蛇床子总香豆素对新生大鼠成骨细胞的作用

目的：研究蛇床子总香豆素（TCFC）在体外对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖及成骨作用的影响。方法：酶消化法分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞;^3H-胸腺嘧啶和^3H-脯氨酸掺入法分别测定细胞增殖和胶原合成;磷酸苯二钠法测定细胞内骨碱性磷酸酶（ALP）活性;并以抗骨质疏松药物异丙黄酮（ipriflavone,IP)作为阳性对照药物。结果：TCFC对新生大鼠成骨细胞的增殖,ALP活性,骨胶原合成具有显的促进作用。结论：TCFC抗骨质惊讶松的作用与其增加成骨细胞的数量,促进细胞胶魇蛋白及ALP的活性有关。     

黄连解毒汤的抗炎作用机理研究

目的 :研究黄连解毒汤的抗炎机理。方法 :采用小鼠背部气囊内注射角叉菜胶的方法诱导急性气囊滑膜炎症 ;脂多糖腹腔注射造成内毒素血症模型 ;噻唑蓝比色法测定细胞增殖 ;Griess法检测上清中NO^-₂ 的浓度 ;胸腺细胞增殖测定IL 1的活性。结果 :黄连解毒汤能抑制角叉菜胶所致小鼠气囊内白细胞的游出 ,减少PGE2 的生成。在体外实验中 ,黄连解毒汤能显著抑制ConA所致的内毒素血症小鼠脾淋巴细胞的增殖 ,但对正常小鼠淋巴细胞的增殖无影响 ,且不影响正常及内毒素血症小鼠的脾细胞生成IL₂。黄连解毒汤还可抑制脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞生成IL-1和NO。结论 :以上结果提示黄连解毒汤的抗炎作用主要与抑制IL-1 ,NO ,PGE₂ 等炎症因子生成有关。     

腰痛宁胶囊活性部位组合对PGE2、IL-2、NO细胞因子的影响及其相互作用

目的 评价腰痛宁胶囊中不同活性部位组合的抗炎、免疫及活血活性,以及活性部位间的相互作用.方法 按照腰痛宁组方原则、组合化学思想及各活性部位在腰痛宁中的重要性,在马钱子与麻黄总生物碱基础上依次加入腰痛宁组方药材的总黄酮、总皂苷、挥发油和多糖等活性部位,得到由不同活性部位混合组成腰痛宁拆方、组方及全方共计6个样品.运用脂多糖(LPS)诱导Ana-1细胞释放前列腺素E₂(PGE₂)模型,有丝分裂原(ConA)诱导脾淋巴细胞产生白细胞介素-2(IL-2)模型及刺激人脐静脉内皮细胞释放NO模型,测定各样品抑制PGE₂产生的半数抑制浓度(IC₅₀),促进IL-2和NO分泌的半数有效浓度(EC₅₀);同时采用最小二乘优化方法,计算各样品的IC₅₀/EC₅₀叠加值,将其与IC₅₀/EC₅₀实验值进行比较,分析不同模型下各活性部位间的相互作用类型.结果 6个样品均有抑制PGE₂产生及促进IL-2分泌的活性,但只有由总生物碱、总黄酮和总皂苷组成的样品III有刺激人脐静脉内皮细胞释放NO的EC₅₀,且样品III在以PGE₂、IL-2及NO为指标的抗炎、免疫及活血模型中均表现出优于其他样品的活性,不同的活性部位组合在这3个模型下产生的相互作用类型不同.只有样品III中的总生物碱、总黄酮及总皂苷3个活性部位在3个模型下均存在协同增效作用.结论 腰痛宁拆方、组方及全方样品对Ana-1细胞中PGE₂的产生均表现出良好的抑制作用、对小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2也表现出良好的促进作用,显示出腰痛宁处方的合理性、科学性及优良的抗炎和免疫活性.腰痛宁中总生物碱、总黄酮与总皂苷间的协同增效作用使腰痛宁拆方样品III在抗炎、免疫与活血方面的活性均优于其他样品,表明腰痛宁组方具有优化空间.可望以样品III为基础精简腰痛宁组方,开发高效、质量易控的治疗风湿痹病新药.     

