具备中和中东呼吸综合征冠状病毒活性的单克隆抗体的制备

目的制备并鉴定对中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)具有中和活性的单克隆抗体,为进一步开展MERS-CoV感染与免疫保护机制研究,以及发展诊断与治疗手段奠定基础。方法 MERS-CoV S蛋白受体结合区与人IgG Fc片段融合表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫后小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过ELISA筛选出阳性克隆,随后通过多次亚克隆筛选出稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,制备单抗腹水并进行抗体效价测定及亚类鉴定;通过MERS-CoV假病毒及活病毒中和试验筛选出中和单抗。结果获得了10株能够稳定分泌抗原特异性单抗的杂交瘤细胞株。制备的腹水单抗亚类均为IgG1;其中7株单抗抗体ELISA效价达到10 000以上,并有1株单抗对MERS-CoV具有良好的中和活性。结论本研究获得了1株对MERSCoV具有良好中和活性的单克隆抗体。     

识别肺癌上调表达的膜蛋白单抗抑制肺癌生长

目的:分析研究抗肺癌24H7单抗的体内外功能,并初步鉴定其识别的抗原蛋白,为肺癌靶向治疗提供候选抗体药物及靶标。方法:采用活细胞免疫荧光及流式细胞荧光检测单抗与多种肺癌细胞的反应;应用CCK-8法和裸鼠体内成瘤实验鉴定单抗对肺癌细胞体外增殖及体内肿瘤生长的影响;同时采用免疫组化检测该单抗识别抗原在肿瘤及癌旁正常组织中的表达差异;免疫亲和层析纯化抗原。结果:活细胞免疫荧光及流式荧光结果显示24H7单抗识别抗原在12种不同肺癌细胞系膜上均有阳性表达;体外增殖及动物体内治疗实验显示该单抗在体外能抑制肺癌细胞的增殖,并在体内显著抑制肿瘤的生长,其抑制率达73.74%(P0.01);免疫组化结果表明该单抗的靶抗原在肺腺癌组织中的表达较癌旁正常显著上调;免疫亲和层析显示靶抗原的分子量约为170 KD。结论:抗肺癌单抗24H7能够在体内外抑制肺癌的生长,其靶抗原可表达于肺癌细胞的膜上,且在肺腺癌组织上调表达,可能是一个肺腺癌靶向治疗的新靶标。     

一株特异识别肺癌组织的单抗抑制肺腺癌的生长

目的:已采用功能性抗体库技术筛选出抗肺癌的单抗13C9,进一步确定其识别的抗原在肺癌组织和细胞中的表达及体内抑制肺癌生长的能力,以期为肺癌靶向治疗提供有价值的分子靶位和治疗剂。方法:常规方法鉴定13C9单抗的一般特性,用细胞免疫荧光、免疫组织化学检测其抗原蛋白在肺癌细胞及组织中的表达和定位,体内移植瘤治疗实验评价13C9单抗对肺癌生长的抑制作用,Western blotting等方法鉴定13C9单抗识别的抗原。结果:13C9单抗与肺癌细胞GLC-82和A549的细胞膜结合,免疫组化结果显示其识别的抗原在人肺癌组织中高表达(79.8%),而在癌旁组织中不表达或低表达(9.6%,P0.05)。该抗体亚型为IgM、κ型,13C9单抗治疗能够抑制人肺腺癌移植瘤的生长,抑制率达63.29%(P0.05)。Western blotting显示13C9单抗识别的抗原相对分子质量约220 KD。结论:单抗13C9能显著抑制体内肺癌生长,具有成为肺癌靶向治疗剂的应用潜力,其识别的特异表达在肺癌细胞膜上的220 KD的膜蛋白,可能是肺癌潜在的治疗靶位。     

曼氏血吸虫童虫表面抗原单克隆抗体的制备和特性分析

目的制备抗曼氏血吸虫童虫表面抗原的单克隆抗体。方法采用活的５小时龄童虫和童虫排泄分泌物经静脉或腹腔注射免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠一次，免疫后取脾细胞与骨髓瘤细胞融合，用间接荧光抗体技术（ＩＦＡ）筛选阳性克隆；用琼脂双扩散试验鉴定单抗类别；用免疫沉淀反应结合ＳＤＳ—ＰＡＧＥ分析单抗所识别的靶抗原分子；用ＩＦＡ分析单抗的阶段和种的特异性。结果获得２５株杂交瘤细胞株，对其中５株（Ｍ４２，Ｍ４３，Ｍ４４，Ｍ４５，Ｍ６７）的特性进行了分析，４株属ＩｇＭ，１株属ＩｇＧ２ａ。５株单抗均识别童虫表面抗原中的２００ｋＤ和２０ｋＤ的两个分子。５株单抗除Ｍ４２外，其余４株单抗没有阶段和种特异性。结论该研究成功地制备了抗曼氏血吸虫童虫表面抗原的单克隆抗体，提供了一种简便、快速及节约抗原的单抗制备法。     

