖和分化调控中的作用。方法: 神经生长因子(nerve growth factor, NGF)诱导PC12细胞分化后用相差显微镜对其形态学进行观察。通过RT-PCR、Western blotting 检测分化前后Mage-H1表达变化情况。流式细胞技术分析PC12细胞瞬时表达Mage-H1对细胞周期的影响。结果: 经NGF诱导8 d后,92%以上PC12细胞属于已分化细胞。分化后的PC12细胞与对照组相比,Mage-H1表达上调。PC12细胞瞬时表达Mage-H1后被明显阻滞在G₀-G₁期。结论: Mage-H1可抑制PC12细胞增殖并促进细胞的分化。     

Inactivation of 45Ca2+ uptake by prior depolarization of PC12 cells

45Ca2+ uptake evoked by depolarization of PC12 pheochromocytoma cells with K+ was reduced approximately 90% by prior depolarization in Ca2+-containing medium. Prior depolarization without added Ca2+ reduced 45Ca2+ uptake by only about 20%. The Ca2+ channel agonists, BAY K 8644 and CGP 28392, had no effect on inactivation of 45Ca2+ uptake. These findings suggest that (1) voltage-gated Ca2+ channels of PC12 cells undergo inactivation, (2) inactivation is Ca2+-dependent rather than voltage-dependent, and (3) Ca2+ channel agonists do do not promote Ca2+ flux by inhibiting Ca2+ channel inactivation.     

Encephalomyocarditis (EMC) virus infection in PC12 and C6 cells

PC12 cells derived rom rat pheochromocytoma and C6 cells derived from rat glioma were infected with 0.3 plaque forming units (PFU)/cell of the D variant of encephalomyocarditis virus (EMC-D), after pretreatment with or without nerve growth factor (NGF). The virus titres in medium and cells were investigated at 6, 12, 24, 48 and 72 h post infection (HPI), and histopathology and viral antigens in cells were examined at 24 and 48 HPI, respectively. As a result, neither viral replication nor light and electron microscopic changes were observed in PC12 cell cultures without NGF-pretreatment. On the contrary, in PC12 cell cultures with NGF-pretreatment, the virus titre prominently increased at 12 HPI, and peaked at 48 HPI. In addition, distinct histological and ultrastructural changes with viral antigens in cells were observed. C6 cells showed similar morphology and susceptibility to EMC-D-infection irrespective of NGF-pretreatment. Namely, the virus titres in C6 cell cultures increased slightly and viral antigens were found in a small number of C6 cells, but there were no evident histological and ultrastructural changes. These results suggest that PC12 cells pretreated with NGF and C6 cells are susceptible to EMC-D infection in vitro.     

Involvement of P2Y13 receptor in suppression of neuronal differentiation

We examined the receptor-mediated effects of extracellular ATP on neuronal differentiation of PC12 cells, Neuro2a cells and MEB5 cells by using a series of receptor antagonists. The P2Y13 receptor antagonist MRS2211 significantly accelerated neurite outgrowth in all cases. Treatment with nerve growth factor (NGF) alone activated ERK1/2 in PC12 cells, and the activation was further increased by MRS2211. These results suggest involvement of P2Y13 receptor in suppression of neuronal differentiation. Thus, P2Y13 receptor antagonists might be candidates for treatment of neurodegenerative diseases.     

Electrically induced neurite outgrowth of PC12 cells on the electrode surface

Morphological differentiation of PC12 cells cultured on an indium-tin oxide (ITO) electrode has been induced to grow neurites in the absence of nerve growth factor (NGF) by electrical stimulation. Rectangular pulse wave potentials were applied to the electrode at amplitudes of 200 mV and 400 mV with frequencies of 50Hz, 500Hz, and 1 kHz. The PC12 cells differentiated most prominently at 200 mV with 100Hz. No statistically significant differences were observed among the electrically induced neurite lengths. The electrically induced differentiation was completely inhibited by a blockade of calcium influx using LaCl₃. This indicates that repeated potential shift in the vicinity of a cellular membrane may stimulate morphological response, probably through calcium ion channels.     

Roscovitine促进增殖期PC12细胞凋亡

目的探讨细胞周期蛋白依赖激酶（CDK）抑制剂Roscovitine导致增殖期PC12细胞死亡的性质和CDK调控的细胞周期与细胞凋亡的关系。方法利用培养的增殖期PC12细胞模型，进行MTT细胞活性检测、Hoechst 33342胞核荧光染色和倒置显微镜观察。结果分别用5、10、20、50和100μmol／L浓度的Roscovitine溶液处理细胞12h，细胞存活率呈剂量依赖性下降；另外，50μmol／L浓度的Roscovitine分别处理细胞4、12、24和48h，细胞死亡也呈现时间依赖性。细胞死亡的形态学表现是细胞皱缩、核染色体固缩和核碎片形成。结论Roscotivine导致的增殖期PC12细胞凋亡与CDK调控的细胞周期蛋白有关。