榄仁叶氯仿提取物的护肝作用及其对肝脏IL-6表达的抑制作用

目的 :研究榄仁树叶氯仿提取物 (TCCE)对CCl₄诱导的小鼠肝损伤的防护作用及其机制。方法 :以不同剂量TCCE(20,50,10 0mg·kg^-1)给小鼠连续灌胃 5d后 ,腹腔注射CCl₄,24h后测定小鼠血清ALT活力变化。同时 ,运用RT PCR半定量分析肝脏IL 6mRNA量的变化并观察肝组织形态学改变。结果 :小鼠腹腔注射CCl₄24h后 ,sALT水平显著升高 ,为对照组的 5.6倍 (P<0.01)。而各剂量TCCE均可显著抑制CCl₄诱导的小鼠sALT水平的上升 ,其中 ,100mg·kg^-1TCCE组小鼠sALT水平恢复至对照组水平。形态学观察表明 ,TCCE明显减轻CCl₄引起的小鼠肝细胞索排列紊乱、肝细胞肿胀及嗜酸性变等 ,且能对抗甚至逆转CCl₄引起的急性肝损伤小鼠肝脏IL-6mRNA含量的升高。结论 :TCCE具有很好的护肝作用 ,且其机理可能与抑制IL-6基因的过度表达有关。     

竹节参总皂苷通过NF-κB通路对LPS致RAW264.7细胞炎症的保护作用研究

目的： 探讨竹节参总皂苷对脂多糖（LPS）刺激的RAW264.7巨噬细胞的抗炎作用。方法：噻唑蓝（MTT）法检测不同浓度的竹节参总皂苷对RAW264.7细胞活性的影响;一氧化氮（NO）试剂盒法检测竹节参总皂苷对LPS刺激RAW264.7细胞的NO释放量;酶联免疫吸附法（ELISA）检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素1-β（IL-1β）分泌;逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）,TNF-α,IL-1β mRNA的表达;免疫印迹法（Western blot）检测胞核内核转录因子-κB p65（NF-κB p65）蛋白表达。结果：竹节参总皂苷的安全用药范围为≤80 mg·L^-1;与LPS模型组相比,竹节参总皂苷各剂量组（0.1,1,10,40 mg·L^-1）均能显著降低LPS刺激下RAW264.7细胞NO,TNF-α和IL-1β分泌;竹节参总皂苷各剂量组（10,40 mg·L^-1）均能抑制iNOS,TNF-α,IL-1β mRNA表达和NF-κB p65蛋白表达。结论：初步证实了竹节参总皂苷对LPS致RAW264.7巨噬细胞炎症的保护作用,作用机制可能与 NF-κB通路有关。     

板蓝根F022部位抗内毒素活性研究

目的 :研究板蓝根F₀₂₂ 部位抗内毒素活性并初步探讨其作用机理。方法 :ELISA法检测内毒素刺激鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)水平 ;内毒素致兔发热实验 ;内毒素致BCG增敏小鼠死亡实验。结果 :F₀₂₂与LPS同时或F₀₂₂ 提前 1h处理巨噬细胞 ,能显著性抑制上清中TNF-α和IL-6水平。先给予F₀₂₂ ,能拮抗内毒素所致家兔发热反应 ,显著延长BCG增敏小鼠受LPS攻击后的存活时间 ,并呈剂量依赖性。结论 :以上结果提示F₀₂₂ 对内毒素拮抗作用发生在LPS激活机体免疫系统之前 ,该过程F₀₂₂可能竞争性阻断LPS与其受体的结合。     

不同基原秦皮、香豆素单体以及不同指纹区样品对内毒素刺激单核-巨噬细胞株分泌炎症因子的影响

目的 :研究4种秦皮提取物、5种香豆素单体、5种单体混合物、苦枥白蜡树已知香豆素指纹区样品和未知成分指纹区样品对内毒素(LPS)刺激小鼠单核-巨噬细胞株RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响。 方法 :以 LPS 10 mg·L^-1刺激RAW264.7细胞, 加入不同浓度的待测样品,24h后,取培养液上清测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-1α(IL-1α)含量。 结果 :①4种基原秦皮提取物能显著抑制由LPS诱导巨噬细胞分泌TNF-α(P<0.05)。②5种香豆素单体均能显著抑制由LPS诱导巨噬细胞分泌IL-1α;除秦皮苷外其余4种单体,能显著抑制由LPS诱导巨噬细胞分泌TNF-α,其中秦皮甲素、秦皮素具有量效关系。③苦枥白蜡树提取物,5种香豆素单体混合物,苦枥白蜡树已知香豆素指纹区样品和未知成分指纹区样品能显著抑制由LPS诱导巨噬细胞分泌TNF-α(P<0.05),5种香豆素单体混合物能显著抑制LPS诱导巨噬细胞产生IL-1α,其他样品的作用没有显著性。 结论 :在该测试系统中4种基原秦皮中尖叶白蜡树抗炎活性最强,其他3个品种抗炎活性相近,抗炎作用与素皮已知香豆素含量没有直接的量效关系,说明素皮除已知香豆素外,未知成分对炎症因子也有一定抑制作用;5种香豆素单体中秦皮乙素,6,7-二甲氧基-8-羟基香豆素抗炎活性最强。     