EGFRvⅢ单抗的制备及其特异性的研究

目的 制备EGFR vⅢ单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定.方法 将小鼠骨髓瘤细胞NS-1与免疫的BALB/C小鼠,免疫小鼠脾细胞进行融合,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选出EGFRvⅢ阳性的杂交瘤细胞株,单抗与EGFRvⅢ抗原结合的特性性通过Western blot进行鉴定.建立裸鼠人肺细胞癌和表皮细胞癌移植瘤模型,分别腹腔注射EGFRvⅢ单抗,尼妥珠单抗(Nimotuzumab),生理盐水,观察3组别的抑瘤效果和作用.结果 用单克隆抗体技术筛选得到的杂交瘤细胞株而制备的EGFRvⅢ单抗,经过Western blot鉴定,结果为可以特异性识别EGFRvⅢ.EGFRvⅢ单抗,尼妥珠单抗对人表皮细胞癌移植瘤的抑瘤率分别为84％和86.3％.结论 通过杂交瘤技术制备的EGFR vⅢ单克隆抗体,特异性好,在抑制肿瘤方面效果显著,对进一步的机制研究和临床应用有一定价值.     

抗结核分枝杆菌抗原优势肽段单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的:制备和初步鉴定抗结核分枝杆菌抗原优势肽段的单克隆抗体。方法:以两种优势肽段的融合抗原PGEX-4T-2/38kD-ESAT6-CFP10和PGEX-4T-2/Mtb8.4-MPT64-Mtb16.3-Mtb8作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合后,通过有限稀释法筛选阳性克隆,经ELISA和Western blotting分析单抗的特性和特异性。结果:获得17株结核分枝杆菌抗原优势肽段特异单克隆抗体杂交瘤细胞株,经间接ELISA方法测定,杂交瘤细胞培养上清效价为28～212,接种小鼠的腹水效价为216～220。Western blotting结果显示,每株单抗均能特异性的识别融合蛋白的优势肽段。结论:制备了针对抗结核分枝杆菌抗原优势肽段的单克隆抗体,为结核分枝杆菌的快速诊断和抗原性分析奠定了基础。     

Y盒结合蛋白1单克隆抗体的研制、表位测定及其免疫学应用

建立稳定分泌抗人Y盒结合蛋白1单克隆抗体(anti-YB-1 mAb)的杂交瘤细胞株,鉴定其表位与免疫学应用.将重组YB-1蛋白免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合.经ELISA法筛选鉴定、定株后采用腹水诱生法制备anti-YB-1 mAb;Protein G亲和层析法纯化mAb,ELISA法测定mAb效价、亚型及相对亲和力.采用抗原表位预测法鉴定anti-YB-1 mAb识别表位所在区域.Westem blot和免疫组化鉴定mAb识别内源性YB-1的特异性.经筛选鉴定获得2株稳定分泌anti-YB-1 mAb的杂交瘤细胞(1-D9,3-E8);腹水抗体效价均≥1×10-6,亚型均为IgG1;1-D9和3-E8单抗识别表位分别位于(134-160aa)与(266-303aa)肽段.Western blot、免疫组化结果证实anti-YB-1 mAb能特异性识别内源性YB-1.该研究为YB-1免疫学定性、定量检测方法的建立、肿瘤靶向抗体治疗及进一步探讨YB-1的生物学功能奠定了基础.     

幽门螺杆菌基因克隆表达及其抗原表位分析

目的 克隆表达幽门螺杆菌基因hp0410,构建12肽噬菌体展示库,对hp0410的抗原表位进行筛选和分析,为构建多表位嵌合疫苗提供理论依据。方法 从幽门螺杆菌NCTC11639基因组DNA中扩增出hp0410,并克隆入pGEX-4T-1中表达。利用纯化重组蛋白筛选出特异性单抗E018,利用该单抗和M13噬菌体12肽随机肽库,构建HP0410抗原表位的抗原展示库。竞争-抑制实验验证获得的阳性噬菌体并测序,生物信息学分析HP0410的抗原表位。结果 成功构建可高水平分泌型表达HP0410的原核表达系统。对13株阳性噬菌体测序后获得8个表位,其中候选表位1个。HP0410可有效抑制展示该表位的噬菌体与单抗E018结合。分析表明,获得的8个表位与HP0410同源性不高,但处于生物信息学预测的区域。结论 获得8个HP0410高抗原性区域的模拟表位,其中1个为模拟单抗E018特异性结合的抗原决定基的候选表位。     

人肺腺癌组织的血清蛋白质组学研究

目的采用以肿瘤免疫学与蛋白质组学研究技术有机地结合为基础的血清蛋白质组学研究体系(SERPA)筛选肺腺癌相关抗原。方法应用SERPA对4例人肺腺癌组织进行研究,分析肺腺癌组织总蛋白分别与肺腺癌患者的自身血清以及正常对照血清反应的W estern b lot图谱,识别鉴定差异反应的蛋白质。结果获得了分辨率较高的人肺腺癌组织与患者的自身血清以及正常对照血清的W estern b lot图谱,共识别27±5个差异反应的蛋白质。对其中的部分差异蛋白质点进行了肽质指纹图分析,鉴定出一些与细胞生长增殖、细胞代谢、细胞周期调控、信号转导等有关的肺腺癌相关抗原。结论本研究为进一步筛选用于肺腺癌诊断、治疗和预后评估的肺腺癌分子标志物奠定了坚实的基础。     