LPS/Ca诱导血栓形成与血瘀证病证结合模型的炎症机制

目的:探讨内毒素(LPS)与角叉菜胶(Ca)联合诱导血栓形成与血瘀证病证结合动物模型的炎症机制。方法:将大鼠随机分成2组:正常组,LPS/Ca模型组。模型组大鼠先腹腔注射Ca 25 mg.kg^-1,16 h后再静脉注射给予LPS 50μg.kg^-1。正常组给予同体积生理盐水。于造模后不同时间点,取血,测定血液中的血栓素(TXB2),6-酮-前列环素(6-keto-PGF_1α)和炎性因子TNF_α,IL-6浓度,观察这些指标的动态变化过程。结果:LPS/Ca联合造模后2 h,血浆TXB₂和6-keto-PGF_1α增高,24 h后TXB₂的浓度降低,48 h后二者接近正常组。血液中的炎性因子TNF_α和IL-6浓度于造模后2 h和4 h显著增高,但持续时间不长,于造模后8 h恢复至正常水平。病理学检查可见在造模后2～24 h尾部小动、静脉和肺、肝微小血管内有白细胞黏附于血管壁,12～24 h后可见血栓形成。结论:炎症是LPS/Ca诱导血栓形成模型的主要发病机制,炎性因子TNF_α和IL-6在血栓形成中起着关键作用。     

栀子总苷对大鼠佐剂性关节炎治疗作用及部分机制的研究

目的:观察栀子总苷(TGCJ)对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用和对炎症区域一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)及相关炎症介质的影响,探讨其治疗类风湿关节炎(RA)的作用机制。方法:弗氏完全佐剂(FCA)免疫诱导大鼠佐剂性关节炎(adjuvantarthritis,AA);SD大鼠随机分为6组:正常组、模型组、TGCJ3个剂量组(20,40,80mg·kg^-1)和雷公藤多苷(GTW)组;足爪容积测定法和关节炎评分法观察关节炎的发生情况;测定大鼠关节滑膜组织中NO、NOS、前列腺素E₂(PGE₂)及白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠关节滑膜组织NO、NOS、PGE₂I、L-1β和TNF-α水平显著升高;与模型组相比,TGCJ组大鼠佐剂性关节炎继发病变显著受抑制,关节滑膜组织NO、NOS、PGE₂及炎性细胞因子IL-1β和TNF-α水平显著降低。结论:抑制关节炎炎症局部炎性细胞因子活性和降低炎症介质含量是栀子总苷发挥治疗类风湿关节炎作用的重要机制之一。     

蛇床子素预防去卵巢大鼠骨质疏松形成的实验研究

 目的观察蛇床子素对去卵巢大鼠骨质疏松的影响。方法以尼尔雌醇为对照观察蛇床子素对双侧卵巢切除大鼠体重、子宫重量、子宫内膜腺体数;血清Ca²⁺,P,ALP,E₂,CT,TGF-β₁,BGP;大鼠股骨骨密度的影响。结果与模型组相比,蛇床子素各剂量组大鼠体重、子宫重量、子宫内膜腺体数未见明显变化,血清P含量下降,血清Ca²⁺,E₂,CT,TGF-β₁和BGP升高。蛇床子素组大鼠股骨骨密度较模型组明显增加。结论蛇床子素能提高去卵巢大鼠股骨骨密度,防止骨质疏松的发生,其作用机制可能与增加血清CT,TGF-β₁和BGP含量等有关。     

降糖防聋方对体外高糖培养成骨细胞骨钙素分泌的影响

目的:探讨降糖防聋方对体外高糖培养成骨细胞骨钙素的影响.方法:采用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,用不同浓度的降糖防聋方含药血清及不含降糖防聋方含药血清的α-MEM培养液加入到成骨细胞高糖(糖终浓度为300 kg·L-1)培养体系,作用不同时间,应用放免法测定细胞骨钙素(BGP)的水平.结果:100,50,10 mg·L-1的降糖防聋方含药血清对体外高糖培养成骨细胞具有明显的促进作用(P＜0.05),在较高浓度对对成骨细胞增殖无明显抑制效应.结论:降糖防聋方含药血清对高糖培养成骨细胞骨钙素有不同程度调节改善作用.     

淫羊藿总黄酮对大鼠成骨细胞代谢调控的机制研究

目的：探讨淫羊藿总黄酮对大鼠成骨细胞代谢调控的影响。方法:取新生SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞。应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法(PNPP)和RT-PCR方法观察淫羊藿总黄酮对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶活性和OPG mRNA,RANKL mRNA表达的影响。结果:淫羊藿总黄酮能刺激成骨细胞增殖,提高碱性磷酸酶活性,增强OPG mRNA的表达（P<0.05或P<0.01）。结论:淫羊藿总黄酮能促进成骨细胞的增殖、分化,增加OPG mRNA的表达,对RANKL的表达无明显影响。     

不同中药含药血清对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的:研究中药骨康及其中补肾、健脾、活血各成分吸收后不同血清对离体大鼠成骨细胞增殖的影响及其对成骨细胞分泌白介素-6(1L-6)的影响。方法:采用胶原-胰蛋白酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞,然后以中药骨康及其中补肾、健脾、活血成分吸收后血清,加入体外培养成骨细胞中进行培养,MTT法测成骨细胞增殖,ELISA法测培养上清中IL-6含量。结果:发现中药骨康吸收后血清能促进成骨细胞的增殖和分化,补肾成分吸收后血清亦能促进成骨细胞的增殖和分化,健脾、活血各成分吸收后血清对成骨细胞无明显影响,同时,中药骨康及其中补肾成分含药血清可作用于成骨细胞,使分泌其IL-6的能力下降。而中药骨康含药血清的作用明显优于补肾成分含药血清的作用。结论:中药骨康及其中补肾成分含药血清能够促进成骨细胞的增殖与分化从而促进骨形成,同时可抑制成骨细胞分泌IL-6,健脾、活血二法是补肾法的良好补充。     

补肾活血中药对体外培养成骨细胞活性的影响

目的研究补肾活血中药对体外培养成骨细胞活性的影响.方法取二次酶消化法培养的胎鼠颅骨第三代成骨细胞,随机分为5组,即:细胞对照组、空白血清组、含药血清组、原药组、阳性对照药α D3组,分别加入普通细胞培养液、含空白血清及不同浓度补肾活血中药含药血清、补肾活血中药原药液、阳性对照药(αD3)的条件培养液,分别在培养第3天和第6天进行各试验组成骨细胞碱性磷酸酶及骨钙蛋白分泌量测定,观察补肾活血中药含药血清及原药液对成骨细胞活性的影响.结果含药血清组成骨细胞活性指标碱性磷酸酶(ALP)值在培养第3天均低于空白血清组,且与含药血清浓度呈负相关关系;第6天,含药血清组各浓度组ALP值明显升高,均显著高于空白血清组,ALP值与含药血清浓度存在正相关关系;空白血清组ALP值在培养第6天时下降,其均值低于培养第3天ALP值.培养第3天及第6天,各浓度原药组ALP值均高于细胞对照组及αD3组;ALP值与原药浓度呈正相关关系.含药血清组及中药原药组骨钙素(OC)含量显著高于空白血清及其他各对照组.结论补肾活血中药含药血清及原药能够直接作用于体外培养的成骨细胞,促进成骨细胞增殖,增强其分泌活性;可延长成骨细胞活性分泌期,使其活性分泌高峰后移而峰值升高,增加其活性分泌总量.     