大鼠抗肠道病毒71型衣壳蛋白VP1特异性中和单克隆抗体的研制与应用

目的研制大鼠抗肠道病毒71型（EV71）衣壳蛋白VPl特异性中和单克隆抗体（单抗）,并用Westem印迹、ELISA和免疫荧光检测（IFA）等方法验证其特异性。方法采用单克隆杂交瘤技术人工合成包含EV71 VP1中和抗原决定簇位点SPT0的多肽偶联载体蛋白KLH,腹腔内注射免疫大鼠数次后,取有预期免疫应答的脾细胞与SP2／0小鼠骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA法筛选和有限稀释法亚克隆获得稳定的阳性单克隆杂交瘤细胞株并鉴定其IgG亚型。选取其中1株单克隆杂交瘤细胞系BC6,体外培养后注射于SCID裸鼠腹腔制备腹水以产生大量抗体,用ProteinA层析柱亲合纯化后获得纯化抗体。细胞培养微量中和试验测定该单抗中和EV71的滴度,并将其用于多种方法检测EV71特异性抗原。结果共获得8株稳定的单克隆杂交瘤细胞系,分别有6株属于IgGl亚型,2株为IgG2a亚型。通过制备腹水大量产生抗EV7l大鼠单抗BC6并纯化,其对EV71的中和滴度为1：32。BC6用于Western免疫印迹可特异检测大肠埃希菌表达的EV71VPl重组蛋白和EV71样品中的VPl,用于ELISA可灵敏特异地定性或定量检测EV71抗原含量,用于IFA可特异识别被感染Vero细胞内的EV71颗粒,而对柯萨奇病毒A16型无交叉反应。结论成功制备获得了大鼠抗EV71VPl的特异性中和单抗,可应用于Western免疫印迹、ELISA、IFA等方法,成为灵敏特异地检测EV71VPl或全病毒颗粒的有效工具。     

对医院护理管理队伍建设的几点思考

文章分析了当前医院护理管理队伍存在的主要问题：知识结构不合理；专业思想不纯正；接受继续教育不足：工作效能低下。提出了建设高素质护理管理人才队伍的思路：严格标准，搞好选才；加强思想教育和引导；加大培养力度；建立科学考评和激励机制；完善人才合理流动措施；合理编制，突出效率。     

医学科技成果信息资源网络开放利用的原则探析

医学科技成果信息资源网络开放利用，为资源的开放共享创造了良好条件，它使医学科技信息得到了高效传播和最大利用。网络开放利用医学科技成果信息资源，利用的主体和核心是其信息内容。信息内容是网络用户从中提取知识和所需资料的主要来源，同时也是信息破坏者发动攻击的主要目标之一，因而，信息内容的安全是信息安全的基本问题，主要包括信息内容的规范性、完整性与真实性、知识产权保护与利用的合理性等。要做好这些工作，应该遵循相应的原则和要求。     

政府公共财政支出分配公平性研究进展

政府公共财政支出是社会再分配的一种形式，其目的是促进社会公平。因此，政府的公共财政支出应该具有较强的目标针对性，应该向社会贫困人群倾斜，使其从中受益。本文通过查阅国内外政府公共财政支出分配公平性的相关文献资料。阐述了相关研究的进展情况，井着重探讨了政府公共财政支出分配公平性的内涵、研究范围、测算方法和研究意义。以及实际研究中存在的问题，最后提出我国政府公共财政支出分配公平性的研究方向和需要进一步完善的地方。     

长春新碱过量引起严重毒副反应1例的护理体会

报道1例霍奇金淋巴瘤患者因误用长春新碱（VCR）10mg一次性静脉推注后治疗护理情况。其出现间断性神志恍惚、眼睑闭合不全、言语不清、口腔黏膜糜烂、全身疼痛、麻痹性肠梗阻、尿潴留、手足麻木等症状,经积极解救,禁食,持续胃肠减压、胃管内注入麻油、开塞露、生理盐水灌肠,合理应用肠外营养,注重疼痛、心理护理,做好口腔、肛周护理,预防感染加重,患者病情得到控制好转出院。     

上海市某医院骨科平均住院日影响因素分析

对上海市某医院2003年-2007年骨科出院病人的住院日描述性分析．2003年-2007年骨科的床位利用指数与平均住院日相关性分析．2003年-2007年骨科床位与医护比例分析．2007年骨科前10大病种平均住院目影响因素分别进行单因素相关性分析和多因素逐步回归分析（STATA软件）。通过对骨科10大病种住院日影响因素分析,术前等待天数、手术类型、是否输血分别对10个、9个和8个病种的住院目有影响。输血因素和手术类型是医院不可控、由病人的病情决定的,术前等待天数是管理因素,是最值得医院重视的影响因素。