巴戟天多糖含药血清对体外成骨细胞DKK-1表达的影响

目的探讨巴戟天多糖含药血清对成骨细胞增殖、分化及DKK-1蛋白表达的影响。方法源于大鼠颅盖骨的原代成骨细胞中加入不同浓度的巴戟天多糖含药血清进行干预。MTT法观察巴戟天多糖含药血清对成骨细胞增殖的影响,用硝基苯磷酸盐(P-nitrophenyl phosphate,PNPP)偶氮法观察含药血清对成骨细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响,用蛋白印记法观察含药血清对成骨细胞DKK-1蛋白表达的影响。结果巴戟天多糖含药血清可使体外培养成骨细胞的增殖率明显提高(P<0.01),并能提高成骨细胞ALP活性(P<0.01)。此外,巴戟天多糖含药血清可以下调成骨细胞DKK-1蛋白的表达。结论巴戟天多糖含药血清可促进成骨细胞的增殖能力和ALP活性,并可通过下调成骨细胞DKK-1蛋白的表达影响骨代谢。     

淫羊藿甙对缺氧所致成骨细胞凋亡的保护作用

目的:通过在缺氧条件下体外培养成骨细胞,探讨缺氧对成骨细胞增殖与凋亡的影响以及淫羊藿甙的保护机制。方法:采用酶消化法传代培养乳SD大鼠颅盖骨细胞并建立缺氧模型。实验分2组:组1为单纯缺氧条件下进行的细胞培养,不加入任何药物干预;组2为缺氧条件下加入浓度为10ng/ml的淫羊藿甙与细胞共培养,用台盼蓝染色法分别计数培养5d的细胞数;用流式细胞仪检测2组缺氧5d的细胞凋亡率。结果:缺氧组的细胞数明显少于与淫羊藿甙共培养组,缺氧引起的细胞凋亡率较淫羊藿甙共培养组高。结论:缺氧能抑制成骨细胞的增殖,促进成骨细胞调亡而淫羊藿甙对其具有保护作用。     

Stimulation of osteoblastic differentiation and inhibition of interleukin‐6 and nitric oxide in MC3T3‐E1 cells by pomegranate ethanol extract

In this experiment, we studied the effects of pomegranate fruit extract (PE) on the function of osteoblastic MC3T3‐E1 cells and the production of local factors in osteoblasts. PE (16～250 µg/ml) significantly increased the growth of MC3T3‐E1 cells (P < 0.05). Moreover, PE (50 µg/ml) caused a significant elevation of alkaline phosphatase (ALP) activity and collagen content in the cells. We then examined the effect of PE on the TNF‐α‐induced production of interleukin‐6 (IL‐6) and nitric oxide (NO) in osteoblasts. Treatment with PE (10～50 µg/ml) decreased the TNF‐α (10^?10 M)‐induced production of IL‐6 and NO in osteoblasts. Copyright © 2008 John Wiley & Sons, Ltd.     

补肾活血复方含药血清对大鼠成骨细胞磷酸化GSK-3β、p38MAPK及ERK1/2蛋白的影响

目的:观察补肾活血复方含药血清对大鼠成骨细胞磷酸化糖原合成激酶3β(GSK-3β)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白的作用。方法:3月龄SD雌性大鼠灌胃制备空白血清和含药血清,并分离培养1日龄新生鼠颅骨成骨细胞。实验分为空白血清组和含药血清组,分别采用MTT、ELISA、Western-blot等方法检测两组成骨细胞的增殖、ALP和BGP的分泌及磷酸化GSK-3β、p38 MAPK和ERK1/2蛋白的变化。结果:与空白血清组相比,含药血清组可明显促进成骨细胞的增殖、ALP和BGP的分泌,并促进胞内磷酸化p38 MAPK和ERK1/2蛋白的表达,对磷酸化GSK-3β蛋白的表达未见明显影响。结论:补肾活血复方含药血清可促进大鼠成骨细胞的增殖和分化,提高p38 MAPK和ERK1/2蛋白磷酸化水平。     

健骨颗粒含药血清对成骨细胞增殖的影响

目的：探讨健骨颗粒含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响。方法：采用酶消化法培养SD大鼠成骨细胞,健骨颗粒含药血清干预,以生理盐水大鼠血清为对照,运用MTT法、流式细胞术检测成骨细胞增殖情况及细胞周期分布。结果：与同浓度生理盐水血清相比,20%健骨颗粒含药血清能明显促进体外培养成骨细胞增殖（P〈0.05）,明显降低G0/G1期细胞分数（P〈0.01或P〈0.05）,提高S期、G2/M期细胞分数和增殖指数（P〈0.01或P〈0.05）。结论：健骨颗粒含药血清能推进体外培养成骨细胞细胞周期,从而促进成骨细胞增殖。